潘生丁,凡拉帕米对逆转K562／ADM耐药性的研究

本研究结果提示:潘生丁、凡拉帕米均有增强ADM和VCR对K562和K562/ADM的作用,在ADM为0.01μg/ml时,对K562的抑制率为35.9％,当同时含有潘生丁6.25μg/ml～50.0μg/ml或凡拉帕米1.8μg/ml～14.4μg/ml时,使细胞的抑制率可分别再提高20.8％～34.50％和7.7％～29.5％,而对K562/ADM,潘生丁和凡拉帕米分别使细胞抑制率提高21.6％～70.9％和40.3％～61.1％。在VCR为0.1μg/ml时,对K562的抑制率为58.4％,当含有潘生丁或凡拉帕米时,抑制率可分别提高19.1％～24.9％和18.7％～22.6％,而对K562/ADM,在VCR8.0μg/ml时,抑制率为18.8％,当含有潘生丁或凡拉帕米时,抑制率可分别提高32.5％～45.1％和23.8％～35.4％。从上述结果可看出,潘生丁或凡拉帕米在逆转K562/ADM的耐药性是有益的。     

雷公藤红素逆转K562/A02细胞多药耐药的实验研究

目的探讨雷公藤红素逆转人慢性粒细胞白血病红白血病急变细胞株K562/A02多药耐药的效果。方法采用CCK-8法测定细胞的药敏性及耐药逆转性,应用流式细胞术检测细胞内ADM浓度、P-gp蛋白表达。结果雷公藤红素对K562/A02、K562的半数抑制率浓度（IC50）分别为（295.58±23.288）μmol/L、（411.59±26.551）μmol/L。K562/A02细胞对ADM的耐药性是K562细胞的79.78倍。细胞毒剂量的雷公藤红素作用后,ADM对K562/A02细胞的IC50显著下降（P〈0.05）,逆转倍数为117.860倍。细胞毒剂量（IC50）和非细胞毒剂量（IC10）的雷公藤红素处理后的K562/A02细胞内的ADM浓度显著增加（P〈0.05）,增加倍数分别为1.537倍和1.102倍。雷公藤红素能明显下调K562/A02细胞的P-gp表达。结论雷公藤红素对逆转K562/A02细胞的耐药性有一定的作用,其机制可能与下调P-gp表达有关。     

5-溴汉防己甲素与汉防己甲素对K562/A02细胞多药耐药性逆转作用的比较

背景与目的:5-溴汉防己甲素(5-bromotetrandrine,BrTet)是汉防己甲素(tetrandrine,Tet)的溴化产物,具有逆转P-糖蛋白(P-glyeoprotein,P-gp)介导的肿瘤多药耐药(muhidrug resistance,MDR)的作用。本研究旨在比较BrTet与Tet对人白血病细胞K562/A02多药耐药的逆转作用。方法:采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)法检测不同浓度BrTet对K562细胞和K562/A02细胞的增殖抑制效应;检测阿霉素(adfiamycin,ADM)对K562细胞和K562/A02细胞增殖的抑制作用,以及加用BrTet、Tet时上述抑制作用的变化,并计算半数抑制浓度(IC50)及逆转倍数。Westernblot法检测各组细胞P-gp的表达,流式细胞仪检测各组细胞内ADM的蓄积。结果:K562/A02细胞对ADM的耐药倍数为49.51倍。2.0μmol/L及更低浓度的BrTet和1.5μmol/L及更低浓度的Tet对K562细胞和K562/A02细胞抑制率均小于10%,无明显细胞毒性作用。加入1.0μmol/L的Tet后,K562/A02细胞对ADM的耐药倍数为12.17倍。加入0.25、0.5和1.0μmol/L的BrTet后,K562/A02细胞对ADM的耐药倍数分别为17.88、9.97和4.24倍。1.0"mol/L的BrTet和Tet分别使K562/A02细胞内ADM浓度提高了69.0%和51.6%,使P-gp表达分别下调了51.1%和43.73%,其差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:BrTet及Tet均可逆转K562/A02细胞耐药,且前者较后者逆转作用更强,逆转机制与抑制P-gp的表达、增加细胞内抗肿瘤药物浓度有关。     

