亮氨酸脑啡肽、胆囊收缩素在海洛因戒断、复吸大鼠脑VTA、NAc区神经元的表达

目的:观察海洛因戒断、复吸大鼠脑VTA、NAc内亮氨酸脑啡肽(leucine-enkephalin,Leu-Enk)和胆囊收缩素(cholecystokinin,CCK)的变化,探讨CCK和内源性阿片肽在海洛因戒断、脱毒和复吸过程中的作用及其相互关系。方法:正常雄性SD大鼠63只,随机分为实验组、盐水对照组和正常对照组。实验组大鼠又分海洛因戒断组、美沙酮脱毒组和海洛因复吸组。取实验各组及对照组大鼠脑组织,定位VTA和NAc,用免疫组化SABC法显示VTA,NAc区Leu-Enk,CCK阳性细胞并用图像分析法测定平均光密度值。结果:(1)Leu-Enk在实验各组大鼠VTA和NAc内的表达与对照组比较均显著降低(P<0.05)。(2)与对照组比较,海洛因戒断、复吸组大鼠VTA和NAc中CCK阳性细胞免疫反应增强,差异有显著性(P<0.05);经美沙酮脱毒后恢复正常。结论:海洛因戒断造成的机体应激及阿片类药物均抑制了VTA和NAc中Leu-Enk的分泌;CCK分泌增加,参与了对脑神经的保护。     

海洛因依赖对大鼠中脑腹侧被盖区和伏隔核内DβH和CCK表达的影响

目的:探讨海洛因依赖对大鼠中脑腹侧被盖区(VTA)和伏隔核(NAc)神经元,DβH(dopamine-beta-hydroxylase)和CCK(cholecystokinin)表达的影响,旨在探讨大脑在海洛因依赖过程中的自我调节多巴胺的释放和保护机制。方法:成年雄性SD大鼠55只,随机分为正常对照组(NCG)5只,实验性海洛因依赖组(HDG)及生理盐水对照组(SCG)各25只。建立海洛因依赖模型,并分别于第10、17、24、31、38 d取脑组织,用免疫组织化学SABC法检测VTA、NAc区内表达DβH和CCK的阳性细胞,并用图像分析法测定其平均光密度值。结果:VTA、NAc区内DβH和CCK阳性细胞免疫反应产物呈棕黄色颗粒状,定位于胞质内。与NCG组和SCG组比较,HDG组在不同时间点VTA、NAc区内的DβH阳性细胞免疫反应强度减弱,染色变浅,而CCK阳性细胞免疫反应强度明显增强,染色变深。结论:在海洛因依赖期间,CCK表达增强、DβH的活性被抑制可能是VTA、NAc区多巴胺升高的原因之一,同时CCK的分泌增加可能是脑的自我保护机制。     

TH和DβH在海洛因戒断、复吸大鼠脑VTA、NAc区神经元的表达

目的　观察海洛因戒断、复吸对大鼠脑VTA、NAc神经元表达酪氨酸羟化酶（TH）和多巴胺β羟化酶（DβH）的影响,探讨多巴胺（DA）和去甲肾上腺素（NE）在海洛因戒断、复吸过程中的调节机制及相互关系。 方法　将正常雄性SD大鼠63只,随机分为实验组21只、盐水对照组21只和正常对照组　21只,实验组大鼠又分海洛因戒断组、美沙酮脱毒组和海洛因复吸组。取正常对照组、盐水对照组及实验各组大鼠的脑组织,用免疫组化SABC法显示VTA、NAc区TH、DβH阳性神经元并用图像分析法测定平均光密度值。 结果　与正常及盐水对照组比较：（1）海洛因戒断组和复吸组大鼠VTA、NAc内TH表达均增强,经美沙酮脱毒之后恢复正常;（2）DβH的表达在戒断组大鼠VTA、NAc内有所增强,但在脱毒组和复吸组均减弱。 结论　在海洛因戒断、脱毒和复吸期间,VTA、NAc区神经元的DA和NE相互调节,是产生奖赏效应的重要神经递质。     

Effect of heroin dependence on 5-hydroxytryptamine, somatostatin and substance P immunoreactive cells in the rat ileum

目的:探讨海洛因依赖对大鼠回肠5-羟色胺(5-HT)、生长抑素(SS)和P物质(SP)免疫反应(IR)细胞的影响.方法:选取成年SD大鼠,分为正常对照组、盐水对照组和海洛因依赖组,建立大鼠海洛因依赖模型,取回肠组织用免疫组织化学SABC法及图像分析法进行研究.结果:与正常及盐水对照组比较,海洛因依赖组大鼠回肠5-HT免疫反应细胞增多,SS及SP免疫反应细胞数无明显变化.5-HT、SS-、SP-IR细胞免疫显色增强,图像分析显示海洛因依赖期间大鼠回肠内5-HT、SS及SP-IR细胞的平均灰度值均低于正常及盐水对照组.结论:海洛因依赖期间,回肠5-HT、SS和SP-IR细胞的5-HT、SS和SP表达增加.     

