云南汉族人群VKORC1￣1639A/G基因多态性与华法林抗凝治疗剂量的相关性研究

目的研究云南汉族人群维生素K环氧化物还原酶复合体亚单位1(VKORC1)-1639A/G基因多态性的分布及与其他民族间的差异,为临床应用华法林初始剂量及维持剂量提供分子遗传学依据,以提高病人应用华法林的依从性。方法采集300例心脏机械瓣膜置换术后服用华法林,INR值在1.5~3.0患者的外周血液,通过聚合酶链式反应(英简PCR)结合限制性片段长度多态性(英简RFLP)分析技术,评价VKORC1-1639 A/G基因的基因型。结果所有样本中,AA型为204例(占68%)、AG型为87例(占29%)、GG型为9例(占3%),等位基因A占82.5%,等位基因G占17.5%。所需华法林维持剂量GG型(4.83±1.15 mg/d)AG型(3.57±1.62mg/d)AA型(2.72±1.35)mg/d。此外,云南汉族人群VKORC1-1639A/G基因多态性分布在性别和年龄上无差异,但与高加索等欧美人群相比存在较大的差异,与VKORC1 1173 C/T及VKORC1 3730 A/G存在高度连锁不平衡。结论 VKORC1基因多态性是一项对华法林个体间用量之间的差异有所影响的重要遗传因素,其还能够对患者VKORC1-1639位点给予准确基因分型,可指导华法林个体化用药的治疗。     

中国汉族人群CYP2C9及VKORC1基因多态性及其对华法林用药剂量的相关性研究

目的分析中国汉族人群CYP2C9和VKORC1的基因多态性及其与华法林稳定维持剂量的相关性。方法回顾性研究。收集2017年10月至2018年4月在北京大学人民医院进行凝血分析检测的458例中国汉族患者,男性213例,女性245例,年龄范围26~94岁。采用PCR-荧光探针法检测CYP2C9*3位点和VKORC1-1639A>G位点基因多态性,458例患者中服用华法林进行抗凝治疗且凝血酶原时间国际标准化比值(INR)达标(在2.0~3.0范围内)的患者130例,记录患者基本信息、华法林用药剂量及凝血酶原时间国际标准化比值(INR),应用SPSS统计分析数据,与美国FDA推荐的不同基因型患者华法林推荐剂量的参考表格进行对比,并且对华法林预测剂量公式进行简单验证。结果458例抗凝患者中CYP2C9*1/*1(AA)基因型频率90.8%,CYP2C9*1/*3(AC)基因型频率8.5%,CYP2C9*3/*3(CC)基因型频率0.7%;VKORC1-1639GG基因型频率0.9%,VKORC1-1639AG基因型频率14.2%;VKORC1-1639AA基因型频率84.9%。在达到抗凝指标(国际标准化比值INR 2.0~3.0)后,结果显示CYP2C9*1/*3与*3/*3基因型患者平均每日剂量为(2.92±1.29);3(2.75,3.375)mg,低于野生型CYP2C9*1/*1基因型患者所需的平均每日华法林剂量(3.91±1.63);3(3,5)mg,差异有统计学意义(P=0.018)。VKORC1纯合突变基因型VKORC1-AA患者平均每日剂量为(3.68±1.64);3(3,4.31)mg,低于杂合基因突变型的平均每日剂量(4.54±1.29);4.5(3.28,6)mg,差异有统计学意义(P=0.001)。不同VKORC1+CYP2C9基因型患者的华法林应用剂量与美国FDA参考表格的推荐剂量具有一致性。Miao2007公式的预测准确度较IWPC公式低,且94.1%的患者华法林剂量被低估。结论携带CYP2C9*3突变基因或VKORC1-AA纯合突变基因型的患者所需华法林剂量较低,CYP2C9和VKORC1基因多态性与华法林稳定维持剂量具有一定的相关性。     

