雷公藤内酯醇抑制滑膜成纤维细胞COX-2和iNOS表达

目的:研究雷公藤内酯醇对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RASF)增殖和表达环氧化酶-2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及合成前列腺素E2(PGE2)、一氧化氮(NO)的影响,并探讨其机制.方法:分离培养人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞,用TNFα(20 μg/L)刺激,同时加或不加雷公藤内酯醇(TP,0～100 μg/L).分别用3H-TdR法、竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)和硝酸酶还原法、半定量逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)法、细胞酶免疫法及蛋白免疫印迹(Western-blot)法,检测滑膜细胞的增殖活性、细胞培养上清液中PGE2和NO的水平,滑膜细胞COX-2和iNOS mRNA表达水平及蛋白表达水平.同时提取各组细胞蛋白,测定其核转录因子NF-κB活性.结果:TP(>20 μg/L)能显著抑制TNFα诱导的RASF COX-2和iNOS表达,并明显减少PGE2和NO的生成,抑制作用与TP浓度呈明显相关性.同时观察到,TP对TNFα激活的RASF核转录因子NF-κB活性有明显的抑制作用(IC50≈35 μg/L),TP对RASF NF-κB活性的抑制程度与其抑制RASF COX-2和iNOS表达的效应相一致.实验未观察到TP对RASF增殖的影响.结论:TP可显著抑制TNFα刺激的RASF COX-2和iNOS的表达及其诱导产物PGE2和NO的生成,这种作用可能通过TP抑制RASF NF-κB的活性而实现.     

骨关节炎、类风湿关节炎的关节滑液和血清中基质金属蛋白酶-1、2、3和9的含量及意义

目的探讨骨关节炎(OA)和类风湿关节炎(RA)的关节滑液和血清中基质金属蛋白酶(MMPs)含量的变化。方法采集17例非OA、RA患者(对照组)、33例OA患者(OA组)和10例RA患者(RA组)血清及关节滑液标本,采用酶联免疫吸附试验检测标本中MMP-1、2、3及9的含量。结果OA、RA组血清中MMP-2、3及9的含量分别为(17．1±6．9)、(3．6±0．2)、(2．7±0．4)ng／mL和(91．2±23．9)、(7．3±0．5)、(2．7±0．5) ng／mL,均显著高于对照组[(2．1±0．3)、(1．4±0．4)和(0．5±0．3)ng／mL,P值均<0．01];而MMP-1的含量分别为(20．7±7．8)和(19．0±2．8)ng／mL,与对照组[(18．7±5．2)ng／mL]的差异无统计学意义(P值均> 0．05)。OA、RA组关节滑液中MMP-1、2、3和9的含量分别为(557．4±41．5)、(1 246．0±42,0)、(384．3±44．6)、(15．2±1．4)ng／mL和(644．4±27．3)、(2 470．0±209．0)、(429．1±34．6)、(20．9±1．0)ng／mL,均显著高于对照组[(106．2±32．9)、(112．7±18．6)、(33．0±8．7)和(0．6±0．3)ng／mL,P值均<0．01]。RA组血清中MMP-2、3的含量均显著高于OA组(P值均<0．01),而两组血清中MMP-1、9含量的差异均无统计学意义(P值均>0．05);RA组关节滑液中MMP-1、2、3和9的含量均显著高于0A组(P值均<0．01)。结论OA、RA患者的关节滑液及血清中部分MMPs含量升高,且RA患者的MMPs含量高于OA患者。     

