卡托普利对高氧致新生大鼠慢性肺疾病的保护作用及机制探讨

目的：观察高氧致慢性肺疾病（CLD）新生大鼠肺组织ACE,AngⅡ和ColⅠ蛋白及mRNA含量的动态变化,以探讨卡托普利的保护作用及机制。方法：足月新生Wistar大鼠240只,随机分为高氧组、空气对照组、卡托普利治疗组和盐水对照组,每组各60只。将高氧组、盐水对照组和卡托普利治疗组的足月新生Wistar 大鼠（连同母鼠）生后即置于氧舱内持续吸入高浓度氧（FiO2=0.9）21 d造成高氧肺损伤模型,空气对照组吸入空气。卡托普利治疗组于生后7 d每天经胃管灌服卡托普利每日30 mg/kg, 盐水对照组每天经胃管灌服等量生理盐水。每组分别于实验开始后第1,3,7,14,21天随机选取6只麻醉后处死。肺组织采用ELISA法测定ColⅠ蛋白含量,用日产7170全自动生化分析仪测定ACE活性,用放免法测定AngⅡ的含量。用RT-PCR法检测肺组织ACE,AngⅡ,ColⅠmRNA表达的动态变化并同时观察肺组织形态学变化。结果：与空气对照组比较,高氧组、盐水对照组肺组织ACE,AngⅡ,ColⅠ蛋白含量及mRNA表达在实验后第14天明显升高,第21天达高峰(P<0.05或P<0.01),卡托普利治疗组上述指标与高氧组、盐水对照组比较明显降低(P<0.05或P<0.01),但仍高于空气对照组（P<0.05）。 肺组织形态学改变：高氧组、盐水对照组第14天肺组织间质细胞增多,出现纤维化改变。第21天正常肺泡结构消失,肺组织出现严重的纤维化。卡托普利治疗组肺组织纤维化病变明显减轻。结论：卡托普利干预抑制了高氧致CLD新生大鼠肺组织ACE,AngⅡ,ColⅠ蛋白含量及mRNA表达,减轻了肺纤维化病变,这可能是卡托普利对高氧肺损伤具有保护作用的机制之一。［中国当代儿科杂志,2007,9（2）：169-173］     

转化生长因子β1对高体积分数氧暴露早产新生大鼠肺纤维化的调控作用

目的 探讨转化生长因子(TGF-β1)对高体积分数氧(高氧)暴露早产新生大鼠肺纤维化的调控作用.方法 将80只早产新生SD大鼠随机分为空气组和高氧组,每组40只;每组又随机分为3、7、14、21 d4个亚组.采用原位杂交法检测各亚组早产大鼠肺组织TGF-β1 mRNA表达与分布;采用免疫组织化学法检测各亚组早产大鼠肺组织TGF-β1蛋白、Ⅰ型与Ⅲ型胶原表达与分布;并用图像分析方法 检测各亚组早产大鼠肺组织TGF-β1 mRNA及其蛋白与Ⅰ型、Ⅲ型胶原阳性表达的PU值.结果 高氧第3天,肺组织TGF-β1mRNA及其蛋白呈现弱阳性表达,第7、14、21天呈强阳性表达,其表达量于第7天开始增高,第14天达高峰;肺组织TGF-β1 mRNA及其蛋白阳性表达的Pu值在第7、14、21天均高于空气组(Pa<0.01).Ⅰ型胶原在第3、7天时呈弱阳性表达,第14、21天时呈强阳性表达,其表达量从第14天开始增加,第21天时达高峰;Ⅲ型胶原表达强度在第3天时呈弱阳性,第7天时开始增强呈中等阳性表达,第14、21天时呈强阳性表达,其表达量在第7天时开始增加,第14天时达高峰,表达量高于Ⅰ型胶原;肺组织Ⅰ型、Ⅲ型胶原阳性表达的PU值在第14、21天时均明显高于空气组(Pa<0.01).高氧组肺组织TGF-β1 mRNA及其蛋白与Ⅰ型、Ⅲ型胶原阳性表达均分布于支气管和血管周围结缔组织及肺间质中;在第14、21天高氧组肺组织TGF-β1蛋白表达与Ⅰ型胶原呈显著正相关(r=0.881,0.793 P.<0.01),与Ⅲ型胶原亦呈显著正相关(r=0.866,0.891 Pa<0.01).结论 TGF-β1过度表达而介导的细胞外基质(ECM)过度合成是肺纤维化发生的重要机制,在肺纤维化形成过程中TGF-β1对Ⅰ型、Ⅲ型胶原等ECM的沉积发挥重要的调控作用.     

