进展期胃癌患者手术前后外周血T细胞及其亚群变化的研究

目的:研究进展期胃癌患者外周血T细胞免疫功能状态,手术对T细胞免疫功能的影响,以及对术后免疫治疗的指导。方法:采用间接免疫荧光染色流式细胞仪检测法,对43例进展期胃癌患者作手术前后外周血T细胞及亚群的测定,17例健康人作术前正常对照组。结果:与对照组相比,术前患者CD_3~+、CD_4~+细胞及CD_4~+/CD_8~+比值显著减少(P<0.01),而CD_8~+细胞无差异(P>0.05)。9例行非根治术者,手术前后T细胞及亚群无明显变化;而34例行根治术者,术后除CD_8~+细胞无变化外,CD_3~+、CD_4~+细胞及CD_4~+/CD_8~+比值均较术前有显著提高(P<0.01或P<0.05)。结论:术前进展期胃癌患者外周血T细胞免疫功能低下,行根治性切除术后得以改善。术后辅助免疫治疗或免疫化疗,以期提高生存率。     

T细胞抗原受体Vβ7阳性T细胞检测在乙型肝炎患者中的临床应用

目的分析在乙型肝炎患者中应用T细胞抗原受体Vβ7阳性(TCR Vβ7+)T细胞检测的应用价值。方法选取我院体检正常的18例健康体检者作为正常组,选取同期体检为急性乙型肝炎患者15例为急性乙型肝炎组,同期体检为慢性乙型肝炎患者35例作为慢性乙型肝炎组,应用流式细胞仪对CD_4~+TCR Vβ7+T细胞、CD_8~+TCR Vβ7+T细胞含量进行检测。结果正常组、急性乙型肝炎组CD_4~+TCR Vβ7+T细胞含量结果与慢性乙型肝炎组之间比较,有统计学差异(P<0.05),正常组、急性乙型肝炎组与慢性乙型肝组CD_8~+TCR Vβ7+T细胞含量比较,有统计学意义(P<0.05)。结论 TCR Vβ7阳性T细胞增殖活性减低可以使乙型肝炎患者感染慢性化。     

乳腺癌干细胞RNA-DCs疫苗诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞抗肿瘤免疫应答

目的制备负载乳腺癌干细胞RNA的树突状细胞(DCs)疫苗,研究其诱导的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)的抗肿瘤免疫反应。方法采用细胞毒性试剂盒检测2种乳腺癌干细胞疫苗[(A组,CD44+CD24-+MCF-7-CTLs)、(B组,MCF-7-CTLs)]和DC-CTLs(C组)的体外细胞杀伤能力。取24只小鼠均分为四组:A1组皮下接种活化的A组疫苗+MCF-7乳腺癌细胞;B1组接种活化的B组疫苗+MCF-7乳腺癌细胞;C1组皮下注射活化的DCs-CTLs+MCF-7乳腺癌细胞;D1组单用MCF-7乳腺癌细胞作为对照。分析裸鼠接种后肿瘤在体内的生长情况。结果体外对CD44+CD24-+MCF-7乳腺癌细胞杀伤能力强度:A组>B组>C组(P<0.05)。体外对MCF-7乳腺癌细胞杀伤能力强度:B组>A组>C组(P<0.05)。在体成瘤实验显示,B1组和A1组的成瘤时间分别为第7周和第6周,明显长于D1组(第1周)和C1组(第2周)(P<0.05)。结论 CD44+CD24-乳腺癌干细胞RNA-DCs疫苗诱导的CTLs能够产生特异性免疫应答,从而抑制乳腺癌细胞成瘤。     

泥鳅多糖对小鼠脾细胞免疫应答的影响

目的:研究泥鳅多糖对小鼠脾细胞免疫应答的影响.方法:分别给正常小鼠、刀豆蛋白(ConA)或左旋咪唑免疫增强小鼠、环磷酰胺免疫抑制小鼠腹腔注射提取的泥鳅多糖,连续给药7d.用~H-胸苷掺入法测定T淋巴细胞的增殖.用~(51)Cr同位素标记法测定细胞毒T淋巴细胞的细胞毒性和天然杀伤细胞的活性.结果:泥鳅多糖5或10mg·kg~(-1)·d~(-1)可以提高T淋巴细胞的增殖,并增强细胞毒T淋巴细胞的细胞毒性和天然杀伤细胞的活性,还能增强ConA解除环磷酰胺对T淋巴细胞增殖抑制的能力,抑制率从环磷酰胺对照组的51.4％分别降低到18.2％和35.1％.而且,给予小鼠10或20mg·kg~(-1)·d~(-1)的泥鳅多糖,可以恢复环磷酰胺所致的天然杀伤细胞活性降低.结论:泥鳅多糖能增强小鼠脾细胞中T细胞、细胞毒T淋巴细胞和天然杀伤细胞的活性.     

