人肺腺癌细胞缺氧后血管形成诱导活性的变化

目的 探讨肺腺癌细胞经过缺氧刺激后的血管形成诱导活性的变化。方法 将人肺腺癌细胞株A549暴露于常氧、缺氧和无氧环境48h后，将其条件培养基或癌细胞分别与包含在纤维蛋白胶中的内皮细胞团块共培养，计数从内皮细胞团块长出的小管数量以反映血管形成诱导活性。同时通过ELISA法分析条件培养基和两细胞共培养时的培养基中的血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)含量。结果 缺氧组条件培养基以及共培养时的血管形成诱导活性及培养基中VEGF、bFGF水平均显著高于常氧组。无氧组血管形成诱导活性及两种生长因子水平均显著低于常氧组。结论 适度缺氧可以刺激人肺腺癌细胞VEGF、bFGF等生长因子的表达，增强血管形成诱导活性。但是严重缺氧可削弱VEGF、bFGF表达，减弱癌细胞的血管形成诱导活性。     

葡萄糖对人外周血内皮祖细胞凋亡的影响

目的 研究不同浓度的葡萄糖对体外培养条件下的健康人外周血内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）凋亡的影响.方法 经密度梯度离心法分离出健康成年人外周血中的单个核细胞（mononuclear cells,MNCs）,在体外诱导分化后,用FITC标记的荆豆凝集素Ⅰ（Dil-acLDL）和Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白（FITC-UEA-1）双染色鉴定为内皮祖细胞.观察不同浓度的葡萄糖对所获取的内皮祖细胞凋亡的影响.结果 11.1 mmol/L葡萄糖干预组较5.6 mmol/L葡萄糖干预组的凋亡率差异无统计学意义（P＞0.05）;25.5 mmol/L葡萄糖干预组的凋亡率较5.6 mmol/L葡萄糖干预组的差异有统计学意义（P＜0.05）,且随干预时间的延长凋亡率增加（P＜0.05）.结论 高浓度葡萄糖能增加体外培养条件下人外周血内皮祖细胞的凋亡,且这种作用呈时间依赖性.     

体外培养骨髓单个核细胞分泌促血管生长因子的实验研究

目的分析体外培养的骨髓单个核细胞持续分泌促血管生长因子的能力。方法从大鼠胫骨及股骨采集骨髓,密度梯度离心法分离出骨髓单个核细胞进行体外培养,并连续收集4周培养上清液。酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定培养上清液中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)和白介素-1β(IL-1β)等因子水平。结果第1、2、3、4周骨髓单个核细胞体外培养上清液中VEGF分别为(24.40±7.99)pg/m、l(89.28±5.13)pg/m、l(115.24±10.08)pg/m、l(157.00±15.64)pg/m l;bFGF含量分别为(52.72±2.13)pg/m、l(48.10±6.41)pg/m、l(44.71±3.21)pg/m、l(25.61±2.42)pg/m l;IL-1β含量分别为:(31.28±5.44)pg/m、l(71.87±3.01)pg/m、l(55.77±11.94)pg/m、l(41.75±9.14)pg/m。l结论体外培养骨髓单个核细胞可持续分泌VEGF、bFGF、IL-1β等多种促血管生长因子。     

番茄红素对高糖环境下人外周血内皮祖细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨不同浓度番茄红素对体外高糖培养环境下健康人外周血内皮祖细胞(EPCs)增殖、凋亡的影响。方法密度梯度离心法分离健康成年人外周血单个核细胞,在体外诱导分化后,用FITC标记的荆豆凝集素I(FITC-UEA-I)和Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-ac-LDL)双染色鉴定为内皮祖细胞。观察不同浓度番茄红素对高糖环境下的内皮祖细胞增殖、凋亡的影响。结果 33mmol/L葡萄糖明显抑制EPCs增殖,并促进其凋亡(P<0.05);番茄红素10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml组EPCs增殖能力均明显高于0μg/ml组,凋亡率明显低于番茄红素0μg/ml组(P<0.05)。结论高浓度葡萄糖能抑制体外培养条件下人外周血EPCs的增殖、促进其凋亡;番茄红素可以保护高糖环境下EPCs的增殖能力并抑制其凋亡。     

