羟基红花黄色素A对高糖作用下视网膜微血管内皮细胞增殖的影响

目的:探讨羟基红花黄色素A(HSYA)对高糖培养下恒河猴脉络膜血管内皮细胞(RF/6A)增殖及血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响。方法:取体外培养的RF/6A细胞,分为NG+H0组(含有5.5mmol/L葡萄糖,HSYA的浓度为0mg/L)及HG+H0、HG+H18、HG+H37、HG+H73组(各组中均含有22mmol/L葡萄糖,HSYA的浓度分别为0,18,37,73mg/L)。培养24,48和72h,分别使用噻唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖的活性。采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测各组中RF/6A细胞中VEGFmRNA的表达。结果:MTT检测结果表明,HSYA作用48h,HG+H37、HG+H73组细胞吸光度值均明显低于HG+H0组(P<0.01),随着HSYA浓度的增加,各组吸光度值降低。作用72h,HG+H18、HG+H37和HG+H73组细胞吸光度值均明显低于HG+H0组(P<0.01),随着HSYA浓度的增加,各组吸光度值降低,HG+H73组抑制作用最明显,其细胞吸光度值明显低于HG+H18和HG+H37组(分别为P<0.01和P<0.05)。RT-PCR实验结果表明:与HG+H0组相比,作用48h,HG+H37、HG+H73对RF/6A细胞VEGFmRNA表达的抑制作用显著(P<0.01);而作用72h,HG+H18、HG+H37和HG+H73对高糖诱导的VEGFmRNA的表达均有抑制作用(P<0.01)。结论:HSYA能够抑制高糖诱导的RF/6A细胞的增殖并下调高糖所致的VEGFmRNA表达升高,提示其可能机制是通过VEGF途经来实现的。     

黄连素对高糖培养下大鼠视网膜Müller细胞增殖的影响

目的：研究黄连素对体外高糖环境下的SD大鼠视网膜Müller细胞增殖的影响。

方法：采用酶消化法原代培养SD大鼠视网膜Müller细胞,将第2代Müller细胞随机分为正常糖浓度(5mmol/L)组、高糖浓度(25mmol/L)组、高糖+不同浓度(5、10、25、50、100μmol/L)黄连素组,分别培养24、48、72h后,采用CCK-8法检测细胞增殖活性。

结果：培养24、48、72h时,高糖浓度组Müller细胞吸光度值较正常糖浓度组明显降低(均P<0.01); 10、25、50、100μmol/L黄连素组细胞吸光度值较高糖浓度组明显升高(均P<0.05),且呈剂量依赖性; 5μmol/L黄连素组细胞吸光度值与高糖浓度组无明显差异(P>0.05)。

结论：黄连素在一定程度上能够减轻高糖对Müller细胞增殖活性的抑制作用,其作用强度与黄连素浓度呈正相关。     

高糖条件下血管内皮细胞增殖与凋亡的研究

目的 观察高糖对血管内皮细胞增殖、凋亡的影响。 方法 用高糖(10、20、30、40、50 mmol/L)作用培养的人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC),第2、4、6、8、10、12、14 d,用氚-标记脱氧胸苷(tritium-labelled thymidine deoxyribose,³H-TdR)掺入法测定每分钟计数(counts per minute,cpm),流式细胞术检测细胞的凋亡指数、增殖指数及细胞周期变化。 结果 高糖作用下,HUVEC cpm值和增殖指数低于对照组(P<0.05),凋亡指数高于对照组(P<0.05),随作用浓度增加、时间延长更为明显。各高糖组G-1期细胞百分率升高,S期百分率降低(P<0.05)。 结论 高糖使培养的HUVEC凋亡加速,同时抑制了细胞增殖。细胞可能被阻滞在G-1/S转变期。(中华眼底病杂志,2000,16:177-180)     

