Notch1信号通路对AGEs诱导大鼠心脏肌成纤维细胞转分化的调控

目的:探讨Notch1信号通路在糖基化终末产物诱导的大鼠心脏肌成纤维细胞转分化中的表达及其可能的调控作用。方法:体外培养SD乳鼠心脏成纤维细胞,予以200μg/ml浓度AGEs刺激、Notch信号抑制剂处理。运用CCK-8检测细胞的增殖情况;Western blot检测Notch1信号通路及肌成纤维细胞相关蛋白α号通路及的表达。结果:(1)AGEs促进心脏成纤维细胞的增殖,并呈时间依赖性(P0.05),同时Notch信号抑制剂DAPT显著抑制细胞的增殖(P0.05)。(2)AGEs刺激心脏成纤维细胞α-SMA及Notch1信号通路蛋白Notch1和Hes1的表达(P0.05)。(3)运用γ内分泌酶抑制剂DAPT抑制心脏成纤维细胞Notch1信号可下调α-SMA的表达(P0.05)。结论 :Notch1信号可能参与促进AGEs诱导的大鼠心脏成纤维的增殖及向肌成纤维细胞方向转化。     

DDK1阻断Wnt/β-catenin信号通路抑制百草枯诱导的肺成纤维细胞转分化北大核心CSCD

目的探讨抑制Wnt/β-catenin信号通路对百草枯(paraquat,PQ)诱导的人胚肺成纤维细胞(MRC-5)转分化的影响及相关分子机制。方法将MRC-5细胞分为三组,对照组(Control组):不加药物处理;PQ组:以50μmol/L的PQ刺激MRC-5细胞72 h诱导建立转分化模型;PQ+DKK1组:以50μmol/L的PQ和10 ng/mL的DKK1同时处理细胞72 h。收集细胞,采用细胞免疫荧光和Western Blot分别检测三组细胞转分化标记物α-SMA、Vimentin和Collagen I的表达水平;同时,应用Western Blot、细胞免疫荧光和实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测转分化过程中Wnt通路相关信号分子β-catenin、Cyclin D1和WISP1的表达变化情况;进一步采用Wnt/β-catenin通路抑制剂Dickkopf-1(DKK1)阻断该信号途径,Western Blot检测β-catenin、Cyclin D1和WISP1表达变化情况,以验证干预效果并分析干扰Wnt/β-catenin信号传递对转分化标记分子α-SMA、Vimentin和Collagen I表达的影响。结果处理72 h后,与对照组细胞相比,PQ组MRC-5细胞α-SMA、Vimentin和Collagen I的表达水平均显著增加(P<0.05);同时,在PQ诱导MRC-5转分化过程中β-catenin、Cyclin D1和WISP1表达水平显著上调(P<0.05);采用DKK1干扰Wnt/β-catenin信号通路能够抑制PQ诱导MRC-5细胞转分化过程中α-SMA、Vimentin和Collagen I的高表达(P<0.05)。结论DKK1能够通过干扰Wnt/β-catenin信号的激活抑制PQ诱导的成纤维细胞转分化,有望进一步抑制PQ中毒引起的肺纤维化的发生。     

骨髓间充质干细胞移植炎症性肠上皮组织中Wnt/β-catenin信号分子的表达

背景：Wnt/β-catenin信号通路是干细胞调控中最关键的信号通路之一,参与调控细胞的增殖与分化。目的：观察Wnt/β-catenin信号通路中主要信号分子在骨髓间充质干细胞移植修复炎性肠疾病过程中的表达状况。方法：采用三硝基苯磺酸灌肠法制作 SD 大鼠炎症性肠病模型,并将绿色荧光蛋白标记的骨髓间充质干细胞经尾静脉注入体内,以注射生理盐水为移植正常对照,于移植第14和28天处死大鼠,取其大肠组织,采用qRT-PCR的方法进行检测Wnt/β-catenin信号通路中信号分子的表达情况。结果与结论：qRT-PCR检测结果显示,wnt3a和β-catenin在炎症性肠组织中相对表达量明显增加(P <0.05),而c-myc的表达量没有明显变化(P >0.05)。骨髓间充质干细胞移植修复后,wnt3a、β-catenin和c-myc的表达量都显著下降(P <0.05)。结果表明Wnt/β-catenin信号通路在炎症性肠病以及移植骨髓间充质干细胞后的修复过程中起着重要的作用,协助骨髓间充质干细胞向肠上皮细胞分化,促进肠炎症的好转,并修复炎症区域,恢复肠组织的稳态。     