调节性T细胞对肿瘤特异性CTL杀伤效能的影响

目的探讨CD+4CD+25Treg细胞对肿瘤特异性CTL杀伤效果的影响及机制。方法将C57BL/6小鼠80只随机分为4组,每组20只。实验组1:DC与T细胞共同培养前删除CD+4CD+25Treg;实验组2:DC与T细胞共同培养后删除CD+4CD+25Treg;实验组3:DC与T细胞共同培养时不删除CD+4CD+25Treg;对照组:无DC诱导的T细胞。应用脾脏来源DC细胞诱导T细胞制备CTL,在CTL形成的不同时期采用MACS法删除CD+4CD+25Treg。应用MTT法检测不同组别CTL对B16黑色素瘤细胞的杀伤效果。同时应用ELISA法检测细胞培养液中IL-2、IL-10含量变化。结果 3实验组CTL杀伤率明显高于对照组(P<0.05)。实验组1及实验组2删除CD+4CD+25Treg的CTL杀伤率明显高于未删除的实验组3(P<0.05)。但CTL形成的不同时期删除CD+4CD+25Treg对CTL杀伤率无显著差别(P>0.05)。结论删除CD+4CD+25Treg细胞可明显提高CTL的杀伤效果,是打破肿瘤免疫耐受机制的新途径。     

化疗联合热疗对直肠癌患者治疗前后CD+4CD+25T细胞和CTL细胞的影响

1995年,Sakaguchi等首次分离获得具有免疫调节作用的CD+4CD+25T细胞,称为调节性T(regulatory T,Treg)细胞[1].研究表明,CD+4CD+25T细胞是存在于正常机体内的一类同时具有免疫无能性和抑制性的调节性T淋巴细胞,通过分泌抑制性细胞因子和T-T细胞接触性抑制,对抗原提呈细胞(APC)和免疫效应细胞发挥独特的免疫调节功能;细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocyte,CTL),对某些病毒、肿瘤细胞等抗原物质具有杀伤作用,与自然杀伤细胞构成机体的重要防线,以上2种细胞均与肿瘤的发生、发展密切相关[2].     

应用单克隆抗体研究寻常性银屑病患者外周血中T细胞及其亚群

随机选择30例寻常性银屑病患者和10例正常人,以抗人T细胞表面抗原的单克隆抗体CD_3,CD_4和CD_8用间接免疫荧光法检测其外周血T细胞及其亚群。患者分成7组,进行期、静止期、退行期,点滴状型和斑块状型,受损面积不足10％和10％以上。每组10例。对照组为10例健康成人。结果表明:1.与对照组相比,各组外周血CD_3~+、CD_4~+和CD_8~+细胞百分率及CD_4~+/CD_8~+细胞比率未见明显差异(均P>0.05)。2.点滴状与斑块型组间及受损面积不足10％与10％以上组间的CD_3~+、CD_4~+和CD_8~+细胞百分率及CD_4~+/CD_8~+细胞比率未见明显差异(均P>0.05)。3.进行期和静止期组CD_4~+/CD_8~+细胞比率,经方差分析证实明显地低于退行期组(F=3.73 P<0.05)。结合该发现,就寻常性银屑病的发病机理进行了分析和讨论。     

胸腺肽α_1对96例慢性肝病患者T细胞亚群影响的临床观察

目的探讨胸腺肽α_1对96例慢性肝病患者T细胞亚群影响的临床效果。方法采用回顾性方法分析,选取我院自2016年1月至2018年1月的96例慢性肝病患者的临床资料,均给予皮下注射胸腺肽α1,分析治疗前后肝功能指标及T细胞亚群水平。结果治疗后,转氨酶、总胆红素水平显著降低,PT活动度显著升高,差异有统计学意义(P <0.05)。治疗后,CD_3~+、CD_4~+、CD_4~+/CD_8~+均有所回升,CD_8~+明显降低,与治疗前相比,有统计学意义(P <0.05)。结论慢性肝病患者采用胸腺肽α_1治疗可提升患者细胞免疫功能,协同改善肝功能,值得临床推广应用。     