姜黄素对高浓度葡萄糖诱导的RF/6A细胞损伤的抑制作用

目的:探讨姜黄素对高浓度葡萄糖培养的恒河猴脉络膜-视网膜内皮细胞(rhesus choroido-retinal endothelial cell,RF/6A)损伤的保护作用及机制。方法:RF/6A细胞分4组培养(n=6/组),对照组:DMEM培养基+100/L胎牛血清;高糖组:对照组培养基添加40mmol/L葡萄糖;姜黄素组:对照组培养基添加30μmol/L姜黄素;姜黄素-高糖组:对照组培养基添加40mmol/L葡萄糖及30μmol/L姜黄素。分组培养5d后,显微镜观察各组细胞生长状态,噻唑蓝比色法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测各组细胞活力,琼脂糖凝胶电泳检测DNA ladder判断凋亡,Western-blot检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达。结果:与对照组相比,高糖组RF/6A细胞生长状态较差,活力明显降低(P<0.01),而姜黄素组及姜黄素-高糖组RF/6A活力无明显变化(P>0.05)。高糖组RF/6A出现明显的DNA ladder,对照组、姜黄素组以及姜黄素-高糖组未见明显DNA ladder。与对照组相比,高糖组TNF-α表达上调(P<0.01),姜黄素组及姜黄素-高糖组TNF-α表达无明显变化(P>0.05)。结论:姜黄素抑制高浓度葡萄糖诱导的RF/6A细胞凋亡、维持细胞活力,可能与姜黄素恢复高浓度葡萄糖诱导的TNF-α表达有关。     

高糖对人晶状体上皮细胞凋亡的作用

目的:研究不同浓度的高糖(HG)对人晶状体上皮细胞凋亡的作用。方法:用不同浓度的HG诱导人晶状体上皮细胞凋亡,处理组:DMEM+HG;对照组:DMEM。用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测人晶状体上皮细胞的生长活性;原位末端核苷标记(TUNEL)法检测细胞凋亡的凋亡指数(AI),并在电镜下观察TUNEL染色阳性细胞的形态及分布。结果:HG可抑制人晶状体上皮细胞生长,诱导细胞的凋亡,并呈剂量及时间依赖性,HG诱导组细胞凋亡率明显高于正常组(P<0.01)。TUNEL染色法在电镜下观察到HG诱导24h后,TUNEL染色阳性细胞核固缩或碎裂呈棕黄色,细胞大小不一;而TUNEL染色阴性细胞着色均匀,大小均一。结论:高糖具有促使人晶状体上皮细胞凋亡形成的作用,尤其是在120~150mmol/L浓度范围内。     

银杏叶提取物对高糖环境下人视网膜血管内皮细胞增殖、凋亡的影响

目的:研究不同浓度的银杏叶提取物(ginkgo biloba ex-tract,GBE)对体外培养的高糖环境下人视网膜微血管内皮细胞(human retinal capillary endothelial cells,HRCECs)增殖和凋亡的影响。方法:体外培养从角膜移植术后新鲜人眼球提取的HRCECs。取生长良好的第3～4代细胞用于实验,实验分为低糖对照组、高糖对照组、高糖+不同浓度GBE组,用噻唑蓝(MTT)比色法检测HRCECs的增殖。吖啶橙(AO)/溴乙锭(EB)荧光双染色、流式细胞术检测HRCECs的凋亡率,并在荧光显微镜下观察荧光染色后HRCECs凋亡形态学改变。结果:MTT比色法结果显示:用12.5,25.0,50.0,100.0mg/L的GBE处理高糖环境下HRCECs,作用24,48,72h,高糖+不同浓度GBE组与高糖对照组相比具有显著性差异(P<0.05),高糖+不同浓度GBE组之间两两比较均具有显著性差异(P<0.05)。AO/EB荧光染色法、流式细胞术检测细胞凋亡率显示:高糖+不同浓度GBE组与高糖对照组比较均有显著性差异(P<0.05),高糖对照组显著高于低糖对照组(P<0.05)。荧光显微镜下观察到活细胞,早期凋亡细胞,晚期凋亡细胞,非凋亡的死亡细胞生物学形态改变的特征。结论:GBE促进高糖环境下HRCECs的增殖,抑制其凋亡。     