RNA干扰对人环氧化酶-2合成以及对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞生物学活性的影响

目的分析siRNA对前列腺素E2（PGE2）、白介素-1β（IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子（TNF—α）和血管内皮生长因子（VEGF）合成的影响。方法设计4条（1^#-4^#）环氧化酶-2（hCOX-2）mRNA的小分子干扰RNA（siRNA）,设立空白阴性（CTL）和1条随机序列（NC）对照。应用LipofectAMINE 2000将siRNA转染入滑膜成纤维细胞（RASF）,4h后,再加入100nmol/L的佛波酯。应用RT-PCR和Western印迹分别检测hCOX-2 mRNA和蛋白表达水平。采用ELISA法检测各组上清液中致炎因子水平。结果转染48h后,NC、1^#-4^#siRNA组与CTL组mRNA条带吸光度比值分别为0．72、0,3、0．25、0．4、0．04。转染36和48h后,各组与CTL组hCOX-2蛋白吸光度比值分别为1．04、0、52、0．39、0．9、0和1．05、0．52、0．51、0．9、0．15;4^# siRNA组上清液PGE2、IL-1β、TNF—α、IL-6和VEGF水平较其他各组为低,且与其他处理组相比死亡细胞率差异无统计学意义（P均〉0．05）。结论4^#iRNA组能有效抑制COX-2mRNA和蛋白表达,其上清液中致炎因子水平最低,死亡细胞较苴他各组无明显增加．     

类风湿关节炎病人滑膜细胞增生与fas和bcl-2基因的表达

目的探讨类风湿关节炎（ＲＡ）病人滑膜细胞增生是否与细胞凋亡有关。方法通过体外转录合成,并标记ｆａｓ及其配体（ｆａｓＬ）和ｂｃｌ－２ＲＮＡ探针,应用原位杂交方法检测１９例滑膜组织的基因表达。用免疫组织化学方法检测蛋白表达。用ＤＮＡ电泳和流式细胞分析仪检测细胞凋亡。结果７例ＲＡ病人滑膜衬里层细胞明显增生,其中６例有ｆａｓｍＲＮＡ表达,５例表达ｂｃｌ－２,而ｆａｓＬｍＲ－ＮＡ在所有病例均不表达。在ＲＡ滑膜衬里层中,ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ总是伴随ｆａｓ而表达,且ｆａｓ和ｂｃｌ－２的表达率较骨性关节炎（ＯＡ）及正常对照者（ＮＣ）明显增高（Ｐ＜０．０５）。免疫组织化学结果表明,ｆａｓ和ｂｃｌ－２蛋白在滑膜衬里层有表达。从６例ＲＡ、４例ＯＡ病人及３例正常对照者滑膜组织中提取ＤＮＡ,仅１例ＯＡ病人可见典型的ＤＮＡ梯形图形。培养的ＲＡ和ＯＡ病人滑膜细胞经流式细胞分析仪检测,表明自发凋亡的细胞很少（＜５％）。结论ＲＡ病人滑膜细胞内不存在明显的细胞凋亡现象,ｂｃｌ－２过量表达可能抑制了ＲＡ滑膜细胞凋亡,是ＲＡ滑膜细胞增生的原因之一。     

PI3K/Akt/mTOR通路与自噬在类风湿关节炎滑膜细胞增生中的意义

细胞自噬是生物体生长发育中极为关键的自救行为,在应激状态下,通过清除细胞内变性蛋白及坏死物质,重建结构,维持细胞生存,但过度的自噬则会引起细胞的Ⅱ型凋亡。PI3K/Akt/mTOR是广泛存在于多种细胞内的一条重要信号通路,参与体内多种生理病理过程,其活化后对细胞自噬有抑制作用。在类风湿关节炎发病的早期,滑膜成纤维细胞（RASF）可通过多种途径启动自噬,维持RASF细胞内环境的稳定和细胞增生,随着病情的进展,血小板活化颗粒如PDGFRα等释放后可通过激活RASF中的PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制自噬,从而避免RASF因过度自噬而诱导的Ⅱ型细胞凋亡,使滑膜细胞持续增生,加重RA的病情。本文旨在对PI3K/Akt/mTOR信号通路与自噬影响RA滑膜细胞持续增生的意义进行综述,以期探讨RA的发病机制、寻找新的治疗靶点。     

