基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术在直接鉴定血流感染病原菌中的应用

目的探讨利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术建立血流感染病原菌快速、准确的鉴定方法。方法收集郑州大学附属儿童医院检验科2017-07～2017-12血培养仪阳性报警血培养瓶524个,抽吸血培养瓶中血液至血清分离胶管,采用差速离心法富集细菌,利用MALDI-TOF MS对富集后的菌液进行快速鉴定,并与传统培养24～48 h后形成的菌落最终鉴定结果进行比较。结果阳性报警血培养瓶524个,496个为单菌株血流感染,16个为混合菌感染,12例血培养报警假阳性结果。在496个单菌株所致血流感染样本中,菌株的属、种鉴定符合率分别为98.6%(489/496)和95.8%(475/496)。其中,120株革兰阴性菌属、种鉴定符合率分别为99.2%(119/120)和98.3%(118/120); 376株革兰阳性菌属、种鉴定符合率分别为98.4%(370/376)和94.9%(357/376)。16个混合菌感染样本及12个血培养报警假阳性样本均未得到鉴定结果。结论该研究利用MALDI-TOF MS对差速离心富集后的菌液进行直接鉴定,与传统的培养鉴定方法相比,对血流感染中主要病原菌的鉴定符合率较高,且方法快速、简便,成本低廉,有效缩短了检测时间,而且鉴定准确率高,适合在临床微生物实验室中推广应用。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在临床微生物检验的应用进展

<正>基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)是一种新型的质谱技术,具有灵敏度高,样品用量少,分析速度快的特点。目前,MALDI-TOF已开始应用于多项微生物的检测,为临床疾病的诊疗提供有效的指导。1 MALDI-TOF鉴定微生物的特点及优势MALDI-TOF系统由基质辅助激光解吸电离离子源(MALDI)、飞行时间质量分析器(TOF)和检测器组成,属于一种软电离技术,适用于混合物及生物大分子的测定〔1〕。其原理是利用激光照射待测物与基质形成的共结晶薄膜,通过基质吸收能量并将能量转移至待测物分子,使分子解离成离子,利用离子在     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在幽门螺杆菌检测中的应用

目的 建立并评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对幽门螺杆菌(Hp)的鉴定能力及Hp耐药性菌株对检测结果的影响.方法 MALDI-TOF MS自建库中的Hp来源于样本库中经传统方法鉴定和药物敏感试验并已进行全基因测序确认的菌株,随机取其中对药物全敏感的Hp菌株10株,用MALDI-TOF M...     

液体芯片飞行时间质谱技术在肿瘤临床研究中的应用

液体芯片飞行时间质谱技术(ClinProt系统)是近年开发的蛋白质组学新技术,其利用纳米磁珠俘获肿瘤患者与对照者体液中低丰度或低相对分子质量特异蛋白/多肽.经基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱测定和软件分析,建立由两者差异表达蛋白/多肽组成的质谱图模型,用于预测未知样品的归属.该系统具有良好的特异性、灵敏性和重复性.高通量,操作简单、快捷等优点,能对所获得的差异蛋白/多肽进行蛋白鉴定,是极具潜力的临床肿瘤早期诊断工具.本文将就目前ClinProt系统在临床肿瘤研究中的应用进行综述.     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在真菌快速鉴定中的应用

真菌是广泛分布于自然界的真核生物,对人类具有致病性的约300种。不同种真菌的生长特性、临床特点及耐药性不同。真菌生长缓慢,传统的培养鉴定方法所需时间较长,且日益多样化的真菌,使鉴定难度不断增加,这些均限制了临床的早期诊断和针对性治疗。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)是一种新兴的诊断技术,可以通过直接检测生物标志物(蛋白)来鉴定病毒、细菌、分枝杆菌等,具有操作简便、快速、准确率高、成本低的特点。本文对MALDI-TOF MS在真菌鉴定中的应用进行综述,发现其对酵母样真菌的正确鉴定率可达到94%以上,丝状真菌正确鉴定率也可达到89%,可满足临床实验室鉴定真菌的需求。     