封闭Notch信号影响神经干细胞分化的体外研究

目的探讨γ-分泌酶抑制剂N-［N-（3,5-二氟苯乙酰丙烯基）］-s-苯甘氨酸叔丁基酯（DAPT）对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导神经干细胞（NSCs）分化的作用及对Notch通路的影响。 方法原代培养来自大鼠前脑组织的NSCs,根据处理措施将NSCs分为溶剂对照组、TGF-β1诱导组（TGF-β1处理细胞,浓度为5 ng/L）和DAPT干预组（5 ng/L TGF-β1基础上加入1或10 μmol/L DAPT）。细胞培养3、8、24和48 h后,real-time RT-PCR检测Notch信号关键分子Notch1和Jagged1 mRNA的表达;Western Blot检测星形胶质细胞标志物-胶质纤维酸性蛋白（GFAP）及NSCs标志物-巢蛋白（Nestin）的表达;细胞免疫荧光染色法检测Notch1、Jagged1、GFAP及Nestin的表达。 结果TGF-β1处理后,可加速诱导NSCs的分化。NSCs标记物GFAP的表达呈现时间依赖性,早期并不表达,在8 h后GFAP开始表达,并随时间延长而表达增加。而Nestin早期明显表达,但8 h后表达明显下调,这提示（TGF-β1）作用8 h后可诱导NSCs向星形胶质细胞转化。深入研究显示,Notch1和Jagged1也在TGF-β1作用8 h后表达逐渐升高,这提示TGF-β1介导星形胶质细胞转化过程中,Notch信号可能被激活进而参与了此过程。应用DAPT处理后,GFAP表达在8 h与对照组相比无明显差异,而在48 h后逐渐下降;伴随着Notch1和Jagged1表达的下调,提示DAPT作用后,NSCs向星形胶质细胞转化被抑制,这与Notch信号活性的下降有关。 结论TGF-β1可诱导了NSCs向星形胶质细胞转化,并且具有时间依赖性;其机制可能与Notch信号的活化有关。DAPT的干预可封闭Notch信号,进而抑制TGF-β1介导NSCs向星形胶质细胞分化。     

Notch信号通路对VEGF促大鼠间充质干细胞增殖的作用

本研究旨在探讨Notch信号传导通路在VEGF促大鼠间充质干细胞增殖中的作用.体外培养大鼠间充质干细胞,取对数生长期的细胞用于实验研究.用Notch通路阻断剂DAPT阻断Notch信号传导,观察该通路在VEGF作用下大鼠间充质干细胞的增殖情况.实验分为4组：空白对照组、VEFG组、DAPT组及VEGF＋ DAPT组.应用CCK-8法检测各组细胞增殖情况,RT-PCR法检测各组相关基因（Notch1、Notch2、Flk-1、HES-1）mRNA水平的变化.结果表明,细胞培养3d,各时间点（24h,48 h,72 h） DAPT组及VEGF＋ DAPT组细胞存活率均较低,细胞形态变圆脱落,数目明显减少;VEGF组存活率最高,差异具有统计学意义（P＜0.01）;与对照组相比,VEGF组的Notch1、Notch2和Flk-1的表达水平均上调,而DAPT组及VEGF＋ DAPT组Notch1和Notch2的表达水平均下调,差异均具有统计学意义（P＜0.05）;VEGF组Hes-1基因水平下调,而DAPT组及VEGF＋ DAPT组Hes-1基因水平上调,差异具有统计学意义（P＜0.05）;DAPT组及VEGF＋ DAPT组的Flk-1基因表达水平稍有下调,但差异无统计学意义（P＞0.05）.结论：Notch信号通路在VEGF作用下对大鼠间充质干细胞的增殖具有明显促进作用,而DAPT可抑制这种增殖效应.     