银连祛风汤对慢性荨麻疹模型小鼠免疫指标的影响

目的探讨银连祛风汤对慢性荨麻疹模型小鼠免疫指标的影响。方法将72只小鼠(雌雄各半)分为正常组(A组),模型组(B组),银连祛风汤低、中、高剂量组[C_1组、C_2组、C_3组生药18.35,36.70 55.05 g/(kg·d)],阳性药对照组[D组地氯雷他定0.83 mg/(kg·d)],各12只。第1天和第10天,除A组外其余各组小鼠均腹腔注射卵白蛋白+氢氧化铝悬液的混合液,以建立慢性荨麻疹小鼠模型。C_1组、C_2组、C_3组、D组小鼠于第1次免疫注射后的第6天灌胃给予相应剂量药物,每日1次;A组、B组小鼠灌胃等体积生理盐水。各组小鼠均连续给药21 d。采用双抗体酶联免疫吸附法检测小鼠血管壁组织匀浆上清液和血清中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)、白细胞介素4(IL-4)水平;采用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群CD_4~+和CD_8~+细胞阳性率。结果与A组比较,B组小鼠血管壁组织匀浆上清液和血清中MCP-1,Eotaxin,IL-4水平及CD_8~+细胞阳性率均显著升高(P <0.01),CD_4~+细胞阳性率和CD_4~+/CD_8~+比值均显著降低(P<0.01);与B组比较,C_1组、C_2组、C_3组、D组小鼠血管壁组织匀浆上清液和血清中MCP-1,Eotaxin,IL-4水平均显著降低,C_3组和D组小鼠CD_4~+细胞阳性率和CD_4~+/CD_8~+比值均显著升高(P <0.05);与C_1组比较,C_3组小鼠上述指标变化显著(P<0.05)。结论银连祛风汤能显著降低慢性荨麻疹模型小鼠MCP-1,Eotaxin,IL-4水平和CD_8~+细胞阳性率升高CD_4~+细胞阳性率。     

乙型脑炎病毒特异性人CD4~+T细胞克隆的建立和鉴定[英]

为了解乙型脑炎病毒(JEV)鼠脑纯化灭活疫苗介导细胞免疫的机理,作者从6～12个月前接种JEV疫苗者的外周血单个核细胞(PBMC)中筛选出JEV特异性人CD4~+T细胞克隆,并分析了其与其他黄病毒的交叉反应性、细胞毒性、对病毒蛋白的识别及人白细胞抗原(HLA)限制性.     

EAE小鼠体内γδT细胞的提取和鉴定

目的试图从蛋白脂质蛋白(Proteolipid protein,PLP)免疫后的SJL/J小鼠肠上皮间(iIEL)、淋巴结(LNC)中提取γδT细胞,并探讨γδT细胞在实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)发病机制中的作用。方法用多肽PLP178-191免疫小鼠,从小鼠iIEL、LNC中提取γδT细胞,利用免疫荧光标记和流式细胞分析技术进行检测。结果PLP免疫组和正常对照组比较,小鼠iIEL中CD3+细胞百分比在组间无统计学差异(P>0.05),而小鼠LNC中CD3+细胞百分比在组间存在显著性差异(P<0.01);小鼠iIELCD3+细胞中和LNCCD3+细胞中γδT细胞的百分比,组间均存在显著性差异(P<0.01)。结论利用PLP178-191免疫SJL/J小鼠,可以稳定地提取γδT细胞,γδT细胞的确参与了EAE发病过程。     

T细胞亚群及免疫球蛋白在复发性外阴阴道假丝酵母菌病中的研究

目的探讨T细胞亚群及免疫球蛋白在复发性外阴阴道假丝酵母菌病中的变化。方法选择80例复发性外阴阴道假丝酵母菌病患者和40例健康人群分别作为研究组和对照组,比较两组外周血T细胞亚群及免疫球蛋白及补体含量。结果 RVVC组CD_3、CD_4~+、CD_4~+/CD_8~+稍低于对照组,而CD_8~+则稍高,但组间差异无统计学意义(P> 0.05);外周血IgA、IgG、IgM、补体C_3、C_4组间差异亦无统计学意义(P> 0.05)。结论 RVVC患者全身细胞免疫及体液免疫功能尚未受到影响。     