三种前处理方法对基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定曲霉结果的对比研究

［摘要］　目的　丝状真菌在质谱前处理方法上尚无规范化指南,寻求高效前处理方法为实验的关键,该研究以梅里埃质谱仪（VITEK MS）为平台,探讨适用于质谱仪鉴定曲霉的最佳前处理方法。方法　收集2021年1月至2021年12月由广东省人民医院临床分离并经基因测序的非重复曲霉114株,以及标准曲霉菌株3株,分别采用磁珠研磨法、冷冻研磨法和甲酸萃取法对117株曲霉前处理操作后进行质谱检测,比较不同前处理方法下的鉴定率、置信度、峰数量、耗时以及图谱质量的差异性。结果　117株曲霉分别采用磁珠研磨法、冷冻研磨法和甲酸萃取法进行前处理后获得的质谱鉴定率分别为90.60%、61.54%和57.26%。磁珠研磨法的鉴定率显著高于其他两种方法（P<0.001）,鉴定能力最佳,且获得的置信度和峰数量亦高于其他两种方法（P<0.05）,所获得的蛋白特征峰数量更多、强度更强、更密集,结果可信度和图谱质量优于其他两种方法。 结论　曲霉使用磁珠研磨法前处理后进行质谱鉴定可获得较理想的鉴定效果和蛋白图谱质量,适合常规实验室曲霉的质谱鉴定。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在结核病领域的应用进展

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)具有高通量、高速度、自动化等优点,成为生物大分子研究的重要工具。其在临床研究领域取得显著进展,在结核病研究领域的作用也日益凸显。作者主要介绍了MALDI-TOF MS在分枝杆菌菌种鉴定、结核病耐药性研究、结核病血清标志物的筛选、结核病易感基因多态性检测和抗结核药物代谢研究方面的应用进展,以加强对MALDI-TOF MS在结核病研究领域的认识。     

奈达铂耐药食管鳞癌患者血清双向电泳联合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术的蛋白筛选

目的探讨奈达铂耐药食管鳞癌患者及奈达铂敏感患者的血清蛋白表达谱的差异性及食管鳞癌奈达铂耐药的相关血清蛋白。方法采用固相p H梯度双向凝胶电泳分离奈达铂敏感及奈达铂耐药患者的血清蛋白样本共40例,建立双向凝胶电泳(2-DE)图谱,再应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术及数据库鉴定部分差异蛋白质。结果采用2-DE技术成功获得分辨率高和重复性好的蛋白表达图谱,凝胶图像软件分析后获得差异≥1.5倍以上的蛋白质共68个,经质谱分析鉴定出8种蛋白,其中表达增高的有谷胱甘肽转硫酶(GST)P1、乳酸脱氢酶(LDH)-B、Sox-2、胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP)-1和基质金属蛋白酶(MMP)-7,表达降低的有E-钙黏蛋白(E-cadherin)、激活素结合蛋白(FS)和磷酸甘油酸激酶(PGK)1。结论应用2-DE技术分离奈达铂耐药食管鳞癌患者及奈达铂敏感患者的血清蛋白表达谱,并通过MALDITOF-MS技术鉴定出与食管鳞癌奈达铂耐药相关的蛋白,为食管鳞癌耐药相关标志物的筛选提供了新的技术方法及候选分子。     