慢性阻塞性肺疾病大鼠气道成纤维细胞过表达HSG基因对Wnt和MAPK信号通路的影响

目的 研究在慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmoriary disease, COPD）大鼠气道成纤维细胞中过表达HSG基因（MFN2）对Wnt信号通路的影响。方法 采用蛋白酶诱导的方式构建大鼠COPD模型，然后原代分离COPD模型大鼠气道成纤维细胞。构建HSG基因的表达载体，转染大鼠气道成纤维细胞，得到过表达HSG的大鼠气道成纤维细胞。实验一，采用Wnt信号途径激动剂佛波醇酯（TPA）处理细胞，WB、qPCR检测转染后HSG、Wnt5a的表达；实验二，采用MAPK信号途径激动剂EGF因子处理细胞，WB、qPCR检测转染后HSG、ERK1/2的表达；而且每个实验都进行ELISA检测细胞培养液中TGF-β1、PDGF、MMP-9的含量，流式检测细胞凋亡情况。结果 COPD模型大鼠气道成纤维细胞分离成功。实验一二中，WB、qPCR检测显示过表达HSG能抑制基因Wnt5a和ERK1/2的表达，受相应激动剂处理后，这些基因表达上调而HSG表达受抑制；而ELISA检测结果显示，过表达HSG能降低TGF-β1、PDGF、MMP-9的含量，受相应激动剂处理后TGF-β...     

纤维细胞生长因子1对转化生长因子β1诱导的人肾成纤维细胞活化纤维化的保护作用

目的:探讨纤维细胞生长因子1(fibroblast growth factor 1,FGF1)对转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)诱导的人肾成纤维细胞活化纤维化的保护作用及机制。方法:将NRK-49F细胞过表达FGF1后,用2 ng/mL TG F-β1刺激诱导肾纤维化模型。24h后观察细胞密度及BrdU阳性率;MTT法测定细胞活力;细胞免疫荧光和蛋白质印迹法检测NRK-49F细胞中α-SMA和FN蛋白表达水平;细胞免疫荧光和蛋白质印迹法检测NRK-49F细胞中p-S6,p-Akt(Ser473),β-caten in和p-Smad 3 (Ser 423/425)蛋白的表达和分布的变化。结果:外源性TGF-β1促进肾成纤维细胞体外增殖,而过表达FGF1可以降低TGF-β1诱导的肾成纤维细胞增殖,减轻由TGF-β1处理刺激的肾成纤维细胞活化;FGF1过表达可以抑制TGF-β1诱导的Akt/β-catenin改变,但不抑制Smad信号转导。结论:FGF1可能是通过Akt/β-catenin通路实现对TGF-β1诱导的人肾成纤维细胞活化纤维化的保护作用。     

持续 Wnt 信号通路激活促进胚胎干细胞源造血干细胞的增殖简

背景：如何提高胚胎干细胞诱导效率、促进胚胎干细胞源造血干细胞体外增殖成为目前急需解决的课题。目的：以外源性Wnt3a作为诱导剂,激活培养中的小鼠胚胎干细胞Wnt/β-catenin信号通路,观察该通路的激活是否促进胚胎干细胞向造血祖细胞的定向分化。方法：用外源性wnt3a（100μg/L）持续作用ES-E14TG2a小鼠胚胎干细胞21 d,通过细胞免疫荧光及蛋白免疫印迹检测细胞内β-catenin蛋白含量,QRT-PCR检测Wnt下游靶标基因的表达量来确定经典Wnt/β-catenin信号通路是否被激活,然后采用单层贴壁培养法诱导其向造血干细胞分化,流式细胞仪检测造血发育相关表面标志CD34＋/Sca-1＋,同时以QRT-PCR法检测造血相关基因的表达情况。结果与结论：ES-E14TG2a小鼠胚胎干细胞经wnt3a（100μg/L）连续培养21 d后发现β-catenin蛋白在细胞内积累;Wnt信号通路的下游靶标基因Pitx2、Frizzled、Sox17、Oct4的表达量均出现不同程度的增加,可见经典 Wnt/β-catenin 信号通路有被激活;单层贴壁培养法诱导其向造血干细胞分化的过程中检测到CD34＋/Sca-1＋细胞含量在14 d时占总细胞量高达20.2%,而对照组的仅占11.9%。造血相关基因骨形态发生蛋白4、FLK2及CD34的表达量均增加,而Smad5的表达则明显受到抑制。说明Wnt3a持续作用可激活Wnt/β-catenin信号通路,并促进ES-E14TG2a小鼠胚胎干细胞向造血干细胞的定向分化。     

