前列腺癌中巨嗜细胞抑制细胞因子-1基因的表达及意义

目的评估巨嗜细胞抑制细胞因子-1（MIC-1）在前列腺癌细胞系和前列腺癌组织中的表达情况，并明确其表达水平和临床病理学参数间的关系。方法用RT-PCR及免疫组化方法检测MIC-1在LNCaP、PC-3细胞系和前列腺癌组织中的表达。结果MIC-1在LNCaP细胞系中高表达，在前列腺癌组织中的表达水平明显高于增生和正常前列腺组织（P〈0．001）。MIC-1基因表达水平和前列腺癌临床分期、Gleason评分、PSA水平、前列腺体积以及患者年龄均无明显相关性。结论MIC-1蛋白可能将成为前列腺癌诊断新的肿瘤标记物。     

PDK4异常表达对前列腺癌细胞糖酵解和生长的影响

目的:探讨丙酮酸脱氢酶激酶4(PDK4)在前列腺癌组织中的表达及其对前列腺癌细胞糖酵解和生长的影响。方法:应用免疫组化法检测比较良性前列腺增生和前列腺癌组织中PDK4蛋白的表达差异。通过RT-qPCR和Western blot方法检测正常前列腺上皮细胞RWPE-1和不同前列腺癌细胞株PC3、LNCaP、DU145和C4-2中PDK4的表达水平。构建PDK4-shRNA重组质粒,转染该质粒以下调前列腺癌PC3细胞中PDK4的表达,采用细胞糖酵解试剂盒测定转染前后PC3细胞糖酵解水平的变化,通过CCK-8实验和流式细胞术检测PDK4对PC3细胞活力和细胞周期分布的影响。结果:在前列腺癌组织中,PDK4蛋白的表达水平显著高于良性前列腺增生组织(P0.05),且PDK4表达的免疫组化评分越高,前列腺癌的Gleason评分也越高(P0.05);RT-q PCR和Western blot实验结果显示,与正常前列腺上皮细胞相比,前列腺癌细胞株中的PDK4表达水平也显著升高(P0.05)。此外,CCK-8实验结果表明,敲减PDK4表达后,前列腺癌PC3细胞的活力显著下降(P0.05);流式细胞术结果显示,敲减PDK4表达能够使PC3细胞周期停滞在G_0/G_1期(P0.05)。结论:PDK4在前列腺癌组织和细胞株中均呈现不同程度高表达,同时在Gleason评分越高的前列腺癌组织中表达也越高。敲减PDK4表达能明显抑制前列腺癌细胞的糖酵解和生长能力,导致细胞周期停滞在G_0/G_1期。     

前列腺癌中Bad蛋白的表达及其意义

目的探讨Bad蛋白在前列腺癌中的表达及其临床意义。方法选择前列腺癌和癌旁良性前列腺增生(benign prostate hyperplasia, BPH)各48例及21例前列腺上皮内瘤(prostate intraepithelial neoplasms, PIN),采用免疫组化SP法观察Bad蛋白在前列腺上皮及间质细胞中的表达,采用化学发光法检测血清PSA值,分析Bad蛋白与前列腺癌、PSA值的相关性。结果 Bad蛋白在前列腺癌和PIN中的阳性率分别为83.3%、66.7%,高于癌旁BPH的33.3%,差异有统计学意义(P均0.01);Bad蛋白在前列腺癌和BPH间质细胞中的阳性率分别为52.1%和25.0%,差异有统计学意义(P0.05);Bad蛋白在Gleason评分≤7和7的前列腺癌中阳性率分别为66.7%和92.6%,差异有统计学意义(P0.05);血清PSA值与Bad蛋白表达无相关性(P均0.05)。结论前列腺癌组织中Bad蛋白高表达,并与Gleason评分有关,提示Bad蛋白在前列腺癌的发生、发展中发挥重要作用。     