5-HT、生长抑素及 P物质在海洛因依赖大鼠直肠的定位和表达

目的 探讨海洛因依赖期间大鼠直肠内5-HT、生长抑素(SS)和P物质(SP)免疫反应(IR)细胞的形态学改变.方法 选取成年SD大鼠,分为海洛因依赖组(30只)、盐水对照组(30只)和正常对照组(6只),皮下注射海洛因建立大鼠海洛因依赖模型.取直肠组织用免疫组织化学SABC法及图像分析法进行研究.结果 与正常组及盐水对照组比较,海洛因依赖组大鼠直肠5-HT、SS及SP免疫反应细胞的细胞数均增多(P<0.05). 5-HT、SS、 SP-IR细胞免疫染色增强,图像分析显示,海洛因依赖期间大鼠直肠内5-HT、SS及SP 免疫反应细胞的平均灰度值均低于正常组及盐水对照组(P<0.05);其中5-HT、SS-IR细胞以31d时间组最低(P<0.05),SP-IR细胞以38d时间组最低(P<0.01).结论 海洛因依赖期间直肠5-HT、SS和SP-IR细胞的细胞数及平均灰度值均发生变化,提示5-HT、SS和SP合成和分泌增多.     

P>海洛因依赖对大鼠中脑腹侧被盖区、伏隔核神经元P物质和神经肽Y表达的影响 /P>

目的 探讨海洛因依赖对大鼠中脑腹侧被盖区（VTA）、伏隔核（NAc）神经元P物质（SP）、神经肽Y（NPY）表达的影响,为进一步揭示海洛因依赖的中枢机制提供重要的原位形态学资料。 方法 成年雄性SD大鼠55只,随机分为海洛因依赖组、生理盐水对照组及正常对照组。建立海洛因依赖模型,并分别于第10、17、24、31、38天取脑组织,免疫组织化学SABC法显示VTA、NAc区神经元SP、NPY免疫反应细胞并用图像分析法测定平均灰度值。结果 海洛因依赖组VTA、 NAc区的SP、NPY免疫反应细胞与生理盐水及正常对照组比较,免疫反应强度明显减弱、染色变浅。平均灰度值测定,海洛因依赖组各时间点大鼠VTA、NAc区 的SP、NPY免疫反应细胞平均灰度值均高于正常对照组及生理盐水对照组,差异有统计学意义（P ＜0.05）。结论 实验结果提示,海洛因依赖使VTA、NAc区SP、NPY的分泌受到抑制,可能导致内源性阿片肽的分泌受影响,SP、NPY可能是药物依赖形成机制中的关键信号分子。     

海洛因依赖对大鼠垂体促肾上腺皮质激素阳性细胞和血清皮质醇的影响

目的探讨海洛因依赖对大鼠垂体远侧部促肾上腺皮质激素细胞表达促肾上腺皮质激素(ACTH)的影响以及血清皮质醇(COR)的改变,并探讨引起变化的可能机制。方法成年雄性SD大鼠55只,随机分为正常对照组、盐水对照组及海洛因依赖组。皮下注射海洛因,建立海洛因依赖大鼠模型,分别于模型建立的第10、17、24、31、38天取垂体组织。应用免疫组织化学SABC法、图像分析法及放射免疫方法进行研究。结果与正常对照组和盐水对照组比较,海洛因依赖组大鼠垂体远侧部ACTH阳性细胞免疫反应明显减弱,与正常及盐水对照组比较有显著性差异;图像分析显示,海洛因依赖组ACTH阳性细胞的平均灰度值增高(P0.05〉。放射免疫法测定结果显示,海洛因依赖组血清COR含量较正常对照组明显降低,经统计处理,差异有统计学意义(P0.05)。结论在海洛因依赖期间,垂体远侧部ACTH阳性细胞表达减少,血清COR含量降低,提示在大鼠海洛因依赖期间,垂体-肾上腺轴功能受到抑制。     

海洛因依赖对大鼠胃窦胃泌素、生长抑素阳性细胞的影响

目的 探讨海洛因依赖对大鼠胃窦胃泌素(Gas)、生长抑素(SS)阳性细胞的影响,以及Gas、SS在海洛因依赖时的可能作用.方法 应用免疫组织化学SABC法和图像分析技术.结果 1.与正常组和盐水对照组相比,海洛因依赖大鼠胃窦内的Gas阳性细胞数量增加(P＜0.05),染色强度随依赖时间逐渐增强,平均灰度值明显低于空白及盐水对照组(P＜0.05),且随依赖时间的延长呈下降的趋势,38d时最低.2.海洛因依赖组大鼠胃窦SS阳性细胞染色强度增强,细胞数量显著高于空白和盐水对照组(P＜0.05),平均灰度值低于空白及盐水对照组(P＜0.05).结论 大鼠胃窦Gas、SS阳性细胞可能通过增加细胞数量和增加Gas、SS的合成来参与大鼠海洛因依赖的调节过程.     