非瓣膜病心房颤动患者VKORC1及CYP2C9基因多态性与华法林临床应用的关系的探究

探究非瓣膜病心房颤动患者VKORC1及CYP2C9基因多态性与华法林临床应用的关系。回顾性分析我院2014年5月~2016年5月收治的140例非瓣膜病心房颤动患者的一般资料,测定华法林初始剂量和基础国际标准化比率(INR),抽取静脉血检测CYP2C9与VKORC1基因多态性,通过随访记录华法林初始服用至INR达标时间、华法林平均日用量及总用量。本组CYP2C9和VKORC1等位基因A型、基因型AA型较多;CYP2C9和VKORC1不同基因型患者体质指数及INR的对比无统计学差异(P0.05);CYP2C9AA型INR达标时间长,华法林总用量较高,与AC型和CC型比较具有显著差异(P0.05);VKORC1 AA型INR达标时间短,华法林总用量较低,与AG型和GG型比较具有显著差异(P0.05)。非瓣膜病心房颤动患者初次服用华法林进行抗凝治疗,VKORC1基因AA型和CYP2C9基因AC/CC患者INR达标时间短,华法林总用量较少。非瓣膜性房颤患者华法林口服剂量个体差异较大,用药前应进行基因多态性检测,以此为临床用药进行指导。     

VKORC1基因1639G/A位点多态性与心房颤动患者抗凝治疗及左房血栓的相关性研究

目的探讨VKORC1基因1639G/A位点多态性与心房颤动(简称房颤)患者抗凝治疗及左房血栓的相关性。方法回顾性选取2015年5月至2016年5月上海市第十人民医院收治的100例非瓣膜性心脏病房颤患者作为实验组,选取同期来同济大学附属普陀人民医院进行体检的100例正常无房颤患者作为对照组。清晨空腹采集对照组和实验组的血液2 ml,应用PCR芯片杂交法测定VKORC1-1639 AA/GA/GG的基因型,比较不同基因型的房颤患者抗凝达标后华法林维持剂量的差异情况,并通过经食管超声心动图检查观察房颤患者左房血栓的位置、大小及抗凝治疗前后血栓变化情况。结果实验组VKORC1-1639 AA型占83%,GA型占15%,GG型占2%,对照组中VKORC1-1639AA型占81%,GA型占14%,GG型占5%。实验组和对照组在AA、GA、GG 3种基因型方面,差异并无统计学意义(P0.05),A、G等位基因频率差异亦无统计学意义(P0.05)。VKORC1-1639 AA患者对华法林更加敏感,AA患者达到国际标准化比值稳定浓度的华法林维持剂量比GA、GG者小。非瓣膜性心脏病房颤患者左房增大对左心耳的血栓形成有预测价值;左房内径越大者,血栓检出率越高。2例VKORC1-1639 GG者经食管超声心动图检查均发现左房血栓,且经华法林抗凝血治疗国际标准化比值达标后血栓大小无明显变化。结论 VKORC1 1639G/A基因位点多态性与人群是否罹患房颤无相关性,基因分型以AA型多见,对华法林更敏感;经食管超声心动图检查发现房颤者左房更大,血栓多位于左心耳,服用华法林抗凝治疗且国际标准化比值达标后复查经食管超声心动图检查,左心耳血栓消失多见,基因型为GG型的房颤患者均发现左房血栓,但国际标准化比值达标前后血栓无明显变化。     

