载脂蛋白E基因多态性在星形胶质细胞缺氧性损伤后早期凋亡中的作用

目的 探讨载脂蛋白E(apolipoprotein E,APOE)基因多态性在星形胶质细胞缺氧性损伤后早期凋亡中的作用.方法 原代培养APOE基因野生鼠、APOE转基因鼠(ε3、ε4)的星形胶质细胞,并纯化鉴定;利用缺氧法构建星形胶质细胞缺氧损伤模型,透射电镜观察细胞及线粒体形态变化,流式细胞仪检测细胞早期凋亡率及线粒体膜电位变化情况.结果 缺氧6h后,通过电镜观察到各组细胞足突肿胀,线粒体形态不规则、空泡化、嵴不规则,各组细胞之间形态变化无明显差异;APOEε4组细胞早期凋亡率、线粒体膜电位下降程度明显高于APOEε3组、APOE野生组(P＜0.05).结论 缺氧损伤后早期,与APOEε3组、APOE野生组比较,APOEε4组星形胶质细胞线粒体膜电位下降程度更大,这可能是导致更多的星形胶质细胞凋亡的原因之一.     

不同高度急性低压缺氧时大鼠大脑顶叶皮质的超微病理变化

目的从亚细胞水平观察大白鼠在不同高度急性缺氧时大脑顶叶皮质组织的神经细胞、胶质细胞、间质血管等的病理改变。方法将雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分成３０００ｍ、５０００ｍ、８０００ｍ及１００００ｍ实验组及对照组，于低压舱内暴露于不同高度３０ｍｉｎ，舱内处死，取大脑顶叶皮质层组织，常规电镜制片，透射电镜下观察。结果与对照组相比，不同高度实验组均呈不同程度变化，主要表现为脑组织神经细胞、胶质细胞膜结构模糊不清，核及胞质内线粒体、内质网扩张，核染色质不均匀凝固，细胞皱缩以至崩解，凋落小体出现，毛细血管外膜胶质屏障水肿等。病变以８０００ｍ及１００００ｍ两组明显。结论大鼠在不同高度急性缺氧时所发生的一系列超微病理学变化与组织形态学及酶活性变化一致，且表现得更明显，也是各种生理学紊乱、酶活性降低及组织学改变的基础     

外伤后急性弥漫性脑肿胀CT 值变化与超微结构损伤关系探讨

目的　观察人脑外伤后急性弥漫性脑肿胀脑CT值和超微结构变化关系。方法　比较 9例急性弥漫性脑肿胀患者伤后和手术前脑组织CT值的变化 ,结合术中所取 3 6份损伤脑组织中毛细血管和脑实质细胞超微结构变化 ,探讨脑组织CT值下降与超微结构损伤的关系。结果　术前脑组织的CT值比伤后首次CT值低 2 .5～ 4.3HU。电镜下见 :毛细血管管腔扩张和狭窄并存 ,血管周围和细胞间出现大片水肿区。神经元细胞核仁边移或消失 ;染色质呈点状或团块状凝集 ,核膜迂曲 ;核周可见大片脂滴及空白区 ;细胞质内线粒体肿胀、嵴模糊或消失 ,粗面内质网扩张、有脱颗粒现象。神经轴索肿胀 ,轴索部分断裂。星形胶质细胞损伤与神经元细胞相似。结论　急性弥漫性脑肿胀脑组织CT值下降与脑血管源性脑水肿、细胞毒性脑水肿和脑组织细胞的超微结构损伤加重有关     

外伤后急性弥漫性脑肿胀合并二次脑损伤的超微结构观察

目的 探讨外伤后急性弥漫性脑肿胀合并二次脑损伤患者的脑组织超微结构变化与预后的关系。方法 对8例外伤后急性弥漫性腑肿胀合并小同程度二次脑损伤患者行内减压手术，留取32份脑组织标本，透射电镜下观察神经元、星形胶质细胞和毛细血管的超微结构变化，分析其与预后的关系。结果 按格拉斯哥预后评分(G0S)：良好1例，中残2例，重残1例，植物生存1例，死亡3例。良好和中残的患者，神经元和星形胶质细胞超微结构基本正常，血管源性脑水肿为主，细胞内水肿较轻，毛细血管扩张允血。其余患者中，神经元和星形胶质细胞核膜迂曲，核仁偏移，染色质凝集，线粒体和粗面内质网的超微结构明显损伤，细胞内水肿和血管源性脑水肿均较重，毛细血管狭窄缺血。结论 外伤后急性弥漫性脑肿胀合并二次脑损伤患者的脑组织超微结构损伤越重，预后就越差。     