海洛因依赖大鼠十二指肠胃泌素和生长抑素免疫反应阳性细胞免疫组织化学和形态计量

目的:探讨海洛因依赖对大鼠十二指肠胃泌素(Gas)、生长抑素(SS)免疫反应(IR)细胞形态学和功能改变的影响.方法:应用免疫组织化学SABC法.结果:与正常对照组及盐水对照组比较,Gas-IR、 SS-IR细胞免疫组织化学显色在海洛因依赖组均增强,阳性细胞数增多;图像分析结果表明,海洛因依赖组Gas-IR、 SS-IR细胞的平均灰度值较正常和盐水对照组显著降低,以24d组最低.结论:大鼠十二指肠中的Gas-IR、 SS-IR细胞通过细胞数的增加以及增强合成、分泌Gas、 SS的方式,参与海洛因依赖期间大鼠机体内的调节过程.     

海洛因依赖大鼠VTA区NMDA受体介导的多巴胺神经元膜电流的变化

目的:探讨海洛因依赖大鼠中脑腹侧被盖区(vental tegmental area,VTA)NMDA受体介导的多巴胺(DA)神经元膜电流的变化。方法:20只SD雄性大鼠随机分成对照组、海洛因依赖组(以下称依赖组)。按剂量递增原则皮下注射给予海洛因,纳络酮催促戒断,确定海洛因依赖模型的建立。免疫组织化学方法标记VTA区DA神经元酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH),脑片膜片钳技术记录其NMDA受体特异性激动剂N-methyl-D-aspartate(NMDA)介导的膜电流。结果:建立的海洛因依赖模型组大鼠催促戒断症状的评分符合成瘾模型评分标准;海洛因依赖组VTA区DA神经元TH表达上调(P<0.05);海洛因依赖组VTA区NMDA受体介导的DA神经元膜电流减小(P<0.05)。结论:海洛因依赖组VTA区DA神经元TH反应增强,神经元的兴奋性受到抑制。     

海洛因作用不同时程诱导大鼠CPP及海洛因依赖大鼠VTA区CREB磷酸化研究

目的:观察不同时程注射海洛因对诱导大鼠条件位置偏爱(conditioned place preference,CPP)行为的影响及其海洛因依赖后大鼠VTA区CREB磷酸化的研究。方法:雄性SD大鼠32只(体重180～220 g),随机分为四组:海洛因依赖8 d组及其对照组,海洛因依赖10 d组及其对照组,每组8只。海洛因依赖组连续腹膜腔注射海洛因每日10 mg/kg,8 d和10 d,对照组注射等量的生理盐水,于训练结束的次日进行CPP检测。模型建立成功后,8 d组大鼠采用Western blot检测VTA区CREB磷酸化的表达。结果:(1)与相应的对照组比较,每日10mg/kg海洛因8、10 d组在伴药箱停留时间均明显延长(P<0.05),而两组大鼠在伴药箱停留时间比较差异无统计学意义。但8 d组更为省药、省时且大鼠无死亡。(2)与对照组比较,海洛因依赖8 d组大鼠VTA区CREB蛋白磷酸化增多(P<0.05)。结论:(1)两种时程均可成功建立大鼠CPP模型,但每日10 mg/kg海洛因8 d组建立的模型更为合适。(2)慢性海洛因给药大鼠VTA区CREB蛋白磷酸化增多。     

海洛因戒断、复吸对大鼠十二指肠5-羟色胺、胃泌素、生长抑素免疫反应细胞表达的影响

目的 研究海洛因戒断、复吸期间5-羟色胺（5-HT）、胃泌素(Gas)、生长抑素（SS）在大鼠十二指肠表达的变化,探讨十二指肠5-HT、Gas、SS在海洛因戒断和复吸期间的可能作用。 方法 正常雄性SD大鼠35只,随机分为实验组15只、生理盐水对照组15只和正常对照组5只,实验组大鼠又分戒断组（HAG）、脱毒治疗组（MDG）、复吸组(HRG)。取正常对照组、生理盐水对照组及实验各组大鼠的十二指肠组织,采用免疫组织化学SABC法、细胞计数及图像分析方法进行研究。 结果 与正常对照组及生理盐水对照组比较,戒断及复吸组大鼠十二指肠内的5-HT、Gas、SS免疫反应细胞数量均增加（P<0.05）,图像分析测得5-HT、Gas、SS免疫反应细胞的平均灰度值均低于正常及生理盐水对照组（P<0.05）。脱毒治疗组与正常及生理盐水对照组比较,3种免疫反应细胞的计数及图像分析变化差异均无统计学意义（P﹥0.05）。 结论 在海洛因戒断、复吸期间,5-HT、Gas、SS在十二指肠表达增强,3种免疫反应细胞合成和分泌5-HT、Gas、SS增多,提示机体十二指肠内3种生物活性物质均参与机体对海洛因损伤的调节;用美沙酮脱毒治疗后5-HT、Gas、SS的表达接近正常,提示经美沙酮治疗,海洛因依赖大鼠十二指肠的5-HT、Gas、SS含量变化是可逆的。     

