应用PCR技术特异扩增抗HFRS病毒血凝素McAb8F8V_H基因的克隆和序列分析

自本室近期克隆出抗肾综合征出血热病毒(HFRSV)血凝素单克隆抗体(McAb)3 G1重链可变区(V_H)基因,并进行了表达和鉴定后;我们又选用对野鼠型和家鼠型HFRSV感染鼠均具有保护作用的抗血凝素McAb 8F8株,采用聚合酶链反应(PCR)技术,克隆了8F8 McAb V_H基因,以期制备出对家/野鼠HFRSV感染均     

抗HFRS病毒McAb 1A8可变区基因的克隆及序列分析

抗ＨＦＲＳ病毒ＭｃＡｂ１Ａ８可变区基因的克隆及序列分析阎岩徐志凯姜绍谆尹文吴兴安王海涛薛小平（第四军医大学微生物学教研室，西安７１００３２）基因工程小分子抗体由于分子小，免疫原性弱，穿透力强，易于抵达抗原“峡谷”位点，因此对于研究病毒及肿瘤分子的结构...     

抗家鼠型HFRS病毒McAb13E2VH基因的克隆及序列分析

从分泌高亲和力抗家鼠型ＨＦＲＳ病毒型特异性ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系１３Ｅ２中提取细胞总ＲＮＡ，经逆转录合成ＣＤＮＡ，并以之为模板，用特异性引物进行ＰＣＲ，扩增出约３６０ｂｐ产物，将之克隆入ＰＵＣ１８质粒中。序列分析表明，所克隆的基因符合编码小鼠抗体ＶＨ的特征。１３Ｅ２ＶＨ基因由２６６个ｂｐ组成，编码１２２个氨基酸，隶属于小鼠重链ⅡＡ亚组。     

单克隆抗体亲和层析法纯化HFRS病毒血凝素抗原的研究

用蔗糖-丙酮法从HFRS病毒陈株感染的乳小白鼠鼠脑中提取粗制血凝素,将此粗制血凝素通过抗HFRS病毒血凝素McAb 3G_1与Sepharosc 4B偶联的免疫吸附柱,获得纯化HFRS病毒血凝素抗原具有较高的血凝滴度和良好的免疫原性。用SDS-PAGE和Western-blot技术分析该纯化的血凝素抗原,并与同法纯化的正常鼠脑抗原比较,证明该特异性血凝素抗原分子量为5×10~4道尔顿。用2株抗HFRS病毒以及10株抗HFRS病毒血凝素McAb,以ELISA阻断试验分析纯化50K血凝素,结果有10株McAb可阻断McAb3G_1与其结合,其抗原决定簇之间有部分相同或童叠,提示这些具有不同特性的抗原决定簇确实位于同一蛋白上。以上结果表明,该50K血凝素蛋白特性及结构均较复杂,尚待进一步研究。     

单克隆抗体亲和层析法纯化HFRS病毒血凝素抗原的初步研究

用蔗糖-丙酮法从HFRS病毒陈栋感染的乳小白鼠鼠脑中提取粗制血凝素,将此粗制血凝素通过抗HFRS病毒血凝素McAb 3G_1与Sepharose 4B偶联的免疫吸附柱,获得初步纯化的HFRS病毒血凝素抗原,经鉴定具有较高的血凝滴度和较好的免疫原性。用SDS-PAGE和Wes-tern-blot技木分析该纯化的血凝素抗原,并与同法纯化的正常鼠脑抗原比较,证明该特异性血凝素抗原分子量为5×10~4道尔顿。用2株抗HFRS病毒以及10株抗HFRS病毒血凝素McAb,以ELISA阻断试验分析纯化50K血凝素,结果有10株McAb可阻断McAb3 G_1与其结合,其抗原决定簇之间有部分相同或重叠,提示这些具有不同特性的抗原决定簇确实位于同一结构蛋白上。以上结果表明,该50k血凝素蛋白特性及结构均较复杂,尚待进一步研究。     

半套式PCR扩增人抗HFRS病毒抗体基因及Fd段基因的克隆和序列分析

从肾综合征出血热恢复期患者外周血淋巴细胞（ＰＢＬ） 中提取细胞总ＲＮＡ, 反转录成ｃＤＮＡ 。以之为模板,用半套式聚合酶链反应（ＰＣＲ） 扩增人Ｉｇ Ｇ 抗体Ｆｄ 段及轻链基因,并将Ｆｄ 段基因克隆入噬菌体载体ｐｃｏ ｍ ｂ３ ;经酶切鉴定后,再亚克隆入ｐＧＥＭ７ｚｆ ,筛选阳性克隆测序。经计算机分析,Ｆｄ 段基因的全长为６３９ｂｐ ,编码２１３ 个氨基酸,属于人Ｉｇ Ｇ２ 亚类。     