脂联素对人成骨细胞分化的影响

目的:研究脂联素对成骨细胞的分化作用.方法:免疫印迹检测体外培养成骨细胞脂联素受体(adiponectin receptor,AdipoR)表达.用酶联免疫吸附试验检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性;用放射免疫测定法测定骨钙素(osteocalcin,OC);并观测脂联素对矿化的影响.用siRNAs抑制AdipoR1表达,观察脂联素对成骨细胞分化作用的变化.结果:检测到成骨细胞AdipoR1蛋白表达.脂联素可提高ALP活性和促进OC分泌,并促进矿化结节形成,此作用可被AdipoR1的siRNAs转染抑制.脂联素作用于成骨细胞可诱导p38和JNK磷酸化,而p38抑制剂SB203580可减轻其对成骨细胞ALP活性的影响.结论:脂联素通过诱导p38信号转导途径诱导人成骨细胞分化.     

Immunohistochemical study of Fas antigen expression in synovial tissues from patients with rheumatoid arthritis

ＩｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｓｔｕｄｙｏｆＦａｓａｎｔｉｇｅｎｅｘｐｒｅｓｉｏｎｉｎｓｙｎｏｖｉａｌｔｉｓｕｅｓｆｒｏｍｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓＹｕＱｉｎｇｈｏｎｇ于清宏,ＬｉｕＸｉａｎｇｙｕａｎ刘湘源...     

甲氨蝶呤对类风湿关节炎滑膜细胞增殖及细胞周期的影响

目的　研究甲氨蝶呤 (MTX)对类风湿关节炎 (RA)滑膜细胞增殖及细胞周期的影响 ,揭示MTX治疗RA的机制。方法　应用克隆形成实验和流式细胞术分别测定RA患者滑膜细胞的增殖水平和细胞周期。结果　加入不同浓度MTX (0 2～ 2 μmol/L)的实验组 ,RA患者滑膜细胞克隆形成率均显著低于未加MTX的空白对照组 (P<0 0 5 ) ;细胞周期分析显示加入不同浓度MTX后第 5、 8天 ,细胞停留在G1期的比例比空白对照组明显增加 (P <0 0 5 ) ,而S、G2 期的细胞比例则明显减少 (P <0 0 5 ) ;MTX能明显抑制滑膜细胞的增殖水平 ,并呈剂量依赖性。结论　MTX治疗RA ,主要作用于RA患者滑膜细胞的增殖及增殖相关的病理过程。     

血管翳并非类风湿关节炎的专利—膝骨关节炎血管翳病理形态观察

目的比较类风湿关节炎（RA）与骨关节炎（OA）滑膜组织病理学差异。方法回顾性分析72例RA、24例OA患者经关节 腔镜手术获得的滑膜标本病理苏木精-伊红（HE）染色切片,经两位高年资病理医师对滑膜细胞（FLS）增生程度、血管增生程度、 纤维组织增生程度、淋巴细胞浸润程度几个方面进行量化评分,对有无浆细胞浸润采用计数统计。并结合临床分析RA、OA滑 膜病理形态学的差异。结果OA滑膜也存在着血管翳形成,但OA-FLS增生程度、纤维组织增生程度和淋巴细胞浸润程度,及 浆细胞浸润比例明显低于RA血管翳;血管增生程度低于RA血管翳,但无统计学差异。OA血管翳在显微镜下可表现的与RA 难以区分。结论OA滑膜存在着血管翳病理变化,FLS增生程度、纤维组织增生程度和淋巴细胞浸润程度,及浆细胞浸润比例 明显低于RA血管翳;OA与RA血管翳的差异给诊断和治疗提示了一定潜在的价值。     