高+Gx过载后恒河猴脑组织损伤的病理学研究

目的 研究实验动物恒河猴在经受抛物线型高 Gx过载后,大脑顶叶皮层和海马区在光镜和电镜下的病理形态学变化,以期深入了解不同高 Gx与脑组织的病理性损伤程度的关系。方法 实验选用健康恒河猴于清醒状态下,在动物离心机上经受相应峰值(实验组： 15Gx／200S、 18Gx／165S、 21Gx／140S和对照组 1Gx／200S)的抛物线型过载作用后,取材、进行病理形态学研究。结果 1)在光镜下,可见大脑顶叶皮层和海马区锥体细胞均表现为不同程度的缺血性萎缩,而星形胶质细胞核周出现空晕,这种病变随着 Gx值的增加而逐渐加重,此外,海马区较大脑顶叶皮层的病变表现的更为明显;2)电镜下随着 Gx值的增加,可见锥体细胞核染色质聚集形成团块状、染色质边集,核膜皱缩,最后形成凋亡小体;胞浆内线粒体由肿胀、嵴模糊不清最后到空泡化;内质网池逐渐扩张。结论 15～ 21G的高 Gx值可以导致恒河猴脑组织出现急性损伤性病理变化,而且损伤的程度随 Gx的增加而加重。     

异氟醚吸入麻醉调控星形胶质细胞活化对围术期小鼠神经认知功能的影响

目的 探讨异氟醚吸入麻醉调控星形胶质细胞活化对围术期小鼠神经认知功能的影响.方法 C57BL/6小鼠80只随机分为对照组、2％异氟醚组、手术组、2％异氟醚+手术组,每组20只.Morris水迷宫实验评估小鼠术后1、3、7 d认知功能,测定海马组织炎性反应及凋亡相关因子水平,免疫荧光染色观察星形胶质细胞活化情况,TUNE...     

培养大鼠皮层星形胶质细胞牵张损伤模型

目的建立培养大鼠皮层星形胶质细胞牵张损伤模型。方法取１～２天新生大鼠皮层细胞原代培养，经纯化后星形细胞传代培养于乳胶膜培养皿中，采用计算机控制的牵张损伤装置致伤，通过电镜形态学检察和乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）、台盼蓝染色定量检测确定损伤程度。结果不同的驱动压力可使乳胶膜牵张变形，导致培养细胞不同程度损伤。电镜可见伤后胞体和突起断裂，线粒体致密，嵴减少，微丝、微管减少。随驱动压力增加，ＬＤＨ释放量和台盼蓝染色定量逐渐增高。结论培养细胞牵张损伤为在细胞水平研究创伤性损伤的有用模型，星形胶质细胞是研究体外细胞损伤较理想的细胞。     

大鼠颅脑创伤后星形细胞早期反应特点

目的研究大鼠颅脑创伤后星形细胞的早期反应。方法用气体冲击导致大鼠局部脑挫伤,采用HE染色和透射电镜观察损伤后脑组织的病理变化,用胶质纤维酸性蛋白免疫组化染色检测反应性星形细胞。结果颅脑创伤后星形胶质细胞肿胀为一早期现象,反应性星形胶质细胞中胶质纤维酸性蛋白染色增强,伤后6小时,反应性星形细胞主要局限于伤区周围脑组织和伤侧海马,伤后24小时,星形细胞反应波及全脑,海马组织中尤为明显。结论颅脑创伤后星形细胞反应可能与早期胶质细胞应激反应有关,反应性星形细胞在继发性脑损伤病理过程中可能具有重要作用。     

急性低压缺氧后大鼠脑皮质和海马细胞凋亡情况的动态观察

目的　观察大鼠在急性低压缺氧环境暴露后脑皮质和海马细胞凋亡的情况。　方法　采用Wistar大鼠 30只 ,在低压舱内模拟暴露于 75 0 0m高度停留 2 0min ,建立急性缺氧模型。分别在缺氧前及低压缺氧环境暴露后 1d、2d、3d、4d和 5d ,取大鼠脑颞叶皮质和海马组织用流式细胞仪分析脑细胞周期和细胞凋亡率的变化。　结果　大鼠低压缺氧后脑皮质和海马细胞凋亡率明显升高 ,在缺氧后 4d和 3d脑皮质和海马凋亡细胞数分别达到高峰 ,急性缺氧后 3d和 4d脑皮质和海马凋亡细胞数显著高于 1d (P <0 0 1 )。而急性缺氧后脑皮质和海马细胞G1 期细胞呈逐渐减少趋势 ,S期细胞逐渐增加。　结论　 75 0 0m模拟高空低压缺氧可导致不同程度的脑皮质和海马细胞凋亡 ,缺血缺氧后的 3d和 4d凋亡细胞率最高 ,5d凋亡细胞数降低与未缺氧时比较差异无显著性意义     