WIF-1对人骨肉瘤MG-63细胞中β-catenin表达的作用研究

目的： WIF-1是Wnt信号通路中最常见抑制因子之一,本实验研究WIF-1对人骨肉瘤MG-63细胞Wnt信号通路中β-catenin表达量的影响。方法细胞培养人骨肉瘤MG-63细胞,0 ng/ml浓度的WIF-1作为空白对照组,分别以0、48、60、80、120 ng/ml浓度的WIF-1刺激MG-63细胞,分别用FQ-PCR及Western blot法从基因水平、蛋白水平测定细胞中β-catenin的表达量;细胞培养人骨肉瘤MG-63细胞,用WIF-1刺激细胞,分别在第0、12、24、48、72、96 h对各组细胞进行计数,观察空白组及WIF-1刺激组细胞数目的变化情况。结果不同浓度（0、48、60、80、120 ng/ml）WIF-1刺激下,FQ-PCR法显示β-catenin mRNA的相对表达总量2-ΔΔCT分别为1、0.55±0.30、0.44±0.24、0.35±0.15、0.24±0.21。与空白组相比较,WIF-1刺激下β-catenin mRNA表达量均降低（P＜0.05）。随着WIF-1浓度的增加,β-catenin mRNA表达量下降,但组间的抑制作用无明显差别（P＞0.05）;Western blot法显示β-catenin/β-actin蛋白相对表达量分别为1.40±0.11、0.86±0.10、0.51±0.11、0.45±0.06、0.18±0.03;与空白组相比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;空白组及WIF-1刺激组细胞数目有差异,空白组细胞增殖情况优于WIF-1刺激组。结论 WIF-1可降低人骨肉瘤MG-63细胞Wnt信号通路中β-catenin表达量,并抑制人骨瘤MG-63细胞的增殖。     

miR-145抑制肺腺癌细胞A549中MMP2的表达

目的探讨miR-145对肺腺癌细胞系A549中MMP2表达的影响及其机制。方法脂质体2000介导miR-145模拟物转染肺腺癌细胞系A549,实时荧光定量PCR检测miR-145表达水平;western blot检测MMP2与β-catenin蛋白的表达水平。以wnt/β-catenin通路激活剂Li Cl与miR-145模拟物共同作用A549细胞,western blot检测MMP2和β-catenin蛋白的表达水平。结果实时荧光定量PCR结果表明,miR-145在模拟物组、对照组及空白组间的差异有统计学意义(F=296.30,P<0.05)。western blot结果显示,与对照组相比,miR-145转染后MMP2和胞核β-catenin蛋白的表达水平均明显下调(q分别为8.98,26.59,P均<0.05)。共处理实验结果表明,激活wnt/β-catenin通路能拮抗miR-145对MMP2表达的抑制作用(q=49.47,P<0.05)。结论 miR-145通过抑制wnt/β-catenin通路下调肺腺癌细胞A549中MMP2的表达。     

