半乳糖急性致衰老动物模型剂量的探讨

目的:探讨D-半乳糖皮下注射法致小鼠衰老模型的最佳剂量,复制实验用小鼠衰老模型。方法:选用3月龄健康昆明小鼠30只,分为D-半乳糖75 mg·kg-1组、100 mg·kg-1组、125 mg·kg-1组。设3月龄和12月龄对照组。实验组每天给予D-半乳糖皮下注射1次,对照组皮下注射等量生理盐水,6周后分别观测脑、心肌、肝中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和脂褐素含量,血清和红细胞中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量。结果:各实验组和12月龄对照组的脑中SOD、MDA和脂褐素含量均较3月龄显著增高,但以100 mg·kg-1组和125 mg·kg-1组为显著。结论:D-半乳糖100 mg·kg-1和125 mg·kg-1皮下注射6周可以较好地复制出小鼠衰老模型。     

氧化应激促进AGT-REN双转基因高血压小鼠心肌中电导钙激活钾离子通道表达

 目的:探讨心肌重构过程中心肌中电导钙激活钾离子通道(K_Ca3.1)蛋白表达与氧化应激反应之间的关系。方法:雄性血管紧张素-肾素(AGT-REN)双转基因高血压(dTH)小鼠2、4、8、12月龄各6只进行相应指标检测。另取12只6月龄雄性dTH小鼠,随机分为2组:模型组(dTH组)和N-乙酰半胱氨酸(NAC)组。同时取6只dTH同品系野生C57B6小鼠作为对照(WT组)。NAC组小鼠腹腔注射NAC 400 mg·kg^-1·d^-1,WT和dTH组小鼠腹腔注射等量生理盐水。4周后检测各组小鼠血压变化;ELISA法测定小鼠血浆中AngⅡ和Ang(1-7)含量变化;试剂盒检测心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量;Western blot法检测小鼠心肌胶原蛋白collagen I、collagen III及K_Ca3.1蛋白表达的变化。结果:dTH组小鼠血压、血浆AngⅡ、MDA及胶原蛋白含量均高于同龄WT组小鼠(2月龄除外),并随年龄增长而增高(P<0.05);血浆Ang(1-7)和心肌SOD活性随年龄增长下降,并低于同龄WT组小鼠(2月龄除外)(P<0.05)。NAC干预使6月龄dTH小鼠心肌SOD活性增强(P<0.01),同时心肌MDA、胶原蛋白和K_Ca3.1蛋白表达下降(P<0.05)。结论:高血压所致心肌重构过程中心肌K_Ca3.1蛋白表达增加可能与心肌氧化应激水平增强有关。     

胎鼠间充质干细胞移植缓解小鼠体力疲劳的研究

目的:观察胎鼠间充质干细胞(MSCs)缓解体力疲劳的作用,探讨其改善肌无力患者或者中老年体弱者生活质量的意义。方法:取孕13.5 d的BALB/c胎鼠,分离纯化得到胎鼠MSCs。6月龄BALB/c雌性小鼠随机分为安静对照组、单纯运动组和MSCs+运动组。MSCs+运动组尾静脉输注第5代MSCs, 其余2组输注同体积生理盐水。24 h后进行负重游泳试验,测定血尿素氮(BUN)、血乳酸、肝糖原和肌糖原,以及肝、肌肉、脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,心脏超声检查评价心功能。结果:(1)原代细胞呈梭形、多角形,散在、集落式分布;第5代细胞均匀平行排列或者漩涡状排列,表达CD44和CD105,不表达CD34和CD45,能向成骨细胞或脂肪细胞分化,具备MSCs基本特点。(2)MSCs缓解体力疲劳作用:MSCs+运动组与单纯运动组比较,负重游泳时间明显延长,BUN和血乳酸水平降低,肝糖原和肌糖原储备增加,肝脏和肌肉组织SOD活性升高,MDA水平降低,以上差异均显著(P＜0.05)。(3)心功能增强:MSCs+运动组与单纯运动组比较,每搏输出量、心输出量和左室舒张期容积均增加。结论:胎鼠间充质干细胞移植具有缓解小鼠体力疲劳作用。     