脑源性神经营养因子（BDNF）对高糖环境下视网膜Müller细胞的保护作用

目的　探讨脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor,BDNF）对高糖环境下视网膜Müller细胞的保护作用。方法　该研究实验分为3组,对照组、高糖组（对照组中添加25 mmol·L^-1葡萄糖）、BDNF组（高糖组添加100 mg·L^-1 BDNF）,实验干预24 h后,在倒置显微镜下观察各组细胞形态和生长状态,并进行各项指标检测。用倒置荧光显微镜观察各组视网膜Müller细胞的生长状态并检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）荧光强度;流式细胞仪检测视网膜Müller细胞凋亡率,Western blot检测Bax、Bcl-2蛋白表达情况。结果　与对照组相比,高糖组Müller细胞生长状态差,细胞突起减少,细胞失去原有形态,由原来的不规则形变为类圆形,折光性增强;而BDNF组与对照组相比无明显差异;与高糖组相比,BDNF组细胞生长状态明显改善,细胞突起增多,细胞折光性减弱。与对照组相比,高糖组Müller细胞内ROS含量显著升高（P<0.01）,BDNF组细胞内ROS含量亦升高（P<0.01）;与高糖组相比,BDNF组ROS含量显著减少（P<0.01）。与对照组相比,高糖组细胞凋亡率显著升高（P<0.01）,BDNF组凋亡率仍高于对照组（P<0.01）;与高糖组相比,BDNF组凋亡率明显减少（P<0.01）。与对照组相比,高糖组Bcl-2蛋白相对表达量显著减少,Bax蛋白相对表达量明显升高,Bcl-2/Bax二者比值降低（P<0.01）,BDNF组与对照组相比相对表达量差异无统计学意义（P>0.05）;与高糖组相比,BDNF组Bcl-2蛋白相对表达量明显升高,Bax蛋白表达减少,Bcl-2/Bax比值升高（P<0.01）。结论　高糖环境能诱导视网膜Müller细胞凋亡,而给予外源性BDNF能够显著抑制高糖环境诱导的视网膜Müller细胞凋亡,对视网膜Müller细胞起到保护作用。     

黄芪提取物对体外高糖培养牛视网膜毛细血管周细胞的影响

目的:观察中药黄芪提取物对体外高糖培养牛视网膜毛细血管周细胞(pericyte,PC)的影响.方法:在体外高糖(20mmol/L)培养2d的第3代周细胞中加入不同浓度的黄芪提取物,继续培养2d,用MTT比色法,测定每组的吸光度值(A值),根据A值计算抑制率.另在周细胞中加入0.4g/L黄芪提取物,2d后收集细胞,用流式细胞仪测定凋亡细胞百分率.结果:黄芪提取物0.0256～10 000 mg/L浓度组对高糖培养周细胞的增殖有促进作用,其A值与空白对照组相比有显著性差异(P＜0.05).在周细胞以20mmol/L葡萄糖培养48h后,加入400mg/L黄芪提取物组的细胞凋亡百分率低于空白对照组和模型组(12.2%±1.5% vs 7.30%±2.0%,18.6%±2.1%P＜0.05).结论:黄芪能抑制周细胞凋亡,提高体外高糖培养视网膜毛细血管周细胞的存活力.     