Wnt/β-catenin信号在高糖诱导H9c2心肌细胞损伤与凋亡中的作用

目的:探讨Wnt/β-catenin信号通路是否参与体外培养条件下高糖诱导的H9c2心肌细胞损伤凋亡,及其与细胞自噬的关系。方法:构建高糖诱导H9c2心肌细胞凋亡细胞模型,CCK-8法和流式细胞仪检测细胞存活率和凋亡率,Western blot检测H9c2心肌细胞caspase-3、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Axin-1和β-catenin的表达。结果:与对照组相比,50 mmol/L高糖处理H9c2心肌细胞48 h后,细胞存活率急速下降,caspase-3表达增强;其次,Western blot实验结果显示高糖促进wnt/β-catenin的激活,表现为Axin-1表达抑制,β-catenin表达显著升高,并伴随细胞内LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值降低;DKK预处理能削弱高糖引起的H9c2心肌细胞凋亡,下调Axin-1活性,增强β-catenin表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值。结论:Wnt/β-catenin通路在高糖致H9c2心肌细胞损伤与凋亡过程中被激活,且其的激活抑制了自噬通路的活化。而当添加D-葡萄糖(Dickkopf-1,DKK-1)抑制Wnt/β-catenin后,自噬作用增强,高糖诱导的H9c2心肌细胞凋亡率明显下降。     

和厚朴酚对人结肠癌细胞及Wnt信号通路的影响及调控作用

目的探讨和厚朴酚(HNK)对人结肠癌细胞及Wnt信号通路的影响和调控作用。方法采用结晶紫染色法和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达检测HNK对人结肠癌LoVo细胞增殖的抑制作用;利用流式细胞仪和Caspase-3蛋白表达观察HNK对人结肠癌LoVo细胞凋亡的影响;利用荧光素酶报告质粒检测HNK对Wnt信号通路中β-catenin/Tcf4转录活性的影响;蛋白的表达采用Western blot检测。结果 HNK剂量依赖性地抑制细胞增殖(P0.05),并诱导细胞凋亡。荧光素酶报告质粒检测结果显示,HNK在10.0μmol/L时就能明显降低LoVo细胞中β-catenin/Tcf4转录活性(P0.05)。结论 HNK能抑制人结肠癌细胞增殖,诱导其凋亡,该作用可能与HNK抑制Wnt信号通路的转导有关。     

信号通路对胃癌干细胞及胃癌发生的影响

背景：Hedgehog与Wnt／β-catenin信号通路对胃癌干细胞的影响及在胃癌发生发展中的作用机制少见报道。目的：探讨Hedgehog与Wnt/β-catenin信号通路在胃癌发生发展中的作用机制。方法：采用肿瘤球悬浮分选法从胃癌组织标本中分选胃癌干细胞。采用免疫组化SP法检测Hedgehog及Wnt／β-catnin信号通路主要分子SHH、GLI1、Wnt2及β-catenin在胃癌干细胞中的表达。Spearman相关分析各细胞因子间的相关性分析。结果与结论：SHH、GLI1、Wnt2及β-catenin在胃癌干细胞中的阳性表达率分别为74．7％,78．3％,85．5％和83．3％,均显著高于癌旁组织的阳性表达率（P〈0．05）。各细胞因子间在胃癌干细胞中的表达均呈正相关（P〈0．05）。说明在胃癌干细胞中Hedgehog及Wnt/β-catenin信号通路均被激活,二者互相作用可能参与了胃癌的发生发展,为胃癌的干细胞治疗提供了新的研究方向。     

过表达lncRNA-p21通过介导Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌MGC-803细胞的生长与转移

目的:探讨lncRNA-p21在调控胃癌MGC-803细胞生长与转移作用中的作用及Wnt/β-catenin信号通路在其中的功能。方法:在人胃癌MGC-803细胞中转染慢病毒以过表达lncRNA-p21。观察细胞形态、细胞增殖以及体内外迁移和侵袭能力,检测Wnt/β-catenin信号通路是否参与lncRNA-p21介导的抑制胃癌细胞增殖和生长作用。最后使用LiCl对Wnt/β-catenin信号通路进行验证。结果:LncRNA-p21过表达的胃癌MGC-803细胞发生了形态学的改变,表现为由纺锤状或星状形态变为较圆的低侵袭状态。LncRNA-p21在体内外均抑制了胃癌MGC-803细胞增殖和生长,体外实验表现为lncRNA-p21过表达减弱了胃癌MGC-803细胞迁移和侵袭能力。LiCl实验验证了Wnt/β-catenin信号通路介导了lncRNA-p21对胃癌MGC-803细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用。结论:LncRNA-p21可在体内外显著抑制胃癌MGC-803细胞的生长与转移,且该抑制作用可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路介导。     

