丹参注射液诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的研究

目的:探讨丹参注射液在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元样细胞分化的作用。方法:采用差速贴壁法体外分离培养大鼠MSCs,流式细胞仪检测其表面标志,经碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)预诱导24h,采用含丹参注射液的无血清L-DMEM培养液诱导MSCs,倒置显微镜下观察细胞形态的变化,免疫荧光细胞化学检测巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF-M)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果:体外培养的大鼠MSCs表达CD29、CD44、CD105、CD166。丹参注射液诱导后MSCs胞体收缩,突起伸出,较密的部分神经元拉成网状,免疫细胞化学显示巢蛋白、NSE、NF-M表达阳性,阳性率分别为(58.68±4.50)%、(61.23±5.72)%、(63.47±6.38)%,GFAP阳性细胞率(1.47±0.23)%。结论:丹参注射液在体外可以将大鼠MSCs诱导分化为神经元样细胞。     

丹参水煎液诱导BMSCs分化为神经元样细胞的最佳剂量研究

目的：研究丹参水煎液诱导BMSCs分化为神经元样细胞的最佳剂量。方法：全骨髓贴壁法分离大鼠MSCs,倒置显微镜观察诱导后细胞形态学特征,流式细胞仪进行MSCs表面抗原鉴定,不同剂量丹参水煎液诱导BMSCs向神经元样细胞分化,对诱导后的细胞进行Nestin、NSE、GFAP免疫细胞化学染色鉴定。结果：培养的细胞经流式细胞仪检测,符合BMSCs表面标志特征。各对照组诱导后阳性细胞率均高于空白组,P〈0.01,丹参诱导组（80ul/ml）Nestin阳性细胞率高于其他诱导组,P〈0.05;各诱导组GFAP表达为均阴性。结论：丹参水煎液诱导BMSCs向神经元样细胞分化的最佳剂量为80ul/ml。     

丹参水煎液对BMSCs分化为神经元样细胞的诱导作用研究

目的：研究丹参水煎液诱导BMSCs分化为神经元样细胞的作用,探索提高MSCs向神经元样细胞分化的诱导条件。方法：全骨髓贴壁法分离大鼠BMSCs,倒置显微镜观察诱导后细胞形态学特征,流式细胞仪进行BMSCs表面抗原鉴定,对诱导后的细胞进行Nestin、NSE、GFAP免疫细胞化学染色鉴定。结果：培养的细胞经流式细胞仪检测,符合BMSCs表面标志特征。各对照组诱导后阳性细胞率均高于空白组,P〈0．01,其中丹参组Nestin阳性细胞率高于β-巯基乙醇组,P〈0．01,丹参组NSE阳性细胞率高于β-巯基乙醇组,P〈O．05;各诱导组GFAP表达为阴性。结论：丹参水煎液可以诱导BMSCs向神经元样细胞分化。     

多种中药成分诱导大鼠骨髓间质干细胞转变为神经元样细胞

目的　体外定向诱导大鼠骨髓间质干细胞 (MSCs)分化为神经元样细胞。方法　通过贴壁法分离大鼠MSCs,体外扩增培养 ,流式细胞仪检测其表面抗原表达 ,中药成分定向诱导MSCs分化为神经元样细胞。光镜下观察细胞形态 ,免疫细胞化学法检测神经细胞特异性抗原标志。结果　大鼠MSCs可通过贴壁法成功分离并可在体外大量扩增。流式细胞仪检测结果显示CD1 4、CD1 1α、CD34、CD38、CD45、CD80、CD86为阴性 ,CD2 9、CD44、CD90、CD1 0 5、CD1 66呈阳性。黄芪、天麻、人参、当归、脑新舒、人参蜂王浆等多种中药诱导 1～ 3h后大部分MSCs转变为神经元样细胞 ,出现胞体和突起 ,免疫细胞化学染色神经元特异性烯醇酶 (NSE)、巢蛋白 (nestin)呈阳性 ,胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)阴性。结论　多种传统中药成分及中药制剂体外能诱导大鼠MSCs分化为神经元样细胞     

中药诱导间充质干细胞向神经细胞分化后的免疫调控作用

目的:探讨多种中药成分体外定向诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元样细胞分化,并研究分化细胞的免疫调控能力.方法:通过贴壁法分离人骨髓间充质干细胞(hMSCs),体外扩增培养.多种中药成分定向诱导分化为神经元样细胞.光镜下观察细胞形态,免疫细胞化学检测神经细胞特异性抗原标志物神经元烯醇化酶(NSE)、巢蛋白(Nestin)、胶质纤维酸性蛋白(CFAP)的表达.通过单向混合淋巴细胞反应(MLR),观察神经细胞分化的hMSCs对人外周血T淋巴细胞(human peripheral blood lymphocyte,hPBL)免疫调控作用.结果:hMSCs可通过贴壁法成功分离并可在体外大量扩增.黄芪,天麻,人参诱导1～3小时后大部分hMSCs转变为神经元样细胞,出现胞体和突起.免疫细胞化学染色NSE及Nestin呈阳性,GFAP阴性.混合培养结果显示分化hMSCs抑制hPBLs增殖反应.结论:多种中药成分和中药制剂可在体外诱导hMSCs分化为神经元样细胞,分化hMSCs抑制人淋巴细胞增殖反应,具有免疫词控作用.     