MRI结合血清、关节液中NO、MMP3水平在膝关节类风湿与骨性关节炎的诊断价值

目的探讨磁共振成像(magnetic resonanceimaging,MRI)联合血清及关节液中一氧化氮(Nitric Oxide,NO)、基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)水平鉴别诊断膝类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)、骨关节炎(osteoarthritis,OA)的价值及影像特点分析。方法选取2017年10月-2018年10月本院收治的40例RA患者作为RA组,同期收治的44例OA患者作为OA组。比较两组MRI影像特点,血清及关节液中NO、MMP3水平,分析MRI、血清及关节液中NO、MMP3水平单独诊断及联合诊断的效能。结果 RA组内侧胫骨关节骨髓水肿率与OA组无明显差异(P>0.05),RA组内侧胫骨关节囊性坏死率显著高于OA组(P<0.05),RA组外侧胫骨骨关节骨髓水肿、囊性坏死率均显著高于OA组(P<0.05),RA组内侧、外侧II^III级半月板损伤率均显著高于OA组(P<0.05),RA组滑膜增生率显著高于OA组(P<0.05);RA组血清和关节液NO、MMP-3水平均显著高于OA组(P<0.05);经受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析,MRI联合血清和关节液中NO、MMP3诊断价值高于各单项检查指标。结论 RA和OA的MRI影像学图像存在一定差异,MRI联合血清和关节液NO、MMP-3指标诊断,可进一步提高两者鉴别诊断价值。     

关节炎患者血清及关节液白细胞介素6表达水平分析

目的：比较白细胞介素6(IL-6)在几种不同类型关节炎患者血清及关节液中的表达水平,并探讨其在类风湿关节炎（RA）发病中的作用及其与RA病情活动的相关性。 方法：采用放射免疫分析法检测RA、强直性脊柱炎、骨性关节炎、痛风等关节炎患者的血清和关节液中IL-6水平,并分析其与RA病情活动的关系。 结果：RA患者的血清及关节液中IL-6的水平显著高于其他关节炎患者;且RA患者关节液IL-6水平显著高于血清。RA患者血清IL-6水平与关节压痛数、关节肿胀数、C-反应蛋白（CRP）呈明显正相关;而关节液IL-6水平则与关节疼痛数、关节压痛数、关节肿胀数、血沉（ESR）、CRP呈明显正相关。 结论：IL-6与RA的发病有关,检测RA患者关节液和血清中IL-6水平有助于RA的诊断及判断病情的活动性。     

A novel tumor-suppressor candidate gene-ndr2 is differentially expressed between osteoarthritis synovium cells and rheumatoid arthritis synoviuni fibroblasts

Objective: To test whether the novel tumor-suppressor candidate gene-ndr2 is also differentially expressed between osteoarthritis synovium cells (OASC) and rheumatoid arthritis synovium fibroblasts (RASF), and whether ndr2 can suppress the growth of RASF in vitro. Methods: Dot blotting, cell culture and gene transfection, cell cycle analysis techniques were applied to investigate the effect of ndr2 on the cell phenotype and cell cycles. Results: ndr2 is expressed in OASC but absent in RASF. Transient transfection of ndr2 into RASF can suppress the growth of RASF from phenotype observation. Cell cycle analysis showed that apoptotic peaks can be detected in RASF cells transfected with ndr2 gene. Conclusion: Novel tumor suppressor candidate ndr2 is not only differentially expressed between OASC and RASF but also can induce the apoptosis of RASF in vitro.     

Peri-articular Lymphatic System and "Bi" Theory of Chinese Medicine in the Pathogenesis and Treatment of Arthritis

Rheumatoid arthritis (RA) and osteoarthritis (OA) are the two most common joint diseases, and they have characterization of synovial inflammation and cartilage destruction, associated with the accumulation of numerous catabolic mediators and inflammatory cells in the synovial space and surrounding soft tissues. How these factors are cleared and if the "clearance" process contributes to pathogenesis of arthritis are not known. Recently, we found the existence of the peri-articular lymphatic system in mouse joints. The blockade of lymphangiogenesis and lymphatic draining function accelerates while stimulation of lymphatic function attenuates the severity of joint tissue lesions in mouse models of RA and OA. More importantly, we noticed the similarity between the dysfunction of lymphatic drainage in arthritic joints and "Bi" theory of Chinese medicine (CM), and demonstrated that several Bi disease-treated herbal drugs directly affect the function of lymphatic endothelial cells. Here we review the advances about the interactions between joint inflammation and changes in the peri-articular lymphatic system and discuss our view of linking "Bi" theory of CM to lymphatic dysfunction in arthritis.     