骨髓间充质干细胞Notch1信号通路异常与骨髓瘤骨病

背景:多发性骨髓瘤骨病的发病机制目前尚未完全明确,骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化障碍参与其中,而Notch1信号通路在间充质干细胞的增殖分化中起重要作用。目的:探讨Notch1信号通路在多发性骨髓瘤骨病中的作用。方法:分离培养多发性骨髓瘤患者和正常人骨髓间充质干细胞,Real-time PCR和Western blot检测成骨诱导分化前后Notch1和成骨基因Runx2的表达,以及Von Kossa染色鉴定钙质沉积程度。在多发性骨髓瘤患者间充质干细胞成骨诱导分化过程中,加入Notch1信号通路抑制剂DAPT和安慰剂,48 h后real-time PCR和western blot鉴定Notch1信号通路下游分子Hes1和成骨指标Runx2表达,2周后Von Kossa染色鉴定钙质沉积程度。结果与结论:成骨诱导48 h后,间充质干细胞的Notch1表达减低,但是骨髓瘤患者间充质干细胞的降低幅度小于正常对照间充质干细胞;48 h后Runx2的表达在骨髓瘤患者间充质干细胞的表达明显弱于正常对照间充质干细胞;2周后,Von Kossa染色鉴定钙质沉积程度,骨髓瘤患者间充质干细胞明显弱于正常对照间充质干细胞;48 h后Hes1表达在DAPT组明显低于安慰剂组;而Runx2的表达在DAPT组明显高于安慰剂组。2周后DAPT组钙质沉积明显强于安慰剂组。实验说明多发性骨髓瘤患者的间充质干细胞中,Notch1信号通路失活缺陷可能抑制其向成骨细胞分化。     

β-连环素及其信号通路在肝癌中的研究进展

β-连环素(β-catenin)是一种由CTNNB1基因编码的具有介导细胞间黏附及信号转导等多重功能的重要分子,其通过Wnt/β-catenin信号通路在肿瘤的发生发展中发挥关键作用。近年来,大量的研究证实经典Wnt/β-catenin信号通路的异常激活在肝癌中具有重要作用,而作为Wnt信号通路关键分子的β-catenin的异常表达与肝癌的发生、发展及预后密切相关。现对β-catenin和Wnt/β-catenin信号通路在肝癌中的作用及目前研究状况作一简要综述,为进一步阐明肝癌中β-catenin及信号通路的作用机制及以Wnt/β-catenin信号通路为靶点的临床治疗提供理论依据。     

5-氟尿嘧啶促进HPV阳性宫颈癌细胞凋亡的Wnt/β-catenin信号通路机制研究

【目的】探讨5-氟尿嘧啶促进HPV阳性宫颈癌细胞凋亡的Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路机制。【方法】HPV阳性宫颈癌细胞SiHa随机分为对照组、低剂量组(10μmol/L 5-氟尿嘧啶)、高剂量组(40μmol/L 5-氟尿嘧啶)和Wnt抑制剂(ICG-001)组(10μmol/L ICG-001),除对照组给予无菌磷酸盐缓冲液外,其余各组分别给予对应剂量的药物。比较各组细胞的增殖、凋亡情况(凋亡率和凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-9)及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白(Wnt、β-catenin)的表达水平。【结果】5-氟尿嘧啶能明显抑制HPV阳性宫颈癌细胞增殖,提高细胞凋亡率和细胞凋亡蛋白Caspase-3及Caspase-9的表达水平(P<0.05);5-氟尿嘧啶处理后Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白Wnt和β-catenin的表达明显减弱(P<0.05),且随着剂量的增加,上述效果越明显(P<0.05)。【结论】5-氟尿嘧啶促进HPV阳性宫颈癌细胞凋亡,可能与其抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨透骨消痛胶囊含药血清对经TNF-α诱导的软骨细胞多靶点保护作用

