分泌抗B型肉毒毒素单克隆抗体的产生与特性鉴定

以B型肉毒类毒素免疫BALB/C小鼠,取脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞进行细胞融合。用ELISA方法筛选有杂交细胞生长孔的上清液,其中有66.7％的孔可分泌肉毒毒素特异性抗体。用有限稀释法进行克隆化培养后,获得4株稳定的杂交瘤细胞系(3B10、3B11、3G12和4A5),在体外培养中均持续分泌抗体,培养液抗体效价达10~(-3)～10~(-5);注入BALB/C小鼠腹腔制备出富含抗体的腹水,抗体效价达10~(-6)～10~(-8)。经用A型和B型类毒素作特异性鉴定,表明抗体3G12及4A5与A型无交叉反应,为B型特异性的。抗体3B10及3B11与A型有弱交叉反应。Ig种类鉴定表明抗体3B10及3G12为IgG_1;抗体3B11及4A5为IgG_2。染色体检查证明4株细胞均为杂交瘤细胞。小白鼠体内进行中和保护力测定表明4种单克隆抗体对肉毒毒素均无保护作用。     

SARS恢复期患者特异性IgG抗体滴度观察与分析

目的探讨SARS恢复期患者特异性IgG抗体滴度水平及变化趋势,完善SARS感染后免疫的资料。方法采用口。ISA法检测23例SARS患者发病后6个月、12个月2个时间点血清中特异性IgG抗体滴度。以单克隆抗体标记23例患者的PBMC,用流式细胞仪检测HLA-A2的阳性率。结果6个月时IgG抗体滴度的最高值为1：160阳性(4／23),最低值为1：10阴性(1／23),平均滴度为1：57;12个月时IgG抗体的最高滴度仅为1：80阳性(6／23),最低值为1：10阴性(2／23),平均滴度为1：27。2个时间点抗体滴度之间的差异有统计学意义(P=0．002)。23例患者中HLA-A2阳性14例,阳性率60．9％。结论SARS恢复期患者的抗体滴度在半年以后已呈现明显的下降趋势,目前所依据的SARS-IgG抗体诊断标准是合理可行的。HLA-A2抗原肽疫苗可以治疗和预防50％左右的SARS病毒感染。     

应用A_(549)细胞分离到1株致细胞病变的甲型肝炎病毒

应用A_(540)细胞系从1例甲型肝炎(甲肝)患儿粪便标本中分离到1株致细胞病变(CPE)的甲型肝炎病毒(HAV),称BJ-1。用免疫荧光(IF)试验证明,约有50％细胞的胞浆内有甲型肝炎病毒抗原(HAAg)。用抗-HAV单克隆抗体和美国NIH的黑猩猩免疫血清鉴定,证明其抗原性与HAV相同。超薄切片电镜观察,证实病毒在胞浆内复制,呈晶格状排列,有空心和实心两种,为典型小RNA病毒。免疫电镜(IEM)检查,大量的27～30nm的病毒颗粒和甲肝患者恢复期血清及黑猩猩抗-HAV血清凝集成抗原抗体复合物。BJ-1HAAg最初检出时间为34天,随着传代次数的增加,感染滴度逐渐增高,繁殖周期逐渐缩短至2～3天。现已稳定地传至第19代,感染滴度TCID_(50)为10~-5/0.1ml。将含有BJ-1HAAg的A_(540)细胞片和羊抗人IgM(μ链)荧光抗体组合成IF(间接法)药盒,检测抗-HAV IgM抗体,与AbbottEIA HAVAB-M药盒比较,符合率为98.4％(246/250)。     

应用ELISA法检测包虫病人抗体的研究 (粗制抗原检测包虫病人抗体)

前言 本文用酶联免疫吸咐试验(简称ELISA、下同)间接法检测包虫病人抗体,获得较为满意的结果,方法具有敏感性高、特异性强,操作简便的特点,目前国内未见报道。抗原为人肺包虫液经活性炭处理的粗抗原,抗原稀释在50～100ug/ml,抗体稀释在10~(-1)～10~(-5)范围内为抗原体最佳浓度。用替代试验,阻断试验证明方法特异性好,用包虫病人血清及正常人血清验证两者OD值极易区别,前者在0.93±0.45,后者为0.119±0.05,同样证明本方法特异性较好,但与肺结核、肝炎、肝硬化有交叉反应。本方法     