不同性别小鼠化学性肝损伤后的肝再生能力比较

背景：肝脏再生能力受多重因素的影响,而性别是否是再生修复过程的一个重要因素尚无定论。 目的：比较不同性别小鼠化学性肝损伤后肝脏再生能力是否有差异。 方法：采用四氯化碳小鼠皮下注射方法建立急性化学性肝损伤模型。120只昆明小鼠随机均分为糖原染色组和5-溴脱氧尿嘧啶核苷组,各组再按照性别均分为雌雄两组,于造模后第1,3,5,7,10天完整取下小鼠肝脏并称质量,取材前称量小鼠体质量。 结果与结论：造模后第7天雌性鼠恢复原肝质量/体质量比,而雄性鼠则表现为下降趋势,不同性别小鼠肝质量/体质量比在各时间点差异无显著性意义(P > 0.05);四氯化碳诱导的急性肝损伤主要部位为肝小叶周围的门管区及界板区,损伤部位肝细胞出现脂肪变,少数肝组织出现点状坏死;损伤后1,5,7 d雌性小鼠糖原染色明显强于雄性组(P < 0.05);肝损伤后3 d雌性鼠肝脏5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记指数高于雄性小鼠(P < 0.05),而第1,5,7,10天则未见明显差异(P > 0.05)。说明肝损伤后雌性鼠的再生修复比雄性鼠强,于第7天完成修复。不同性别的昆明小鼠对四氯化碳诱导的急性肝损伤后恢复期中肝脏再生能力具有差异性。     

当归多糖治疗小鼠乙醇性肝损伤中丙二醛、超氧化物歧化酶及谷胱甘肽过氧化物酶的变化及意义

目的:探讨当归多糖治疗小鼠乙醇性肝损伤中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)的变化及意义。方法:通过一次性高浓度乙醇灌胃建立小鼠乙醇性肝损伤模型,之后连续腹腔注射当归多糖6 d,血清生化检测MDA、SOD及GSH-Px,光镜观察肝形态结构变化。结果:小鼠乙醇性肝损伤后,血清MDA显著增高,SOD及GSH-Px显著下降,同时肝组织结构呈弥漫性脂肪变性损伤。用当归多糖治疗后,伴随肝组织结构的修复,血清MDA显著下降,SOD及GSH-Px增高。结论:当归多糖可通过阻断膜脂质过氧化起到保护肝细胞的作用,血清MDA、SOD及GSHPx水平的变化对判断肝的损害程度、病情发展、评估预后有一定的意义。     

大鼠再生肝提取物对肝再生中肝细胞增殖的影响

大鼠肝大部(67%)切除24小时后取残肝匀浆,经加热,酒精沉淀、透析等步骤制备提取物,腹腔注射给正常大鼠和32%肝切术后的大鼠。光镜下观察肝组织切片,计算肝细胞有丝分裂百分率。鼠再生肝提取物可使32%肝切术后24-48小时再生肝细胞有丝分裂百分率明显增加,尤其在术后30小时可达对照组的3.9倍。结果表明,再生肝提取物中含有能够促进肝细胞增生的肝再生刺激因子(HSS),此因子对增殖前期(G_0/G_1早期)细胞作用不明显。     

细胞凋亡相关基因表达谱与大鼠再生肝的细胞凋亡关系

目的在基因转录水平探讨细胞凋亡相关途径对大鼠肝再生的作用。方法采用大鼠2/3部分肝切除(PH)方法,制备再生肝模型,同时设对照手术(假手术)。用查阅网站资料和相关论文等方法获得凋亡相关基因,用大鼠基因230 2.0芯片检测它们在大鼠再生肝中的表达情况,通过比较真、假手术中上述基因的表达差异性确定肝再生相关基因。结果细胞凋亡相关基因中,252个基因与肝再生相关。在肝再生启动(PH后0.5~4h)、G0/G1过渡(PH后4~6h)、细胞增殖(PH后6~66h)、细胞分化和结构功能重建期(PH后72~168h)等4个阶段起始表达的基因数为81、231、55和16,总表达的基因数为161、100、733和192,表明相关基因主要在肝再生启动阶段起始表达,在不同阶段发挥作用。它们共上调795次,下调291次,表明肝再生中大部分基因表达增强。它们的表达模式分为35种,表明肝再生中细胞凋亡相关基因的表达情况多样和复杂。结论15条细胞凋亡途径参与肝再生调控。     

小白鼠肝脏再生肝、H_(22a)腹水型肝癌细胞及荷癌肝脏中脂质过氧化物水平、超氧化物歧化酶及谷胱甘肽过氧化物酶的活力

我们测定了正常小白鼠肝脏、再生肝、H_(22)a腹水型肝癌细胞及荷癌肝脏中脂质过氧化物水平、超氧化物歧化酶及谷胱甘肽过氧化物酶的活力。实验结果表明: 1.小白鼠再生肝脏的脂质过氧化物水平高对正常鼠肝,而谷胱甘肽过氧化物酶活力均低于正常鼠。再生肝中超氧化物歧化酶活力与正常肝此较无明显差异。     