WT1特异性 CD8+ T 细胞治疗乳腺癌的实验研究

摘要： 目的 通过检测 Wilms’肿瘤基因 1 （WT1） 特异性 CD8+ T 细胞对乳腺癌细胞的杀伤活性, 探讨正常外周血中提取的 WT1 特异性 CD8+ T 细胞用于治疗乳腺癌的可行性。方法 运用流式细胞仪检测 20 例人白细胞抗原（HLA） -A2 血清阳性健康志愿者外周血中 WT1 特异性 CD8+ T 细胞的浓度, 通过 WT1/主要组织相容性复合体（MHC） 连锁状多聚体磁珠分选 WT1 特异性 CD8+ T 细胞并进行培养, 细胞毒性实验检测 WT1 特异性 CD8+ T 细胞的功能。结果 20 例 HLA-A2 血清阳性健康志愿者外周血中均可检测到 WT1 特异性 CD8+ T 细胞, 12 例健康外周血中 WT1 特异性 CD8+ T 细胞的浓度＞0.5%, 其中 4 例＞1%。WT1/MHC 连锁状多聚体磁珠分选后, 其浓度明显增加至 80%左右。WT1 特异性 CD8+ T 细胞可特异性杀伤 WT1 多肽负载的乳腺癌细胞株。结论 健康志愿者外周血中可检测到 WT1 特异性 CD8+ T 细胞, 该细胞可能对乳腺癌细胞具有特异性杀伤作用, 提示 WT1 特异性 CD8+ T 细胞用于乳腺癌过继性免疫治疗的可能性。     

脾氨肽对支气管哮喘患者T细胞亚群及IgE水平的影响

目的探讨脾氨肽对支气管哮喘患者T细胞亚群及IgE水平的影响。方法随机选取2012年5月至2015年5月我院呼吸内科收治的支气管哮喘患者80例,依据治疗方法将这些患者分为两组,即研究组(n=40)和对照组(n=40)。给予对照组患者常规治疗,给予研究组患者脾氨肽辅助常规治疗,然后对两组患者的症状缓解时间和月均哮喘发作次数、临床疗效、T细胞亚群及lg E水平进行统计分析。结果研究组患者的症状缓解时间显著短于对照组(P<0.05),月均哮喘发作次数显著少于对照组(P<0.05),治疗的总有效率95.0%(38/40)显著高于对照组67.5%(27/40)(P<0.05),CD_4~+、CD_8~+、CD_4~+/CD_8~+均显著高于对照组(P<0.05),lgE水平显著低于对照组(P<0.05)。结论脾氨肽能够有效改善支气管哮喘患者的免疫功能。     

脐血树突状细胞提呈抗原对特异性CTL诱导杀伤的探讨

利用pH3．3柠檬酸．磷酸盐缓冲液（0．131M柠檬酸／0．066M Na2HPO4）提取的QGY-7703细胞膜外抗原多肽（50μg／m1），经过细胞因子GM-CSF（100ng／m1）、TNF-a（1000U／m1）以及IL-4（50ng／m1）诱导脐血造血干细胞分化的脐血树突状细胞（DC）进行抗原加工和提呈后，可以有效地激活外周血淋巴细胞（PBLC），形成特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）．使其对QGY-7703细胞具有明显的杀伤活性，且这种杀伤活性在50：1以后随效：靶比例的增加而更加明显，在对QGY-7703、SPGA-1、HL-60以及K562细胞的杀伤比较时，更加明显地表现出杀伤细胞的特异性，而且研究还表明，这种选择性杀伤作用是通过诱导肿瘤细胞凋亡途径杀死肿瘤细胞，本研究进一步表明应用脐血来源的脐血树突状细胞可以作为肿瘤免疫中的抗原提呈细胞（APC），并执行其抗原提呈作用，激活特异性细胞毒性T淋巴细胞执行其细胞免疫功能。     

重症患者外周血T淋巴细胞亚群免疫分型的检测与临床意义

目的探讨外周血T淋巴细胞亚群免疫分型在重症患者中的变化及临床意义。方法收集2014年1月至2015年5月我院重症加强医疗病房(ICU)的住院患者100例为观察组,并选择同期健康体检人员50例为健康对照组,采用流式细胞仪分别检测两组人员的外周血T淋巴细胞亚群数量(绝对计数)和百分数。另将观察组按序贯器官衰竭评估(SOFA)标准,分为重症组(SOFA<3分)和危重症组(SOFA≥3分)进行比较,并进行统计分析。结果观察组外周血CD_3~+淋巴细胞(简称CD_3~+)、CD_3~+CD_4~+T淋巴细胞数量(简称CD_4~+)、CD_3~+CD8~+T淋巴细胞数量(简称CD8+)、CD_4~+%、CD4~+/CD8+比值明显低于健康对照组,差异均具有统计学意义(P<0.01);而外周血CD8+%明显高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。重症组和危重症组比较,危重症组CD_3~+、CD_4~+细胞数量、CD_4~+%、CD_4~+/CD8+比值明显低于重症组,差异均具有统计学意义(P<0.01);而CD_4~+%明显高于重症组,差异有统计学意义(P<0.01);CD8+变化不明显(P>0.05)。结论重症加强医疗病房(ICU)患者存在外周血T淋巴细胞水平异常,表明患者机体免疫功能存在障碍,且免疫功能状态与病情危重程度有关。尽早检测ICU患者外周血T淋巴细胞数量,对于ICU患者病情的早期诊断、评估及指导临床治疗具有较好的临床意义。     