硼替佐米提高耐药K562/ADM细胞对NK细胞杀伤的敏感性及其机制

目的:探讨硼替佐米提高耐药K562/ADM细胞对NK细胞杀伤敏感性的可能机制.方法:流式细胞术和real-time PCR检测硼替佐米处理前后K562/ADM细胞表面MHC Ⅰ类链相关分子A(major histocompatibility complex class Ⅰ chainrelated molecule A,MICA)蛋白和mRNA的表达,LDH释放法检测硼替佐米处理前后K562/ADM细胞对NK细胞的杀伤敏感性.结果:硼替佐米处理后,K562/ADM细胞表面MICA蛋白表达率上升[(17.03 ±4.94)％vs(23.77±5.26)％,P＜0.05];处理后K562/ADM细胞MICA mRNA的表达水平是处理前的(2.03±0.33)倍.效靶比为10∶1、20∶1时,NK细胞对硼替佐米处理后的K562/ADM细胞的杀伤率上升[(23.22±3.03)％、(30.30±0.74)％ vs(33.69±1.28)％、(41.40 ±1.97)％,P＜0.05].结论:硼替佐米提高耐药K562/ADM细胞对NK细胞杀伤的敏感性,其机制可能与硼替佐米上调K562/ADM细胞MICA表达有关.     

浙江蝮蛇蛇毒成分逆转多药耐药白血病K562/ADM细胞耐药性分析

[目的]探讨浙江蝮蛇蛇毒提取物逆转K562/ADM细胞耐药的作用及机制.[方法]通过MTT法检测不同浓度浙江蝮蛇蛇毒提取物对K562/ADM细胞阿霉素(ADM)的IC50影响,分析其逆转耐药活性;通过实时定量PCR法检测浙江蝮蛇蛇毒提取物对K562/ADM细胞MDR1及GST-π耐药基因表达的影响.[结果]浙江蝮蛇蛇毒提取物呈浓度依赖性地降低K562/ADM细胞对ADM的IC50.实时定量PCR法检测结果显示,浙江蝮蛇蛇毒提取物作用后K562/ADM细胞内MDR1及GST-π基因表达水平有下调趋势,且随蛇毒提取物浓度增加下调趋势逐渐明显.[结论]浙江蝮蛇蛇毒提取物具有较强的逆转人白血病K562/ADM细胞多药耐药活性作用.     

汉防己甲素逆转白血病细胞株K562/ADM多药耐药性机制研究

目的 研究汉防己甲素(TTD)对慢性粒细胞白血病急性变白血病细胞株K562／ADM多药耐药(MDR)逆转的机理。方法 采用流式细胞仪检测细胞内化疗药物的浓度及细胞表面P糖蛋白(P-gp)的表达；荧光定量PCR法检测MDR1 mRNA；通过流式细胞仪检测Anexin—V判断凋亡细胞的数量。结果 10μmol/L的TTD处理K562／ADM细胞后，细胞内阿霉素(ADM)的浓度明显提高；K562／ADM细胞MDR1 mRNA／P-gp的表达下降；TTD能增强ADM致细胞凋亡的作用。结论 汉防己甲素的耐药逆转机制除了下调MDR1 mRNA／P-gp的表达引起细胞内抗癌药物的积聚外，增加抗癌药物致细胞凋亡也是耐药逆转的重要原因。．     

斑蝥酸钠维生素B6注射液对人白血病K562/AO2细胞的逆转作用及机制的研究

目的研究斑蝥酸钠维生素B6注射液(SCA)体外对K562/AO2细胞多柔比星(ADM)耐药的逆转作用及机制.方法应用MTT法测定SCA作用人白血病K562/AO2细胞后对ADM敏感性的变化.采用流式细胞术(FCM)法测定SCA对K562/AO2细胞内ADM的影响及Bcl-2、P-gp蛋白表达的影响.结果SCA作用K562/AO2细胞前后,对ADM的IC50分别为(40.85±0.40)和(27.09±0.63) μg/mL,逆转倍数为1.51倍;FCM发现SCA能明显增加K562/AO2细胞内ADM的浓度,并使Bcl-2、P-gp蛋白表达下调.结论SCA能部分逆转K562/AO2对ADM的耐药性,机制可能与增加MDR细胞内的ADM浓度,抑制Bcl-2和P-gp蛋白表达有关.     

Survivin反义寡核苷酸逆转K562/A02细胞的耐药研究

目的:探讨Survivin反义寡核苷酸(an-tisenseoligodeoxynucleotide,ASODN)对K562/A02细胞耐药的作用和机制。方法:以脂质体转染SurvivinASODN,以MTT法检测多柔比星(adriamycin,ADM)和SurvivinASODN ADM对K562/A02细胞的IC50,以RT-PCR、蛋白印迹、荧光分光光度计和流式细胞术分别检测SurvivinmRNA、蛋白表达及半胱氨蛋白水解酶-3(Caspase-3)的活性和细胞凋亡的变化。结果:ADM和ASODN ADM对K562/A02细胞的IC50分别为45·56和19·01mg/L,SurvivinmRNA和蛋白水平表达分别降低36·2%和71·5%,Caspase-3活性增加67·5%,凋亡率较对照组增加[(14·5±5·6)%vs(2·4±1·0%),P<0·05]。结论:SurvivinASODN通过抑制Survivin表达激活Caspase-3,诱导凋亡,逆转耐药。     