半套式PCR扩增人抗HFRS病毒抗体基因及Fb段基因的克隆和序列分析

从肾综合征出血热恢复期患者外周血淋巴细胞(PBL)中提取细胞总RNA，反转录成cDNA。以之为模板，用半套式聚合酶链反应(PCR)扩增人IgG抗体Fd段及轻链基因，并将Fd段基因克隆入噬菌体载体pcomb3；经酶切鉴定后，再亚克隆入pGEM7zf，筛选阳性克隆测序。经计算机分析，Fd段基因的全长为639bp，编码213个氨基酸，属于人IgG2亚类。     

抗HFRS病毒鼠源性McAb在家兔体内的动态变化及抗鼠IgG…

本文观察了抗ＨＦＲＳ病毒鼠源性ＭｃＡｂ在家兔体内的动态变化及抗鼠ＩｇＧ抗体产生的情况，结果表明，ＭｃＡｂ经静脉注射后３０ｍｉｎ在血液循环中维持较高浓度１ｄ时已明显下降，３￣６ｄ多数已不能测出，兔抗鼠ＩｇＧ抗体的产生时间和滴度有较明显的个体差异性，多数家兔产生于注射ＭｄＡｂ后和第３￣６ｄ，第６￣１０ｄ达到高峰，３０￣５０ｄ内消失。     

半套式PCR扩增人抗HFRS病毒抗体基因及Fd段基因的克隆？…

从肾综合征出血热恢复期患者外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）中提取细胞总ＲＮＡ，反转录成ｃＤＮＡ。以之为模板，用半套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增人ＩｇＧ抗体Ｆｄ段及轻链基因，并将Ｆｄ段基因克隆入噬菌体载体ｐｃｏｍｂ３；经酶切鉴定后，再亚克隆入ｐＧＥＭ７ｚｆ，筛选阳性克隆测序。经计算机分析，Ｆｄ段基因的全长为６３９ｂｐ，编码２１３个氨基酸，属于人ＩｇＧ２亚类。     

双McAb-ELISA夹心法检测HFRS病毒血凝素抗原的实验研究

作者采用抗HFRS病毒血凝素McAb和HRP标记的同一种McAb,建立了检验HFRS病毒血凝素抗原的双McAb-ELISA夹心法。经取代试验和抗原阻断试验均证明本法具有高度特异性,重复性也良好。用本法和血凝试验平行地检测了10批粗提HFRS陈株感染鼠脑的血凝素抗原,检出率分别为100％和70％,而前法滴度明显高于后法(GMT 1:506和1:26),有显著性差异(P<0.01)。用本法检验了10种从不同疫区不同宿主分离的HFRS病毒株的感染鼠脑或Vero—E6培养上清,结果均为阳性,虽血凝素抗原滴度高低不一,却再次说明不同HFRS病毒株血凝素之间有群共同性,因此本法在HFRS的临床诊断,流行病学监测,疫苗效价鉴定中都有实用价值,可取代血凝试验。     

抗CD8单抗轻,重链可变区基因的克隆和序列分析

采用反转录－ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）法，从分泌特异性抗ＣＤ８单抗的杂交瘤细胞中扩增出该抗体轻，重链可变区（ＶＨ，ＶＬ）基因，并测定了其序列，经计算机分析，ＶＨ和ＶＬ基因均为新发现的基因序列，符合功能重排的鼠抗体可变区基因特征。     

抗HFRS病毒McAb制剂对大白鼠呼吸和循环系统影响的初步观察

抗ＨＦＲＳ病毒ＭｃＡｂ制剂对大白鼠呼吸和循环系统影响的初步观察薛小平，徐志凯，王海涛，尹文，阎岩，吴兴安（西安第四军医大学微生物学教研室，西安７１００３２）鼠源性单克隆抗体（ＭｃＡｂ）应用于肿瘤等疾病的体内诊断和治疗国内外文献均有报道，但用于体内抗病...     