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱快速鉴定沙门菌临床分离株

目的评估基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)在沙门菌鉴定中的临床应用,并研究其影响因素。方法用传统血清学方法鉴定沙门菌的血清型,用MALDI-TOF MS对哥伦比亚血平板、HE平板、SS平板和麦康凯平板分别培养24h、72h、120h和168h的179株沙门菌进行鉴定。结果 179株沙门菌可分为38种血清型,肠炎沙门菌(21.2%)、斯坦利沙门菌(17.3%)和Ⅰ4,5,12:i:-沙门菌(16.2%)居前3位。所有菌株在血平板、HE平板、SS平板和麦康凯平板分别培养24h和72h均能被MALDI-TOF MS准确鉴定为沙门菌。MALDI-TOF MS的耗材成本约为微生物自动生化鉴定系统(Vitek 2)的1/3,检测时间约为Vitek 2的1/7。结论在血平板、HE平板、SS平板和麦康凯平板培养3d以内的沙门菌,MALDI-TOF MS均可以准确鉴定。与Vitek 2相比,MALDI-TOF MS检测的速度更快,消耗的成本更低,并且可以直接鉴定生长在选择性培养基的沙门菌。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术在感染性疾病病原及耐药检测中的应用

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术作为蛋白质组学分析方法,具有高通量、高敏感度、操作简单、快速获得结果、可自建数据库等特点。该技术应用于感染性疾病病原鉴定及耐药检测,对临床感染患者的及时诊治意义重大。本文通过介绍该技术对菌种、无菌部位等各类标本的病原微生物进行快速鉴定及耐药检测的研究现状,探讨其面临的挑战和应用前景。     

用飞行质谱技术筛选肝棘球蚴病患者血清蛋白质组学标记物

目的 筛选肝棘球蚴病患者血清蛋白质组学标记物,建立血清蛋白质指纹图诊断模型,评价其应用价值.方法 肝棘球蚴病患者68例,对照组73例(其他肝病患者33例,健康人40例),将全部样品分为训练组(37例)和测试组(67例).用弱阳离子交换蛋白芯片结合表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测肝棘球蚴病患者和对照者的血清蛋白质谱.分别比较训练组中37例肝棘球蚴患者和37例对照者、5例肝囊型棘球蚴病(HCE)患者和5例肝泡球蚴病(HAE)患者、8例肝棘球蚴病患者手术前后两组血清蛋白质峰的差异.利用ZJU-PDAS软件进行数据处理,通过支持向量机(SVM)运算建立蛋白质指纹图诊断模型,并用测试组标本采用盲法对模型的灵敏度和特异度进行验证.结果 肝棘球蚴病组和对照组共筛选出9个差异蛋白峰,其中相对分子质量为1044、1047、1073、1075、1338、6453、6649、8714 m/z的8个蛋白质峰在病例组中下调,相对分子质量为5651 m/z的蛋白峰在病例组中上调(P<0.05),盲法验证表明所建模型对肝棘球蚴病诊断的灵敏度为77.4%(24/31),特异度为66.7%(24/36);阳性预测值为66.7%(24/36),阴性预测值为77.4%(24/31).HCE和HAE患者之间筛选出2个差异表达蛋白峰,质荷比分别为8716和2751 m/z(P<0.05);8例肝棘球蚴病患者手术前后两组共筛选出6个差异表达蛋白质峰,相对分子质量分别为1297、1505、1525、1534、5921,5941 m/z(P<0.05).结论 SELDI-TOF-MS技术结合生物信息学方法能筛选出肝棘球蚴病患者血清蛋白质组学标记物,对肝棘球蚴病诊断及预后判断具有潜在的应用价值.     

SELDI-TOF MS技术在胰腺癌早期诊断中的应用

胰腺癌是目前预后最差的恶性肿瘤,早期诊断被认为是改善胰腺癌预后的重要出路之一.表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI- TOF MS)技术,是近年来发展起来一种新的高通量蛋白质组学研究方法,本文就SELDI-TOF MS技术相关的原理、特点,在胰腺癌早期诊断中的应用新进展和未来的发展趋势作一综述.     