骨髓基质干细胞分化为神经元样细胞迁移能力变化的研究

目的研究体外定向诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经元样细胞的方法,探讨其分化后迁移能力变化的分子机制。方法体外培养BMSCs,以β-巯基乙醇(BME)1 mmol·L-1诱导分化,于诱导后12 h、24 h分别观察细胞形态变化,RT-PCR鉴定神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(Neurofilament)、胶质纤维酸性蛋白(β-tubulinⅢ)mRNA的变化。Western blot检测CXCR4表达变化,细胞迁移实验检测BMSCs诱导前后迁移能力的变化。结果诱导后,BMSCs胞体收缩,突起伸出;RT-PCR发现诱导出的神经元样细胞的NSE、Neurofilament、β-tubulinⅢmRNA明显增加;Western blot结果表明神经元样细胞表面CXCR4的表达明显增加,细胞迁移实验发现神经元样细胞向SDF-1α的迁移能力明显增加。用CXCR4特异的抑制剂AMD3100处理后细胞迁移被明显抑制。结论在体外骨髓基质干细胞以BME为诱导剂可定向分化为神经元样细胞,且发现其迁移能力明显增加,其机制可能与其表面CXCR4表达上调有关。     

还原型谷胱苷肽诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化形成神经细胞

目的 研究还原型谷胱苷肽(GSH)对大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)的诱导分化作用.方法 用SD大鼠股骨、胫骨以及肱骨骨髓细胞体外培养.采用GSH诱导rBMSCs 24h,免疫细胞化学染色评价神经细胞特异性烯醇化酶(NSE)表达率.结果 诱导6、24h时,MSCs分化成神经元样细胞,形成网络状结构,免疫细胞化学染色诱导出的神经元样细胞NSE表达阳性率分别为(64.0±4.3)%和(71.0±5.0)%.结论 GSH可诱导MSCs分化形成神经元样细胞.     

人脐血MSCs的分离培养及向神经的诱导分化

目的探讨人脐血中分离所得到间充质干细胞（MSCs）向神经组织细胞诱导分化的实验条件。方法淋巴细胞分离液分离正常人脐血单个核细胞，利用差速消化法通过多次传代得到MSCs，流式细胞仪测定细胞表型。取2至4代的MSCs加入含有维甲酸（RA）与神经生长因子（NGF）的诱导分化培养基将其定向诱导，免疫细胞化学染色检测诱导后的MSCs神经元和神经胶质细胞标志的表达。结果脐血MSCs每传一代，细胞数量增加约2～3倍。流式细胞仪检测，脐血MSCs不表达CD34，表达CD25、CD29、CD105、CD106。诱导后的细胞不仅形态类似神经元和神经胶质细胞，而且表达神经丝蛋白200（NF）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）和胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）。结论从人脐血中可以分离得到与骨髓相似的MSCs，并且能够在体外分化为神经元样和神经胶质细胞样细胞。     

促大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的研究

目的探讨成年大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）的体外培养和向神经元样细胞分化的方法。方法通过梯度分离获得成年大鼠MSCs,在细胞因子和氧化剂作用下对其诱导分化为神经元样细胞,免疫细胞化学方法检测神经元特异性烯醇化酶（NSE）、神经丝蛋白（NF）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和神经巢蛋白（Nestin）的表达情况,流式细胞仪检测分析诱导率。结果BMSCs被转化神经元样细胞并表达Nestin。应用碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、叔丁基对羟基茴香醚（BHA）所获得的神经元样细胞诱导率高（49.7%）。结论bFGF、BHA能促进大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞。     

鹿茸精诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞

目的:探讨鹿茸精体外定向诱导SD大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞。方法:通过贴壁法分离大鼠骨髓间充质干细胞,体外扩增培养。鹿茸精定向诱导分化为类神经元样细胞。光镜下观察细胞形态,免疫细胞化学检测神经细胞特异性抗原标志物神经元烯醇酶(NSE)、巢蛋白(Nestin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果:大鼠骨髓间充质干细胞可通过贴壁法成功分离并可在体外大量扩增。鹿茸精诱导3小时后大部分骨髓间充质干细胞转变为神经元样细胞,出现胞体和突起,免疫细胞化学染色NSE及Nestin呈阳性,GFAP阴性。结论:鹿茸精可在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞。     

D609 induces vascular endothelial cells and marrow stromal cells differentiation into neuron-like cells

AIM: To investigate the effect of tricyclodecane-9-yl-xanthogenate (D609) on cell differentiation in vascular endo- thelial cells (VECs) and marrow stromal cells (MSCs). METHODS: Morphological changes were observed under phase contrast microscope. Electron microscope and immunostaining were used for VECs identification. The expressions of neuron-specific enolase (NSE) and glial fibrillary acidic protein (GFAP) were examined by immunohistochemistry. RESULTS: After 6 h of induc…     