EPA对创伤性脑损伤APP/PS1转基因小鼠淀粉样肽沉积和认知功能的作用

目的探究二十碳五烯酸(EPA)对创伤性脑损伤APP/PS1转基因小鼠淀粉样肽沉积和认知功能障碍的作用。方法对3月龄APP/PS1小鼠施行创伤性脑损伤(TBI)手术并在手术当天即开始对其进行为期30天的EPA乙酯治疗(腹腔注射,1g/Kg/d)。TBI手术30天后(小鼠4月龄),通过HE染色和免疫组织化学检测小鼠脑内淀粉样肽(Aβ)负荷,通过Y-迷宫自发变更试验和高架十字迷宫试验检测小鼠认知功能状态。结果 TBI手术造成小鼠皮层明显空洞形成和组织缺损,4月龄APP/PS1/小鼠海马区开始出现Aβ斑块,TBI可显著加重APP/PS1小鼠海马区Aβ负荷,而EPA治疗后APP/PS1小鼠海马区Aβ负荷可恢复至生理水平。4月龄APP/PS1小鼠并未出现显著认知功能损害,TBI可使APP/PS1小鼠探索活跃度、空间工作记忆和危险识别能力明显降低,EPA治疗可恢复至未损伤小鼠同等水平。结论EPA治疗可降低创伤性脑损伤AD模型小鼠脑内淀粉样斑块沉积和改善认知功能障碍。     

不同性别肝大部切除小鼠的肝再生

背景:各种病因所致的肝硬化及肝癌发病率存在明显的性别差异。肝受损或手术后肝脏均可通过其自身强大的再生能力进行代偿,但肝再生过程中不同性别肝细胞的再生状况是否存在差异尚不清楚。目的:比较肝大部切除后不同性别小鼠肝脏再生能力是否存在差别。方法:采用不同性别成年昆明小鼠行肝脏大部切除,称量手术切除的肝组织,并于术后1,3,5,7,10,14d取再生肝组织,称量后常规制作组织切片备用,取材前2h腹膜下注射5-溴脱氧尿核苷50mg/kg。观察比较不同性别小鼠再生肝组织的结构变化、细胞形态,以及术后各时间点肝再生率、肝组织5-溴脱氧尿核苷的标记指数。结果与结论:苏木精-伊红染色切片镜下结果显示,肝脏大部切除后各时间点不同性别小鼠肝组织结构无明显差别。不同性别小鼠肝大部切除后各时间点肝再生率及5-溴脱氧尿核苷标记指数差异均无显著性意义(P0.05)。提示肝大部切除后不同性别小鼠肝的再生能力无明显差别。     

鼠神经生长因子对六溴环十二烷暴露引起小鼠脑损伤的保护作用

目的研究注射用鼠神经生长因子(mNGF)对六溴环十二烷(HBCD)暴露下小鼠脑损伤的保护作用。方法 2月龄昆明小鼠分为正常对照组、HBCD组和mNGF组。mNGF组小鼠腹腔注射mNGF 5ng/g·d,连续5d。然后,对HBCD组和mNGF组小鼠每天灌入溶有HBCD的花生油100μl(浓度为50μM/ml),正常对照组每天灌入等量不含HBCD的花生油,连续10d。采用试剂盒及ELISA方法检测小鼠脑组织中相关酶活性如乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽(GSH),丙二醛(MDA)及凋亡相关蛋白Bcl-2。结果小鼠暴露于50μM/ml HBCD 10d后,LDH释放增加,SOD和GSH酶活性降低,MDA含量增加,Bcl-2含量下降。mNGF能够显著提高抗氧化酶的活性及凋亡相关蛋白Bcl-2的表达,降低MDA的活力。结论 m NGF对小鼠暴露HBCD造成脑损伤的保护作用可能与抗凋亡相关。     

超小尺寸碳量子点在小鼠体内的辐射防护研究

目的 研究超小尺寸碳量子点(CQDs)在小鼠体内的辐射防护效果,揭示其辐射防护机制.研究机体对CQDs的免疫反应与CQDs的体内毒性.方法 给小鼠注射不同质量浓度的CQDs溶液,采用高剂量γ射线辐照构建小鼠全身辐射损伤模型,通过检测辐照后30 d内小鼠的存活率、骨髓DNA、股骨有核细胞数(BMNC)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平,评估CQDs的辐射防护效果,并探究可能的防护机制.通过检测小鼠注射CQDs前后的体质量变化、肝指数、脾指数,研究CQDs的体内毒性.结果 CQDs对于小鼠具有明显的辐射防护作用.与对照组相比,CQDs处理过的辐照小鼠30 d存活率从0％提高到40％.证明CQDs可有效降低辐照造成的机体造血系统损伤,提高骨髓DNA、股骨BMNC、肝和肺的SOD水平,减少MDA产生.免疫反应结果表明,CQDs的体内毒性较小,不会引发机体的排异反应.结论 CQDs在辐射防护领域具有较大的应用前景,可为新型纳米材料在医学领域的应用提供新思路.     