卡托普利对高氧致新生大鼠肺纤维化的保护作用

目的 观察卡托普利对高氧致新生大鼠肺组织纤维化的保护作用.方法 足月新生Wistar大鼠240只,随机分为模型组、空气对照组、治疗组和盐水对照组,每组各60只.模型组、盐水对照组和治疗组将足月新生Wistar大鼠(连同母鼠)生后即置于氧舱内持续吸入高浓度氧(FiO2:0.9)21 d造成高氧肺损伤模型,空气对照组吸入空气;治疗组于生后7 d每天经胃管灌服卡托普利30 mg/(kg·d)(用生理盐水配成5.4 mg/ml混悬液),盐水对照组每天经胃管灌服等量生理盐水.每组分别于实验开始后的第1、3、7、14、21夭随机选取6只麻醉后处死.肺组织采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定Ⅲ型胶原的含量,用放射免疫法测定血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的含量.用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织AngⅡ、Ⅲ型胶原mRNA表达的动态变化,同时观察肺组织形态学变化.结果 模型组及盐水对照组肺组织AngⅡ、Ⅲ型胶原含量及mRNA表达第14天明显升高,除盐水对照组的AngⅡmRNA表达升高不明显外,与空气对照组比较差异均有显著性(P<0.05);两组各项指标在第21天达到高峰,模型组肺组织AngⅡ、Ⅲ型胶原含量分别为(838.22±197.75)、(104.21±43.37)ng/mg,与空气对照组比较差异有显著性(P均<0.01);盐水对照组肺组织AngⅡ、Ⅲ型胶原含量分别为(759.97±60.81)、(128.69±54.74)ng/mg,与空气对照组比较差异有显著性(P均<0.05).治疗组第21天AngⅡ、Ⅲ型胶原含量分别为(554.52±59.32)、(39.90±13.45)ng/mg.其mRNA表达分别为1.50±0.84、1.13±0.55,均明显低于模型组及盐水对照组(P均<0.05),但仍高于空气对照组(P均<0.05).肺组织形态学改变:空气对照组为正常肺组织.模型组、盐水对照组第1天同空气对照组,第3～7天肺泡壁毛细血管扩张,肺间隔水肿,肺间隔及肺泡腔内有中性粒细胞浸润,第14天部分肺泡腔变狭长,肺间隔增宽,肺间质细胞增多,出现肺组织纤维化改变.第21天正常肺泡结构消失,残留肺泡直径明显缩小,肺组织出现严重的纤维化.治疗组肺组织纤维化病变明显减轻.结论 卡托普利对高氧所致肺损伤具有一定的保护作用.     

转化生长因子β1对高体积分数氧暴露早产新生大鼠肺纤维化的调控作用（英文）

目的探讨转化生长因子（TGF-β1）对高体积分数氧（高氧）暴露早产新生大鼠肺纤维化的调控作用。方法将80只早产新生SD大鼠随机分为空气组和高氧组,每组40只;每组又随机分为3、7、14、21d4个亚组。采用原位杂交法检测各亚组早产大鼠肺组织TGF-β1 mRNA表达与分布;采用免疫组织化学法检测各亚组早产大鼠肺组织TGF-β1蛋白、Ⅰ型与Ⅲ型胶原表达与分布;并用图像分析方法检测各亚组早产大鼠肺组织TGF-β1 mRNA及其蛋白与Ⅰ型、Ⅲ型胶原阳性表达的PU值。结果高氧第3天,肺组织TGF-β1 mRNA及其蛋白呈现弱阳性表达,第7、14、21天呈强阳性表达,其表达量于第7天开始增高,第14天达高峰;肺组织TGF-β1 mRNA及其蛋白阳性表达的PU值在第7、14、21天均高于空气组（Pa〈0.01）。Ⅰ型胶原在第3、7天时呈弱阳性表达,第14、21天时呈强阳性表达,其表达量从第14天开始增加,第21天时达高峰;Ⅲ型胶原表达强度在第3天时呈弱阳性,第7天时开始增强呈中等阳性表达,第14、21天时呈强阳性表达,其表达量在第7天时开始增加,第14天时达高峰,表达量高于Ⅰ型胶原;肺组织Ⅰ型、Ⅲ型胶原阳性表达的PU值在第14、21天时均明显高于空气组（Pa〈0.01）。高氧组肺组织TGF-β1 mRNA及其蛋白与Ⅰ型、Ⅲ型胶原阳性表达均分布于支气管和血管周围结缔组织及肺间质中;在第14、21天高氧组肺组织TGF-β1蛋白表达与Ⅰ型胶原呈显著正相关（r=0.881,0.793 Pa〈0.01）,与Ⅲ型胶原亦呈显著正相关（r=0.866,0.891 Pa〈0.01）。结论TGF-β1过度表达而介导的细胞外基质（ECM）过度合成是肺纤维化发生的重要机制,在肺纤维化形成过程中TGF-β1对Ⅰ型、Ⅲ型胶原等ECM的沉积发挥重要的调控作用。     