Study on the quality of recombinant proteins using matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry

Subjecxtheadingsrecombinantproteins;molecularweight;flightmassspectrometry;erythroPOietintrypticdigestsINTRODUCTIONSinceHillenkampetal[ljfirstintroducedmatrixassistedlaserdesorption/ionizationtimeofflightmassspectrometry(MALDI-TOFMS)toanalyzeproteinswithmolecularmassesgreaterthanM.10000,~DI--TOFMShasbeenwidelyusedtostudydifferentclassesofbiomoleculessuchasproteins,oligonucleotides,polysaccharidesandpolymers"--".Comparedtothetraditionaltechniques,suchassodiumdodecylsulfatepolyacryl…     

Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry for the identification of beta-hemolytic streptococci

Objective

Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) has emerged as promising technology for species identification. The purpose of this investigation was to compare the performance of MS and the traditional method for identification of beta-hemolytic streptococci (BHS).

Methods

Clinical BHS isolates were identified by the BD Phoenix SMIC/ID Streptococcal panels, and two MALDI-TOF MS platforms: the VITEK MS and the Bruker MALDI Biotyper systems respectively. In case of discordant results, 16sRNA sequencing was performed to provide the reference ID.

Results

A total of 96 isolates of BHS were analyzed. Thirty-six isolates (20.8%) were re-tested by BD Phoenix for identification failure; and four isolates (4.2%) were rerun on the Bruker system for low identification score. No isolate need a second run for identification by Vitek MS system. Overall, BD Phoenix, BioTyper and Vitek MS automated system accurately identified 76 strains (79.2%), 91 (94.7%) strains and 92 (95.8%) strains, respectively.

Conclusions

Our study suggests that MALDI-TOF MS is a superior method to conventional phenotypic methods for BHS identification.     

应用SELDI-TOF-MS技术建立肝癌筛选血清蛋白质指纹图谱模型

目的:建立肝癌筛选血清蛋白质指纹图谱模型．方法:用表面加强激光解析电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)及WCX2蛋白芯片获得新发肝癌、肝硬化患者和正常人血清的蛋白质指纹图谱,用计算机软件进行比较分析,建立肝癌的筛选模型．结果:肝癌患者与健康对照组血清蛋白质指纹图谱之间有5个标志蛋白(4477,8943,5181, 8617,13 761 Da)在肝癌患者血清中高表达,肝癌患者与肝硬化患者血清蛋白质指纹图谱之间2个标志蛋白(4477,13 761 Da)在肝癌患者血清中高表达,1个标志蛋白(4097 Da)在肝癌患者血清中低表达．SELDI-TOF-MS技术的特异性(60／60,100％);敏感度(18／20,90％)．分析系统筛选出4477,8943,13 761,4097 Da标志蛋白建立的肝癌诊断模型．结论:建立的血清蛋白质指纹图谱模型能够区分肝癌与非肝癌患者,SELDI-TOF-MS在肝癌的诊断及肿瘤特异性蛋白质生物标志分子的筛选等方面具有一定价值．     

表面增强的激光解析电离飞行时间质谱技术在肝细胞癌血清学诊断中的应用

目的:检测HBV感染携带者与肝细胞癌(HCC)患者血清蛋白质的差异性表达,以发现HCC的肿瘤诊断标志物.方法:用表面增强的激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测27例HCC患者,27例HBV感染携带者,25例健康对照血清中的蛋白质谱,并用Biomarker Patterns System 5．0软件分析,建立诊断模型．结果:检测HCC患者与HBV感染携带者。正常对照与HCC患者,正常对照与HBV感染携带者的差异性蛋白分子,据此构建分类模型,得到的灵敏度和特异度分别为93％,85％; 96％,96％;84％,89％．其中相对分子质量为8141 Da的蛋白峰在HCC组明显高于HBV感染组(p<10-5);相对分子质量为3448 Da的蛋白峰在HCC及HBV感染携带组表达均较正常组显著增高(P<10-5),而在HCC-HBV组无明显差异(P>0．05),提示其可能为HBV感染的一种标志蛋白;相对分子质量为777) Da的蛋白峰在3组中均有差异性表达．结论:SELDI蛋白芯片技术检测血清蛋白质谱法诊断HCC具有较高的灵敏度和特异度,操作简单快捷,临床应用前景广阔,为HCC诊断提供了新的血清学方法．