广东地区严重急性呼吸综合征患者血清学调查

目的 通过调查严重急性呼吸综合征(SARS)患者血清中特异IgG、IgM抗体，找出冠状病毒与SARS之间可能存在的病因关糸；比较急性期和恢复期血清抗体效价，寻求该病毒特有的血清学反应及其临床意义。方法 用新分离SARS病毒作为抗原，采用间接免疫荧光(IFA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)法，对广州4所医院SARS病人的血清标本进行检测。结果 检测临床诊断SARS病人130例，其中117例出现病毒特异性抗体，阳性率达90%，病人血清IgG抗体滴度10天后明显上升，15天后抗体达到高峰，IgM抗体滴度20～30天达到高峰。检测119例健康接触者和同一流行区100例健康人，结果全部为阴性。结论 SARS病人血清与新分离SARS病毒抗原有高水平的特异反应，证实病人急性感染了这种新的病毒；病人恢复期血清IgG抗体在体内滴度高、持续时间长，提示可能是人群保护性抗体。     

抗-HIV单克隆抗体的筛选与鉴定

我们用HIV抗体阳性者血浆包被聚苯乙烯条,加入纯化的HIV组织培养抗原,通过夹心ELISA法,筛选出3株能分泌抗HIV单克隆抗体杂交瘤细胞,传代稳定。培养上清经Western blot染色鉴定含有抗-HIV gag蛋白。夹心ELISA法测得杂交瘤细胞培养上清中单克隆抗体滴度达到1∶6400,接种BALB/C小鼠获腹水抗体效价为1∶2430000。实验表明,用此单克隆抗体检测HIV病人血清抗体敏感、特异、稳定、重复性好,是一种良好的试剂。     

放射免疫显像对乳腺癌和恶性淋巴瘤患者骨髓转移的诊断

本文采用~(99m)Tc-McAb IgG_1进行骨髓放射免疫显像(RII),以此来评价乳腺癌和恶性淋巴瘤患者骨转移的存在.显像剂为~(99m)Tc标记的鼠单克隆同型IgG_1抗体,亲合常数为2×10°L/mole.给15名合并有骨转移的乳腺癌、10名恶性淋巴瘤和15名非恶性肿瘤患者(对照组)静注300 MBq~(99m)Tc-McAb IgG_1(200～500μgIgG_1/2mlPBS)后3～5小时行全身γ-闪烁显像.显像结果分三类:抗体均匀摄取(0)、转移灶少于10个(<10)和转移灶多于10个或弥漫性转移灶(>10).转移灶均表现为局部放射性缺损.     

脾内注射法免疫小鼠制备抗—HBc单克隆抗体的研究

用基因工程菌产乙型肝炎核心抗原(HBcAg)对 Balb/c 小鼠脾内多点注射法免疫,将该鼠的脾淋巴细胞与鼠骨髓瘤细胞在 PEG 作用下融合,用固相放射免疫分析法(SPRIA)筛选,成功地获得了2株抗-HBc 阳性的杂交瘤细胞株。通过中和试验和交叉鉴定,2株抗-HBc 单克隆抗体只能与 HBcAg 起反应,而不能与 HBsAg 和 HBeAg 反应。经多次亚克隆后,所得腹水中的抗-HBc 滴度达1:64000～1:28000。这2株单克隆抗体做包被抗体检测 HBcAg 和(125)~Ⅰ标记查患者血清标本时,所测得的结果与人抗-HBc 多克隆抗体做包被或(125)~Ⅰ标记所测得的结果相一致。2株杂交瘤细胞连续传代3个多月,冻存复苏后仍能稳定地分泌特异的抗-HBc 单克隆抗体。     

产生抗单纯疱疹病毒单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

用HSV-1 SM44株免疫C×S/1小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/O融合,经HAT选择培养,细胞融合率为100％。ELISA筛选后获得53孔产生抗HSV抗体的杂交瘤阳性孔。对1A12,2A8,1G8,1D10,2C5 5株细胞系用有限稀释法做2～5次克隆化,阳性克隆率均达到100％。杂交瘤细胞系经连续传代培养4个月,仍能稳定产生单克隆抗体,冻存的细胞系经复苏后亦能稳定产生抗体。应用ELISA及IF试验证明,5种单克隆抗体均与HSV-1和HSV-2标准株呈特异性反应。ELISA测定,杂交瘤培养上清抗体效价为10~(-2)～10~(-3),制备免疫腹水效价为10~(-4)～10~(-7)。5种单克隆抗体与EBV,CMV,JEV和HFRSV无交叉反应。     