高氧暴露早产大鼠肺泡上皮细胞损伤与细胞外基质变化的动态研究

目的 动态观察高氧暴露新生早产大鼠肺组织肺泡上皮细胞(AEC)超微结构与细胞外基质(ECM)的变化,探讨其在高氧性肺损伤肺纤维化发病机制中的作用.方法 将80只新生早产SD大鼠随机分为空气组和高氧组,空气组在空气中饲养,高氧组置于高氧箱(保持氧体积分数>950 nd/L)中饲养,每组40只;每组又随机分为3、7、14、21 d 4个亚组,每组10只.分别在第3、7、14、21天处死动物,收集肺组织标本.采用透射电镜观察各亚组大鼠AEC超微结构改变;采用碱水解法测定其肺组织匀浆羟脯氨酸(HYP)含量;采用免疫组织化学方法检测肺组织Ⅰ型与Ⅲ型胶原表达与分布;并用图像分析方法检测肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原阳性表达的PU值.结果 高氧组第3天即出现AEC轻度损伤;第7天时AEC损伤加重,第14、21天时出现AEC-Ⅱ坏死,板层小体基本排空,AEC基底膜及气血屏障明显增厚,肺间质可见大量胶原原纤维.肺组织HYP含量随着高氧暴露时间的延长而逐渐增加,第21天时达最高,在第7、14、21天时均明显高于空气组.Ⅰ、Ⅲ型胶原均在第3天呈弱阳性表达,第14、21天呈强阳性表达.肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原阳性表达的PU值在第14、21天时明显高于空气组(P<0.01).结论 AEC损伤是早产大鼠长时间高氧暴露所致肺损伤的早期特征,而后期以肺间质ECM过度沉积为主.     

持续吸入高体积分数氧对新生大鼠肺组织Ⅰ型和Ⅳ型胶原信使核糖核酸表达的动态影响

目的 探讨新生大鼠持续吸入高体积分数氧(高氧)后肺组织病理学变化,以及肺组织Ⅰ型和Ⅳ型胶原mRNg表达的动态改变和在高氧致慢性肺疾病(CLD)发生中的作用.方法 足月新生大鼠出生12 h内,依据吸入氧体积分数的不同随机分为高氧组和空气对照组.分别于实验1、3、7、14、21 d,从2组中抽取5只,水合氯醛麻醉后取肺组织制备石蜡切片;行HE染色镜下观察肺组织病理变化;应用原位杂交方法检测其肺组织Ⅰ型和Ⅳ型胶原mRNA的动态表达和定位.采用SPSS 11.0软件进行统计学分析.结果 高氧组早期出现炎性反应,7 d出现肺泡发育阻滞,最终形成纤维化.原位杂交光镜下可见,Ⅰ型胶原在新生大鼠肺组织中主要表达于肺泡上皮细胞和血管内皮细胞;与对照组比较7 d时在高氧组Ⅰ型胶原mRNA表达显著降低(P<0.05),14 d时差异更为显著(P<0.01);Ⅳ型胶原在新生大鼠肺组织中主要表达在血管内皮细胞,各时间点上2组Ⅳ型胶原mRNA表达水平比较无明显差异(Pa>0.05).结论 持续吸入高氧可引起新生大鼠肺发育受阻和肺间质纤维化等,与CLD相似改变,而Ⅰ型和Ⅳ型胶原mRNA表达水平与其蛋白的沉积不平行,提示此2型胶原的调节可能不是以转录水平为主.     

细胞粘附因子-1在新生大鼠高氧肺损伤模型肺组织的表达及意义

目的探讨细胞粘附因子-1(ICAM-1)与新生大鼠高氧肺损伤的关系以及高氧肺损伤的发病机制。方法取102只胎龄22天足月新生大鼠,随机分为实验组与对照组各51只。实验组生后立即置入持续高浓度氧(>95%)环境中饲养,对照组在空气中饲养。两组新生大鼠根据随机数字法于生后第3、7、14天各抽取8只定位相应亚组。处死新生鼠取其肺组织,HE染色观察肺组织病理变化,Masson三色染色判断肺组织纤维化程度,免疫组化检测ICAM-1并对表达强度进行半定量分析。结果 (1)对照组生后3、7、14天各亚组未见肺损伤的病理性改变,Masson三色染色未见胶原沉积增多现象,ICAM-1在肺组织中阴性或弱阳性表达。(2)实验组7天HE染色可见大量炎细胞浸润,肺间隔轻度增宽,14天炎细胞浸润减少,肺泡结构破坏较明显,肺间隔明显增厚;Masson三色染色生后7天胶原沉积开始增加,14天纤维化程度更加显著,ICAM-1在各时间点均呈阳性表达,且分布广泛;半定量分析显示,实验组各时间点ICAM-1的表达明显高于对照组,生后7天表达最强(P<0.05)。结论高氧对肺组织有明显的损害作用,高氧暴露早期ICAM-1在肺组织中的表达随着暴露时间的延长而增加,ICAM-1在高氧暴露早期的急性炎症阶段起作用,继续暴露则逐渐降低,并未证实其与高氧肺损伤后期的纤维化有关系。     

