植物类药材基因组DNA提取与纯化的方法学研究

本文探讨了菊科9种植物和地胆草的4种对口商品药材基因组DNA提取与纯化的原理、方法，通过对3种常用植物基因组DNA提取方法（CsC1梯度超速离心法、CTAB／CsC1梯度超速离心法和DTAB微量提取法）的条件摸索，在DNA产率、纯度以及提取纯化过程中影响PCR扩增因子方面进行比较，认为CTAB微量提取法是植物类药材基因组DNA一种比较省时、有效、经济的提取方法。     

星点设计-响应面法优化川芎生物碱提取工艺

目的优选川芎总生物碱的提取工艺。方法对川芎采用乙醇回流提取的方法,进行星点设计,以乙醇浓度、醇倍数、提取时间为自变量,以川芎中总生物碱含量为因变量,通过对自变量各水平的多元线性回归及二项式拟合,用响应面法优选出最佳提取工艺,同时进行预测分析。结果确定了最佳提取工艺为用8倍90%的乙醇提取2次,每次2 h,提取的川芎总生物碱含量为0.693 mg.g^-1,二项式拟合复相关系数R^2=0.957 3。结论星点设计-响应面法优选川芎中总生物碱的提取工艺,方法简单,精密度高,可预测性好。     

川芎和引种日本川芎的RAPD分析与鉴定

目的从DNA分子水平上探讨川芎和引种日本川芎的亲缘关系及不同居群的遗传变异。方法提取35个样本的基因组DNA,并进行随机扩增多态性DNA(RAPD)分析和聚类分析。所选15个引物的RAPD,得出35个样本的聚类树状图。结果川芎和引种的日本川芎有明显的种间遗传差异,居群内遗传变异小,小生境对遗传性状有影响。结论所用方法可为川芎和日本川芎的鉴定及其道地性研究提供分子生物学依据。     

冰冻血样的DNA提取方法比较

目的探索冰冻血样的最佳提取方法,保证DNA检测分析的质量。方法采用离心柱法和磁珠法进行DNA提取,分析所得DNA的浓度和纯度。结果两种DNA提取方法提取DNA纯度均符合实验要求(1.6~1.9),两种方法无统计学差异;磁珠法提取冻存血样所得DNA浓度高于离心柱法,有统计学意义。结论对于冰冻血液的DNA提取,磁珠法优于离心柱法。     

常用外周血DNA提取方法的比较

目的比较目前常用的外周血DNA提取的三种方法。方法用三种方法提取全血DNA,通过吸光度检测、PCR扩增分析各自优缺点。结果三种方法提取的DNA纯度和作为模板PCR扩增无显著差别,只是操作时间和成本不同。结论天根离心柱型试剂盒应用比较广泛,Promega试剂盒操作时间最短,Chelex-100方法最经济,适合微量提取。     

丝状真菌顶头孢霉染色体DNA的提取

目的探索提取头孢菌素C产生菌顶头孢霉基因组DNA的方法。方法采用氯化苄法、液氮研磨法和酶裂解法。结果较其他两种方法比 ,氯化苄法提取效果好。当提取液pH值为 9 0～10 0、EDTA浓度为 12 0mmol·L-1时 ,所得的顶头孢霉染色体DNA的质量和数量均较理想 ,每克(湿重 )顶头孢霉菌丝体能得到 96 μg的染色体DNA。常规琼脂糖凝胶电泳分析 ,其DNA片断大于2 3kb。结论该分离方法获得的染色体DNA质量较高 ,可进行限制性内切酶酶解并适合后续特定基因的PCR扩增反应     

贝母属药用贝母总DNA提取方法的比较研究

目的 比较筛选最适于贝母属药用贝母的总DNA提取方法。方法 利用试剂盒法、改良的CTAB法、改良的SDS法提取贝母属药用贝母的总DNA;通过核酸蛋白检测仪及琼脂糖凝胶电泳方法检测其浓度和纯度;进行ISSR-PCR扩增检测所得总DNA质量。结果 3种方法均可提取出产量较高的基因组DNA,但试剂盒法相较提取的总DNA纯度最高,质量最好,并且均能扩增出丰富清晰的条带,稳定性高,操作简单耗时短。改良的CTAB法、SDS法提取的总DNA纯度、质量均次于试剂盒法,操作复杂耗时长,不适用于下游的分子生物学实验。结论 试剂盒法为贝母属药用贝母总DNA提取的最佳方法,其所得样品适用于PCR及其他分子生物学研究。     

川芎挥发油提取工艺的研究进展

川芎是一种重要的药用植物,其主要成分是挥发油。本文综述了川芎挥发油的各种提取方法,包括水蒸气蒸馏法、溶液萃取法、提取-共沸精馏耦合新工艺、超临界流体萃取法和超声强化超临界CO2萃取法,从得率、提取得到的成分及含量等方面对各种方法的优缺点进行了比较和分析,并对其发展方向提出展望。     

微波法快速提取丝状真菌基因组DNA

丝状真菌基因组DNA的提取是一个费时、费力,并且费用较高的工作,效率较低。本文报道一种以微波热振破壁处理真菌菌丝,快速、简便和高效提取真菌基因组DNA的方法。以提取的DNA为模板可以扩增出18S rRNA基因。     

芋螺基因组DNA提取方法的优化

热带药用海洋生物芋螺产生的芋螺毒素(Conotoxin),已成为神经科学研究的有力工具药和新药开发的新来源。近来出现了从芋螺基因组DNA中克隆新型芋螺毒素基因的新方法．因而快速获得芋螺基因组DNA是分离多样性毒素基因、建立基因库及药用芋螺基因资源开发的前提。本研究采用不同的DNA提取方法．从6种芋螺的不同组织和器官中分离总DNA，经综合比较，建立了简便快速的提取芋螺总DNA的改良苯酚-SDS优化方法。     