诱导型一氧化氮合酶在正常前列腺、良性前列腺增生及前列腺癌组织中的表达研究

目的：探讨诱导型一氧化氮合酶（iNOS）与良性前列腺增生（BPH）、前列腺癌（PCa）病理生理变化的关系。方法：采用免疫组化方法检测6例正常前列腺组织、15例BPH患者的前列腺组织以及9例前列腺癌组织中iNOS的表达。结果：BPH组与PCa组中iNOS呈阳性表达，主要分布于前列腺上皮细胞及前列腺癌细胞胞浆内，间质平滑肌细胞内及正常前列腺组织内均未见表达，iNOS在PCa组织中的表达低于BPH组（P〈0．05）。结论：iNOS产生的NO在BPH及前列腺癌的发生发展过程中起重要作用，但iNOS在前列腺肿瘤发病机制的确切作用还需进行进一步研究。     

前列腺癌雄激素受体表达与细胞凋亡的关系

目的：探讨前列腺癌雄激素受体与细胞凋亡的关系及其生物学特性,方法：56例前列腺癌和20例良性前列腺增生症,应用免疫组化方法检测石蜡蜡包埋的组织切片中雄激素受体（AR）表达和应用原位末端标记技术（TUNEL）检测细胞凋亡指数（AI）。结果：AR在良恶性前列腺组织中的表达差异无显著性（P＞0．05）。AR和AI与前列腺癌Gleason分级无关。AI在前列腺癌组织中的表达明显高于良性前列腺增生症（P＜0．05）,AR阳性的前列腺癌AI亦明显高于AR阴性的前列腺癌。结论：前列腺癌组织中AR的表达可诱导其细胞凋亡,并对前列腺癌的功能性分类和内分泌治疗的疗效判断具有实用的临床意义。     

ENDOD1在前列腺癌组织及细胞中的表达及意义

目的:观察比较核酸内切酶结构域内含蛋白1(endonuclease domain containing1,ENDOD1)在良性前列腺增生和前列腺癌组织中的表达差异;筛选存在ENDOD1特异性低表达的前列腺癌细胞系,继而通过调控该细胞ENDOD1蛋白表达,研究其在前列腺癌细胞中的生物学功能,初步探索ENDOD1基因与前列腺癌发生、进展的联系。方法:利用免疫组化SP法检测20例良性前列腺增生和21例前列腺癌术后标本组织中ENDOD1表达情况;利用RT-qPCR和Western blot方法观察ENDOD1的mRNA和蛋白在前列腺正常上皮细胞和不同类型前列腺癌细胞中的表达差异,筛选出特异性低表达细胞系;构建pCMV-N-Flag-ENDOD1重组质粒,转染前列腺癌细胞株,过表达ENDOD1蛋白,通过MTT法测定调控前后前列腺癌细胞活力的变化,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Transwell实验评价肿瘤细胞迁移和侵袭能力的改变。结果:免疫组化评分的方差分析结果显示ENDOD1表达与前列腺癌Gleason评分呈负性关联;RT-qPCR和Western blot实验结果表明ENDOD1在雄激素非依赖性前列腺癌细胞系PC3和DU145中存在着特异性低表达(P0.05)。同时,MTT实验显示,在DU145细胞中,过表达ENDOD1肿瘤细胞活力显著下降(P0.05);而流式细胞术检测结果表明过表达ENDOD1能够使DU145细胞周期停滞在G_0/G_1期,但细胞凋亡率无明显差异。此外,在Transwell实验中,过表达ENDOD1的DU145细胞迁移和侵袭能力明显下降(P0.05)。结论:ENDOD1在Gleason评分越高的前列腺癌中表达越低,同时在雄激素非依赖性前列腺癌细胞系存在着特异性低表达;而过表达ENDOD1能明显抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞的生长、迁移和侵袭能力。     

AMACR/P504S的发现及其在前列腺癌诊断中应用

前列腺特异性抗原（PSA）是诊断前列腺癌并判断其预后最常用的血浆生物学标记物。然而，PSA并不是癌症的特异性标记物，它在正常和恶变的前列腺上皮细胞中均可表达。血浆PSA水平不但在前列腺癌中升高，而且在许多良性疾病中也会升高，例如良性前列腺增生（BPH）和前列腺炎。因此，血浆PSA升高的患者必须接受组织活检以确定或排除前列腺癌。     