中国汉族人群CYP2C9和VKORC1基因多态性对华法林用药的影响

目的 探讨中国汉族人群细胞色素氧化酶P450 2C9(CYP2C9)基因以及维生素K环氧化物还原酶复合体1(VKORC1)基因多态性对华法林用药的影响。方法 首先抽取无抗凝障碍的汉族人群受试者200例利用基因测序法进行CYP2C9 和VKORC1基因分型(正常对照组)。并收集临床使用华法林稳定维持剂量的汉族人群患者114例(服用华法林药物组),记录患者年龄、性别、身高、体质量以及体表面积等,检测基因型并结合体征差异及临床稳定剂量进行分析。结果 正常对照组的CYP2C9基因型检测有CYP2C9*1/*1型186例(93%),未发现CYP2C9*1/*2型,CYP2C9*1/*3型14例(7%); VKORC1-1639A/G基因型:AA型179例(89.5%),GA型21例(10.5%),未发现GG型(0.0%); 服用华法林药物组的CYP2C9*1/*1型104例(91.2%),CYP2C9*1/*3型10例(8.8%),CYP2C9*1/*1型患者华法林平均维持剂量高于CYP2C9*1/*3型患者[(2.13±0.83)mg/dvs(1.61±1.17)mg/d,P＜0.05]。VKORC1(-1639G＞A)基因型检测有102例患者为突变纯合子AA型(89.5%),12例患者为杂合子GA型(10.5%),未发现纯合子GG型患者,GA型患者华法林平均维持剂量明显高于AA型[(3.34±1.07)mg/d vs(1.63±0.45)mg/d,P＜0.01]。正常人群组与服用华法林药物组基因型在CYP2C9*3(1075C/A)(P=0.926)和VKORCl -1639A/G突变上的差异无统计学意义(P=0.812)。结论 中国汉族人群存在CYP2C9*3 A/C 和VKORC1-1639G/A 的基因多态性,且不同基因型患者间华法林用量存在差异。     

CYP2C9和VKORC1基因多态性与华法林剂量关系的研究

目的研究江苏徐州地区汉族人细胞色素P450(CYP)2C9和维生素K环氧化物还原酶复合体1(VKORC1)基因型与华法林剂量的关系,为华法林个体化给药方案提供建议。方法采用聚合酶链反应-连接酶检测反应(PCR-LDR)技术检测100名汉族健康受试者及200例临床使用华法林的患者CYP2C9和VKORC1基因型。结果健康受试者CYP2C9基因型中91例为*1/*1型,9例为*1/*3型;VKORC1基因型中17例为GA型,83例为AA型。200例临床使用华法林的患者CYP2C9基因型检测有179例为*1/*1型,21例为*1/*3型,未发现*2突变;VKORC1(1639GA)基因型中168例为突变纯合子AA型,32例为杂合子GA型,未发现GG型;VKORC1(1639GA)基因AA型患者的华法林维持剂量为(2.59±0.83)mg/d,明显低于GA型[(4.51±0.79)mg/d];CYP2C9基因*1/1*型华法林维持剂量为(3.01±1.12)mg/d,明显高于*1/*3型[(2.19±0.32)mg/d,P0.05]。结论 CYP2C9和VKORC1基因型的多变量个体化给药方案对临床提高华法林使用的安全性有潜在的意义。     

基于CYP2C9与VKORC1基因多态性的心脏瓣膜置换术后华法林个体化给药剂量预测的3种模型算法比较

目的了解泸州及周边地区汉族人群CYP2C9与VKORC1基因多态性分布情况并评价3种常用华法林剂量预测算法的差异。方法选取2018年6月至2019年7月在西南医科大学附属医院心脏大血管外科行心脏瓣膜置换术的120例泸州及周边地区汉族患者为研究对象,用PCR-微阵列基因芯片法检测其CYP2C9430、CYP2C91075与VKORC1-1639位点的基因型,对3个基因位点基因型的分布情况进行分析。基于基因检测结果与患者生理、病理信息,分别用国际华法林药物基因组协会(IWPC)公式、Warfarin Dosing网站、中国公式计算患者个体化剂量,对比3种算法计算剂量的差异。结果CYP2C91075位点AA与AC型的患者分别占90.83%和9.17%,VKORC1-1639位点AA、AG、GG型的患者分别占88.33%、10.83%和0.83%,未检出CYP2C9*2。检出的5种基因型组合中华法林计算剂量最高的基因型为CYP2C9*1/*1&VKORC1 GG。中国公式的计算剂量与国际公认的IWPC公式与Warfarin Dosing网站的计算剂量相关度均较高。结论泸州及周边地区汉族人群中存在CYP2C91075与VKORC1-1639位点的基因多态性,建议患者服用华法林前先进行该组基因位点的多态性检测,利用计算因素更全面的中国公式与Warfarin Dosing网站计算剂量,并在后期持续监测国际标准化比值以获得更好的预后。     