N-乙酰半胱氨酸对高氧性肺损伤新生未成熟大鼠肺纤维化的抑制作用

目的 探讨高氧性肺损伤新生未成熟大鼠肺纤维化过程中Ⅰ、Ⅲ型胶原的沉积情况,并观察N-乙酰半胱氨酸(NAC)的干预效果,以期为临床防治高氧性肺损伤后肺纤维化提供一条新的有效途径.方法 将200只孕21 d(足月为22～23 d)剖宫产出生的新生SD大鼠随机分为空气组(Ⅰ组)、高氧组(Ⅱ组)、高氧+生理盐水(NS)组(Ⅲ组)、高氧+小剂量NAC组(Ⅳ组)、高氧+大剂量NAC组(Ⅴ组)共5个组,每组40只.每组又随机分为3 d、7 d、14 d和21 d共4个亚组,每个亚组10只.Ⅰ组在空气中饲养;Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组置于同一室的高浓度氧(﹥95%)箱中饲养;Ⅳ、Ⅴ组大鼠以灌胃方式给予NAC(大剂量组每天给予6.25×10-5 g NAC/g体重,小剂量组是大剂量的1/4);Ⅲ组给予相同容量的NS.光镜观察各组大鼠肺组织病理形态学;应用图像分析方法检测肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量,并比较各组大鼠肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的差别.结果 3、7 d时各组大鼠肺组织Ⅰ型胶原免疫组化PU值的差异均无统计学意义(P均﹥0.05);14、21 d时Ⅱ组较Ⅰ组明显增高(P均﹤0.01),Ⅴ组则较Ⅱ组明显降低(P分别为0.015、0.001).3 d时各组大鼠肺组织Ⅲ型胶原免疫组化PU值的差异无统计学意义(P＞0.05);7、14、21 d Ⅱ组较Ⅰ组显著增加(P均＜0.01),Ⅴ组则显著低于Ⅱ组(P均＜0.01).对各时间点Ⅳ组与Ⅱ组Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达量之间进行比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 高氧性肺损伤新生未成熟大鼠肺纤维化过程中Ⅰ、Ⅲ型胶原沉积增加,NAC对高氧性肺损伤后肺纤维化具有抑制作用,其作用具有剂量依赖性.     

基质金属蛋白酶-8及其组织抑制因子-1在高氧致新生鼠肺纤维化中的基因表达及其意义

目的：近年来研究发现细胞外基质（ECM）的过度沉积与肺纤维化发生密切相关，而ECM合成与降解在新生儿慢性肺疾病的肺纤维化发生、发展中作用如何尚不清楚。本文着重研究基质金属蛋白酶-8（MMP-8, Ⅰ型胶原的降解酶）及其组织抑制因子-1（TIMP-1）基因在高氧致新生鼠肺损伤中的表达，并探讨其在纤维化中的作用。方法：80只足月新生大鼠依吸氧浓度（FiO2）随机分为高氧组（FiO2＝0.90）和对照组（FiO2＝0.21）,每组均为40只。采用高浓度氧诱导新生鼠肺损伤模型，应用酶联免疫吸附法（ELISA）、免疫组织化学及反转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术，动态研究MMP-8及TIMP-1 mRNA表达，并同时观察肺组织Ⅰ型胶原蛋白的表达强度及其含量变化。结果：实验后14 d 和21 d的高氧组肺组织中，Ⅰ型胶原蛋白表达和Ⅰ型胶原水平均高于对照组， 差异有显著性意义。 而实验后14 d 和21 d，高氧组肺组织MMP-8 mRNA表达降低，TIMP-1 mRNA表达增高，与对照组比较差异有显著性意义。结论：高氧通过下调MMP-8及上调TIMP-1基因表达，导致ECM降解减少，过量ECM沉积于肺组织, 这可能是高氧致肺纤维化的机制之一。［中国当代儿科杂志，2007，9（1）：1-5］     

高体积分数氧致慢性肺疾病新生大鼠肺组织基质金属蛋白酶-13和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1表达的意义

目的 观察高体积分数氧(高氧)致慢性肺疾病(CLD)新生大鼠肺组织基质金属蛋白酶.13(MMP-13)和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)的动态变化,探讨CLD发病与MMPs的关系.方法 将新生大鼠于出生24 h内随机分为高氧组和对照组,每组各40只;于出生第1、3、7、14、21天处死,留取其肺组织,苏木素-伊红(HE)、Masson染色,酶联免疫吸附法检测其Ⅰ型胶原(ColⅠ)表达;免疫组织化学法检测其肺组织MMP-13和TIMP-1的表达.结果 随高氧暴露时间的延长,新生大鼠肺组织光镜下表现为次级隔数目和肺泡数目减少,终末气腔扩张,肺泡间隔增宽.随高氧暴露时间的延长,肺组织Col Ⅰ型胶原蛋白沉积在第14天较对照组显著增加(p<0.01),第21天差异更为显著(P<0.001).MMP-13和TIMP-1 主要在上皮细胞、内皮细胞、间质细胞、肺泡巨噬细胞等细胞胞质中表达;第21天高氧组肺组织MMP-13表达与对照组比较明显下降(P<0.05),其余时间点二组比较无明显差异(Pa>0.05),TIMP-1 表达随高氧暴露时间延长逐渐增加,高氧组第14、21天较对照组表达均显著增加(Pa<0.01).结论 高氧致CLD新生大鼠肺组织存在MMP-13/TIMP-1表达失衡,是高氧后期以Col I为代表细胞外基质异常沉积的关键.     