前列腺病变中E-cadherin、p16和ER表达及意义

目的 探讨抑癌基因E-cadherin(E-cad)、p16蛋白及ER在前列腺病变组织中的表达及临床意义。方法 应用免疫组化技术检测13例良性前列腺增生，10例高级别前列腺上皮内瘤变和20例前列腺癌组织中E-cad、p16及ER的表达。结果 前列腺癌中，E-cad表达明显减低，p16蛋白表达增加；发生转移的癌中E-cad蛋白表达显著减弱；p16蛋白的表达在HGFPIN组与低Gleason评分前列腺癌组间差异存在显著性。ER在所有前列腺病变的上皮中无表达。结论 E-cad和p16蛋白的免疫组化检测，结合血清PSA水平可作为前列腺癌诊断的辅助手段；p16蛋白的检测有助于HGPIN与高分化癌的鉴别；E-cad蛋白的表达可作为判断预后的指标。ER阴性表达并不意味雌激素治疗无效。     

PSA、PSAD在前列腺癌与前列腺增生鉴别诊断中的价值

目的：探讨血清总前列腺特异抗原（PSA）及前列腺特异抗原密度（PSAD）在前列腺癌与良性前列腺增生鉴别诊断中的价值。方法：用化学发光免疫分析检测前列腺癌患者（48例）和前列腺增生患者（86例）血清PSA含量,NNNNB超测定每个病人的前列腺体积,计算出PSAD,将病人分组进行比较。结果：前列腺癌组PSA和PSAD均显著高于前列腺增生组（P〈0．01）。前列腺癌组病人PSAD≥0．15比例明显高于前列腺增生组。结论：PSA和PSAD可提高前列腺癌与良性前列腺增生鉴别诊断的准确性。     

前列腺癌组织中N-Myc、p53的表达及其临床意义

目的探讨N-Myc、p53在前列腺癌组织中的表达、两者的相关性及其临床意义。方法收集2015～2016年安徽医科大学第一附属医院行前列腺手术的前列腺癌患者63例及前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)患者50例,采用免疫组化MaxVision法检测病理组织中N-Myc、p53的表达。结果 N-Myc、p53在前列腺癌组织中的表达均升高(P 0. 05),前列腺癌组织中N-Myc、p53中表达与有无骨转移和TNM分期具有相关性(P 0. 05),与患者年龄、术前PSA水平等因素无关(P0. 05)。另外,p53表达与Gleason评分亦相关。结论 N-Myc和p53在前列腺癌中呈高表达,可能共同参与前列腺癌的恶性进展和转移,有望成为检测前列腺癌转移的新靶点。     

miR-29a抑制前列腺癌细胞恶性表型的分子机制

目的:探讨微小RNA-29a(miR-29a)在前列腺癌细胞中的生物学功能及miR-29a过表达抑制前列腺癌细胞恶性表型的分子机制。方法:运用基因芯片和生物信息学技术检测并分析miR-29a在前列腺癌组织及癌旁组织中的表达;real-time PCR检测前列腺癌组织、癌旁组织、4种前列腺癌细胞(PC3、DU145、LNCa P和Ar Ca P)及正常前列腺细胞(RWPE-1)中miR-29a和赖氨酸(K)特异性去甲基化酶4B(KDM4B)mRNA的表达水平;采用瞬时转染法将p Genesil-1-miR-29a质粒转染上述4种前列腺癌细胞,MTT法、集落形成实验、Annexin V-FITC/PI及流式细胞术分别检测细胞活力、集落形成率和细胞凋亡率;Western blot检测KDM4B的蛋白表达。结果:基因芯片和生物信息学结果显示,miR-29a在前列腺癌组织和癌旁组织中存在差异表达;real-time PCR结果显示,分别与癌旁组织和RWPE-1细胞比较,miR-29a在前列腺癌组织和4种前列腺癌细胞中的表达水平均显著降低,而KDM4B的mRNA水平显著增高(P0.05)。与阴性对照(p Genesil-1)组比较,miR-29a过表达显著抑制4种前列腺癌细胞活力和集落形成,细胞凋亡率显著增加(P0.05);Western blot结果显示,与p Genesil-1组比较,miR-29a过表达显著抑制KDM4B的蛋白表达。上调KDM4B的表达后,细胞活力明显升高,细胞凋亡率显著降低(P0.05)。结论:miR-29a在前列腺癌组织和细胞中低表达,miR-29a过表达抑制前列腺癌细胞生长,诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制KDM4B的表达有关。     