色素上皮衍生因子对高糖刺激下大鼠视网膜Müller细胞凋亡的影响

目的 探讨色素上皮衍生因子(pigmentepitheliumderivedfactor,PEDF)对高糖刺激下视网膜Müller细胞凋亡的影响,为PEDF治疗糖尿病视网膜病变提供实验依据。方法 实验分3组,分别是正常对照组、高糖模型(HG)组(培养基内含有25mmolL-1的葡萄糖)和PEDF处理高糖模型(HG+PEDF)组(在高糖培养基础上加入25mgL-1的PEDF)。反复胰蛋白酶消化法培养纯化SD大鼠视网膜Müller细胞,免疫荧光双标鉴定纯度;应用倒置相差显微镜观察Müller细胞形态,AnnexinVFITC、PI染色流式细胞技术检测Müller细胞的凋亡率,RTPCR测定Müller细胞bcl2、baxmRNA的表达变化。结果 原代培养的Müller细胞传至3代时纯度为95%以上。正常对照组、HG组、HG+PEDF组Müller细胞早期凋亡率分别为(1.223±0106)%、(2.657±0.120)%、(1.907±0.117)%,baxmRNA相对灰度值分别为0.269±0.041、0.804±0.052、0.528±0.018,bcl2mRNA相对灰度值分别为0.904±0.021、0.413±0015、0.521±0.010。HG组与正常对照组相比,Müller细胞形态发生明显改变,细胞凋亡率显著增加(P<0.001),baxmRNA表达显著升高,bcl2mRNA表达显著降低(均为P<0.01);HG+PEDF组Müller细胞凋亡率较HG组显著降低(P<0.001),baxmRNA表达显著降低,bcl2mRNA表达显著升高(均为P<0.01),但仍有别于正常对照组(均为P<005)。结论 外源给予PEDF可以显著减少高糖刺激引起的Müller细胞的凋亡,对视网膜Müller细胞具有显著的保护作用。     

高脂诱导肥胖小鼠的视网膜变性及其与氧化应激的关系

目的:探讨高脂饮食建立的C57BL/6小鼠肥胖模型的视网膜变性的超微结构改变及其与氧化应激的关系。方法:高脂饲料喂养19wk后,小鼠分为肥胖抵抗(DIO-R)组和肥胖倾向(DIO)组,同时对照组小鼠给予基础饲料。应用光镜、透射电镜及TUNEL法检测3组小鼠视网膜超微结构的改变及凋亡情况,并应用生化方法检测视网膜的氧化和抗氧化指标。结果:与对照组及DIO-R组比较,DIO组小鼠视网膜及外核层(ONL)变薄(P<0.01);感光细胞出现凋亡及坏死,其外段视盘膜排列紊乱,部分溶解、断裂,神经节细胞体积变小,细胞质分布紊乱,核染色质固缩;TUNEL法检测结果显示,在ONL层可见较多的凋亡细胞,其细胞凋亡率显著升高(P<0.01)。与对照组比较,DIO组小鼠视网膜匀浆丙二醛(MDA)含量明显升高(P<0.01),超氧化物歧化酶(SOD)活力显著下降(P<0.05)。结论:高脂诱导的肥胖可导致C57BL/6小鼠视网膜变性及细胞凋亡,其机制可能与氧化应激有一定关系。     

人参皂苷Rg3对高糖下视网膜血管内皮细胞增殖及ICAM-1表达的影响

目的:研究人参皂苷Rg3对体外培养的高糖条件下人视网膜血管内皮细胞(human retinal capillary endothelial cell,HRCEC)增殖与细胞间黏附分子-1(intercellular adhesionmolecule-1,ICAM-1)表达的影响。方法:体外培养从角膜移植术后新鲜人眼球提取的HRCECs。取生长良好的第3~4代细胞用于实验,实验分为低糖对照组、高糖对照组、高糖+不同浓度Rg3组,用噻唑蓝(MTT)比色法检测HRCEC的增殖。通过免疫细胞化学法观察各分组HRCEC ICAM-1的表达情况。结果:MTT比色法结果显示,高糖对照组与低糖对照组没有显著差异(P>0.05),用10,20,40,80,160mg/L的人参皂苷Rg3处理高糖下HRCEC24,48,72h与高糖对照组相比具有显著性差异(P<0.05),高糖+不同浓度Rg3组之间呈时间和浓度的显著性差异(P<0.05)。免疫细胞化学检测显示,与低糖对照组相比,高糖对照组ICAM-1表达明显(P<0.05),用40,80,160mg/L的人参皂苷Rg3处理高糖下HRCEC48h与高糖对照组相比ICAM-1表达有显著性差异(P<0.05),高糖+不同浓度Rg3组之间两两比较均具有显著性差异(P<0.05)。结论:人参皂苷Rg3可抑制高糖下视网膜血管内皮细胞增殖和ICAM-1表达。     

