红霉素发酵中连续补料的探讨

众所周知,在抗菌素发酵中菌丝生长和单位增长是密切相关的,没有足够量的菌丝,就没有高产抗菌素的物质基础,但菌丝陡长了,又影响抗菌素的产生。据报导在红霉素发酵中培养基里适于菌丝生长的氮源存在会抑制红霉素的合成,因此,要提高红霉素发酵产量,就必须严格控制各种发酵条件,特别是控制适宜的碳氮比,尽量做到既避免培养基中有过多的适于菌丝生长的氮源存在而又能维持菌丝正常代谢并在较长时间内菌丝量保持在适中的水平上。我们认为采用连续补料是解决这个问题的可行办法之一。本文报导红霉素发酵中将补料中的主要氮源—花生饼粉用A.S1398蛋白酶水解,取滤液,用连续流加代替一次性的大量补料的初步结果。     

柔红霉素的发酵研究

利用TLC、HPLC技术鉴定了柔红霉素产生菌SIPl 1482发酵过程中间产物ε—紫红霉酮、副产物13—双氢柔红霉素、13—双氢柔红霉酮,柔红霉酮、7—脱氧—13—双氢柔红霉酮和7—脱氧柔红霉酮等组份的变化。研究了外源添加试验,发酵条件包括发酵培养pH、温度及通气等条件对柔红霉素生物合成的影响,对副产物及中间体ε—紫红霉酮的转化。玉米粉—麸皮培养基能提高柔红霉素发酵效价,且降低发酵过程中副产物的生成。 在高氏一号合成培养基上不产柔红霉素的突变株SIPI 1482 NS-4通过加入玉米粉或玉米粉酸解液、或经纯化的酸解液组份1-B,能够使其恢复产生柔红霉素。在柔红霉素生产菌株SIPI1482和SIPIPF-25原来的玉米粉—麸皮培养基中添加一定浓度的玉米粉酸解液能够提高柔红霉素发酵效价10％和30％以上。     

玉米粉水解物作为红霉素发酵培养基的研究

研究了摇瓶试验中玉米粉水解物替代葡萄糖发酵红霉素的最佳培养基组成。用均匀设计法得到发酵基础培养基的最佳配比(wB，％)：玉米粉3．6，黄豆饼粉2．0，玉米浆0．23，碳酸钙0．5，淀粉0．6；用正交试验得到了优化的补混合料配比(％)：玉米粉4．5，黄豆饼粉2．0，硫酸铵1．0，酵母粉2．0；并得到了玉米粉的最适水解条件。30t发酵罐放大实验结果表明，用玉米粉水解物替代葡萄糖作碳源发酵红霉素，发酵单位提高5．8％，综合生产成本降低26．0％。     

响应曲面法优化柔红霉素发酵培养基

目的优化培养基,提高柔红霉素发酵效价。方法采用Plackett-Burman法、最陡爬坡试验和Box-Behnken设计,用摇瓶发酵进行实验,利用SAS软件进行二次回归分析。结果 Plackett-Burman设计证明麸质粉(A)、FeSO4·7H2O(B)和NaCl(C)对产量影响较大,通过最陡爬坡试验和响应曲面法得到柔红霉素发酵培养基预测模型为:Y=-16.09+13.55A+231.49B+5.20C-3.59A2+130.00AB-30774B2-0.37AC+102.50BC-1.84C2,从中获得柔红霉素发酵的最优配方为:麸质粉2.0%,FeSO4·7H2O 0.01%,NaCl 1.51%。1500L发酵罐中试放大结果表明:柔红霉素效价提高24%。结论使用响应曲面法可以较大幅度地提高柔红霉素发酵效价。     