AR-V7在前列腺癌细胞耐药中的作用

目的:探讨雄激素受体剪接变异体7(AR-V7)在前列腺癌细胞耐药中的作用及分子机制。方法:运用Lipofectamine2000转染法将AR-V7 siRNA(siAR-V7)转染至4株前列腺癌细胞中,命名为PC3-siAR-V7、DU145-siAR-V7、LNCaP-siAR-V7和ArCaP-siAR-V7细胞,以转染无关序列(NC siRNA)为阴性对照。运用real-timePCR和Westernblot实验分别检测转染前后细胞中AR-V7的mRNA和蛋白表达水平;运用MTT法和Transwell法分别检测细胞活力和细胞迁移率;运用萤光素酶报告基因实验和Western blot实验分别检测AR的启动子活性及下游靶基因前列腺特异性抗原(PSA)和FK506结合蛋白5(FKBP5)的蛋白表达。构建耐比卡鲁胺的前列腺癌细胞系LNCaP-DR,运用免疫荧光观察LNCaP、LNCaP-siAR-V7和LNCaP-DR细胞中AR和AR-V7的亚细胞定位;运用蛋白质免疫共沉淀实验检测AR-V7与热休克蛋白90(HSP90)的相互作用。结果:4株前列腺癌细胞中的AR-V7 mRNA水平显著高于正常前列腺上皮细胞RWPE-1(P0.05);PC3-siAR-V7、DU145-siAR-V7、LNCaP-siAR-V7和ArCaPsiAR-V7细胞中AR-V7蛋白水平、细胞活性及细胞迁移率显著低于NCsiRNA转染的细胞(P0.05)。随着比卡鲁胺剂量的增加,所有细胞活力逐渐降低,而下调AR-V7表达显著增强前列腺癌细胞对比卡鲁胺的敏感性(P0.05)。Westernblot结果显示下调AR-V7表达显著抑制AR启动子活性,其下游PSA和FKBP5蛋白水平明显降低(P0.05)。免疫荧光结果发现AR和AR-V7主要存在于前列腺癌细胞核内,AR少量存在于细胞质中;下调AR-V7表达则抑制AR的核转运;AR存在于耐药细胞核中,AR-V7在耐药细胞中高表达。免疫共沉淀结果显示内源性AR-V7与HSP90相互作用。结论:AR-V7在前列腺癌细胞中高表达,下调AR-V7的表达显著抑制前列腺癌细胞活力和迁移;前列腺癌细胞耐药与AR-V7高表达相关,其机制可能通过AR-V7与HSP90相互作用介导AR-V7的核转运,激活AR信号通路调控下游靶基因的转录活性最终导致细胞耐药。     

沉默URG11基因对前列腺癌LNCaP细胞增殖、迁移与侵袭的影响

 目的: 观察上调基因11(up-regulated gene 11,URG11)在前列腺癌细胞系中的表达及降低URG11表达对人前列腺癌LNCaP细胞增殖和侵袭能力的影响。方法: 用real-time PCR和Western blot检测前列腺癌细胞系和正常前列腺上皮细胞系中URG11 mRNA和蛋白水平;设计针对URG11基因的siRNA靶序列,转染LNCaP细胞,采用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,MTS测定LNCaP细胞增殖能力,划痕和侵袭实验评价LNCaP细胞迁移及侵袭能力。结果: 在LNCaP、DU145、PC3前列腺癌细胞系和RWPE-1正常前列腺上皮细胞系中URG11 mRNA和蛋白表达水平存在显著差异,在前列腺癌细胞中URG11 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与对照组相比,转染URG11 siRNA的LNCaP细胞增殖停滞在G₁/S期并诱导前列腺癌细胞凋亡,转染组的细胞凋亡率为8.79%±0.12%,而且LNCaP肿瘤细胞的迁移及侵袭能力明显下降(P<0.05)。结论: URG11在前列腺癌系中高表达。通过RNAi沉默URG11基因能明显抑制LNCaP细胞增殖和侵袭能力,并诱导细胞凋亡。     