有氧运动对中老年大鼠外周血内皮祖细胞增殖及黏附能力的影响

目的研究有氧运动对中老年大鼠外周血内皮祖细胞增殖及黏附能力的影响。方法健康雌性2月龄和14月龄SD大鼠各12只,分为2月龄空白对照组,2月龄有氧运动组,14月龄空白对照组,14月龄有氧运动组4个组,每组6只。采用乳酸阈测定法确定有氧运动强度,以递增负荷跑台训练建立有氧运动模型,实验结束后12 h取大鼠外周血,采用密度梯度离心法分离单个核细胞,以EGM-2培养基对其体外培养,诱导分化获取内皮祖细胞,通过双荧光染色法观察细胞对乙酰化低密度脂蛋白的摄取和与荆豆凝集素1的结合以及形态学特征鉴定内皮祖细胞。倒置显微镜下计数贴壁细胞数量反映细胞增殖和黏附情况。结果与对照组相比,有氧运动组培养48 h和d 7的贴壁细胞数量都明显增加(P0.01);内皮祖细胞黏附能力增强(P0.01);14月龄大鼠的增殖和黏附能力均小于两月龄组(P0.01)。结论有氧运动能促进中老年大鼠外周血中的内皮祖细胞增殖,且增加其黏附能力,但衰老则降低其增值和黏附。     

神经生长因子对神经干细胞分化的影响

【目的】探讨不同神经生长因子对神经干细胞(neural stemcells,NSCs)分化特性的影响。【方法】自10～14周人胚胎脑分离培养海马神经干细胞,分别用表皮生长因子(human epidermal growth factor,EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF),或单独用bFGF扩增神经干细胞,取第3代神经干细胞球,用含小剂量bFGF(0.5 ng)的无血清基础培养基诱导分化,体外诱导分化7 d后应用免疫荧光方法检测β_Ⅲ微管蛋白(β_ⅢTubulin,Tuj1)和神经胶质纤维酸性蛋白(glial fibriliary acidic protein,GFAP)表达情况。【结果】不同的生长因子培养的神经干细胞分化特性很不相同,EGF+bFGF培养的NSCs既可分化为神经元,又可分化为星形胶质细胞,其分化比率分别为38.8%和57.3%;bFGF培养的NSCs主要分化为神经元,比率达81.2%,未检测星形胶质细胞。【结论】不同神经生长因子扩增的神经干细胞分化特性很不相同,本实验为神经干细胞分化的研究提供了良好的实验平台。     

孕妇外周血与新生儿脐带血内皮祖细胞数量及功能分析

目的观察孕妇外周血和新生儿脐带血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)数量和功能变化的相关性。方法用流式细胞仪检测未怀孕妇女和早孕妇女外周血中内皮祖细胞的数量;用密度梯度离心法分离脐带血内皮祖细胞;用流式细胞仪检测脐带血内皮祖细胞的数量;脐带血内皮祖细胞经体外培养7d后,分组做增殖实验、迁移实验和粘附实验。结果妇女怀孕后循环中内皮祖细胞数量增加;外周血内皮祖细胞数量明显降低的孕妇所产新生儿的脐带血内皮祖细胞数量降低,增殖、迁移和粘附能力下降,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论怀孕后循环内皮祖细胞数量增加明显;孕妇外周血和新生儿脐带血内皮祖细胞的数量和功能变化有一定的相关性。     

皮肤血管瘤患儿脉冲激光治疗前后外周血生长因子的变化

目的 对比分析皮肤血管瘤患儿脉冲激光治疗前后外周血血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子(TGF-β1)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达变化.方法 选取皮肤血管瘤患儿73例(增生期35例、消退期17例、消退完成期21例)及非血管性皮肤病患儿22例(对照组),所有增生期皮肤血管瘤患儿均采用脉冲染料激光进行治疗;取外周静脉血,检测VEGF、TGF-β1及bFGF的mRNA表达水平及蛋白含量.结果 治疗前,增生期患儿的VEGF、TGF-β1及bFGF的mRNA表达水平和蛋白含量高于消退期,消退期高于消退完成期与对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05),消退完成期和对照组之间无统计学差异(P＞0.05).治疗后,增生期患儿VEGF、TGF-β1及bFGF的mRNA表达水平和蛋白含量均显著低于治疗前(P＜0.05).结论 脉冲染料激光可下调皮肤血管瘤患儿外周血VEGF、TGF-β1及bFGF的mRNA表达水平,从而减少各蛋白分泌,可能为其发挥治疗作用的重要机制之一.     