几种原材料对红霉素发酵的影响

采用上海第三制药厂供给的红霉菌~#1-23,考察了几种原材料对红霉素发酵的影响,并以正交试验法优选了发酵培养基的配比。实验结果表明优质而新鲜的黄豆饼粉是提高发酵单位的重要保证,磷酸盐的用量以及硫酸镁对发酵有一定的影响,增加玉米浆、蚕蛹粉的量或加入吲哚丁酸可提高发酵单位。 试验在300及500ml摇瓶中进行,培养基装量为摇瓶体积的十分之一,摇床转速230转/分。首先采用正交试验表L_8(2~7)对黄豆饼粉、葡萄糖、淀粉、玉米浆、蚕蛹粉、KH_2PO_4及MgSO_4等7种原材料的配比进行优选,认为MgSO_4对红霉素发酵单位的影响最大,并通过进一步摇瓶试验证实发酵基础料中不宜配入MgSO_4但在发酵过程中适时适量地补入MgSO_4(如132小时左右补入0.1-     

抗生素链霉菌合成喷司他汀发酵工艺的关键原料研究

目的 通过抗生素链霉菌对发酵培养基和发酵工艺优化,对发酵过程中所用的关键原料进行了研究,提高喷司他汀的发酵产量。方法 考察和评估抗生素链霉菌发酵生产喷司他汀发酵培养基中的关键原料,研究关键材料的供应商及用量,提高喷司他汀产量,于5000L发酵罐上进行发酵工艺验证试验。结果 喷司他汀摇瓶发酵单位达232mg/L,结果较原始工艺提高了28%;在5000L发酵罐发酵单位达210mg/L,较原始工艺提高了74%。 结论 控制发酵培养基中的植物油种类、来源和用量,能有效提高喷司他汀的生物合成。     

紫外分光光度法快速测定庆大霉素含量在优化培养基中的应用

目的 在庆大霉素发酵培养基优化过程中,探索庆大霉素含量的快速测定方法.方法 以紫外分光光度法作为庆大霉素含量测定手段,采用正交试验方法,对紫色小单孢菌产庆大霉素的发酵培养基及发酵条件进行优化.结果 通过统计学分析,确定发酵培养基最优组合为:黄豆饼粉3.5%,CaCO,0.5%,淀粉5.5%,CoCl20.0006%.优化的发酵条件为:种龄60h,接种量12mL,装液量50mL/500mL摇瓶.在此优化条件下添加一定量的氨基酸培养6d,庆大霉素效价较优化前提高了85.5%.结论 本文用紫外分光光度法与微生物法测定庆大霉素发酵液效价产生的误差小于4%,该方法可以用于庆大霉素液体发酵培养基优化的快速筛选.     

均匀设计法优化咪唑立宾发酵培养基配方

本文采用均匀设计试验方法对咪唑立宾的发酵培养基配方进行优化,考察淀粉、麸质粉、黄豆饼粉和葡萄糖对其发酵效价和菌体生长量的影响,得到了四个因素的优化配比(淀粉1.8%,麸质粉1.5%,黄豆饼粉2.5%,葡萄糖0.6%),发酵效价比对照培养基提高约21.3%。     

豆粕的不同酶解液发酵苏云金芽孢杆菌对Zwittermicin A产量的影响

目的 研究培养基中豆粕所含蛋白质的不同存在形式对zwittermicin A产量的影响.方法 豆粕经过3种不同的复合蛋白酶(碱/中蛋白酶、中性蛋白酶、酸/中蛋白酶)处理后形成了蛋白质、寡肽和氨基酸含量均不同的3种酶解液,即DPI,DP2和DP3.以苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种(Bacillus thuringiensis sp.kurstaki D1-23)为菌种,分别将这3种豆粕酶解液作为其氮源进行发酵.结果 从含有DP1的培养基D-1 中获得的苏云金芽孢杆菌生物量最低;含有DP2的培养基D-2中的zwittermicin A含量最高;从含有DP3的培养基D-3中得到的生物量最大.结论 氮源的存在形式不同,对Bacillusthuringiensis sp.turstaki D1-23 菌体繁殖和其次级代谢产物zwittermicin A的合成有不同影响.     