DEAD-box RNA解旋酶5和转录因子12与肌萎缩侧索硬化症的关系

目的 通过检测DEAD-box RNA解旋酶5(DDX2)和转录因子12(TCF12)在SOD1-G93A突变型肌萎缩侧索硬化症(ALS)转基因小鼠海马中表达情况及其相互作用关系,揭示DDX5和TCF12表达改变与ALS海马病变的关系.方法 将42对SOD 1-G93A突变型ALS转基因小鼠和野生型小鼠,按照95 d龄(发病早期)、108 d龄(发病中期)和122 d龄(发病晚期)分为3组,通过RT-PCR、Western blotting和免疫荧光双标记技术,检测DDX5和TCF12在海马中的表达情况,通过免疫共沉淀技术检测DDX5和TCF12蛋白之间是否具有相互作用.结果 与同龄野生型小鼠相比,在SOD 1-G93A突变型ALS转基因小鼠海马中DDX5和TCF12 mRNA无明显变化,而蛋白在95 d、108 d和122 d表达均上调,差异均有统计学意义.海马齿状回和海马本部均可见DDX5和TCF12阳性细胞,且DDX5和TCF12在海马神经元中表达.SOD1-G93A突变型ALS转基因小鼠海马中DDX5和TCF12免疫阳性反应均较同龄野生型小鼠增强.免疫共沉淀实验检测发现,DDX5和TCF12蛋白质之间存在相互作用.结论 DDX5和TCF12蛋白在SOD1-G93A突变型ALS转基因小鼠海马组织中表达上调,DDX5和TCF12表达异常与ALS海马组织病变有关.     

白细胞致热原对肝切除后大鼠肝ATP、cAMP含量的影响

近年许多资料报道肝再生可受多种因素如胰岛素、表皮生长因子等的刺激而加速。部分切除后再生的肝胞质液具有刺激肝细胞增殖作用,且可提高实验性肝严重损伤鼠的存活率。另外,前列腺素E(PGE)亦可促进肝     

小鼠肝LPO、蛋白质含量、SOD活性与实验性高脂血症及年龄的关系

高脂血症是导致动脉粥样硬化(As)主要危险因子,As属老年性疾病,其确切机理尚未阐明,故本文对9、2月龄小鼠同时造成高脂血症模型,观察9、2月龄小鼠形成高脂血症的程度差异,与抗脂质过氧化的中心器官肝脏组织LPO含量和SOD活性及蛋白质     

手机电磁辐射对小鼠损伤实验的初步研究

目的本实验通过检测受手机辐射小鼠的血清中SOD(superoxide dismutase,SOD)活性和NO含量的影响,以及肝bcl-2和bax蛋白的表达,旨在探讨手机辐射对小鼠的损伤,为手机辐射对人体造成影响提供一定的实验依据.方法将40只小鼠随机分为两组,每组20只,Ⅰ组为对照组,不经任何处理;Ⅱ组为实验组,每日手机辐射2h,连续30d.处死小鼠,取血清及肝脏.血清SOD采用分光光度法检测,血清NO采用硝酸还原酶法.利用免疫组织化学法检测小鼠肝组织bcl-2和bax的蛋白表达.结果.(1)实验组小鼠的血清中SOD(16.1±1.04)NU/ml与对照组小鼠的血清中SOD(21.73±0.84)NU/ml相比差异有显著性(P＜0.05).2)实验组小鼠的血清中NO(10.53±3.61)μmol/L与对照小鼠的NO(4.15±1.25)μmol/L含量相比差异有高度显著性(P＜0.01).(3)对照组与实验组肝细胞bcl-2蛋白表达阳性率相比无显著性差异(P＞0.05);而bax蛋白表达阳性率,差异有显著性(P＜0.05).结论手机辐射可明显降低小鼠血清中SOD的活性和NO含量,并诱导肝细胞凋亡.     