CALU(rs2307040)基因多态性与华法林稳定剂量的关系研究

目的:探讨CALU(rs2307040)基因型在中国汉族人群中的分布情况及其基因多态性与瓣膜置换术后华法林稳定剂量的相关性。方法:采用Snapshot技术检测226例研究对象CALU(rs2307040)位点基因型,研究其基因型及等位基因频率;比较其中176例瓣膜置换术患者基因多态性与华法林稳定剂量的相关性。结果:226例研究对象,CALU(rs2307040)位点基因型AA、AG和GG分别有0、40和186例,各占0%、17.7%和82.3%,A和G等位基因的频率分别为8.8%和91.2%;176例瓣膜置换术后患者服用华法林达稳定状态,AA型未检出,AG组与GG组比较,华法林日维持剂量、INR值和PT值均无显著统计学差异。结论:中国汉族人群CALU(rs2307040)基因多态性可能不是瓣膜置换术后华法林个体剂量差异的影响因素。     

Fas基因启动子670A／G多态性与脑梗死的关系

目的了解上海地区汉族脑梗死患者Fas基因-670A／G多态性和等位基因频率的分布情况,探讨其多态性与脑梗死的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术（PCR—RFLP）,对156例脑梗死患者和95名健康老年人的Fas基因-670A／G位点进行基因分型,计算等位基因的频率分布。结果脑梗死组与老年健康对照组的AA、AG、GG基因型频率分别为28．21％、56．41％、15．38％与42．11％、45．26％、12．63％;A、G等位基因频率分别为56．41％、43．59％与64．74％、35．26％,2组问的差异均无统计学意义（P〉0．05）。脑梗死组的（AG＋GG）型的高密度脂蛋白胆固醇（HDL—C）水平明显低于（AG＋GG）型的健康老年对照组,而低密度脂蛋白胆固醇（LDL—C）水平则明显高于健康老年对照组的（AG＋GG）型,脑梗死组的AA型的三酰甘油（TG）水平明显高于健康老年对照组的AA型,其HDL—C水平明显低于健康老年对照组的AA型。结论Fas基因启动子670A／G位点的单核苷酸多态性与脑梗死的发生无关。     

基于华法林药物基因组学的临床用药模型建立

目的探讨CYP2C9、CYP4F2和VKORC1基因多态性对中国汉族人群中华法林稳定剂量的影响,评价华法林用药遗传背景,为临床个体化用药奠定基础。方法采用PCR．HRM法对181例接受华法林治疗并达到稳定剂量的中国汉族患者检测CYP2C9＊2、CYP2C9＊3、CYP4F2V433M和VKORC11173C／T四个SNP位点的多态性。基因分型数据结合临床资料（性别、年龄和华法林剂量等）进行统计学分析并建立数学模型。结果20岁以下年龄组与70岁以上年龄组间华法林剂量有统计学差异（P=0．041）,且随着年龄的增长,华法林剂量有降低趋势;CYP2C9＊3基因型CA（杂合突变型）华法林日平均剂量（1．93mg）比AA（野生型）日平均剂量（2．96mg）低1mg（P=0．001）;VKORC11173C／T基因型CT（杂合突变型）华法林日平均剂量（3．34mg）比TT（野生型）日平均剂量（2．77mg）高0．57mg（P=0．002）;CYP4F2V433M基因型TT（纯毹铡）糊日平均剂量（3．52mg）比CT（杂譬洌）高0．68mg（P=0．021）,比CC（野生型）高0．72mg（P=0．026）。结论华法林剂量受CYP2C9、CYP4F2、VKORCl基因多态性和年龄的影响,临床用药前进行CYP2C9、CYP4F2、VKORC1基因多态性检测有助于华法林抗凝治疗用药剂量的评钻。     

Estimation of warfarin maintenance dose based on VKORC1 (-1639 G>A) and CYP2C9 genotypes