不同胎龄早产儿脐带血中内皮祖细胞水平及迁移能力研究

目的探讨不同胎龄早产儿脐带血中内皮祖细胞(EPC)水平及迁移能力的差异。 方法选择2014年10月至2015年7月,于四川大学华西第二医院、四川省医学科学院·四川省人民医院、成都市第一人民医院收集的47份新生儿的脐带血为研究对象。根据收集脐带血的新生儿胎龄,将其分为极早产儿组(胎龄为28～32孕周,n＝12),早产儿组(胎龄为32～36孕周,n＝20),以及足月儿组(胎龄>37孕周,n＝15)。将3组新生儿脐带血于诱导分化前,采用流式细胞仪检测脐带血中EPC水平;于诱导分化后,采用荧光探针标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-Ac-LDL)与异硫氰酸荧光素标记的荆豆凝集素(FITC-UEA-1)对单个核细胞进行孵育、染色,荧光显微镜下观察3组单个核细胞染色情况,判断EPC是否诱导分化成功。采用Transwell迁移实验,检测3组新生儿脐带血EPC迁移能力。统计学比较3组新生儿脐带血诱导分化前EPC水平,诱导分化后EPC迁移数量。本研究遵循的程序符合收集脐带血的上述3家医院伦理委员会所制定的伦理学标准,得到批准,脐带血获取前,均征得产妇的知情同意,并与之签署临床研究书知情同意书。3组收集脐带血的新生儿性别构成比、分娩方式及出生时Apgar评分等基本资料比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。 结果①流式细胞仪检测结果显示,脐带血诱导分化前,3组新生儿脐带血中,EPC水平比较,差异无统计学意义(F＝0.302,P＝0.654)。②Dil-Ac-LDL、FITC-UEA-1双荧光染色结果显示,3组新生儿脐带血中EPC均诱导分化成功,并且随着胎龄增加,单个核细胞诱导分化为EPC的数量逐渐增多。③Transwell迁移实验结果显示,极早产儿组、早产儿与足月儿组新生儿脐带血中EPC迁移数量分别为(13.8±21.7)个/视野、(18.8±12.4)个/视野与(39.9±23.8)个/视野,3组比较,差异有统计学意义(F＝3.826,P＝0.027)。其中,极早产儿组与早产儿组EPC迁移数量,均显著低于足月儿组,差异均有统计学意义(P＝0.016、0.035);极早产儿组EPC迁移数量,亦显著低于早产儿组,二者比较,差异亦有统计学意义(P＝0.042)。 结论随着胎龄增加,早产儿脐带血中EPC水平虽然无明显增高,但其迁移能力逐渐提高。     

塞来希布对胃癌细胞增殖抑制作用

目的 观察塞来希布对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)促进胃癌BGC-823细胞的增殖抑制影响,探讨塞来希布抑制肿瘤细胞增殖的机制.方法 不同浓度组的塞来希布作用于经25 ng/ml bFGF作用后的胃癌BGC-823细胞,用蛋白印迹(westem blot)分析法检测环氧化酶-2(COX-2)、核转录因子-KB(NF-kB)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达变化.结果 25 ng/ml bFGF通过PKB信号转导通路能增强胃癌BGC-823细胞中COX-2、NF-kB、VEGF蛋白的表达,对胃癌BGC-823细胞有促增殖作用,呈时间依赖性(P＜0.01).不同浓度组的塞来希布对经25 ng/ml bFGF作用的胃癌BGC-823细胞中COX-2、NF-kB、VEGF蛋白的表达均有抑制作用(P＜0.01).结论 塞来希布对bFGF促进BGC-823胃癌细胞的增殖有一定的抑制作用.     