重组人促红细胞生成素对新生大鼠高体积分数氧肺损伤细胞炎症的影响

目的探讨人重组促红细胞生成素(rhEPO)对新生大鼠高体积分数氧(高氧)肺损伤炎症的影响。方法将72只新生SD大鼠按随机数字表法分为4组:对照组、支气管肺发育不良(BPD)组、高氧+低剂量促红细胞生成素[EPO(L)]组、高氧+高剂量促红细胞生成素[EPO(H)]组。BPD组、高氧+EPO(L)组和高氧+EPO(H)组新生大鼠暴露于850 mL/L氧气中,高氧+EPO(L)组和高氧+EPO(H)组分别于高氧暴露后1、3、7 d给予800 IU/kg、2000 IU/kg rhEPO皮下注射,对照组和BPD组注射等量9 g/L盐水。实验开始后3、7、14 d记录各组体质量。HE染色,光镜下观察其肺组织形态结构的改变,检测肺组织放射状肺泡计数(RAC)。免疫荧光染色法检测核因子-κB(NF-κB)的表达,Western blot技术检测肺组织磷酸化NF-κB(pNF-κB)、抑制蛋白(IκB)及Caspase-3的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测支气管肺泡灌洗液中白细胞介素-1β(IL-1β)的表达。结果1.BPD组新生大鼠14 d时体质量明显低于对照组[(18.97±3.21)g比(27.97±2.30)g],差异有统计学意义(P<0.05);14 d时,高氧+EPO(L)组和高氧+EPO(H)组新生大鼠体质量[(24.16±2.15)g、(26.04±1.97)g]均显著高于BPD组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。2.HE染色观察肺组织形态学结构显示,与对照组比较,BPD组3 d肺泡间隔有少量炎性细胞渗出,7 d更为明显,肺泡腔有渗出,14 d出现肺泡数量减少,肺大疱形成,间隔增厚,RAC明显减少(5.50±1.29比14.33±2.80),差异均有统计学意义(P<0.01);高氧+EPO(L)组和高氧+EPO(H)组新生大鼠肺组织病理改变减轻,炎性细胞浸润减少,RAC值在14 d均明显高于BPD组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。3.免疫荧光结果显示,BPD组NF-κB p65阳性细胞数目明显增多,荧光强度增强,给予EPO处理后可减少NF-κB p65阳性细胞数目,荧光强度减弱。4.Western blot结果显示,与对照组比较,BPD组pNF-κB p65及Cleaved Caspase-3显著增高,差异均有统计学意义(均P<0.05);IκB明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与BPD组比较,高氧+EPO(L)组和高氧+EPO(H)组pNF-κB p65及Cleaved Caspase-3显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05),IκB均明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。5.ELISA结果显示,与对照组比较,BPD组IL-1β表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);高氧+EPO(L)组和高氧+EPO(H)组IL-1β表达则显著低于BPD组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论EPO能通过NF-κB途径抑制细胞炎性反应,减轻高氧诱导的肺组织凋亡,对新生大鼠高氧肺损伤起保护作用。     

地塞米松对大鼠胎肺形态结构及Wnt信号转导途径的影响

目的 比较产前给予不同剂量地塞米松对大鼠胎肺形态结构及Wnt信号转导途径的影响.方法 孕鼠12只,于孕16、17、18 d,连续3 d给孕鼠腹腔注射药物,随机分为3组,每组4只.地塞米松小剂量组：地塞米松0.4 mg/(kg·d),地塞米松大剂量组：地塞米松0.8 mg/(kg·d),均用生理盐水稀释至0.5ml;对照组：生理盐水0.5 ml/d;取孕19 d胎鼠肺组织,HE染色观察肺病理学改变;RT-PCR、Western-Blot方法检测Wnt信号转导途径中Wnt7b、GSK-3β、β-catenin基因mRNA和蛋白表达.结果 (1)肺脏病理学改变：HE染色可见：地塞米松小剂量组肺泡数目为(15.6±2.1)个;大剂量组(13.2±1.6)个,对照组(20.8±2.0)个;肺泡间隔厚度：地塞米松小剂量组(11±5)μm;大剂量组(11±4)μm;对照组(13±7)μm;肺泡腔结构：地塞米松小剂量组(2483 ±1336)μm2;大剂量组(2924 ±1705)μm2;对照组(1913±764)μm2;以上各指标地塞米松组与对照组差异均有统计学意义(P均＜0.01),地塞米松大剂量组较小剂量组肺泡数目明显减少(P＜0.01).(2)地塞米松组胎肺Wnt7b及β-catenin基因mRNA的表达量均高于对照组,GSK-3β表达量低于对照组(1.1±0.6)(P均＜0.05);地塞米松组胞浆GSK-3β蛋白表达量低于对照组,大剂量组低于小剂量组;地塞米松小剂量组胞浆β-catenin的表达高于对照组,大剂量组低于对照组;胞核β-catenin蛋白表达量高于对照组.结论 产前使用地塞米松,肺泡数目减少,肺泡腔结构变大,肺泡间隔厚度变薄,周围结缔组织减少,影响胎肺形态发育;Wnt7b、β-catenin和GSK-3β基因表达异常;胎肺形态发育异常可能是通过地塞米松所致的Wnt信号转导途径障碍而发生.     