Ⅰ型膜型基质金属蛋白酶在癌细胞系中的表达及其与明胶酶A活？…

目的 探讨Ⅰ型膜型基质金属蛋白酶在人肿瘤细胞系中的表达情况及其与明胶酶的分泌和活化的关系。方法 运用逆转录巢式ＰＣＲ,ＲＮＡ印迹分析和蛋白质印迹分析的方法,检测ＭＴ１－ＭＭＰ,ｍＲＮ和ＭＭＰ２蛋白在４个黑色素瘤,２个肺癌和２个前列腺癌细胞系中的表达水平。结果 ＭＴ１－ＭＭＰｍＲＮＡ在所有癌细胞系中均有表达,但表达水平很不一致;在４个黑色素瘤细胞系中的表达水平明显高于肺癌和前列腺癌细胞系;     

FOXA1 promotes tumor progression in prostate cancer and represents a novel hallmark of castration-resistant prostate cancer

Forkhead box protein A1 (FOXA1) modulates the transactivation of steroid hormone receptors and thus may influence tumor growth and hormone responsiveness in prostate cancer. We therefore investigated the correlation of FOXA1 expression with clinical parameters, prostate-specific antigen (PSA) relapse-free survival, and hormone receptor expression in a large cohort of prostate cancer patients at different disease stages. FOXA1 expression did not differ significantly between benign glands from the peripheral zone and primary peripheral zone prostate carcinomas. However, FOXA1 was overexpressed in metastases and particularly in castration-resistant cases, but was expressed at lower levels in both normal and neoplastic transitional zone tissues. FOXA1 levels correlated with higher pT stages and Gleason scores, as well as with androgen (AR) and estrogen receptor expression. Moreover, FOXA1 overexpression was associated with faster biochemical disease progression, which was pronounced in patients with low AR levels. Finally, siRNA-based knockdown of FOXA1 induced decreased cell proliferation and migration. Moreover, in vitro tumorigenicity was inducible by ARs only in the presence of FOXA1, substantiating a functional cooperation between FOXA1 and AR. In conclusion, FOXA1 expression is associated with tumor progression, dedifferentiation of prostate cancer cells, and poorer prognosis, as well as with cellular proliferation and migration and with AR signaling. These findings suggest FOXA1 overexpression as a novel mechanism inducing castration resistance in prostate cancer.     

磷酸甘油酸激酶1和前列腺癌临床特征的相关性及在预后预测中的作用

目的:探讨磷酸甘油酸激酶1在前列腺癌中的表达水平,并分析其与前列腺癌临床特征的相关性以及在预后预测中的作用。方法:收集2013年1月~2014年12月于南方医科大学中西医结合医院住院部行手术治疗的30例良性前列腺增生患者和132例前列腺癌患者标本,用Western blot和免疫组化法分析磷酸甘油酸激酶1在前列腺细胞以及标本中的蛋白表达,并分析磷酸甘油酸激酶1的表达水平与前列腺癌临床特征的相关性以及对前列腺癌预后预测的作用。结果:磷酸甘油酸激酶1在前列腺癌组织和细胞中的表达明显上升,且其表达水平与前列腺癌的Gleason评分、TNM分期、局部浸润、骨转移和血清前列腺特异性抗原(PSA)水平具有显著相关性;Cox分析表明骨转移、血清PSA和PGK1表达是影响前列腺癌患者生存的独立危险因素。生存曲线分析表明高表达的PGK1与前列腺癌的预后不良明显相关。结论:磷酸甘油酸激酶1是影响前列腺癌患者生存的独立危险因素,并能够作为前列腺癌的预后预测标志物。