血内皮祖细胞与一氧化氮在慢性阻塞性肺疾病并发肺动脉高压患者中的变化及意义

目的 观察慢性阻塞性肺疾病（COPD）并发肺动脉高压（PAH）病人外周血内皮祖细胞（EPCs）数量和功能及一氧化氮的变化,并探讨其在COPD并PAH发病中的作用.方法 选择本院住院的COPD病人60例,其中COPD并PAH（COPD＋PAH组）病人30例,COPD非PAH病人30例（COPD组）;正常对照20例（非COPD组）.用密度梯度离心法从外周血获取单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被培养板,培养7d后对贴壁细胞进行细胞化学分析.通过集落形成试验、改良的Boyden小室和黏附能力测定实验计数EPC的数量、测定EPC的迁移和黏附能力.用硝酸还原酶法比色检测入选患者血浆一氧化氮（NO）水平.结果 和正常对照组[（24.9±4.1）克隆形成数]及COPD组[（21.9±3.9）克隆形成数]相比,COPD＋PAH组[（14.2±3.5）克隆形成数]外周血EPC数量明显减少,黏附和迁移能力显著降低（F≥9.15,q≥3.49,P〈0.05）,且EPC数量及黏附、迁移能力与肺动脉压力呈负相关（r=-0.79、-0.85、-0.89,P〈0.01）.COPD＋PAH组患者NO水平[（43.6±4.8）ng/ml]明显低于对照组[（67.17±4.9）ng/ml]（P〈0.01）,NO浓度与循环EPCs数量及迁移能力呈正相关（r=0.77、0.71,P〈0.01）,与循环EPCs黏附能力无关.结论 COPD病人PAH的发生可能与循环EPCs数量减少、迁移和黏附能力降低有关,这种变化可能与血浆NO水平减少有关.     

Effects of lycopene on number and function of human peripheral blood endothelial progenitor cells cultivated with high glucose

BACKGROUND/OBJECTIVES

The objectives of this study were to investigate the effects of lycopene on the migration, adhesion, tube formation capacity, and p38 mitogen-activated protein kinase (p38 MAPK) activity of endothelial progenitor cells (EPCs) cultivated with high glucose (HG) and as well as explore the mechanism behind the protective effects of lycopene on peripheral blood EPCs.

MATERIALS/METHODS

Mononuclear cells were isolated from human peripheral blood by Ficoll density gradient centrifugation. EPCs were identified after induction of cellular differentiation. Third generation EPCs were incubated with HG (33 mmol/L) or 10, 30, and 50 µg/mL of lycopene plus HG. MTT assay and flow cytometry were performed to assess proliferation and apoptosis of EPCs. EPC migration was assessed by MTT assay with a modified boyden chamber. Adhesion assay was performed by replating EPCs on fibronectin-coated dishes, after which adherent cells were counted. In vitro vasculogenesis activity was assayed by Madrigal network formation assay. Western blotting was performed to analyze protein expression of both phosphorylated and non-phosphorylated p38 MAPK.

RESULTS

The proliferation, migration, adhesion, and in vitro vasculogenesis capacity of EPCs treated with 10, 30, and 50 µg/mL of lycopene plus HG were all significantly higher comapred to the HG group (P < 0.05). Rates of apoptosis were also significantly lower than that of the HG group. Moreover, lycopene blocked phosphorylation of p38 MAPK in EPCs (P < 0.05). To confirm the causal relationship between MAPK inhibition and the protective effects of lycopene against HG-induced cellular injury, we treated cells with SB203580, a phosphorylation inhibitor. The inhibitor significantly inhibited HG-induced EPC injury.

CONCLUSIONS

Lycopene promotes proliferation, migration, adhesion, and in vitro vasculogenesis capacity as well as reduces apoptosis of EPCs. Further, the underlying molecular mechanism of the protective effects of lycopene against HG-induced EPC injury may involve the p38 MAPK signal transduction pathway. Specifically, lycopene was shown to inhibit HG-induced EPC injury by inhibiting p38 MAPKs.     

视黄酸和硷性成纤维细胞生长因子对神经干细胞增殖和分化的影响

目的:研究视黄酸(RA)、硷性成纤维细胞生长因子(bFGF)对体外培养的神经干细胞(NSCs)分裂增殖和分化的作用。方法:分离培养新生SD大鼠大脑皮层NSCs,采用不同组合配方的培养液培养细胞,利用MTT法检测其对NSCs存活和增殖的影响;利用免疫荧光鉴定和分化细胞的分类计数法,判定bFGF、RA等对NSCs分化的影响。结果:MTT实验表明,bFGF组、bFGF+RA组以及RA组均能促进NSCs增殖,其中bFGF作用最明显,bFGF+RA次之,RA最弱。RA处理组经诱导分化后产生的神经元是bFGF组及对照组的2～3倍。结论:bFGF对NSCs增殖及较长期存活具有重要的作用,同时抑制其分化;RA可以部分抵消bFGF的促有丝分裂和分化抑制作用,并促进NSCs向神经元方向分化。     

