cDNA代表性差异分析法分离鼻咽癌上皮细胞株HNE1表达差异cDNA序列的初步研究

目的寻找鼻咽癌中差异性表达基因，包括与鼻咽癌发病相关的候选抑瘤基因。方法应用ｃＤＮＡ代表性差异分析法（ＲＤＡ），分离原代培养的正常人鼻咽上皮细胞与鼻咽癌细胞株ＨＮＥ１中差异表达的ｃＤＮＡ序列，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交被用来分析差异性表达产物的来源，最后，将这些序列克隆到ｐＧＥＭ－Ｔｅａｓｙ载体中，并用链终止法测序。结果在第４轮杂交及扩增反应后，获得４条差异性条带。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交证明，这些差异性片段来自作为“检测”扩增子的正常人鼻咽上皮，在鼻咽癌细胞株ＨＮＥ１中不表达或表达降低。序列分析这些差异性片段的克隆，发现一些序列是与已知基因高度同源的基因，包括一些看家基因；另有一些基因则为新基因序列。结论鼻咽癌的发生是一个多基因参与的过程，所获得的差异性片段中，与之同源的一些已知基因具有抑瘤功能。     

鼻咽癌组织基因表达谱的研究

目的和方法：用Ｃｌｏｎｔｅｃｈ公司的Ａｔｌａｓ＾ＴＭＨｕｍａｎ Ｃａｎｃｅｒ ｃＤＮＡ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｒｒａｙ对人胚鼻咽、正常成人鼻咽、ＨＮＥ１细胞、鼻咽低分化鳞癌、肺癌和头颈部其它３种肿瘤５８８个与肿瘤相关基因的表达谱进行了研究。结果：在选定的９１个基因中,有３６个基因的鼻咽癌组织中表达加强,５１个基因鼻咽癌组织中表达下调,在鼻咽癌组织中表达下调的基因相对较多。周期素依赖性刺酶抑制子－     

转染B7—1基因至鼻咽癌细胞株及其诱导的细胞免疫应答

通过包装细胞把逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ／Ｂ７－１导入鼻咽癌细胞株ＣＮＥ１，利用ＲＴ－ＰＣＲ及ＦＡＣｓ等技术证实Ｂ７－１的表达情况，同时检测了ＣＮＥ１细胞表面ＭＨＣＩ抗原。在此基础之上，观察了表达Ｂ７－１的ＣＮＥ１细胞（ＣＮＥ１／Ｂ７－１）对健康个体ＰＢＬ（外周血淋巴细胞）的增殖及细胞因子分泌的影响，结果表明：ＣＮＥ１／Ｂ７－１可以促进ＰＢＬ的增殖及细胞因子的分泌，且增高水平的细胞因子主要是ＩＬ－２和ＩＦＮ－γ。提示：ＣＮＥ１／Β７－１诱导的免疫应答以细胞免疫为主。     

不同氧分压时人脂肪干细胞细胞因子的分泌

背景：不同氧分压对人脂肪来源干细胞分泌细胞因子的影响目前尚未定论,这些差异可能由于研究者对于氧分压的选取不同而造成影响。 目的：检测不同氧分压对人脂肪来源干细胞分泌细胞因子的影响。 方法：体外分离培养人脂肪来源干细胞进行免疫表型进行鉴定。将人脂肪来源干细胞分别在1%,3%,5%,10%,21%氧分压的环境中培养24 h后,使用实时定量PCR和酶联免疫吸附法对人脂肪来源干细胞分泌的血管内皮生长因子、肝细胞生长因子、神经细胞生长因子、角质细胞生长因子,在基因水平以及蛋白水平上进行检测分析。 结果与结论：人脂肪来源的人脂肪来源干细胞阳性表达CD71,CD73,CD90,CD105,阴性表达CD34,CD45,CD54及HLA-DR。经单因素方差分析统计,在基因水平上,低氧环境(体积分数1%,3%氧)均可促进人脂肪来源干细胞显著性高表达血管内皮生长因子、神经生长因子(P均< 0.01);对人脂肪来源干细胞表达肝细胞生长因子有显著影响(P < 0.05);而对角质细胞生长因子的表达则无显著影响(P > 0.05)。在蛋白水平上,低氧促进人脂肪来源干细胞分泌肝细胞生长因子、血管内皮生长因子蛋白(P均<0.01),对神经生长因子、角质细胞生长因子的分泌无显著影响。结果提示,人脂肪来源干细胞在低氧环境中培养后,其生物学特性受到一定的改变,可促进血管内皮生长因子、肝细胞生长因子、神经生长因子基因的表达,提高肝细胞生长因子、血管内皮生长因子蛋白的分泌。     