动物双歧杆菌BB-12改善全脑照射后小鼠海马神经炎症和认知功能障碍的研究

目的 探讨动物双歧杆菌BB-12对全脑照射后小鼠海马神经炎症和认知功能的影响。方法 选取60只7~8周龄雄性C57BL/6J小鼠,采用完全随机法分为5组,每组12只,即健康对照组(Con组)、益生菌组(BB-12组)、单纯照射组(IR组)、照射+美金刚组(IR+Memantine组)、照射+益生菌组(IR+BB-12组)。采用医用直线加速器对小鼠行10 Gy电子线全脑照射建立放射性脑损伤模型。Y-迷宫实验评估小鼠认知功能;免疫荧光染色检测海马小胶质细胞和星形胶质细胞激活水平;实时荧光定量PCR技术(QRT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测海马炎症因子白介素1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平。结果 Y-迷宫实验显示,与Con组相比,IR组小鼠到达新异臂的次数占3个臂总次数的百分比明显降低(t= 5.04,P<0.05);BB-12可以改善放射性脑损伤后小鼠认知障碍(t=4.72,P<0.05)。与Con组相比,IR组小鼠海马区Iba1、GFAP阳性细胞数量显著增多(t=3.05、7.18,P <0.05),圆形度指数显著升高(t=6.23、2.52,P<0.05),小胶质细胞和星形胶质细胞被激活;与IR组相比,IR+BB-12组小鼠海马区Iba1、GFAP阳性细胞数量减少(t=4.80、2.90,P<0.05),圆形度指数降低(t=6.22、2.63,P<0.05),BB-12可以抑制小胶质细胞和星形胶质细胞激活。IR组小鼠海马区炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA和蛋白表达水平显著升高(与Con组相比:t_mRNA=4.10、3.04、4.18,P<0.05;t_蛋白=11.49、7.04、8.42,P<0.05);BB-12可以降低受照后IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA和蛋白的表达水平(与IR组相比:t_mRNA=4.19、3.40、2.84,P<0.05;t_蛋白=6.36、4.03、3.75,P<0.05)。结论 动物双歧杆菌BB-12可抑制照射后小鼠海马区小胶质细胞、星形胶质细胞介导的神经炎症,并改善放射性认知功能障碍,具有缓解放射性脑损伤的应用潜力。     

急性重复缺氧海马锥体层神经元光镜观察

为探讨急性重复缺氧动物对缺氧受性增加的形态学基础，对５２只昆明小鼠海马ＣＡ１区锥体层神经地凶作光镜观察。结果：（１）肥大神经元在１次、３次、５次钾氧组均存在。（２）萎缩神经元在１次缺氧组存活７ｄ、３次缺所缺氧组存活３ｄ、５次缺氧组存活１ｄ时才出现。（３）固缩神经元在１次缺氧组未出现，在３次缺氧组存在７ｄ，５次的的岂氧组存活３ｄ的出现。     

Immunohistochemical investigation of hypoxiclischemic brain damage in forensic autopsy cases

A neuropathological study of 41 forensic autopsy cases of hypoxic/ischemic brain damage has been undertaken, using immunohistochemical staining to detect the 70-kDa heat shock protein (hsp70) and the status of the glial cells. In cases surviving 2–5 h after hypoxic/ischemic injury, ischemic cell changes were seen whereas glial reactions were not apparent. In cases of longer survival, neuronal necrosis and a loss of neurons were seen, and these changes were accompanied by proliferation of glial fibrillary acidic protein (GFAP), vimentin-positive astrocytes and microglia which transformed into rod cells or lipid-laden macrophages. In cases with a history of hypoxic attacks, GFAP-positive and vimentin-negative astrocytes had proliferated in the CA3 and CA4 regions of hippocampus. The cases of severe hypoxic injury, such as an asthmatic attack and choking, showed no ischemic changes in the hippocampul neurons. On the other hand, the CA1 pyramidal cells showed neuronal necrosis in a patient suffering from tetralogy of Fallot (TOF), who survived for 2 h after a traffic accident. Therefore, it is suggested that even moderate hypoxic injury induces astrocytosis in the CA3 and CA4 regions and may affect the neuronal proteins and the metabolism, and that in cases with a history of hypoxic attacks neuronal damage may be severe even several hours after ischemic injury. The protein hsp70 expression was found in the CA2, CA3 and CA4 regions in cases of long-term survival after severe hypoxic/ischemic injury and in cases of alcoholic intake or toluene abuse just before acute death. Thus, it is suggested that the detection of hsp70 in the hippocampus indicates hypoxic/ischemic injury or other stress prior to death. In forensic practice, immunohistochemical investigation of the hsp70 and glial cell staining can be of great value for diagnosing not only hypoxic/ischemic brain damage during the process of death but also the victim's past history of hypoxic attacks.     