Methodological Studies on Genomic DNA Extraction and Purification from Plant Drug Materials

本文探讨了菊科９种植物和地胆草的４种对口商品药材基因组ＤＮＡ提取与纯化的原理、方法通过对３种常用植物基因组ＤＮＡ提取方法（ＣｓＣｌ梯度超速离心法、ＣＴＡＢＣｓＣｌ梯度超速离心法和ＣＴＡＢ微量提取法）的条件摸索在ＤＮＡ产率、纯度以及提取纯化过程中影响ＰＣＲ扩增因子方面进行比较，认为ＣＴＡＢ微量提取法是植物类药材基因组ＤＮＡ一种比较省时、有效、经济的提取方法     

贝母的分子生物学鉴定方法的研究

用ＤＮＡ指纹图谱、ＲＡＰＤ和ＤＮＡ测序等技术鉴定中药材已有不少报道[1～ 5] 。ＤＮＡ的提取和ＰＣＲ扩增是分子生物学最基本的操作步骤之一。但是由于商品药材多数经过加工处理 ,ＤＮＡ可能会受到不同程度的降解 ,再者植物药材中含有的次生代谢产物如多糖很难与ＤＮＡ和ＲＮＡ分开 ,而多糖对酶有抑制作用 ,因此将会影响ＤＮＡ的提取和ＰＣＲ扩增。本文以贝母为研究对象 ,探讨不同ＤＮＡ提取方法、不同扩增条件对ＰＣＲ产物的影响 ,为生药的分子生物学鉴定提供参考。材料与方法1　材料　托里贝母Ｆｒｉｔｉｌｌａｒｉａｔｏｒｔｉｆｏｌ…     

发菜基因组DNA提取方法比较与分子鉴定研究

目的 以发菜为研究对象比较不同的提取DNA方法,筛选出了一种适合快速提取发菜DNA的方法。方法 分别利用自主研发的硅珠DNA纯化技术、细菌试DNA提取试剂盒和植物DNA提取试剂盒提取发菜基因组DNA。结果 本实验室开发的硅珠DNA提取纯化技术具有快速、无毒以及获得的发菜DNA纯度高等优势。通过PCR扩增和测序得到16S rRNA基因,利用Blast软件进行序列比对,与发菜同源性为99%。结论 本研究研制的发菜基因组DNA提取方法可用于发菜源性的分子鉴定。     

三种全血基因组DNA提取方法的比较

目的比较高盐法、改良高盐法和超声波处理法三种方法对全血基因组DNA的提取效果。方法取200ul肝素抗凝血，分别采用上述三种方法提取基因组DNA，用紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测其纯度和含量。结果三种方法提取的基因组DNA含量分别为：高盐法38ug／ml全血；改良高盐法76．5ug／ml全血；超声波处理法20ug/ml全血；三种方法提取的基因组DNA纯度用A260／A280表示分别为：高盐法1．62；改良高盐法1．46；超声波处理法4．10。结论三种全血基因DNA提取方法操作简便、安全、快速，以改良高盐法提取效率最高。     

在干细胞药物临床前研究中动物样品基因组DNA高通量提取的固相萃取法和磁珠筛选法初探

干细胞药物临床前研究中,常需要以干细胞特定基因片段为靶点追踪其体内的分布过程,需要提取动物样品基因组DNA,涉及到心脏、肝脏、肺脏、脾脏、肾脏、脑、骨髓、血、脂肪、肌肉、性腺、胃和肠等多种组织类型。为实现临床前样品的高通量检测,总结动物组织基因组DNA提取方法,并就如何高效高质提取样品基因组DNA进行讨论,提出间充质干细胞临床前研究中样品处理的一种可行的方案：通过生物样品制备仪获取稳定均一的组织裂解液,利用固相萃取法和磁珠筛选法配合使用获得高质量高浓度的动物样品DNA。     

一种快速提取丝状真菌产黄青霉DNA的方法

介绍一种快速有效的提取丝状真菌产黄青霉染色体DNA的方法。该方法以100mmol／L Tris、100mmol／L NaCl、50mmol／L．EDTA-Na2和2％SDS（pH9.0）为提取液，经石英砂研磨破壁．获得了较高质量的染色体DNA，该法较酶解法和氯化苄法廉价、快速、安全，且不影响其后续的分子生物学操作。     

Development of a quantitative PCR assay for residual mouse DNA and comparison of four sample purification methods for DNA isolation

Reliable and sensitive assays are required to determine whether a pharmaceutical product meets current regulatory guidelines for residual host cell DNA. In this study, the sensitivity of the qPCR assay was significantly improved by targeting the repetitive elements of mouse genome. This improved method allowed for sensitive and accurate quantitation of mouse genomic DNA in the range of 1 to 10⁶ pg/mL. In addition, four sample purification methods for DNA isolation (Wako DNA extractor kit, MasterPure™ DNA purification kit, PrepSEQ™ residual DNA sample preparation kit, and phenol–chloroform extraction method with addition of glycogen), each representing a different strategy for DNA isolation from proteinaceous solutions, were evaluated by isolating DNA from a mouse monoclonal IgG antibody. Among these methods, Wako DNA extractor kit and MasterPure™ DNA purification kit demonstrated superior DNA recovery, repeatability, and sensitivity, with quantitation limits of 1 pg/mL. To further evaluate these two DNA isolation methods, six replicates of an unspiked mouse polyclonal IgG antibody sample were tested by both methods, and both methods demonstrated a good degree of precision. Therefore, the residual mouse DNA quantitation methods described here represented rapid, accurate, precise, and sensitive procedures that can be used in quality control testing for regulatory compliance in the pharmaceutical industry.