目的观察透骨消痛胶囊含药血清对经TNF-α诱导的软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响,探讨其对关节软骨细胞的多靶点保护作用。方法将4周龄SD大鼠关节分离软骨细胞进行体外培养、传代,用免疫组化法鉴定第三代软骨细胞。以第3代软骨细胞为靶细胞,分为正常组、模型组和治疗组,模型组和治疗组用TNF-α诱导软骨细胞凋亡后,分别给予生理盐水血清和透骨消痛胶囊含药血清作用24 h,Western blot法观察各组软骨细胞中Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白Wnt 4、β-catenin和GSK-3β的表达。结果 (1)细胞鉴定结果为Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色阳性,由此说明分离细胞为软骨细胞。(2)与正常组相比,模型组Wnt 4和β-catenin表达升高(P<0.05),而GSK-3β的表达降低(P<0.05);与模型组相比,治疗组Wnt 4和β-catenin表达降低(P<0.05),而GSK-3β的表达升高(P<0.05)。结论透骨消痛胶囊能多靶点调控Wnt/β-catenin信号通路,对软骨细胞具有保护作用,为其治疗骨关节炎提供依据。     

Wnt信号通路对体外培养小鼠雪旺细胞增殖及其促进神经元轴突生长作用的研究

目的研究Wnt/β-catenin信号通路在加入GSK-3β抑制子后促雪旺细胞增殖过程中的作用,探讨雪旺细胞促进神经元轴突生长的可能的信号分子机制。方法体外培养纯化雪旺细胞,S-100免疫荧光鉴定;采用GSK-3β抑制子作用雪旺细胞,观察雪旺细胞的形态学改变并计数;培养小鼠背根神经节神经元,与活化的SCs细胞共培养,用Western blot检测β-catenin在与活化的雪旺细胞共培养的神经元内的表达情况,评价其促神经元轴突生长的功能特性。结果 GSK-3β抑制子可促使雪旺细胞发生形态学上的变化及增殖;Western blot的结果表明GSK-3β抑制子可使神经元内β-catenin表达增加。活化的SCs细胞与背根神经节神经元共培养,与未活化的SCs细胞共培养的神经元相比,其神经元轴突长度显著增长,差异有统计学意义(P0.05)。结论 Wnt信号通路活化后可使体外培养的雪旺细胞发生形态学变化及增殖,Wnt/β-catenin通路在促进雪旺细胞的生长过程中发挥作用;活化的雪旺细胞与神经元共培养,使神经元轴突增长及β-catenin表达增高。     

沉默wee1基因对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用机制

目的探讨沉默wee1基因对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用机制。方法将卵巢癌细胞分为Blank组、小干扰RNA(siRNA)阴性对照(siRNA-NC)组和携带wee1基因片段(siRNA-wee1)组,利用siRNA技术在卵巢癌细胞中沉默wee1基因,采用实时荧光定量PCR、免疫印迹法(WB)检测3组卵巢癌细胞wee1 RNA及蛋白表达水平,采用细胞划痕试验、Transwell试验观察卵巢癌细胞平板集落形成数及卵巢癌细胞迁移、侵袭能力,采用WB观察卵巢癌细胞Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt3a、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(Cyclin-D1)、基质金属蛋白酶7(MMP-7)的表达情况。结果siRNA-wee1组卵巢癌细胞wee1 RNA和蛋白表达水平均低于siRNA-NC组和Blank组(P<0.05),卵巢癌细胞集落形成数少于Blank组和siRNA-NC组(P<0.05),卵巢癌细胞迁移、侵袭能力低于Blank组和siRNA-NC组(P<0.05),Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt3a、β-catenin、Cyclin-D1和MMP-7表达水平均低于siRNA-NC组和Blank组(P<0.05)。结论沉默wee1基因可抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活,进而抑制卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。