硫氧还蛋白及其还原酶在新生鼠高氧肺损伤中的表达

目的 研究硫氧还蛋白(Trx)及其还原酶(TR)在早产新生鼠高氧肺损伤的肺组织中的表达变化及意义.方法 早产新生SD大鼠,生后第一天随机分为空气组和高氧组.每组64只.两组分别于高氧或空气暴露后第4、7、10、14天提取肺组织总RNA,采取半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定Trx和TR mRNA表达;同时采用HE染色观察肺组织病理学变化,并进行辐射状肺泡计数(RAC).结果 病理学观察显示:与对照组比较,高氧组肺组织出现明显肺泡炎性改变和肺发育滞后,同时RAC值亦较空气组显著减少(P＜0.05).高氧暴露各组Trx、TR mRNA表达较空气组均明显增强(P＜0.05),且二者表达强度分别于第10天和第7天达高峰.结论 高氧上调肺组织Trx、TR表达;肺组织Trx系统表达增高可能在早产鼠高氧肺损伤的发病过程中发挥重要保护作用.     

高氧致慢性肺疾病新生大鼠肺组织尿激酶型纤溶酶原激活因子和纤溶酶原激活物抑制因子1表达的动态改变及意义

目的 慢性肺疾病(Chronic lung disease,CLD)的特征性病理改变是肺发育受阻和肺问质纤维化,因此胶原等细胞外基质(extracellular matrix,ECM)重塑在肺纤维化形成中的作用已成为当今的研究热点.纤溶系统也是调节ECM降解和基质金属蛋白酶(MMPs)活性的重要因素.这里我们制备了吸入高浓度氧(高氧)致新生大鼠CLD的模型,探讨尿激酶型纤溶酶原激活因子(urokinase-plasminogen activator,u-PA)和纤溶酶原激活物抑制因子(plasminogen activator inhibitor-1.PAI-1)在新生大鼠CLD中的动态变化和意义.方法 足月新牛大鼠生后12h内,分别于0.90～0.95氧和卒气中持续暴露,于1、3、7,14、21 d光镜下观察不同时间点的病理改变,应用Western Blotting和RT-PCR的方法分别检测肺组织u-PA、PAI-1蛋白及mRNA表达的动态改变.结果 (1)病理改变:3d时高氧组可见炎件反应;7d时肺发育障碍,间隔增宽,胶原纤维沉积.(2)u-PA表达:高氧暴露3d时,蛋白表达较对照组明显升高(115.52±7.10 vs 96.51±6.33),P<0.01;高氧组在7～21 d(97.66±7.98,99.91±7.60,103.23±6.24)与对照组比较(112.43±6.01,123.25±8.35,103.23±6.24)降低,P值分别为<0.05,<0.01,<0.01.mRNA表达在高氧暴露3d时较对照组明显升高(1.18±0.07 vs 0.99±0.05),P<0.01,7 d至21 d(1.01±0.06,1.10±0.12,1.27±0.06)与对照组比较(1.15±0.08,1.51±0.32,1.60±0.24)降低,P均<0.01.(3)PAI-1表达:高氧暴露后7～21 d,蛋白表达(147.83±12.27,149.07±11.17,161.42±13.08)明显高于同期对照组(116.18±10.67,113.73±15.58,126.60±8.59),P值分别<0.01,<0.05,<0.O1;mRNA表达在7～21 d(1.49±0.28,1.46±0.31,1.51±0.33)也高于同期对照组(0.94±0.01,0.94±0.03,0.98±0.03),P<0.05,<0.01和<0.05.结论 新生大鼠高氧暴露早期,肺组织u-PA/PAI-lmRNA及蛋白表达增强,纤溶和降解活性增强;高氧暴露中晚期,u-PA/PAI-lmRNA及蛋白表达降低,纤溶和降解活性降低,与肺纤维沉积平行,提示u-PA/PAI-1失衡参与了高氧致CLD的纤维化形成过程.     