突触结合蛋白I和Ⅳ在小鼠背海马表达的区域差异及年龄相关性变化

目的:探讨昆明小鼠背海马突触前囊泡蛋白(Syt)Ⅰ和Ⅳ的分布差异及其年龄相关性变化.方法:选取3个年龄段昆明小鼠22月龄17只、11月龄22只和6月龄28只作为研究对象,采用免疫组织化学技术检测其背海马Syt Ⅰ和Syt Ⅳ含量.结果:SytⅠ与Syt Ⅳ在不同年龄组小鼠背海马锥体细胞和颗粒细胞中均有表达,其中SytⅠ在CA3区透明层和齿状回(DG)门区呈高表达,而Syt Ⅳ在锥体细胞和颗粒细胞胞膜呈高表达.22月龄鼠在海马CA1、 CA3和DG中Syt Ⅰ的相对含量高于11月龄和6月龄鼠,而Syt Ⅳ的相对含量低于6月龄鼠.结论:相对于中、青年鼠而言,老年昆明小鼠背海马Syt Ⅰ水平升高而Syt Ⅳ水平降低;Syt Ⅰ的优势表达可能在苔藓纤维及其与CA3区锥体细胞顶树突形成的轴-树或树-树型突触,Syt Ⅳ的优势表达可能在锥体细胞和颗粒细胞的轴-体或树-体型突触.     

丹酚酸B对APP/PS1小鼠学习记忆及氧化应激的作用及可能机制

目的 探讨丹酚酸B对APP/PS1转基因小鼠学习记忆能力、氧化应激水平及Nrf-2/HO-l信号通路的影响.方法 将7月龄的APP/PS1小鼠随机分为模型组、丹酚酸B低剂量组(30mg/kg)及丹酚酸B高剂量组(60 mg/kg),并取同龄C57BL/6小鼠作为对照组,每组10只,连续灌胃给药8周.Morris水迷宫观察各组小鼠学习与记忆能力;TUNEL染色检测小鼠海马区域细胞凋亡情况;试剂盒检测小鼠海马区域SOD、GSH-Px活性及MDA含量;Western Blot检测Nrf-2/HO-1信号通路相关蛋白Nrf-2、Keap-1及HO-1表达情况.结果 丹酚酸B低、高剂量均能改善小鼠的学习与记忆能力,表现为小鼠逃避潜伏期明显缩短,目标象限停留时间延长,穿越平台次数相应增加,海马区域细胞凋亡数量显著降低(P＜0.05),提高SOD及GSH-Px活性,降低MDA含量,上调细胞核中Nrf-2及HO-1蛋白表达,下调Keap-1蛋白表达(P＜0.05).结论 丹酚酸B改善APP/PS1小鼠学习与记忆能力,降低氧化应激水平,与激活Nrf-2/HO-1信号通路相关.     

增殖细胞核抗原在大小鼠肠、肝和肾的表达

目的探讨增殖细胞核抗原(PCNA)在大小鼠肠、肝、肾的表达及其在大小鼠同一器官的表达差异。方法分别取体重为(111.6±16.0)gSD大鼠6只和(17.1±2.0)g昆明小鼠7只的肠、肝、肾,常规石蜡切片,苏木精伊红(HE)染色观察形态,SABC法检测PCNA的表达。结果PCNA在大小鼠肠绒毛固有层、肠腺细胞、肝细胞、肾小球和肾小管中有不同程度的表达,PCNA免疫反应阳性物质在肠、肝、肾的积分光密度在大小鼠同一器官的差异没有统计学意义(P>0.05)。结论正常情况下大小鼠肠、肝、肾均有一些细胞处于增殖状态,同一器官中PCNA的表达差异不明显。     

年轻血液对小鼠脊髓损伤的影响

目的通过建立连体小鼠模型,研究年轻小鼠血液对小鼠脊髓损伤的影响。方法对12月龄C57BL/6小鼠实施脊髓损伤手术,并于损伤7 d后将脊髓损伤C57BL/6小鼠与年轻(3月龄)或同龄(12月龄)EGFP转基因小鼠连体配对。连体配对14 d后,通过脾脏细胞分离和荧光显微镜检测对小鼠连体模型进行血液嵌合检测。连体配对28 d后,对连体模型中的脊髓损伤C57BL/6小鼠进行BBB运动功能评分和HE染色。结果血液嵌合分析显示,脊髓损伤C57BL/6小鼠-EGFP转基因小鼠连体模型可形成稳定的血液嵌合。BBB评分显示,与年轻EGFP小鼠连体配对的脊髓损伤C57BL/6小鼠运动功能恢复情况显著优于与同龄EGFP小鼠连体配对者。与年轻EGFP小鼠连体配对的脊髓损伤C57BL/6小鼠脊髓组织空洞面积较与同龄EGFP小鼠连体配对者明显缩小。结论年轻血液可显著促进小鼠脊髓损伤恢复。