骨关节炎关节滑液中白细胞介素18及其他相关因子含量测定

目的 探讨IL-18在骨关节炎发病机制中的作用及临床意义,检测膝骨关节炎关节滑液中细胞因子白介素-18(IL-18)和IL-6、IL-8、炎症介质前列腺素E2(PGE2)含量关系.方法 30例膝骨关节炎患者的关节滑液,男14例、女16例,ELISA分别检测IL-18、IL-6、IL-8和PGE2含量,并对IL-18和这些因子做统计学分析.结果 骨关节炎患者膝关节滑液中PGE2的含量随IL-18增加有增高的趋势,IL-18的平均值(220±304)pg/ml,PGE2的平均值为(89±104)pg/ml.30例患者膝关节滑液IL-18和PGE2呈正相关关系(r=0.628,P<0.01);与此同时,IL-6的平均值为(1200±1587)pg/ml与IL-8的平均值为(5190±6024)pg/ml,表明IL-6和IL-8的增高与IL-18存在一定的正相关关系.结论 人体中IL-18能促进PGE2的表达.说明IL-18可能参与了软骨细胞的变性、破坏.抑制IL-18的表达可能成为一种早期治疗骨关节炎的有效方法.     

甲氨蝶呤对类风湿关节炎滑膜细胞增生及细胞周期的影响

目的研究甲氨蝶呤(MTX)对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞增生及细胞周期的影响,揭示MTX治疗RA的机制。方法应用MTS/PMS比色法和流式细胞术分别测定MTX处理和未处理RA患者滑膜细胞的细胞增生水平和细胞周期。结果加入不同浓度MTX(0.2~2.0 μmol/L),RA患者滑膜细胞接种后第4天起增生水平均显著低于未处理的RA患者滑膜细胞(P<0.05);细胞周期分析显示加入不同浓度MTX(0.2~2.0 μmol/L)后第5、8天,RA患者滑膜细胞停留在G1期的比例要比未处理的RA患者滑膜细胞明显增加(P< 0.05),而S、G2期的细胞比例比未处理的RA患者滑膜细胞则明显减少(P<0.05);MTX能以剂量依赖性明显抑制滑膜细胞的增生水平。结论MTX在治疗RA时,主要起到对RA患者滑膜细胞的增生及增生相关病理过程的抑制。     

脂联素及其受体与多囊卵巢综合征的研究进展

脂联素是脂肪细胞分泌的一种脂肪细胞因子,具有抗糖尿病、抗动脉粥样硬化、抗炎和增敏胰岛素的作用,它通过三种脂联素受体(AdipoR)发挥生理作用,包括AdipoR 1、AdipoR 2和T-钙黏蛋白。该文主要阐述脂联素及其受体的分子结构和生理功能,初步探讨多囊卵巢综合征患者的血清脂联素水平、脂联素及其受体基因多态性与多囊卵巢综合征及胰岛素抵抗的关系。     

雷公藤单体T4对IL-1刺激引起的类风湿患者关节滑膜成纤维细胞增殖和产生IL-6的影响

目的　探讨雷公藤单体 T4对经 IL- 1刺激的体外培养的类风湿关节炎 (RA)患者的关节滑膜成纤维细胞增殖和产生 IL- 6的影响。方法　关节滑膜组织来自行关节置换术或滑膜切除术的类风湿患者。滑膜组织经体外消化使细胞分散后 ,传代培养。以培养 3代后的滑膜成纤维细胞为对象 ,先给予 IL- 1刺激 ,再加入雷公藤 T4单体。结果　 T4可抑制由 IL- 1刺激的滑膜成纤维增殖 ,但不影响 IL- 6的产生。结论　 T4的上述作用可能是其治疗RA的机制之一 ,本研究结果为 T4早日应用于临床治疗 RA提供了一定的理论依据     