乙型肝炎病毒前S_2蛋白活力与病毒复制的关系

本文通过用ELISA法检测了122例各型乙型肝炎病人血清中的Pre-s_2蛋白:研究其与HBV复制的各种标志的关系,并讨论了其临床意义。 前s_2蛋白(Pre-s_z蛋白)测定以单克隆抗Pre-s_2抗体为主要试剂,采用夹心法原理,检测患者血清中Pre-s_2蛋白,具体操作方法按试剂盒说明书进行,S/N比值≥2.1及血清滴度>1∶10为阳性;HBV标志(HB_sAg,抗-HB_s、HB_eAg、抗-HB_e、抗-HB_c)均采用ELISA法     

幼儿手背丘疹皮炎与病毒感染的实验研究

对25名幼儿手背丘疹性皮炎患者的粪便和咽拭子标本进行病毒分离培养,结果获得肠道病毒4株,腺病毒1株,肠道病毒经鉴定为CoxsA_92株,ECHO_(25)1株。用所分离的病毒作成抗原对43名患者和40名健康者进行血清学对比研究。结果表明病毒感染和患者之间有明显相关性。同时对26名患者进行了双份血清学检测,结果显示CoxsA_9病毒组患者的血清抗体滴度大于4倍,阳性率达80.77％,而ECHO_(45)病毒和腺病毒组的血清抗体滴度均小于4倍,证明本组患者中CoxsA_9病毒感染与本病密切相关。     

抗人IgK和Igλ链单克隆抗体的制备及临床初步应用

用初乳和血清IgA免疫Balb/c小鼠的脾细胞与SP_2/O和NS-1瘤细胞融合,以ELISA双抗原夹心法检测获得5株杂交瘤细胞。其中3株(1D1、5C3、11A7)分泌抗人游离和结合型λ轻链;2株(4G12、14A6)分泌抗人游离和结合型K轻链。4G12与结合型K链反应比游离K链好。这些细胞株在长达1年的培养中仍能稳定分泌特异性单克隆抗体,经液氮冻存10个月后杂交瘤细胞仍保持原有的特性。用固相抗原竞争ELISA试验表明,两个抗K链McAb是针对不同的抗原位点,而3株抗λ链则针对相同的抗原位点。用于检测副蛋白和本周氏蛋白具有很好的特异性和敏感性。把McAb4G12-HRP和1D1-HRP混合,用于检测-EB病毒早期抗原(EA)和壳抗原(VCA)抗体被证明是满意的,同时试用于抗核抗体的检测也获得了初步的结果。     

核素标记癌胚抗原单克隆抗体在结肠肿瘤放免显象诊断中的应用

放射免疫显象(Radioimmunoimaging RⅡ)是肿瘤定位诊断的一项新技术,自1978年Goldenberg等首先用~(131)Ⅰ标记抗癌胚抗原(CEA)的IgG对消化道肿瘤作定位显象获得成功以来,近年来,国外已采用核素标记单克隆抗体(Mcab)及McAb片段[F(ab)_2]作肿瘤特异性显象,并认为具有肿瘤定位迅速,组织本底低等优点。本院自1985年3月开始用~(131)Ⅰ-CEA-Mcab作人结肠癌定位显象。抗体由北京生物制品研究所惠赠,为3株(C_5,C_6,C_(47))混合的无菌无热源制剂,含免疫球蛋白7.5mg/ml,     

产生流行性乙型脑炎病毒单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

用JEV-SA,免疫BALB/C小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(NS_1)在PEG作用下融合,以ELISA、HI、IF 3种方法检测抗体,建立了1株针对JEV-SA_4的单克隆抗体杂交瘤细胞系。该细胞系染色体在74～98之间,含中着丝点标志染色体,经4次克隆化,连续传代5个月仍持续分泌特异性抗体,该抗体为IgG_3亚类。     

抗鸡蛋黄IgY单克隆抗体的制备和初步鉴定

以纯化的鸡蛋黄IgG(IgY)为免疫原,免疫BACB/c小鼠.取其脾细胞与小鼠Sp/o骨髓瘤细胞融合,经间接EIISA筛选,3次克隆化后,获得2株能稳定分泌抗IgY单克隆抗体的杂交瘤细胞IGII和3A6.用琼脂双扩散法鉴定,两者均为IgG_1亚类.特异性鉴定表明,IGII和3A6两株单克隆抗体均与鸡血清IgG及鸡蛋黄IgG起强反应,而不与鸭蛋黄、鹌鹑蛋黄、小鼠血清、大鼠血清、兔血清、羊血清、马血清,以及人血清的IgG起反应.IGII与3A6的腹水效价分别为3.1×10~(-6)和6.4×10~(-6).     