人类白血病多药耐药细胞株K562/ADM、HL60/ADM的耐药性及耐药逆转的研究

目的：研究K562／ADM、HL60／ADM的耐药性及CsA对其耐药的逆转作用。方法：MTT比色法检测细胞耐药性及CsA对细胞耐药性的影响，流式细胞仪检测Pgp、MRP的表达及细胞内柔红霉素(DNR)的浓度。结果：K562／ADM、HL60／ADM对DNR、ADM、VCR、Har、VP16、MIT交叉耐药，对Acla和Ara—C基本不耐药。K562／ADM细胞Pgp过度表达，HL60／ADM细胞的MRP过度表达。CsA使K562／ADM、HL60／ADM细胞内药物浓度增加，逆转了K562／ADM、HL60／ADM的耐药性，而对K562、HL60的耐药性基本无影响。结论：两种不同耐药机制的细胞株对8种常用化疗药物的耐药谱相似，对Acla基本不产生耐药性，故在防止和克服多药耐药的基础上，Acla可能取代DNR、ADM。环孢菌素A(CsA)对两种不同耐药机制的细胞株的耐药性均有逆转作用，主要是通过增加胞内药物浓度来达到逆转作用。     

环腺苷酸对人白血病多药耐药 K562/ADM 细胞的诱导分化作用

目的：研究环腺苷酸（cyclic adenosine monophosphate,cAMP)对人白血病多药耐药K562／ADM细胞的诱导分化作用。方法：K562／ADM细胞经0.25-2.0mmol/L cAMP处理后,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术（flow cytometry,FCM)检测细胞周期和P－糖蛋白（P－glycoprotein,P-gp)的表达,免疫细胞化学法检测细胞周期蛋白cyclin D1和转录因子E2F的表达;同时观察细胞形态学变化和血红蛋白合成功能。结果：cAMP呈浓度和时间依赖性地抑制K562／ADM细胞的增殖（P＜0．01）,细胞形态学上出现红系细胞的形态特征;被诱导的细胞能够合成血红蛋白、cyclinD1和E2F的表达减低。cAMP(0.25mmol/L和1.0mmol/L)诱导24h,多数细胞被阻滞在G1期,S期和G2＋M期细胞显著降低,诱导72h后K562／ADM细胞P－gp表达的阳性率无明显变化（99．8％－99．9％）,但P－gp的表达量显著增加,平均荧光强度分别增高1．24倍和1．28倍。结论：K562／ADM细胞仍保留了分化成熟的潜能,可被cAMP诱导向正常血细胞分化,但在分化诱导过程中,化学诱导剂可导致耐药细胞发生P－gp的应激性表达增强而可能阻抑后续的化学治疗,或对诱导剂产生耐受性。     

香加皮水提物抑制诱导红白血病细胞K562分化的初步研究

背景与目的： 研究中药香加皮水提取物(cortex periplocae extract,CPE) 诱导体外培养人红白血病细胞株K562分化的作用。 材料与方法： 观察人红白血病细胞株K562与CPE体外共培养时的形态学变化;同时采用比色法检测不同浓度CPE诱导人红白血病细胞株K562产生Hb含量的变化。 结果： 与阴性对照相比,CPE可以诱导K562细胞发生坏死的形态学变化。与CPE共培养后K562细胞株Hb的产生明显减少。 结论： CPE 对K562肿瘤细胞只具有杀伤作用而不能诱导K562肿瘤细胞的分化。     

靶向ABCG2基因的RNA干扰提高K562细胞的化疗敏感性

目的:研究靶向人白血病K562细胞内高表达的三磷酸腺苷结合盒转运体G2(ATP binding cassette transporter G2,ABCG2)基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)对K562细胞化疗敏感性的影响.方法:构建靶向ABCG2基因的RNAi重组腺病毒Ad-siABCG2,以其感染K562细胞后,采用RT-PCR、免疫细胞化学和Western印迹法检测K562细胞中ABCG2 mRNA和蛋白的表达,MTT法检测K562细胞对药物的敏感性变化,FCM检测细胞内多柔比星(adriamycin,ADM)和柔红霉素(daunorubicin, DNR)的平均荧光强度.结果:成功构建靶向ABCG2的RNAi重组腺病毒Ad-siABCG2,经感染K562细胞后可有效沉默ABCG2基因表达;MTT检测发现,感染Ad-siABCG2的K562细胞对ADM和DNR的敏感性是未感染时的2～6倍(P＜0.01);FCM检测显示,感染Ad-siABCG2的K562细胞内DNR和ADM平均荧光强度(86.19和180.26)分别高于未感染的K562细胞(63.65和141.60),差异有统计学意义(P＜0.05).结论:重组腺病毒Ad-siABCG2沉默ABCG2基因表达可增加K562细胞对ADM和DNR的敏感性,表明ABCG2基因表达可导致K562细胞产生多药耐药;Ad-siABCG2对ABCG2介导的细胞多药耐药有逆转作用.     