雷公藤单体T4对IL—1刺激引起的类风湿患者关节滑膜成纤 …

目的 探讨雷公藤单体Ｔ４对经ＩＬ－１刺激的体外培养的类风湿关节炎（ＲＡ）患者的关节滑膜成纤维细胞增殖和产生ＩＬ－６的影响。方法 关节滑膜组织来自行关节置换术或滑膜切除术的类风湿患者。滑膜组织经体外消化使细胞分散后,传代培养,以培养３代后的滑膜成纤维细胞为对象,先给予ＩＬ－１刺激,再加入雷公藤Ｔ４单体。结果 Ｔ４可抑制由Ｉ－１刺激的滑膜成纤维增殖,但不影响ＩＬ－６的产生。结论 Ｔ４的上述作用可能是其     

丹参诱导成纤维样滑膜细胞caspase-1基因表达研究

目的探讨丹参对类风湿关节炎患者和骨关节炎患者的成纤维样滑膜细胞（FLSs）caspase-1 mRNA表达的影响。方法类风湿关节炎（RA）患者关节滑液和骨关节炎（OA）患者关节滑液中游离滑膜样细胞经原代培养,分别用终浓度为0、0.2、0.4、0.8、1.6和3.2mg/ml的丹参作用24h后,观察形态;提取总RNA并逆转录成cDNA,采用SYBR green适时荧光定量PCR方法检测caspase-1的表达。结果无论RA还是OA,在丹参浓度为0.2mg/ml时,FLSs形态变化不明显;当丹参浓度为0.4mg/ml及以上时,FLSs发生凋亡样改变。caspase-1的基础表达量（未加丹参刺激）在RA FLSs与OA FLSs中为差异无统计学意义（P〉0.05）;以丹参浓度为0作为对照组,无论是在RAFLSs,还是在OA FLSs中,Caspase-1的表达量均随丹参浓度增加而增加,并且在丹参浓度为0.4mg/ml时开始差异有统计学意义（P〈0.001）。结论 caspase-1在RAFLSs和OA FLSs中的表达无明显变化可能表明两种细胞的炎性性质的一致性;丹参可诱导FLSs caspase-1在mRNA水平的表达增加,且呈剂量关系,这可能与丹参抗炎和（或）诱导FLSs凋亡有关。     

多囊卵巢综合征患者子宫内膜脂联素及受体的表达

目的 探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者与正常排卵妇女子宫内膜脂联素(APN)及其受体(AdipoR)表达的差异.方法 选择体质指数<25 kg/m~2的PCOS患者(PCOS组)和正常排卵妇女(对照组)各10例,收集月经第10～12天的子宫内膜.通过蛋白印迹和实时定量聚合酶链反应(PCR)等方法测定子宫内膜APN及AdipoR1、AdipoR2的表达.结果 ①蛋白印迹结果显示,PCOS组与对照组间子宫内膜APN表达的差异无统计学意义(P>0.05),两组患者的子宫内膜均有微弱的AdipoR1及AdipoR2表达.②实时定量PCR结果显示,PCOS与对照组的APN mRNA、AdipoR1 mRNA及AdipoR2 mRNA表达的差异均无统计学意义(P值均>0.05).PCOS组的AdipoR1 mRNA与AdipoR2 mRNA表达的差异无统计学意义(P>0.05),对照组的AdipoR2 mRNA表达则显著低于AdipoR1 mRNA(P<0.05).结论 体重正常的PCOS患者的子宫内膜无APN及其受体表达水平异常.