Role of acetylcholine transmission in nucleus accumbens and ventral tegmental area in heroin-seeking induced by conditioned cues

The involvement of cholinergic transmission in heroin self-administration and the reinstatement of heroin-seeking was examined in rats trained to nose-poke for i.v. heroin. Systemic treatment with physostigmine, an inhibitor of acetylcholinesterase, modestly reduced the acquisition and rate of heroin self-administration, and this suppression of heroin intake was reversed by pretreatment with scopolamine but not by mecamylamine. Following 10-14 days of self-administration, rats were left in the home environment for 14 days. Subsequently, rats were evaluated for extinction of nose-pokes during the first hour after being returned to the self-administration apparatus. One hour later a conditioned stimulus (house light, light in the nose-poke hole, sound of the infusion pump) was presented to initiate cue-induced reinstatement. Physostigmine produced a dose-dependent inhibition of cue-induced reinstatement, but only the dose of 0.5 mg/kg significantly decreased nose-poke responding in the extinction test. Chronic treatment with physostigmine (0.1 mg/kg) did not impair performance during acquisition of heroin self-administration. However, during a subsequent reinstatement test conducted in the absence of physostigmine pretreatment, heroin seeking was significantly below that of rats chronically pretreated with saline. To evaluate brain regions mediating the effects of systemic drug treatment on reinstatement, physostigmine was microinjected into the nucleus accumbens (NAc) or ventral tegmental area (VTA). Microinjection of physostigmine into the NAc prior to presenting conditioned cues inhibited the reinstatement of heroin-seeking, without affecting extinction responding. In contrast, microinjection of physostigmine into the VTA augmented the reinstatement induced by conditioned cues and extinction responding. Inactivation of either NAc or VTA by microinjecting tetrodotoxin blocked both extinction responding and cue-induced reinstatement. These data demonstrate that cholinergic transmission influences heroin self-administration and reinstatement. Moreover, cue-induced reinstatement was inhibited by physostigmine in the NAc and potentiated by cholinergic stimulation in the VTA.     

电针对海洛因成瘾大鼠PAG内细胞凋亡和caspase-3表达的影响

目的:研究电针对海洛因成瘾大鼠中脑导水管周围灰质(periaqueductal gray,PAG)的细胞凋亡及caspase-3表达的影响。方法:大鼠被随机分为四组:正常对照组、海洛因成瘾组(成瘾组)、海洛因戒断组(戒断组)和海洛因戒断针刺组(针刺组)。按给药剂量逐日递增的原则皮下注射海洛因建立成瘾模型;针刺组大鼠成瘾后用韩氏穴位神经刺激器(HNAS)针刺双侧"足三里"和"三阴交"穴位,30min,每日1次,连续5d;免疫组织化学染色法测caspase-3的表达;流式细胞仪测细胞凋亡情况。结果:(1)与正常组相比,成瘾组、戒断组和针刺组大鼠PAG内的细胞凋亡和caspase-3的表达均增多(P0.05);(2)针刺组与成瘾组和戒断组相比,针刺组PAG内的细胞凋亡和caspase-3的表达均减少(P0.05)。结论:(1)海洛因成瘾导致大鼠PAG内细胞凋亡和caspase-3的表达增多;(2)HANS针刺对海洛因成瘾引起的大鼠细胞凋亡有抑制作用,并下调大鼠PAG内caspase-3的表达。     

海洛因依赖对大鼠胃窦生长抑素和白细胞介素2阳性细胞表达的影响

目的:探讨海洛因依赖对大鼠胃窦生长抑素(SS)、白细胞介素2(IL-2)阳性细胞表达的影响。方法:应用免疫组织化学SABC法及图像分析技术。结果:海洛因依赖组大鼠胃窦SS阳性细胞染色强度增强,细胞数量显著高于空白和盐水对照组,平均灰度值低于正常及盐水对照组;IL-2阳性细胞的数量及染色强度显著降低,平均灰度值升高。结论:大鼠胃窦中SS、IL-2阳性细胞通过形态数量及细胞内的SS、IL-2的含量改变参与了在海洛因依赖期间机体的调节过程。