抗禽流感病毒H7亚型血凝素特异性单克隆抗体的研制

目的:研制禽流感病毒H7亚型血凝素特异性单克隆抗体(mAb)。方法:以H7亚型禽流感诊断抗原为免疫原免疫6～8周雌性BALB/c小鼠,末次加强免疫后取其脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag-14进行融合。通过HA和HI试验筛选阳性克隆。应用HI试验和Western blot试验测定mAb的反应性和特异性。结果:共获得4株分泌抗AIVH7亚型HAmAbs的杂交瘤细胞株,分别命名为2E2、2A4、5F5、7G5。这些mAb的腹水HI效价在5×27～5×211之间,其中2E2属于IgM亚类,2A4属于IgG1亚类,5F5、7G5属于IgG2a亚类。Western blot分析结果显示,4株AIVH7亚型HAmAb能与AIVH7蛋白在Mr75000处反应,但不与新城疫病毒(NDV)蛋白发生反应,表明这些mAb能特异性识别AIVH7亚型HA。mAbHI反应性测定结果表明:4株mAb中,2E2、5F5、7G5只与H7亚型AIV发生特异性HI反应,而不与其他亚型AIV以及NDV、传染性支气管炎病毒(IBV)反应,显示出良好的特异性;而2A4除了与H7亚型AIV反应外,还与H15N8标准株发生低水平交叉反应。结论:这些mAb不仅为H7亚型AIV的HA结构分析提供了工具,而且为建立快速廉价的H7亚型禽流感诊断方法提供了核心试剂。     

抗肾综合征出血热病毒血凝素单克隆抗体8F8轻链可变区基因的克隆及序列分析

本文用基因工程技术,从8F8杂交瘤细胞提取总RNA,逆转录合成cDNA,应用PCR快速克隆出8F8单抗的轻链可变区基因V_L,并对8F8单抗V_L的核苷酸序列和相应编码的氨基酸序列进行了测定和推导。 1 杂交瘤细胞系 抗HFRSV血凝素McAb 8F8株培养于RPMI-1640培养液(含20％小牛血清)中。     

抗HFRS病毒McAb制剂对动物的致敏,毒性和血管刺激性实验

抗ＨＦＲＳ病毒ＭｃＡｂ制剂对动物的致敏、毒性和血管刺激性实验薛小平，徐志凯，王海涛，尹文，晏培松，阎岩，吴兴安（西安第四军医大学微生物学教研室，西安第四军医大学病理学教研室，西安７１００３２）肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）是一种急性病毒性传染病，迄今尚无...     

抗H9亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的 :制备抗禽流感病毒 (AIV)H9亚型血凝素蛋白的单克隆抗体 (mAb)。方法 :以AIVH9亚型油乳剂灭活疫苗作为免疫原 ,免疫 8wk龄BALB/c小鼠。采用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗AIVH9亚型血凝素蛋白的mAb ;采用ELISA和血凝抑制试验(HI)检测腹水mAb的效价 ;采用ELISA、HI、免疫荧光染色 (IF)及Westernblot鉴定mAb的特异性。结果 :获得 3株可稳定分泌特异性mAb的杂交瘤细胞株 2A3、2H1和 1C8,其腹水mAb的ELISA效价依次为 1× 10 7、1× 10 5和 5× 10 6,血凝抑制效价为 1× 2 8～ 1× 2 13 ;3株mAb的Ig亚类均为IgG1。以mAb 2H1进行Westernblot的结果显示 ,该mAb能与AIV的Mr 为 75 0 0 0的蛋白条带起反应 ,表明其是针对AIVH9亚型血凝素蛋白的mAb。与 32株AIVH9亚型国内分离株进行血凝抑制试验表明 ,mAb 2H1具有良好的广谱性。结论 :成功地制备了抗AIVH9亚型血凝素蛋白的mAb ,为AIV的抗原性分析、血清学诊断、疫苗质量的监测及流行病学调查等奠定了基础     

小鼠BMP—McAb可变区基因的体外扩增,克隆与序列分析

从体外培养的ＢＭＰＭｃＡｂ杂交瘤中提取细胞总ＲＮＡ，反转录成ｃＤＮＡ。以ｃＤＮＡ为模板，利用两对根据免疫球蛋白重链与轻链可变区５′端序列和Ｊ区序列设计合成的引物，通过ＰＣＲ方法，扩增出抗体重链、轻链可变区基因片段（ＶＨ，ＶＬ）。将扩增产物分别克隆入ｐＵＣ１８，ｐＵＣ１９质粒，筛选出阳性克隆，利用双脱氧链终止法进行序列测定，经计算机分析，ＶＨ基因全长为３４５ｂｐ，编码１１５个氨基酸；ＶＬ基因全长为３１５ｂｐ，编码１０５个氨基酸。