外周血中Th17细胞和Treg细胞与子痫前期关系的meta分析

目的:系统评价外周血中Th17细胞及Treg细胞与子痫前期的相关性,探讨两者数量变化与子痫前期发病的关系。方法:检索PubMed、Web of science、中国期刊网全文数据库(CNKI)、万方数字化期刊数据库和维普数据库中关于外周血中Th17细胞及Treg细胞数量变化与子痫前期关系的病例对照研究。检索时限均为建库至2016年3月1日。同时手工检索郑州大学图书馆馆藏的7种妇产科杂志和8种免疫学杂志,并对纳入文献的参考文献进行追索。由两名评价员按照纳入及排除标准分别对文献进行筛选、资料提取和质量评价,采用RevMan 5.3软件对纳入文献的相关数据进行meta分析。结果:共纳入11篇文献,其中中文文献7篇,英文文献4篇,共计266例子痫前期孕妇和266例健康孕妇。11篇文献纽卡斯尔渥太华量表质量评分均≥5分,质量较优。meta分析结果显示,子痫前期孕妇外周血中Th17细胞数量高于健康孕妇(MD=1.41,95%CI0.71~2.10)(P0.0001);子痫前期孕妇外周血中Treg细胞数量低于健康孕妇(MD=-1.54,95%CI1.75~-1.33)(P0.00001)。结论:子痫前期孕妇外周血中Th17细胞数量增多以及Treg细胞数量减少与子痫前期的发病密切相关。     

HBsAg脉冲的树突状细胞对CIK细胞功能的影响

目的探讨HBsAg脉冲的树突状细胞(DC)对细胞因子诱导的杀伤细胞(C IK)增殖和杀伤作用的影响。方法选择慢性乙肝患者27例,分离外周血单个核细胞(PBMC),经HBsAg脉冲后,用3H-TdR掺入法检测该细胞对C IK细胞增殖的刺激作用,用乳酸脱氢酶释放法检测特异性C IK细胞对HepG2.2.15细胞的特异性杀伤作用。结果HBsAg脉冲的DC对C IK细胞的增殖具有刺激作用。由HBsAg脉冲的DC所诱导的特异性C IK细胞对HepG2.2.15细胞的特异性杀伤作用增强。结论HBsAg脉冲的DC可增强C IK细胞的杀伤活性。     

髓系抑制细胞、Th17细胞在哮喘患儿外周血中的表达

目的 分析髓系抑制细胞(MDSCs)及Th17细胞在哮喘患儿外周血中的表达情况和临床意义.方法 选取自贡市第一人民医院儿科2013年6月至2015年8月收治的120例哮喘患儿作为观察组,另外选择87例健康儿童作为对照组.应用流式细胞术检测MDSCs、Th17细胞在哮喘患儿外周血中的表达情况.结果 和对照组相比,观察组MDSCs占有核细胞的百分比和Th17细胞占单个核细胞的百分比都显著升高(Hc值分别为56.14、45.98,均P<0.05),差异具有统计学意义.结论 从MDSCs、Th17细胞在哮喘患儿外周血中的表达情况来看,它们可能参与了婴幼儿哮喘的发生与发展过程.     

大肠癌患者外周血自然杀伤细胞数量和活性的检测及意义

目的研究大肠癌患者外周血自然杀伤(NK)细胞的数量和活性的变化及意义。方法用流式细胞仪分析检测25例大肠癌、60例大肠息肉、30名健康者的外周血NK细胞的数量,并用酶标仪检测各组NK细胞的细胞毒活性。结果大肠癌患者的NK细胞数、NK细胞杀伤率[(1.1±0.7)×108、(26±7)%]均明显低于正常组[(2.8±1.3)×108、(66±9)%]、大肠息肉组[(2.6±1.2)×108、(62±7)%],差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论大肠癌患者外周血NK细胞数量及活性明显降低,提高大肠癌患者NK细胞的数量及活性可增强大肠癌的细胞过继免疫治疗。