热疗联合足叶乙甙对K562 体外抑制效应及bcl-2 的表达

 目的 观察热疗联合足叶乙甙增强对K562的体外增殖的抑制作用及对其凋亡、bcl-2表达的影响。方法 采用MTT法测定确定VP16的工作浓度，以该浓度进行化疗或与热疗的联合，选择温度40℃、42℃，体外作用于K562。48小时及作用前均采用台盼蓝拒染法检测肿瘤细胞的存活率；MTT法检测对肿瘤细胞增殖的抑制作用；流式细胞仪检测作用后肿瘤细胞的凋亡及bcl-2的表达。观察热疗联合足叶乙甙的抗肿瘤作用。结果 以作用48小时IC50的值作为实验的工作浓度。单纯40℃、42℃热疗60分钟在48小时对K562细胞系有抑制作用（P〈0．01），并随温度增高而增强；单纯化疗对K562细胞系也有明显抑制作用（P〈0．01）；热化疗组在40℃、42℃温度下，对K562均有显著的抑制作用（P〈0．01），随着温度的增高而增强。热疗组、化疗组、热化疗组细胞凋亡率均较对照组显著升高，各组之间均有显著性差异（P〈0．01）；bcl-2蛋白的表达下降，各组之间也有显著性差异（P〈0．01）。结论 热疗联合足叶乙甙能增强对K562细胞的体外抑制作用；热化疗联合应用可以提高肿瘤细胞的凋亡率，下调bcl-2的表达。     

补骨脂素逆转K562/ADM多药耐药细胞系耐药性研究

目的:研究补骨脂素对白血病细胞阿霉素耐药株(K562/ADM)多药耐药(multidrug resistance,MDR)性的逆转作用及其机制.方法:采用MTT法检测药物细胞毒性作用,计算其逆转倍数.结果:补骨脂素在1～20μmol·L-1范围内,对K562和K562/ADM无明显细胞毒作用,但与ADM联合用药可使ADM对K562/ADM的IC50明显下降,补骨脂素(1～20μmol·L-1)能不同程度地降低ADM对K562/ADM细胞的IC50值.结论:补骨脂素能逆转K562/ADM细胞的多药耐药.     

As2O3与STI571单用及联用对K562细胞bcr-abl磷酸化的影响

目的 研究As2O3单用及联用ST1571对K562细胞bcr-abl蛋白酪氨酸磷酸化的影响。探讨其抗白血病的分子机制,为As2O3和ST1571联合应用治疗CML提供理论依据。方法 采用细胞增生实验检测细胞生长;采用Annexin-V／PI双染实验、DNA的PI染色及DNA电泳等方法检测细胞凋亡：运用免疫沉淀和Western blot检测K562细胞bcr-abl蛋白酪氨酸磷酸化水平。结果 As2O3和ST1571明显抑制K562细胞生长。并检测出凋亡细胞群。DNA电泳出现“梯”状条带;bcr-Abl蛋白酪氨酸磷酸化水平出现时间剂量依赖性下调。结论 As2O3和ST1571能诱导K562细胞凋亡和抑制其增生．两药联用具有协同作用．机制似与下调K562细胞bcr-abl蛋白酪氨酸磷酸化有关。     

Livin反义寡核苷酸对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨Livin反义寡核苷酸（ASODN）对白血病细胞K562增殖及凋亡的影响。方法设计合成特异性的Livin硫代磷酸ASODN及其对照错义寡核苷酸（MSODN）,脂质体介导转染K562细胞后,采用四甲基偶氮唑盐光吸收法（MTT）检测细胞增殖,AnnexinV—FITC法检测细胞的凋亡,反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测LivinmRNA的表达。结果LivinASODN在终浓度为600nmol／L作用K562细胞48h时,能明显抑制其增殖细胞增殖咖制率（IR）为（52．99±2．67）％],降低LivinmRNA的表达[ODR为（59．75±3．24）％],K562细胞凋亡率显著增加f（36．89±1．08）％]（P〈0．01）,而Lip—MSODN组、Lip对照组与细胞对照组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论LivinASODN可下调Livin基因表达,有效抑制K562细胞的增殖,并促进K562细胞凋亡。     