CD_4~+CD_(25)high~+CD_(127)low~+与儿童免疫性血小板减少症相关性的研究

目的研究CD_4~+CD_(25)high~+CD_(127)low~+在儿童免疫性血小板减少症相关性的研究。方法选择中国医科大学附属盛京医院小儿血液科于2015年1月至2016年6月就诊2~6岁儿童60例。观察组:重度和极重度血小板减少症患儿30例。对照组:30例健康儿童做正常对照。60例儿童均采外周血为标本行检测调节性T细胞中CD_4~+CD_(25)high~+CD_(127)low~+。结果对照组30例正常儿童以上观察指标均在正常值范围。观察组30例血小板减少症患儿调节性T细胞中CD_4~+CD_(25)high~+CD_(127)low~+与正常儿童组比较P>0.05无统计意义。结论调节性T细胞CD_4~+CD_(25)high~+CD_(127)low~+在儿童免疫性血小板减少症的发病中无明显影响。     

宫颈癌患者前哨淋巴结免疫杀伤细胞的检测及意义

目的探讨检测宫颈癌前哨淋巴结(SLN)和盆腔淋巴结中抗肿瘤免疫细胞功能的临床价值。方法采用流式细胞技术测定宫颈癌引流区淋巴结中γδT细胞和细胞毒性T细胞(CTL)水平。结果20例手术切除的SLN和盆腔淋巴结中,γδT细胞分别为14±11和9±10(P=0.103);CTL细胞分别为18±5和14±4(P=0.014)。前哨淋巴结中CTL细胞数量显著高于盆腔淋巴结,γδT细胞在前哨淋巴结和盆腔淋巴结中数量差异无统计学意义。结论宫颈癌引流淋巴结中CTL细胞为主要免疫杀伤细胞。     

HIV/HCV共感染者T淋巴细胞亚群CD_(28)、CD_(38)分子表达特征的分析

目的通过观察HIV/HCV共感染者外周血T淋巴细胞亚群CD_(28)、CD_(38)分子的表达规律,探讨其与疾病进展的相关性。方法本研究选择本院2012年8月至2014年10月门诊HIV感染者40例、HIV/HCV共感染患者40例及体检中心2014年9~10月体检健康人群20例,采用流式细胞术检测HIV/HCV共感染患者(40例)、HIV感染者(40例)和健康人(20例)外周血CD_8~+T淋巴细胞表面CD_(28)、CD_(38)分子的表达,分析HIV/HCV共感染者CD_(28)、CD_(38)分子在T淋巴细胞亚群的表达特征;按照CD4~+T数值对HIV/HCV共感染者进行分组,分析不同CD4~+T水平CD_8~+CD_(28)~+、CD_8~+CD_(38)~+的表达差异,探讨CD_8~+T淋巴细胞CD_(28)、CD_(38)分子与疾病进展的相关性。结果与健康人群及HIV感染者比较,HIV/HCV共感染者CD_8~+CD_(38)~+T细胞的绝对计数与百分比明显升高,CD_8~+CD_(28)~+T细胞百分比明显降低;随着CD4~+T水平的降低,CD_8~+CD_(28)~+T有逐渐降低趋势,CD_8~+CD_(38)~+T有逐渐升高趋势。结论 HIV/HCV共感染者CD_8~+T淋巴细胞表面CD_(28)分子表达降低,CD_(38)分子表达升高,且这种变化与患者CD4~+T水平密切相关,可作为判断疾病进展的重要指标。     

胃癌患者免疫抑制因子和淋巴细胞亚群变化的临床实验研究

本文通过T细胞增殖抑制实验发现胃癌患者血清存在免疫抑制因子,可抑制正常人或胃癌患者PBMC对PHA的增殖效应;首次发现不同癌瘤来源的抑制因子有非特异性交叉抑制作用。实验表明胃癌血清抑制因子可诱导/活化正常人Ts(CD_8~+)细胞,使其发挥免疫抑制效应。观察到术后1年以上恢复期患者血清免疫抑制效应明显下降(P<0.001)。本文同时检测了胃癌、胃或十二指肠溃疡患者及正常人群的淋巴细胞亚群,证明进展期胃癌CD_4~+下降,CD_8~+升高明显,CD_4~+/CD_8~+比值显著下降(P<0.001);胃癌术后1月内淋巴细胞亚群与术前无明显差异,而术后半年以上恢复期患者该三项指标趋于正常。