酶标抗体染色法检测痢疾杆菌(摘要)

酶标抗体染色法是将抗原抗体免疫反应的特异性与酶催化反应的高度敏感性有机地结合起来的一种检测方法。通过实验建立了应用本法检测痢疾杆菌的程序,并对其特异性、敏感性及可行性进行了实验验证。 一、具体步骤 (1)取痢疾多价血清1滴(1:20稀释),含少量醛化红细胞,涂成φ5mm的抗体斑于玻片上,自然晾干,甲醇-H_2O_2固定5分钟,pH7.4,0.02M PBs冲洗,晾干。(2)每个抗体斑加入培养4～6小     

梅毒血清学诊断述评(摘要)

梅毒的实验室诊断主要依靠血清学诊断,其主要方法有: 1.非特异性反应素的检测:所使用的抗原为心拟脂(牛心肌提取物),用于检测患者血清中的非特异性抗体——反应素。主要包括:(1)性病研究实验室试验(VDRL试验):心拟脂和胆固醇、卵磷脂的无水乙醇溶液即为VDRL抗原。此抗原与灭活被检血清做玻片试验,形成凝集和沉淀者为阳性,但VDRL抗原悬液有效期仅一天,被检血清需加热灭活,凝集结果需在显微镜下观察,(2)不加热血清反应素试验(USR试验):     

双抗体夹心ELISA检测生殖支原体抗原方法的初步建立及临床应用

目的 :建立检测生殖支原体 (Mycoplasmagenitalium ,Mg)抗原的双抗夹心ELISA方法 ,探讨其临床应用的可行性。方法 :采用不同株Mg单抗用ELISA双抗夹心法检测Mg抗原 ,摸索该方法检测Mg抗原的最佳实验条件。对Mg标准株及 10 8份临床标本进行平行测定 ,观察双抗夹心ELISA方法的敏感性和特异性及该方法与PCR检测方法的符合率。结果 :包被单抗量为 2 0 μg ml,酶标记单抗 1∶2 0 0稀释时 ,P N值最大 ;检测Mg抗原敏感度达 2 μg ml;10 8份临床标本PCR检测阳性率 8.2 6 % (10 10 8) ;双抗夹心ELISA法检测阳性率 7.4 1% (8 10 8) ,两者符合率达 89.71%。结论 :建立的双抗夹心ELISA法检测Mg抗原具有快速、敏感、经济、简便易行等优点     

抗Salmonella minnesota R_(595)菌脂多糖杂交瘤的建立及其抗体特性的初步鉴定

将煮沸致死的R_(595)菌体免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞在PEG介导下与SP_(2/0)细胞融合,经筛选获得2个阳性孔2D_6、3H_4。将2D_6、3H_4阳性孔细胞克隆,传代最终获得8株能稳定分泌抗R_(595)内毒素单抗的杂交瘤株。经鉴定,杂交瘤细胞染色体数90余条,抗体效价(EL1SA法)10~4～10~5,2D_6B_1,2D_6E_7单抗的Ig类型为IgG_1,3H_42F_7、3H_42H_3单抗Ig类型为IgG2_b,轻链均为K链。类脂A抑制试验显示,单抗识别的表位为类脂A或KDO,表明抗体识别内毒素保守区域。间接EL1SA试验表明,抗体能与多种GNB交叉反应,提示抗体具广谱交叉反应性。玻片凝集试验显示,抗体仅能凝集R_(595)菌,不能凝集其它GNB菌。     

山东省恙虫病的实验室诊断

本实验室以从联合国引进的各群立克次体标准株为参考株,采用免疫荧光和免疫酶标记染色方法,结合病原体的检查,证实了1986年9～12月山东省恙虫病的流行.免疫荧光和免疫酶标染色检测10例可疑恙虫病人血清的恙虫病立克次体抗体,阳性率90%,IgG抗体滴度为2560～5120,IgM抗体滴度为2560～20480,高于IgG抗体滴度,且可在病人静脉血感染的小鼠脏器涂片中查见立克次体.