木黄酮作用于K562细胞机制的初步研究

目的：探讨酪氨酸激酶抑制剂木黄酮（Genistein)作用于慢性粒细胞性白血病（CML）的机制。方法：通过细胞增殖、活力检测、形态学观察、半固体集落培养及DNA凝胶电泳和流式细胞术,观察木黄酮对K562细胞生长的影响。结果：（1）经≥5mg/L木黄酮处理2d的K562细胞,增殖抑制率达到50％以上,且与作用剂量和时间呈正相关;形态渐趋向凋亡但体积涨大;(2)K562细胞集落抑制达50％时的木黄酮浓度为10mg/L,也与时间和剂量呈正相关;（3）K562细胞经10mg/L木黄酮处理4d,DNA凝胶电泳可见清晰的梯状条带;（4）K562细胞分别经2．5mg/L、5mg/L和10mg/L木黄酮处理1d和2d后,流式细胞术检测细胞凋亡率分别为0．62％、1．64％、2．71％和0．68％、4．09％、8．4％;2d后G2期细胞分别占总细胞数的17％、34．5％和79．5％,而G1期和S期细胞逐渐明显减少。结论：木黄酮对K562细胞具有显的抑制增殖作用,其机制与诱导凋亡有关。     

Independent and synergic inhibition of verapamil and electric beam radiation on clonogenic growth in K562 and K562/ADM cell linesin vitro

It was first reported here that verapamil (VP) and electric beam radiation (EBR) were capable of inhibiting, independently or synergically, clonogenic growth in two kinds of K562 cell lines, adriamycin (ADM)-sensitive and ADM-resistant (K562/S and K562/ADM). Results showed that clonogenic rate (CGR) decreased by 3%–99.9% in the presence of dependent dose-ADM (3.8 μg/ml) in K562/ADM cell lines, while treated with 0.5μM–6μM of VP. VP was capable of potentiating radiosensitivity in K562/S and K562/ADM cell lines, whether before or after exposure of them to electric beam radiation, and significantly reduced CGR in these kinds of cell lines (P<0.01).     

盐酸千金藤素逆转K562/ADR细胞的多药耐药性及其与bcl-2的关系

目的　研究盐酸千金藤素(CEP)对K5 62 /ADR细胞多药耐药性的逆转作用及逆转机制。方法　采用MTT法测定阿霉素(ADR)单用及与CEP ,维拉帕米(VER)合用对K5 62 ,K5 62 /ADR细胞的直接细胞毒作用;采用免疫组织化学(IHC)法测定K5 62细胞,K5 62 /ADR细胞内bcl 2的表达,以及药物对bcl 2表达水平的影响。结果　联合应用ADR和4μmol/LCEP使K5 62 /ADR细胞对ADR的IC50 由13 5 μmol/L降至1 73 μmol/L ,其逆转倍数为7 8倍,但对K5 62细胞无明显影响;联合应用ADR和4μmol/LVER使K5 62 /ADR细胞对ADR的IC50 降至7 5 0 μmol/L ,其逆转倍数为1 8倍,但对K5 62细胞也无明显影响。用IHC法检测bcl 2的表达,K5 62 /ADR细胞中bcl 2的表达量为2 6 79% ,远高于K5 62细胞中表达量4 98% ,而联合应用ADR和4μmol/LCEP使K5 62 /ADR细胞中bcl 2的表达量降至13 16%。结论　CEP可部分逆转K5 62 /ADR细胞的耐药性,其机制可能与降低bcl 2的表达有关。     

INDEPENDENT AND SYNERGIC INHIBITION OF VERAPAMIL AND ELECTRIC BEAM RADIATION ON CLONOGENIC GROWTH IN K562 AND K562／ADM CELL L

ＩＮＤＥＰＥＮＤＥＮＴＡＮＤＳＹＮＥＲＧＩＣＩＮＨＩＢＩＴＩＯＮＯＦＶＥＲＡＰＡＭＩＬＡＮＤＥＬＥＣＴＲＩＣＢＥＡＭＲＡＤＩＡＴＩＯＮＯＮＣＬＯＮＯＧＥＮＩＣＧＲＯＷＴＨＩＮＫ５６２ＡＮＤＫ５６２／ＡＤＭＣＥＬＬＬＩＮＥＳＩＮＶＩＴＲＯ￥ＸｉｅＺｕｏ...