高糖体外对视网膜色素上皮增生以及活性氧表达的影响

目的:研究高浓度葡萄糖对体外培养的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞增生以及活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成的影响。方法:体外培养人RPE(ARPE-19),随机分成4组,即正常对照组用含5.6mmol/L葡萄糖的DMEM/F12培养液,高糖组用30mmol/L葡萄糖的DMEM/F12培养液,高糖+SB203580组用p38-MAPK特异性阻断剂SB20358010μmol/L预处理30min后,再用含30mmol/L葡萄糖的DMEM/F12培养液,甘露醇组(渗透压对照组)用含5.6mmol/L葡萄糖和24.4mmol/L甘露醇的DMEM/F12培养液。各组培养48h用MTT法检测各组视网膜色素上皮细胞的增生活力,用CM-H2DCFDA荧光染色检测RPE细胞中ROS的产生量。结果:与对照组相比,高糖培养人视网膜色素上皮细胞48h可以导致RPE细胞的损伤,抑制RPE细胞增殖,并使ROS生成增加,在一定程度上,与p38-MAPK途径的激活有关。结论:高糖培养ARPE-19可致细胞损伤,抑制增殖,并使ROS生成增加。     

高糖对牛眼小梁细胞形态、增殖及凋亡的影响

目的:建立牛眼小梁细胞体外培养体系,观察高浓度葡萄糖对小梁细胞的影响,研究高糖与开角型青光眼(primary open angle glaucoma,POAG)以及糖尿病与POAG之间的关系,探讨糖尿病开角型青光眼的发病机制,从而为指导开角型青光眼的临床用药提供重要依据。方法:以新鲜牛眼为材料,分离并培养小梁细胞,用光学镜、电镜观察正常小梁细胞的形态。将传至第3代的小梁细胞制作成细胞悬液、计数并接种于培养板(或培养瓶)中,待细胞贴壁后,将细胞分为两组:对照组(葡萄糖浓度为5.5mmol/L)和高糖组(葡萄糖浓度为35mmol/L),分别培养7d后收集细胞,用透射电子显微镜、MTT法、流式细胞仪(FCM)检测法,研究高糖对小梁细胞形态、增殖和凋亡的影响。结果:高糖组与对照组相比较,小梁细胞胞浆内细胞器减少,内质网、高尔基复合体、线粒体等细胞器肿胀,溶酶体及脂肪滴增多,核浆比减小,可见凋亡小体;高浓度葡萄糖对小梁细胞的增殖有明显的抑制作用,能够促进小梁细胞的凋亡,均有统计学意义(P<0.05)。结论:高糖可能通过使小梁细胞的增殖能力下降,凋亡率增加,使近管小梁网的网状结构改变,网孔变小,改变房水流出途径的阻力导致眼内压升高,可能是糖尿病患者PO-AG发病率增高的原因之一。     