洛沙坦对高氧致慢性肺疾病新生大鼠肺纤维化的影响

目的：血管紧张素II除了调节血压,还参与肺纤维化的发生。研究血管紧张素II 1型受体拮抗剂洛沙坦对高氧致慢性肺疾病（CLD）新生大鼠肺组织的影响,探讨洛沙坦在抗纤维化的作用及可能的机制。方法：将Waistar新生大鼠生后24 h内随机分为：空气组、高氧组、高氧+注射用水组、高氧+ 洛沙坦组,高氧组氧浓度为85%~90%,高氧+注射用水组、高氧+洛沙坦组在生后6 d每天用注射用水或洛沙坦(5 mg/kg)灌胃至实验结束,于7,14,21 d处死。观察病理组织学改变;生化检测肺组织超氧化物歧化酶活性(SOD)、丙二醛(MDA)和羟脯氨酸(HYP)的含量。结果：高氧暴露后大鼠肺泡数目减少,终末气腔扩张,次级隔数目减少,肺泡间隔显著增厚,甚至出现肺出血和肺实变。洛沙坦干预后肺泡间隔变薄,但肺泡腔没有明显缩小,且肺泡次级隔仍较少。高氧后14和21 d新生大鼠肺组织HYP含量较同期空气组显著增加(P<0.01),洛沙坦治疗2周后肺组织HYP含量较高氧组明显下降 (471.46±30.63 μg/kg vs 545.15±34.90 μg/kg, P<0.01); 高氧组在高氧暴露7 d时,SOD活力呈代偿性增加,之后逐渐下降至空气组水平;MDA水平在高氧暴露后显著增加,但随日龄增加呈下降趋势。洛沙坦治疗能增加高氧肺组织SOD的活力, 21 d时差异有显著性(82.94±4.62 U/mg protein vs 67.78±8.02 U/mg protein, P<0.01),同时降低MDA的水平(30.54±5.89 nmol/mg protein vs 48.75±8.09 nmol/mg protein, P<0.01)。结论：洛沙坦治疗能减轻高氧诱导新生鼠CLD肺纤维化的程度,该过程可能与肺组织抗氧化酶活性增加以及膜脂质过氧化减轻密切相关。［中国当代儿科杂志,2007,9（6）：591-594］     

吸入高浓度氧对大鼠肺泡发育过程促红细胞生成素受体的影响

目的 探讨大鼠肺泡发育阶段促红细胞生成素受体(erythropoietin receptor,EPOR)的动态变化以及吸入高浓度氧对EPOR的影响.方法 将48只新生Wistar大鼠生后12 h内随机分为空气组和高氧组.高氧组将动物置于自制密闭氧箱中,持续输入氧气,FiO2=0.85±0.02.在实验3,7和14 d每组随机选取8只处死,采集标本.采用HE染色观察肺组织病理改变,放射状肺泡计数评价肺泡化程度,免疫组织化学法检测肺组织血小板内皮细胞黏附分子-1(platelet endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1)及EPOR表达,PT-PCR及Western blot法检测肺组织EPOR基因和蛋白表达.结果 高氧组3 d时肺毛细血管扩张、充血,7 d时肺泡体积增大、数量减少,14 d时肺泡数量及毛细血管进一步减少.空气组RAC值随日龄增长而增加,与空气组相比,高氧组7 d时RAC值降低[(6.85±104):(7.33±1.0),P＜0.01],差异在14 d更显著[(6.20±1.58):(9.07±0.69),P＜0.001].空气组PECAM-1表达随日龄增长逐渐增强,高氧组7 d和14 d PECAM-1表达较空气组明显减弱[(15.14±1.51):(31.47±2.43),(11.04±1.76):(41.41±3.83),P＜0.001].空气组EPOR染色在生后3 d最强,随日龄增长逐渐减弱,与空气组相比,高氧组各时点EPOR表达均明显减弱[(1.62±0.04):(1.82±0.06),P＜0.05;(0.48±0.01):(1.10±0.07),(0.39±0.04):(0.87±0.03),P＜0.001].空气组EPOR mRNA表达在生后3 d最强,高氧组各时点EPOR mRNA表达较空气组明显减弱[(0.87±0.07):(1.1±0.17),(0.18±0.07):(0.36±0.08),P＜0.01;(0.14±0.05):(0.36±0.09),P＜0.001].结论 EPOR可能在正常肺泡发育过程发挥调节作用,吸入高浓度氧导致的肺泡及血管发育阻滞可能与EPOR及PECAM-1蛋白表达减弱有关.