BACKGROUND: CYP2C9 polymorphisms are associated with decreased S-warfarin clearance and lower maintenance dosage. Decreased expression of VKORC1 resulting from the -1639G>A substitution has also been implicated in lower warfarin dose requirements. We investigated the additional contribution of this polymorphism to the variance in warfarin dose. METHODS: Sixty-five patients with stable anticoagulation were genotyped for CYP2C9 and VKORC1 with Tag-It allele-specific primer extension technology. Plasma S-warfarin concentrations and warfarin maintenance dose were compared among patients on the basis of the VKORC1 -1639G>A genotype. RESULTS: Eighty percent of CYP2C9*1/*1 patients stabilized on <4.0 mg/day warfarin had at least 1 VKORC1 -1639A allele. Mean warfarin doses (SD) were 6.7 (3.3), 4.3 (2.2), and 2.7 (1.2) mg/day for patients with the VKORC1 -1639GG, GA, and AA genotypes, respectively. Steady-state plasma concentrations of S-warfarin were lowest in patients with the VKORC1 -1639AA genotype and demonstrated a positive association with the VKORC1 -1639G allele copy number (trend P = 0.012). A model including VKORC1 and CYP2C9 genotypes, age, sex, and body weight accounted for 61% of the variance in warfarin daily maintenance dose. CONCLUSIONS: The VKORC1 -1639A allele accounts for low dosage requirements of most patients without a CYP2C9 variant. Higher plasma S-warfarin concentrations corresponding to increased warfarin maintenance dosages support a hypothesis for increased expression of the VKORC1 -1639G allele. VKORC1 and CYP2C9 genotypes, age, sex, and body weight account for the majority of variance in warfarin dose among our study population.     

换瓣术后华法林维持量与mEH ApoE基因多态性的相关性研究

目的探讨mEH基因T612C、A691G位点sNP及ApoE基因型在中国汉族人群中的分布,并探讨华法林维持剂量与其相关性。方法共选取52例换瓣术后患者以及68例健康汉族个体。瓣膜置换术后个体根据国际化标准比值（INR）控制在1．5～2．2,调整华法林维持剂量,采用PCR-RFLP技术检测ApoE基因型、Pyrosequencing法检测mEHT612C及A691GSNP。结果（1）在120个受测试人群中,mEHT612C等位基因频率分别为74．6％和25．4％;而mEHA691G分别为66．7％、33．3％,换瓣人群中mEHT612C的纯合子比杂合子和野生型的所需华法林剂量要高,分别为（5．5±2．9）mg／d、（4．8±2．2）mg／d、（4．0±2．6）mg／d,三者之间剂量比较有显著性差异（P〈0．05）。（2）在120个受测试人群中,ApoE基因型等位基因E2,E3,E4的频率分别为44．2％、35．8％、20．O％;换瓣人群中各基因型所需华法林的剂量分别为（4．5±2．7）mg／d、（4．7±2．4）mg／d、（4．4±2．6）mg／d,三者之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论mEH基因T612C、A691G位点SNP能解释部分个体之间华法林维持剂量的差异,ApoE基因型的差异不能解释华法林维持剂量的差异。     

CYP4F2 gene polymorphism as a contributor to warfarin maintenance dose in Japanese subjects

What is known and Objective: Polymorphisms in the gene encoding CYP4F2 may partly explain the variability in warfarin maintenance dose by altering the metabolism of vitamin K. To determine the genetic factors that cause large inter‐patient variability in warfarin efficacy, we investigated the relationship between serum warfarin concentration and CYP4F2 V433M (1347C>T, rs2108622) polymorphism in Japanese subjects. Methods: Gene variations in VKORC1, CYP2C9 and CYP4F2 were analysed in 126 Japanese patients treated with warfarin. The daily dosage of warfarin, concentration of S‐ and R‐warfarin in plasma, and prothrombin time international normalized ratio (PT‐INR) was used as the pharmacokinetic and pharmacodynamic indices. Results and Discussion: The maintenance dose of warfarin was larger in the CYP4F2 1347 CT genotype group (3·59 ± 1·80 mg/day, P = 0·027) than in the CYP4F2 CC genotype group (2·88 ± 1·00 mg/day). CYP4F2 1347C>T polymorphism significantly affected serum R‐warfarin concentration when the VKORC1‐1639 genotypes are AG and GG. What is new and Conclusion: Although a significant inter‐patient difference in warfarin maintenance dose was observed between the CYP4F2 CC and CT genotypes, serum S‐warfarin concentration was not significantly different between them. An effect of CYP4F2 V433M polymorphism on warfarin maintenance dose was observed but was relatively small when compared to the effects of CYP2C9 and VKOR polymorphism.     