青霉素产生菌产黄青霉绿色孢子菌种以棉子粉作为氮源的发酵试验

抗生素产量的高低与菌种及其发酵条件关系密切。本文介绍几株不同青霉菌菌株用棉子粉为有机氮源,不断改进培养基成份及培养条件,提高青霉素产量的试验研究结果。 一、低棉酚棉子粉的试制及其分析: 日人介绍用美国专利商品Pharmamedia作有机氮源发酵青霉素。我们试制了效果     

利福霉素产生菌发酵培养基的研究

本文考查了各种无机、有机氮源和黄豆饼粉酶解液对地中海诺卡氏菌(Nocardiamediterranei)C_(?)-8菌株生物合成利福霉素SV的影响。结果以蛋白胨、硝酸钾的效果为最佳。通过均匀设计的实验,获得了最佳发酵培养基的组成,使利福霉素SV的产量提高30%.     

春雷霉素生产工艺研究——Ⅲ.春雷霉素通氨发酵试验

本文报告采取通氨措施提高春雷霉素发酵单位的试验结果。 试验采用小金色放线菌(Actinomycesmicroaureus)48菌株,2吨发酵罐装量7001,通气量1:1.2～1.3,搅拌速度240转/分,发酵培养基配方为棉子油2.5％,黄豆饼粉4.0％、饴糖3.0％、蚕蛹粉1.0％、鱼粉0.5％、玉米浆0.5％、KH_2PO_40.05％、NaCl0.5％,pH自然。发酵过程中分别用甲醛法测定氨氮、氢氧化钾滴定法测定脂肪酸、杯碟法测定春雷霉素效价,并以微孔接种法向     

春雷霉素生产工艺研究——Ⅱ.春雷霉素发酵培养基配方改革

本文报告采用单因子筛选法改革春雷霉素发酵培养基配方,克服因培养基中含有大量的油脂和黄豆饼粉影响发酵液过滤的缺点,从而提高收率的试验结果。 试验采用小金色放线菌(Actinomycesmicroaureus)42菌株,黄豆饼粉-豆油种子培养基,旋转式摇床(240转/分)28℃发酵,摇瓶装量75ml/750ml摇瓶;2吨发酵罐装量7001。通气量1:1.2～1.3,搅拌速度240转/分。发酵中间分析分别用甲醛法测定氨氮、用氢氧化钾滴定法测定脂肪酸、以杯碟法测定春雷霉素效价。     

天龙粉酶解工艺中最佳用酶的研究

目的探索天龙粉经过4种蛋白酶酶解后对肺腺癌A549细胞株的抑制作用,筛选出最佳用酶。方法天龙粉分别经过胰蛋白酶、胃蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶酶解,采用茚三酮比色法测定蛋白质的水解度,同时以天龙粉水提物作为对照组,用甲基噻唑蓝(MTT)法测定4种酶水解物对肺腺癌A549的抑制率。结果对照组不同药物浓度对肺腺癌A549细胞无明显抑制作用;弹性蛋白酶、胰蛋白酶对天龙粉的水解度分别为77.50%、28.02%,给药组不同药物浓度对肺腺癌A549细胞的抑制率明显高于对照组;胰凝乳蛋白酶和胃蛋白酶的水解度分别为34.63%、72.80%,给药组不同药物浓度对肺腺癌A549细胞无明显抑制作用。结论天龙粉酶解工艺的最佳用酶是弹性蛋白酶,其次是胰蛋白酶。     

抗生素Jo717的鉴别

大环内酯类抗生素之间存在交叉耐药现象,我们据此建立了这类抗生素的筛选方法,初筛时使用耐红霉素及林肯霉素的两株金黄色葡萄球菌,经筛选数千株放线菌,发现数株放线菌产生的抗生素具有交叉耐药性,我们对其中一株Jo707进行了较深入的研究。 放线菌Jo717用葡萄糖、淀粉、陈、黄豆饼粉、氯化钠、碳酸钙等组成的培养基发酵,48小时以前以产生组分Ⅳ为主,48小时后以产生Ⅰ为主,最终发酵液用硅胶G薄层层析检测,(溶媒系统为氯仿:甲醇=95:5,     