Correlation between glial fibrillary acidic protein-positive astrocytes and age in the human hippocampus

The hippocampus is one of the areas most vulnerable to histopathological changes, and such changes may yield useful information in forensic medicine. We found that glial fibrillary acidic protein (GFAP)-positive astrocytes are frequently found in the hippocampus of consecutive series of forensic brains, distributed predominantly in the hippocampal CA4 and hippocampal sulcus (HS) regions. The present study counted GFAP-positive astrocytes in these regions and investigated associations with age, cause of death and postmortem time. Significant correlations were found between age and number of GFAP-positive astrocytes in both CA4 and HS regions. Number of GFAP-positive astrocytes increases in an age-dependent manner, but no correlations were noted between number of GFAP-positive astrocytes and postmortem time and cause of death. Number of GFAP-positive astrocytes in the hippocampus may provide useful information for age estimation.     

微波辐射对小鼠联合型学习记忆功能及海马组织结构的影响

目的 探讨微波辐射对联合型学习记忆功能及海马组织结构的影响。方法 将小鼠按随机数表法分为假辐射组和微波辐射组,各27只。采用2.856 GHz、8 mW/cm²微波辐射C57BL/6N小鼠15 min,建立微波辐射动物模型。采用Morris水迷宫和穿梭箱行为学实验,研究微波辐射对小鼠空间学习记忆和联合型学习记忆功能的影响。观察海马组织病理学变化,研究微波辐射后海马组织超微结构改变。结果 Morris水迷宫结果表明,微波辐射后小鼠反向空间探索实验跨越平台次数减少,由(3.60±0.79)次降至(2.55±0.47)次(t = 2.21,P= 0.046);穿梭箱实验结果表明,辐射后小鼠平均主动逃避率显著下降(t = 2.70,P<0.05),平均主动潜伏期和总电击时间显著延长(t = -3.09、-3.02,P < 0.05)。辐射后8 d,海马CA3和DG区部分神经元核固缩,海马CA3区神经元凋亡、突触间隙模糊、胶质细胞肿胀、血管周隙增宽。结论 微波辐射可引起小鼠空间参考记忆能力及联合型学习记忆能力下降,海马组织形态学病理改变是其功能障碍的结构基础。     

Regional heterogeneity in the brain's response to hypoxia measured using BOLD MR imaging.

Blood oxygenation level-dependent (BOLD) magnetic resonance (MR) imaging is sensitive, in part, to the amount of paramagnetic deoxyhemoglobin in a voxel. This project was designed to determine whether there would be differences in the BOLD response between the hippocampus and other brain regions to acute hypoxia. R2* was quantified using a multi-echo gradient-echo sequence. The pyramidal CA1 region of the hippocampus showed a reduced response to changes in arterial oxygenation relative to cortex and basal ganglia and white matter. This difference may relate to the relative hypoxia sensitivity of the hippocampus. It also supports the premise that in functional MR imaging, the magnitude of the MR response to a stimulus may vary with the region of the brain.     

不同强度的模拟推拉动作致大鼠海马神经元损伤的实验研究

目的探讨不同强度的推拉动作所致的推拉效应对大鼠海马神经元损伤的程度和时相性。方法应用动物模型评分、病理、电镜技术分别对不同强度模拟推拉动作后大鼠海马各区神经元损伤情况进行检测。结果 1 )动物模型评分 :随着推拉动作强度的加大 ,卒中指数和神经症状评分逐渐增高。 2 )HE染色 :对照组和± 2Gz暴露后各组及± 6Gz、± 8Gz暴露后的 30min组海马各区神经元形态及分布未见异常。± 6Gz、± 8Gz暴露后的 6h和 2 4h组可见轻重不等的神经元变性。 3)电镜超微结构检查 :± 2Gz暴露后 30min和 2 4h组 ,海马CA1区神经元与正常对照组比较无明显改变。± 2Gz暴露后 6h组及± 6Gz、± 8Gz暴露后的 6h和 2 4h实验组可见大鼠海马CA1区部分神经元出现程度不等的变性。结论± 6Gz和± 8Gz暴露后可引起大鼠海马神经元损伤 ,且以± 8Gz暴露后 6h损伤程度最重。     