血管内皮生长因子-B对高糖环境下人视网膜色素上皮细胞凋亡的保护作用

目的探讨血管内皮生长因子-B(vascular endothelial growth factor-B,VEGF-B)对高糖环境下诱导的人视网膜色素上皮细胞(cultured human retinal pigmentepithelial cells-19,ARPE-19)凋亡的保护作用及其机制。方法将ARPE-19细胞分为正常组(体积分数10%胎牛血清+5.6 mmol·L^-1葡萄糖)、高糖组(体积分数10%胎牛血清+30 mmol·L^-1葡萄糖)、药物组(100μg·L^-1 VEGF-B+体积分数10%胎牛血清+30 mmol·L^-1葡萄糖)、抑制组20μmol·L^-1 PD98059(ERK1/2阻滞剂)+100μg·L^-1 VEGF-B+体积分数10%胎牛血清+30 mmol·L^-1葡萄糖。倒置显微镜观察细胞的形态变化;CCK-8法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测蛋白Bcl-2、Bax及细胞外信号调节激酶1/2(extracelluar regulated protein 1/2,ERK1/2)、p-ERK1/2表达水平;实时荧光定量PCR检测Bcl-2 mRNA、Bax mRNA的表达。结果倒置显微镜发现,高糖组细胞皱缩变小变圆,正常组及药物组细胞体积大、有突起,抑制组细胞形态及数量接近正常组,少许细胞皱缩变圆,体积变小。CCK-8法检测显示,高糖组细胞较正常组存活率降低,药物组较高糖组细胞存活率升高,抑制组细胞存活率介于高糖组和药物组之间,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。流式细胞仪检测显示,高糖组较正常组细胞正常细胞率下降、细胞凋亡率升高,药物组较高糖组正常细胞率升高、细胞凋亡率下降,抑制组细胞凋亡率介于高糖组和药物组之间,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。Western blot和实时荧光定量PCR检测显示,高糖组较正常组Bcl-2蛋白及Bcl-2 mRNA表达减少、Bax蛋白及Bax mRNA表达增多、Bcl-2/Bax蛋白及mRNA比值均降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05);药物组较高糖组Bcl-2蛋白及Bcl-2 mRNA增多、Bax蛋白及Bax mRNA减少、Bcl-2/Bax蛋白及mRNA比值均升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05);高糖组p-ERK1/2表达量较正常组增多、药物组p-ERK1/2较高糖组表达增多、抑制组p-ERK1/2表达量介于药物组和高糖组之间,差异均有统计学意义(均为P<0.05),四组总ERK1/2表达量不变,差异无统计学意义(P>0.05)。结论VEGF-B具有抑制高糖环境培养的ARPE-19细胞凋亡作用,其作用机制部分是通过ERK1/2信号通路,调节Bcl-2和Bax基因表达而实现。     

恒定性及波动性高糖对牛视网膜周细胞凋亡的影响

目的探讨恒定性高糖及不同频率的波动性高糖对原代培养的牛视网膜周细胞增生、细胞周期及凋亡的影响。方法以体外培养3代近融合的牛视网膜毛细血管周细胞为对象，分别在对照组（5．5mmol／L）、恒定性高糖组（25mmol／L）及不同波动频率的高糖组（5．5mmol／L与25mmol／L交替，频率分别为6h和24h）中孵育6d，采用MTT比色法观察周细胞增生情况；流式细胞术观察周细胞周期情况；TUNEL法检测培养后周细胞的凋亡率。结果周细胞增生受抑制，周期阻滞，出现典型的细胞凋亡特征。恒定性高糖组的作用高于波动性高糖组（P〈0．05）；波动性高糖组内波动频率越高作用越明显（P〈0．05）。结论恒定性高糖较波动性高糖可能具有更强的抑制周细胞增生、周期阻滞及诱导凋亡作用，波动组间波动频率高者比频率低者作用更明显。     

灯盏花素通过调节Bcl-2和Bax表达拮抗高糖诱导的RPE细胞损伤

目的:探讨灯盏花素对高糖环境下人视网膜色素上皮(RPE)细胞氧化应激的影响。方法:常规培养RPE细胞,分为对照组(葡萄糖浓度为5.5mmol/L)、高糖组(葡萄糖浓度为30mmol/L)、灯盏花素低浓度组(30mmol/L葡萄糖+1μmol/L灯盏花素)和灯盏花素高浓度组(30mmol/L葡萄糖+10μmol/L灯盏花素)。细胞划痕实验观察RPE细胞的迁移性,CCK-8法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)水平变化,Hoechst染色法观察凋亡细胞比例,Western blot分析各组Bcl-2和Bax的变化。结果:细胞划痕实验结果显示,灯盏花素低浓度组和灯盏花素高浓度组RPE细胞形态较高糖组改善,细胞迁移性较高糖组增加;CCK-8结果显示,用1、10μmol/L浓度的灯盏花素处理后,RPE细胞存活率分别提高到61.06%±5.59%和79.81%±7.04%,与高糖组(40.63%±4.72%)比较有差异(P<0.05);2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯(H2DCFDA)荧光探针染色结果显示,灯盏花素抑制了RPE细胞内ROS水平;Hoechst染色法显示,1、10μmol/L灯盏花素处理后发生凋亡的RPE细胞数量逐渐减少;Western blot结果显示,灯盏花素增强了Bcl-2蛋白的表达,降低了Bax蛋白的表达。结论:灯盏花素可以抑制高糖诱导的RPE细胞氧化损伤和凋亡的发生,为糖尿病视网膜病变的治疗靶点研究提供了理论支持。     