构建7q32区域鼻咽癌和正常鼻咽上皮细胞部分基因的表达图谱

目的构建７ｑ３２区域鼻咽癌细胞和组织及原代培养人正常鼻咽上皮细胞的部分基因表达图谱。方法通过差异ＲＴ－ＰＣＲ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交的方法检测定位于７ｑ３２区域的２０个ＥＳＴ在鼻咽癌细胞和鼻咽癌组织及原代培养人正常鼻咽上皮细胞ｍＲＮＡ的表达水平。结果８个ＥＳＴ在鼻咽癌细胞ＨＮＥ１和原代培养人正常鼻咽上皮细胞中表达量较一致，７个ＥＳＴ在两种细胞中均无表达，３个ＥＳＴ（Ｗ７２６８８、Ｈ１９８３０、ＡＡ１３０６３０）在鼻咽癌细胞株中表达上调，而２个ＥＳＴ（ＡＡ０７０４３７、Ｈ９０８８２）在原代培养人鼻咽上皮细胞中表达上调。在１３例鼻咽癌活检组织中３０．７％（４／１３）的ＡＡ０７０４３７表达下调，７７％（１０／１３）的Ｗ７２６８８和７７％（１０／１３）的Ｈ１９８３０表达上升。结论构建了７ｑ３２区域鼻咽癌细胞和组织及原代培养人正常鼻咽上皮细胞部分基因表达图谱，并初步认为Ａ０７０４３７的表达下调和Ｗ７２６８８、Ｈ１９８３０的过表达与鼻咽癌的发生有关。     

Th1/Th2相关细胞因子基因检测方法的建立

目的：建立检测Ｔｈ１／Ｔｈ２相关细胞因子的方法。方法：设计６对用于ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－１３、ＩＦＮγ和β－ａｃｔｉｎ基因扩增的引物,建立可用于Ｔｈ１／Ｔｈ２相关细胞因子检测的ＲＴ－ＰＣＲ技术,同时 口平移法制备６种细胞因子的ｃＤＮＡ探针,建立ＲＮＡ斑点杂交技术。结果：用ＲＴ－ＰＣＲ和ＲＮＡ斑点杂交技术检测２０种肿瘤细胞株,发现１１／２０为Ｔｈ２型细胞因子表达,８／２０为Ｔｈ０型,     

中药海乐得对部分肾切除大鼠残余肾脏表达PAI—1,TGFβmRNA？…

目的：观察中药制剂海乐得对５／６肾切除（５／６ＮＸ）大鼠残余肾组织表达纤溶酶原激活物抑制物－１、转化生长因子β的影响。方法：海乐得治疗５／６肾切除大鼠６周后处死,检测尿蛋白排泄和血生化变化,制作残肾组织病理和冰冻切片,提取残余肾脏组织ＲＮＡ,分别采用的位杂交及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印记杂交方法观察ＰＡＩ－１、ＴＧＦβ的基因表达。结果：中药治疗组残肾组织中ＰＡＩ－１和ＴＧＦβｍＲＮＡ表达、尿蛋白排泄、血清     

cDNA代表性差异分析法分离鼻咽癌上皮细胞株HNE1表达差异 …

寻找鼻咽癌中差异性表达基因，包括与鼻咽癌发病相关的候选抑瘤基因，方法应用ｃＤＮＡ代表性差异分析法，分离原代培养的正常人鼻咽上皮细胞与鼻咽癌细胞株ＨＮＥ１中差异表达的ｃＤＮＡ序列，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交被用来分析差异性表达产物的来源，最后，将这些序列克隆到ＰＧＥＭ－Ｔｅａｓｙ载体中，并链终止法测序。     

B7／CD28和ICAM—1／LFA—1共刺激信号对T及B细胞功？…

目的 研究共刺激途径Ｂ７／ＣＤ２８和ＩＣＡＭ－１／ＬＦＡ－１对Ｔ细胞活化以及Ｂ细胞效应的作用。方法 在体外建立ＡＰＣ：Ｔ：Ｂ细胞反应系统,用Ｂ７－１单抗和ＩＣＡＭ－１单抗分别阻断Ｂ７／ＣＤ２８和ＩＣＡＭ－１／ＬＦＡ－１共刺激途径,利用＾３Ｈ－ＴｄＲ法检测Ｔ细胞增殖,ＥＬＩＳＡ法测定Ｂ细胞分泌的杭体,用ＲＴ－ＰＣＲ法检测细胞因子基因的表达。结果 Ｂ７－１单抗和ＩＣＡＭ－１单坑均可抑制Ｔ细胞增殖及ＩＬ     

Western印迹杂交分析p53蛋白在人鼻咽癌中的表达及其意义

目的：检测１０４例鼻咽癌活检组织和８例鼻咽粘膜慢性炎症组织中Ｐ５３蛋白的表达。方法;采用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法结合免疫沉淀技术。结果：１０４例鼻咽癌活检组织中有１２例出现突变型Ｐ５３蛋白表达,突变检出率为１１．５４％（１２／１０４）。８例鼻咽慢必琰症活检组织中未见,Ｐ５３蛋白的异常表达（０／８）;鼻咽癌病人中人ＩｇＡ／ＶＣＡ抗体滴度≥１：１６０者,Ｐ５３蛋白突变检出率为１１．８０％（１１／９３）,Ｉ