Abstract：

Objective Oxygen toxicity is thought to be a major contributing factor in the pathogenesis ofbronchopulmonary dysplasia (BPD). Animal experiments reveal that erythropoietin (EPO) may have protective effects against hyperoxic lung injury, but the mechanisms remain unknown.The aim of this study was to evaluate effects of hyperoxia on erythropoietin receptor expression in lung development of neonatal rats.Methods Several litters of Wistar pups were pooled together within 12 hours after birth and randomly divided into two groups (n = 24 in each ): air-exposed control group and hyperoxia-exposed group. In hyperoxia-exposed group, the rats were exposed to 85% oxygen. Pups ( n = 8 ) from each group were sacrificed on postnatal days 3, 7, and 14.The pulmonary histologcal and morphometric changes were observed after hematoxylin-eosin (HE) staining under light microscope. Radical alveolar counts ( RAC )were compared between the two groups to evaluate the differences of aveolarization. Expressions of platelet endothelial cell adhesion molecule-1 ( PECAM-1 ) and erythropoietin receptor (EPOR) in lung tissue were measured by immunohistochemistry.Expressions of EPOR mRNA and EPOR protein were measured by RTPCR and Western blotting. Results In hyperoxia-exposed group, there were a few inflammatory cells infiltration in interstitium on day 3 and inflammatory response worsened on day 7. Alveolar and capillary hypoplasia and interstitial fibrosis were evident on day 14.RAC increased in air-exposed control group along with the age in days. RAC decreased from day 7 in hyperoxia-exposed group compared with air-exposed control group [( 6.85 ± 1.04 ) vs.( 7.33 ± 1.0 ), P ＜ 0.01], which was more evident on day 14 [( 6.20 ±1.58 ) vs.(9.07 ± 0.69 ), P ＜ 0.001].Expression of PECAM-1 protein increased in air-exposed control group along with the age in days.But in hyperoxia-exposed group, it decreased on day 7 and 14 [( 15.14 ±1.51) vs.(31.47 ±2.43),(11.04 ± 1.76)vs.(41.41 ±3.83),P＜0.001]compared with air-exposed control group.Expression of EPOR on day 3 in air-exposed control group was the strongest and weakened gradually with the increase of postnatal days.Expression of EPOR in hyperoxia-exposed group decreased on day 3 and became more evident on day 7 and day 14 compared with air-exposed control group [( 1.62 ±0.04) vs.(1.82±0.06), P＜0.05;(0.48 ±0.01)vs.(1.10±0.07), (0.39±0.04) vs.(0.87±0.03 ) ,P ＜0.001].Expression of EPOR mRNA on day 3 in air-exposed control group was the strongest and was decreased significantly in hyperoxia-exposed group compared with air-exposed control group at all time points [(0.87±0.07)vs.(1.1±0.17),(0.18±0.07)vs.(0.36±0.08),P＜0.01;(0.14±0.05)vs.(0.36 ± 0.09 ), P ＜ 0.001]. Conclusions EPOR may participate in the modulation of normal lung development.Depressed expression of EPOR and PECAM-1 may be involved in the pathogenesis of alveolar and capillary hypoplasia induced by hyperoxia.     

泛素-特异性蛋白酶7在高氧暴露早产鼠肺组织中的表达及意义

目的 探讨泛素-特异性蛋白酶7（USP7）及Wnt信号通路中关键因子在高氧暴露早产大鼠肺组织中的表达及意义。方法 将180只新生早产Wistar大鼠随机均分成空气对照组、空气干预组、高氧对照组及高氧干预组,每组45只。干预组早产鼠每天腹腔注射USP7特异性抑制剂P5091（5 mg/kg）,高氧组建立早产大鼠高氧暴露肺损伤动物模型。分别于实验过程第3、5、9天时处死动物收集早产鼠肺组织标本,通过苏木精-伊红染色病理切片观察肺组织病理变化;采用RT-PCR及Western blot技术检测肺组织中USP7及Wnt信号通路关键因子β-catenin、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的mRNA及其蛋白表达水平。结果 空气各组肺组织形态结构基本正常;高氧对照组3 d、5 d时可见肺泡明显压缩、结构紊乱,有明显炎症细胞、红细胞渗出及间质水肿改变;高氧对照组9 d时可见肺泡结构紊乱、肺泡间隔明显增厚;高氧干预组肺组织结构紊乱、炎症细胞浸润、红细胞渗出情况均较相应时间点的高氧对照组有所减轻;各时间点高氧各组放射状肺泡计数（RAC）均明显低于相应空气各组（P < 0.05）,且高氧干预组RAC较高氧对照组明显升高（P < 0.05）。实验第3、5、9天时,高氧各组USP7、β-catenin mRNA及USP7、β-catenin、α-SMA蛋白表达均较相应空气各组增加（P < 0.05）;高氧干预组β-catenin mRNA及β-catenin、α-SMA蛋白表达较高氧对照组减少（P < 0.05）;高氧干预组USP7 mRNA及蛋白表达与高氧对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05）,空气干预组USP7、β-catenin mRNA及USP7、β-catenin、α-SMA蛋白表达与空气对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 高氧暴露可激活Wnt/β-catenin信号通路;USP7可能通过Wnt/β-catenin信号通路参与高氧肺损伤;USP7特异性抑制剂P5091可能通过加强β-catenin的泛素化来加速其降解,减少肺上皮-间质转化,从而对高氧肺损伤具有一定的保护作用。