IL-6基因-572C／G多态性对2型糖尿病患者血清IL-6水平的影响

【目的】探讨白介素-6（IL-6）基因-572C／G多态性对2型糖尿病患者血清IL-6水平的影响。【方法】应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法检测358例初发2型糖尿病患者IL-6基因-572C／G多态性,用ELISA方法检测不同基因型患者的IL-6水平【结果】2型糖尿病患者IL-6基因-572CC,CG,GG基因型人数分别为212,129,17;血清IL-6水平分别为（61．32±16．98）pg／mL,（64．98±15．19）pg／mL和（92．18±25．36）pg／mL,血清IL-6水平在CC,CG基因型间差异无显著性,两种基因型与GG基因型相比,血清IL-6水平差异均有显著性（P〈0．05）。【结论]IL-6基因572C／G多态性可能具有功能性,572GG基因型分泌IL-6能力可能较CC及CG基因型强,IL-6基因572GG基因型可能是2型糖尿病的危险因素之一。     

肺结核患者单核细胞趋化因子蛋白-1基因多态性的检测

目的探讨我国北方地区汉族人群单核细胞趋化因子蛋白（MCP-1）-2518位基因多态性与肺结核的相关性。方法应用聚合酶链反应-序列特异性引物（PCR—SSP）和聚合酶链反应．限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）的方法检测我国北方地区汉族136例肺结核患者和152例正常人对照的MCP-1基因．2518位基因多态性。结果肺结核患者中GG基因型的频率明显高于对照组（P〈0．05,OR=1．96）：AA和AG基因型的频率在两组间无统计学差异（P〉O．05）。肺结核患者中等位基因G的频率明显高于对照组（P〈O．05,OR=1．536）。MCP-1基因多态性在初治与复治、耐药与无耐药患者中的频率分布无显著差异（P〉0．05）。结论中国北方地区汉族人群MCP-1基因-2518位点多态性与肺结核具有相关性,GG基因型可能是肺结核的易感因素。     

多巴胺D1受体-48 A/G基因多态性与脑出血的相关性研究

目的：探讨多巴胺D1受体基因-48 A/G[DRD1（-48 A/G）]多态性与中国湖南地区汉族人群脑出血发病的相关性。方法：筛选121例脑出血患者及115例年龄、性别相匹配的正常体检人群,应用聚合酶链式反应（PCR）-限制性片段长度多态性（RFLP）方法测定DRD1（-48 A/G）基因的多态性。结果：在中国湖南汉族人群中,DRD1（-48 A/G）基因型分布为AA 63.2%,AG 31.3%和GG 5.5%,等位基因A和G频率分别为78.9%和21.1%。DRD1（-48 A/G）三种基因型频率及两种等位基因频率在脑出血组和正常对照组分布差异无显著性（P〉0.05）。脑出血组中高血压和非高血压两亚组间DRD1（-48 A/G）基因型频率分布差异无显著性（P〉0.05）,且它们分别和对照组比较DRD1（-48A/G）基因型频率分布差异无显著性（P〉0.05）。Log istic回归调整了脑出血环境因素的影响后,DRD1（-48 A/G）基因多态性与脑出血的关系仍无统计学意义（P〉0.05）。结论：DRD1（-48 A/G）基因多态性可能与中国湖南地区汉族人群脑出血无关。