重组人α-半乳糖苷酶A在巴氏毕赤酵母中的表达及鉴定

目的：克隆人α-半乳糖苷酶A（α-GalA）cDNA，并在毕赤酵母中表达重组的人α-GalA。方法：利用RT-PCR方法从人肝癌细胞中克隆人α-半乳糖苷酶AcDNA并构建到可用甲醇诱导的分泌型巴氏毕赤酵母表达载体pPICZαA中。将重组质粒导入毕赤酵母并用Zeion抗生素筛选转化细胞。在甲醇诱导后。利用SDS-PAGE、Western印迹及酶活测定方法在酵母上清中鉴定重组的人α-GalA。结果：获得人α-GalA cDNA，构建酵母表达质粒pHGCZα-A，将重组表达载体导入到酵母细胞，并在上清中检测到人α-GalA蛋白。结论：获得了人α-GalA cDNA及具有生物活性的重组人α-GalA，为临床应用于法布莱氏病的治疗奠定了基础。     

重组α-半乳糖苷酶工程菌菌种稳定性鉴定

α-半乳糖苷酶(EC3．2．1．22)属外切糖苷酶类，可特异性水解多糖、糖脂、糖蛋白中糖链末端的α-半乳糖苷键。α-半乳糖苷酶被广泛应用于农产品加工、人B→O血型改造、异种移植、清除异种抗原以及治疗遗传性疾病法布莱病等。然而，用生化提取技术无法获得高产量、高纯度的酶。利用DNA重组技术，制备可表达α-半乳糖苷酶的工程菌株是解决这一问题的有效方法。为了满足临床和科研工作对α-半乳糖苷酶的需求，     

B→O血型改造血的长臂猿动物实验研究

目的：进行临床前B→O血型改造的实验动物研究，观察α—半乳糖苷酶对长臂猿B抗原的酶解效果及α—半乳糖苷酶酶解后的红细胞进行异种血型动物输血的安全性。方法：用100U／ml基因重组咖啡豆α—半乳糖苷酶体外处理B型长臂猿红细胞，使其转变为O型，再回输给B、A、AB型长臂猿。结果与结论：α—半乳糖苷酶可以清除B型长臂猿红细胞表面B抗原，而不影响红细胞结构、功能及其在受体猿体内存活；α—半乳糖苷酶酶解的B型红细胞输给B、A和AB型血的长臂猿，未发生输血反应；受血猿的血液及尿液常规指标与输血前相比，无明显变化。     

重组人α-半乳糖苷酶A在CHO细胞中的表达及鉴定

目的 构建重组人α-半乳糖苷酶A(GLA)真核表达载体,并在中华仓鼠卵巢细胞CHO中表达重组的人GLA.方法 利用RT-PCR方法从人肝癌细胞中克隆人GLA cDNA,并构建到哺乳动物细胞表达载体pcDNA3.1/myc-His A中.将重组质粒转染CHO细胞并用G418筛选.用丁酸钠诱导G418抗性细胞,检测培养上清中的GLA活性,筛选高表达GLA的细胞株.采用HisTrapTM FF纯化培养上清中的GLA蛋白并利用Western 印迹进行鉴定.结果 成功构建了哺乳动物细胞表达载体pcDNA3.1/myc-His A-GLA,并在中华仓鼠卵巢细胞CHO中表达,得到高表达量的单克隆(蛋白比活为1935 U/mg).纯化后的培养上清在50×103(Mr)附近出现单一条带,通过Western 印迹确定为GLA蛋白.结论 成功构建了真核表达载体pcDNA3.1/myc-His A-GLA,获得了具有生物活性的重组人GLA,为临床上治疗法布莱病奠定了一定基础.     

α半乳糖苷酶的c DNA克隆及序列测定

咖啡豆中存在的α半乳糖苷酶可作用于人Ｂ型血红细胞表面糖链末端的α半乳糖苷键，造成糖链末端的α半乳糖水解，使Ｂ型血表面的糖链结构与Ｏ型血相同，从而将Ｂ型血转变为Ｏ型血，在野战输血和自然灾害急救中具有重要的意义。为实现以基因工程方法生产α半乳糖苷酶的目的，我们克隆了海南兴隆咖啡豆的α半乳糖苷酶全长ｃＤＮＡ，并与已报道的桑托斯咖啡豆的α半乳糖苷酶ｃＤＮＡ序列进行了比较。根据已报道的桑托斯咖啡豆α半乳糖苷酶ｃＤＮＡ序列设计了５′、３′端上、下游引物和与全长ｃＤＮＡ中间部位完全匹配的引物，分别与上、下游引…     

小肠克隆氏病：X线和病理表现的比较研究

作者试图评价插管钡灌注检查对小肠克隆氏病的诊断价值。36例皆因X线诊断小肠克隆氏病而手术,术中证实诊断正确33例;诊断错误3例,其中1例为恶性类癌,1例为慢性局部缺血,另1例为结肠克隆氏病而小肠正常。     

胃肠道克隆氏病的X线诊断问题

胃肠道克隆氏病（Crohn‘s)近年在国内各地报导逐渐增多，本病不仅好发于胃肠道，而又可累及所属的淋巴结，肝，肾，眼，关节及皮肤，X线检查是诊断本病的一种常用的方法，但术前确诊率仍然较低，鉴别诊断还存在着一定的困难，本文结合我院经手术证实的26例克隆氏病的X线诊断问题予以讨论。     

肿瘤坏死因子-α转换酶的研究进展

肿瘤坏死因子-α(TNF-α)由活化的单核细胞及巨噬细胞分泌，在组织受到损伤或感染时，TNF-α介导炎性细胞的聚集与活化。研究表明，TNF-α参与了多种疾病的病理过程，如脂多糖诱导的脓毒性休克、关节炎、胸膜炎、恶病质、Crohn病、炎症性肠病、自发性神经炎、神经源性疼痛等。TNF-α有两种形式：其一为全长Ⅱ型膜结合形式(相对分子质     

脑SPECT诊断早期阿茨海默氏病的初步探讨

目的：本文旨在初步探讨脑ＳＰＥＣＴ在诊断早期阿茨海默氏病中的价值。材料和方法：采用Ｍａｙｂｅｒｇ氏的断面划分感兴趣区的方法，使用放射性药物９９ｍ锝──六甲基丙叉二胺肟（９９ｍＴｃ－ＨＭＰＡＯ），比较１８例早期阿茨海默氏病患者及１１名正常老年人脑ＳＰＥＣＴ的血流灌注显像特点。结果：早期阿茨海默氏病患者脑ＳＰＥＣＴ可见不同程度的弥漫性大脑皮质血流灌注减低，左颞叶、扣带回、左额叶的血流灌注减低与正常老年人相比有显著差异（Ｐ＜０．０５），而皮质下血流灌注则未受影响。结论：早期阿茨海默氏病患者大脑半球血流灌注为左右非对称性减低，脑ＳＰＥＣＴ的血流灌注显像有助于诊断早期阿茨海默氏病。     

线粒体肌病及脑肌病的PGA标记法免疫电镜研究

线粒体肌病及脑肌病的ＰＧＡ标记法免疫电镜研究宋东林，吕强，石进，谢仁厚，刘宏利，张宏神经内科主题词线粒体肌病，线粒体脑肌病，线粒体，显微镜检查，免疫电子，免疫组织化学线粒体内呼吸链中的酶复合体活性降低是造成线粒体肌病及线粒体脑肌病的一个主要原因，而这...