黄豆饼粉对螺旋霉素合成的影响

黄豆饼粉是许多抗生素发酵培养基中较好的氮源,而螺旋霉菌如采用黄豆饼粉为主要氮源与生产用的鱼粉为主要氮源的培养基比较,则螺旋霉素合成有很显著的差异。为要提供工业生产抗生素的有用资料,我们对此作了进一步研究。 材料和方法 (-)菌种:我国土壤中分离到的螺旋霉素产生菌 Streptomyces spiramyceticusA.SP编号为——799-1941. (二)培养基 1.孢子斜面培养基:麦敖6％,琼脂2％ 2.种子培养基:黄豆饼粉25％,淀粉4％,NaCl0.4％,CaCO_30.5％,自来水,自然pH,500毫升三角瓶装量100毫升。 3.发酵培养基:     

均匀设计法优化柔红霉素发酵培养基

目的优化培养基,提高柔红霉素发酵效价。方法采用U1*0(108)均匀设计表进行均匀设计,用摇瓶发酵进行实验。结果使柔红霉素效价提高23%。结论使用均匀设计的方法可以较大幅度的提高柔红霉素发酵效价。     

产溶葡球菌酶工程菌的发酵工艺

对溶葡球菌酶生产菌Bacillus Subtilis-0044的发酵条件和工艺作了进一步研究和改进，该菌的摇瓶产酶呆达550u/ml，在5L自动发酵罐上达680u/ml，且发酵周期大大缩短，仅5-6小时，发酵产率比原工艺提高一倍以上，该工艺全部使用国产常用原料，为产业化生产提供便利，在研究中发现溶解氧对培养过程非常重要；pH对产酶没有明显影响。发酵中期流加葡萄糖可抑制蛋白酶对产物酶的降解作用。     

林可霉素发酵生产过程中空气流量控制的研究

本文阐述了抗生素发酵生产过程中影响培养液溶解氧的主要因素,并通过实验探讨了林可霉素生产过程中发酵前、中、后期溶解氧的变化规律。实验结果应用于生产实际,既提高了发酵放罐总效价,又节约了能源。     

蜈蚣粉酶解工艺最佳用酶的初步筛选

目的分别利用胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶对蜈蚣粉进行酶解并选取最佳用酶来制备抗肿瘤多肽。方法利用4种酶对蜈蚣粉进行酶解,采用MTT体外抗肿瘤实验方法,以蛋白质的水解度及酶解提取液对乳腺癌MCF-7细胞的抑制率为指标,同时以蜈蚣粉的水溶性蛋白质含量为标准,评价4种酶对蜈蚣粉的酶解效果并筛选出最佳用酶。结果胃蛋白酶对蜈蚣粉的水解度为10.44%;胰蛋白酶对蜈蚣粉的水解度为28.29%,在0.125 mg·m L~(-1)及0.25 mg·m L~(-1)的较小浓度下对乳腺癌MCF-7细胞的抑制率低于对照组,但随浓度的增大抑制率逐渐增大,在0.5~2 mg·m L~(-1)浓度时,胰蛋白酶在4种酶中达到最大抑瘤效果;胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶的水解度分别为50.45%、44.16%,当浓度>0.5 mg·m L~(-1)时其对乳腺癌MCF-7细胞的抑制率高于对照组,在浓度为0.5mg·m L~(-1)时抑制率分别为2.86%、36.37%,且随浓度增大抑制率增大。结论蜈蚣粉酶解工艺最佳用酶为胰蛋白酶,其次是胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶,而胃蛋白酶活性较低可以去除。