虎纹捕鸟蜘蛛毒素对全脑缺血大鼠海马神经元细胞形态及bax、bcl-2 mRNA和蛋白表达的影响

目的:观察蛛网膜下腔注射虎纹捕鸟蜘蛛毒素(HWTX-I)对全脑缺血再灌注大鼠海马神经细胞线粒体和CA1区锥体细胞形态、凋亡相关因子bax和bcl-2 mRNA及蛋白表达的影响。方法:SD大鼠随机分为假手术组、生理盐水组及HWTX-I组,采用改良的Pulsinelli四血管阻断全脑缺血损伤结合蛛网膜下腔置管术模型,对大鼠海马神经细胞线粒体进行超微结构及Nissl染色形态学观察,免疫组织化学法检测Bax、Bcl-2蛋白表达,RT-PCR法检测baxb、cl-2 mRNA表达。结果:(1)HWTX-I能够使全脑缺血大鼠海马神经细胞线粒体基本维持正常形态。(2)HWTX-I能稳定全脑缺血大鼠海马CA1区锥体细胞分布。(3)HWTX-I能够下调全脑缺血再灌注大鼠海马组织bax mRNA及蛋白表达,上调bcl-2 mRNA及蛋白表达。结论:蛛网膜下腔注射HWTX-I对全脑缺血再灌注所致的大鼠海马神经元损伤有明显的保护作用。     

缺Zn大鼠海马神经元内Zn变化的形态计量学研究

采用Ｔｉｍｍ氏硫化银法及图象分析法，对单纯缺Ｚｎ大鼠海马细胞内Ｚｎ灰度值的变化进行了研究。结果表明；在缺Ｚｎ状态下，海马ＣＡ１、ＣＡ３齿状回和ＣＡ４区光密度均降低。提示；缺Ｚｎ早期，脑海马细胞内可螯合Ｚｎ的减少，超前于海马Ｚｎ总浓度的变化。     

慢性染铅大鼠海马脑源性神经营养因子的改变

 目的探讨慢性染铅大鼠海马脑源性神经营养因子(Brain derived neurotrophic factor,BDNF)的变化.方法Wistar大鼠分别饮用0.02%、0.2%的醋酸铅(PbAc)溶液,染铅3个月后,通过Y-迷宫实验检测各组动物学习记忆行为变化,采用免疫组织化学ABC法观察各组大鼠海马CA1区、CA3区和齿状回BDNF阳性神经元数目的改变.结果在正常情况下,BDNF样免疫阳性神经元在海马各区及齿状回均有分布.与对照组相比,饮用0.02%和0.2%PbAc两组染铅大鼠学习记忆能力明显降低(P＜0.05),同时两组染铅大鼠海马CA1区、CA3区和齿状回的BDNF阳性神经元数均明显减少(P＜0.05).结论海马各区BDNF阳性神经元数目的减少可能是大鼠染铅后学习记忆功能受损的机制之一.     

急、慢性吗啡依赖大鼠脑内Gi2蛋白的表达

目的研究吗啡依赖大鼠腹侧背盖区（VTA）、伏隔核（NAc）、前额皮质（PC）、海马及蓝斑（LC）各脑区Ⅱ型抑制性鸟苷酸结合蛋白（Gi2蛋白）的改变，探讨吗啡依赖的可能机制。方法36只SD大鼠随机分为6组，分别为急性吗啡依赖组、急性吗啡戒断组、急性空白对照组、慢性吗啡依赖组、慢性吗啡戒断组和慢性空白对照组。建立吗啡依赖大鼠模型。戒断组腹腔注射纳洛酮5mg／kg，作用30min。断头处死各组大鼠，取出脑组织，进行冰冻切片。用免疫组化技术检测NAc、PC、LC、VTA和海马的相对Gi2蛋白水平。结果急性吗啡依赖组和戒断组与急性空白对照组比较，NAc区Gi2蛋白水平明显降低（P〈0．01）。慢性吗啡依赖组和戒断组与慢性空白对照组比较，NAc区Gi2蛋白水平明显降低（P〈0．01），LC区Gi2蛋白水平明显升高（P〈0．01）。结论吗啡依赖可引起大鼠脑内Gi2蛋白水平发生改变，但各脑区Gi2蛋白水平的变化并不相同。Gi2蛋白水平改变可能是吗啡耐受和依赖潜在的分子机制。