骨髓间充质干细胞诱导分化为神经元样细胞前后基因方面及Ca2+浓度变化的研究

目的观察骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)按照Woodbury经典诱导方案将其诱导分化为神经元样细胞前后基因方面及Ca2+浓度的变化。方法分离纯化SD大鼠MSCs进行传代培养,传至第5代时,按照Woodbury经典诱导方案进行诱导,采用免疫组化和Realtime PCR技术检测诱导前后GAP-43、NSE、NF和Nestin的蛋白和mRNA表达的变化,采用激光扫描共聚焦显微镜检测诱导前后细胞内游离钙离子浓度的变化。结果诱导后GAP-43、NSE、NF和Nestin蛋白表达水平均有增高(P<0.05),但GAP-43、NSE、NF和Nestin基因表达改变不显著(P>0.05),更换诱导液后,细胞内荧光强度逐渐增加,到100s达高峰值,其后逐渐减弱,但20 min时细胞荧光强度仍高于诱导前。结论 MSCs诱导分化为神经元样细胞后GAP-43、NSE、NF和Nestin蛋白表达水平均有增高,但基因表达改变不显著,说明Woodbury经典诱导方案可能为转录后水平即蛋白水平的调控,游离钙离子可能对诱导分化有促进作用。     

胎盘间充质干细胞向神经细胞诱导的实验研究

目的间充质干细胞(MSCs)具有自我更新和多向分化能力的特点，尽管其主要来源骨髓间充质干细胞(BMSCs)已被认为是治疗多种疾病的良好细胞来源。但在严重感染或随着年龄的增长骨髓细胞数及增殖、分化能力均明显下降等情况下，就无法顺利获得足量可用于治疗的BMSC，有必要寻找MSC的新来源。方法消化胎盘组织、贴壁培养获得基质细胞；用流式细胞仪检测其细胞表面标志；比较叔丁对甲氧酚(butylated hydroxyanisole，BHA)、复方丹参注射液、β-巯基乙醇(BME)等对培养的基质细胞向神经细胞分化的作用；采用免疫细胞化学的方法对分化的细胞进行鉴定。结果胎盘组织中分离出的基质细胞与骨髓间充质干细胞有相似形态和细胞表面标志，并可诱导表达神经元和星型胶质细胞标志神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolasen，NSE)、神经微丝(neurofilament，NF)和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrilament acidic protein，GFAP)。结论胎盘组织中存在能分化为神经元样细胞的间充质干细胞。胎盘间充质干细胞可能是一种可为临床治疗提供丰富新来源的间充质干细胞。     

诱导后上清液在BMSCs向神经元样细胞分化中的作用

目的:研究体外使用SHH、Ra、Fn组成的诱导体系诱导骨髓间充质细胞后的上清液对BMSCs向神经细胞分化的作用。方法:从健康志愿者髂骨处抽取骨髓4mL,体外分离、培养、扩增后用400ng/LSHH、0.5μmolRa和5μmolFn组成的诱导体系进行诱导,取诱导后12,24h的诱导液上清分别作用于BMSCs。7d后使用倒置显微镜和免疫组织化学方法观察诱导前后细胞的变化。结果:诱导7d之后各组均有部分细胞胞体收缩、伸长突起,表现为神经细胞的形态。12h组同SHH+Ra+Fn组NSE、MAP-2阳性细胞比例差异无显著(P>0.05)。12h组分化率高于24h组(P<0.05)。结论:12h后诱导液上清可以有效地诱导BMSCs向神经细胞分化。     

源于骨髓间充质干细胞的神经元存活与c-myc

目的：探讨源于骨髓问充质干细胞的神经元的存活与原癌基因蛋白c-myc的关系。方法：从成年大鼠骨髓分离、扩增rMSCs至6代。给予不同的诱导条件,采用免疫组化方法观察神经分化过程中神经特异抗原和c-myc蛋白的表达,并计算分化率。结果：在不同的分化诱导条件下,MSCs呈现典型的神经元形态。加入MNM组分化率高于对照组。分化后4～36h,可检测到c-myc蛋白的持续表达。结论：c-myc在MSCs向神经元分化过程中有重要作用。     

大鼠骨髓基质细胞向神经细胞分化的体外诱导动态观察

目的 动态观察体外定向诱导大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)分化为神经细胞的时程变化。方法 采用Percoll-Paque液(1．073g／ml)分离BMSCs体外扩增培养后，加入丁羟茴醚 二甲基亚砜诱导其分化为神经细胞，分别于1、2、3、4h后光镜下观察形态变化及通过免疫组化和免疫荧光染色测定特异性神经元烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞数。结果 BMSCs在加入诱导剂后1h出现胞体收缩，突起伸出，有不同程度NSE、NF、GFAP表达，3h后汰高峰。结论 丁羟茼醚 二甲基亚砜在一定时间内是一种较好的体外诱导剂。