表没食子儿茶素没食子酸酯抑制地塞米松体外诱发兔白内障的作用

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对抑制地塞米松(Dex)诱导体外培养兔晶状体上皮细胞(LEC)凋亡的作用。方法:采用体外培养正常家兔晶状体,随机将家兔晶状体分为3组:空白对照组(A);Dex(10μmol/L)处理组(B);Dex+EGCG(10mmol/L)实验组(C)。分别于3,5,7d培养结束后观察各组晶状体的透明度,并进行相关比较及统计学分析。TUNEL法检测EGCG对Dex诱发的兔LEC凋亡细胞数量的影响,并进行相关比较及统计学分析。结果:EGCG实验组晶状体透明性均低于空白对照组,但高于Dex处理组,差异有显著统计学意义(P<0.01);Dex处理组LEC凋亡率显著高于空白对照组(P<0.01);Dex处理组与EGCG实验组比较,有显著性差异(P<0.01)。结论:EGCG可抑制Dex损伤所诱导兔LEC调亡,具有明显抑制激素性白内障形成的作用。     

PI3K/Akt信号通路对高糖状态下视网膜Müller细胞的影响

目的　探讨PI3K/Akt信号通路对高糖状态下视网膜Müller细胞的影响及机制。方法　本实验分两部分,动物实验:雄性SD大鼠随机分成对照组、糖尿病组、胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factors-1,IGF-1)组、IGF-1+LY294002(PI3K/Akt信号通路抑制剂)组。后三组采用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)(50 mg·kg^-1)诱导成为糖尿病模型。模型诱导成功后,IGF-1组给予IGF-1 (80 g·L^-1) 5 μL玻璃体内注射给药,IGF-1+LY294002组给予5 μL(IGF-1+ LY294002)(80 μg·L^-1)玻璃体内注射给药。细胞实验:对培养的Müller细胞进行不同处理,分为对照组(空白对照)、高糖组(30 mmol·L^-1葡萄糖)、IGF-1组(30 mmol·L^-1葡萄糖+80 μg·L^-1 IGF-1)、IGF-1+LY294002组［30 mmol·L^-1葡萄糖+80 μg·L^-1(IGF-1+ LY294002)］。HE染色检测大鼠视网膜内核层(inner nuclear layer,INL)细胞密度,免疫荧光染色检测大鼠视网膜神经胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acid protein,GFAP)表达及Müller细胞Caspase-3表达,TUNEL染色检测细胞凋亡情况,Western blot检测p-Akt、NF-κB、Caspase-3蛋白相对表达水平。结果　动物实验中,与对照组相比,糖尿病组及IGF-1+LY294002组GFAP表达均明显增加,INL细胞密度均明显降低(均为P<0.05);与糖尿病组相比,IGF-1组GFAP表达明显下降,INL细胞密度明显增加(均为P<0.05)。细胞实验中,与对照组相比,高糖组及IGF-1+LY294002组细胞凋亡率和NF-κB、Caspase-3蛋白相对表达水平均明显增加,p-Akt蛋白相对表达均明显降低(均为P<0.05);而与高糖组相比,IGF-1组细胞凋亡率、NF-κB及Caspase-3蛋白相对表达均明显下降,p-Akt蛋白相对表达明显增加(均为P<0.05)。结论　激活PI3K/Akt通路可对抗高糖状态下视网膜Müller细胞凋亡,其机制可能与下调NF-κB、Caspase-3蛋白表达有关。