苦瓜素对柯萨奇B3病毒所致病毒性心肌炎小鼠肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的观察苦瓜素对柯萨奇B3病毒（CVB3）所致病毒性心肌炎大鼠心肌组织TNF-α水平、基因转录及相应蛋白质表达的影响，探索苦瓜素治疗病毒性心肌炎的药理机制。方法50只Balb／c实验小鼠随机分为苦瓜素治疗组（20只）、病毒感染空白对照组（20只）、正常对照组（10只）。苦瓜素治疗组与病毒感染空白对照组分别予腹腔注射0．1mL内含1×10^5TCID。的PRIM1640液，而正常对照组予腹腔注射同等体积培养液。苦瓜素剂量为25mg／（kg·d），1次／d，疗程7d。第15天取小鼠心肌采用ELISA进行TNF-α测定，HE染色行心肌病理检查，RT-PCR检测TNF-αmRNA转录水平，免疫组织化学测定TNF-α蛋白表达。结果与病毒感染空白组比较，苦瓜素治疗组小鼠心肌病理积分明显减少[（3．26±0．84）m（1．56±0．48），t=3．90 P〈0．01]，大鼠心肌组织TNF—α水平明显降低[（85．6±16．7）vs（34．5±10．3），t=5．24P〈0．01]，大鼠TNF-α mRNA转录水平亦显著减少[（0．09±0．02）vs（0．41±0．06），t=7．37 P〈0．01]。结论苦瓜素通过抑制TNF—α基因转录与蛋白质表达、降低心肌TNF—α水平，对Balb／c小鼠CVB，致病毒性心肌炎具有明显的治疗作用。     

黄芪对哮喘大鼠肺组织信号转导子和转录激活子4表达的调控

目的观察黄芪对大鼠哮喘模型肺组织信号转导子和转录激活子4（STAT4）蛋白及其mRNA表达的影响。方法用卵清白蛋白建立哮喘模型,SD大鼠随机分成4组：正常对照组、哮喘组、低剂量黄芪组和高剂量黄芪组,每组10只鼠。留取支气管肺泡灌洗液（BALF）进行嗜酸性粒细胞（EOS）计数和分类计数;应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验法测定BALF中IL-4和IL-12浓度;采用免疫组化法和原位杂交法分别检测STAT4蛋白和STAT4 mRNA的表达。结果（1）哮喘组BALF中EOS绝对值和EOS占细胞总数的百分比[（EOS％）（35．8±7．3）×10^7／L,（8．20±1．75）％]均显著高于正常对照组[（1．5±1．0）×10^7／L,（0．70±0．48）％]（P〈0．01）,黄芪组上述指标[（14．9±2．4）×10^7／L,（4．70±0．82）％;（11．0±1．8）×10^7／L,（3．56±0．53）％]均低于哮喘组（P〈0．01）;（2）BALF中IL-4浓度（ng／L）哮喘组（25．70±7．36）显著高于对照组（8．55±2．97）（P〈0．01）,黄芪组[（13．87±3．61）,（11．67±3．05）]均显著低于哮喘组（P〈0．01）;BALF中IL-12浓度（ng／L）哮喘组（16．10±3．38）显著低于对照组（42．33±9．66）（P〈0．01）,黄芪组[（31．89±5．46）,（35．26±6．03）]均显著高于哮喘组（均为P〈0．01）;（3）免疫组化和原位杂交显示,哮喘组肺组织STAT4蛋白和STAT4 mRNA表达的强度[（0．096±0．012）,（0．098±0．011）]均低于对照组[（0．216±0．034）,（0．228±0．032）],黄芪组[（0．176±0．012）,（0．185±0．023）;（0．183±0．011）,（0．201±0．019）]较哮喘组均明显升高（均为P〈0．01）,其主要表达细胞是气道平滑肌细胞和肺细小动脉的血管平滑肌细胞及内皮细胞;（4）肺组织中STAT4及其mRNA表达分别与BALF中的IL-12浓度呈显著正相关（r=0．897、0．910,P〈0．01）;而与BALF中的IL-4浓度、EOS数量均分别呈显著负相关[（r=-0．693、-0．668,P〈0．01）,（r=-0．891、-0．897,P〈0．01）]。结论黄芪有抑制哮喘气道EOS性炎症的作用,上调气道平滑肌细胞、血管平滑肌细胞及内皮细胞STAT4蛋白及其mRNA表达,使IL-12合成增加可能为其作用机制。     

氧化应激在新生大鼠常压高体积分数氧致脑损伤发生中的作用

目的探讨氧化应激在7日龄新生大鼠高体积分数氧（高氧）性脑损伤发生中的作用。方法体质量12～18g的7日龄SD大鼠42只，随机分为空气组和高氧组。高氧组与其乳母一起置于氧箱中，调节氧流量（3L／min），使箱内氧体积分数维持（800±50）mL／L，用数字式测氧仪进行监测。空气组置于同一室内空气中，氧体积分数为210mL／L，饲养条件与高氧组相同。高氧／空气开始暴露30min后，各取3只大鼠，麻醉后采血，行动脉血气分析。高氧／空气暴露12h后2组大鼠各处死8只，化学比色法检测其脑组织还原型谷胱甘肽（GSH）、氧化型谷胱甘肽（GSSG）、GSSG／GSH、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平。高氧／空气暴露12h后2组各处死10只大鼠，取其脑组织常规脱水、包埋、切片（经海马），脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记法观察脑组织细胞凋亡指数。结果空气组平均动脉血氧分压[pa（O2）]为（87．0±2．71）mmHg（1mmHg=0．133kPa），高氧组为（219．0±10．7）mmHg，高氧组明显高于空气组[（87．0±2．71）mmHg]（P〈0．05）。高氧组暴露12h脑细胞凋亡指数[（39．20±7．59）％]较空气组[（4．50±1．87）％]显著增加（P〈0．01）。高氧暴露12h组GSH[（0．994±0．230）μmol／g]较空气组[（1．210±0．210）μmoL／g]明显下降（P〈0．05），高氧组暴露12h SOD[（124．60±4．14）×10^3 U／g]也较空气组[（145．0±6．62）×10^3 U／g]明显下降（P〈0．01）；高氧组GSSG[（0．0283±0．0043）μmol／g]、GSSG／GSH（0．0296±0．0045）、MDA[（5．21±0．41）μmol／g]均较空气组[（0．0212±0．0029）μmol／g，0．0181±0．0031，（4．85±0．25）μmol／g]显著升高（Pa〈0．05）。结论常压高氧可引起新生大鼠脑细胞的凋亡及氧化应激，氧化应激与高氧性脑损伤密切相关。     

新生儿痰真菌生长的临床意义及相关因素探讨

目的探讨新生儿痰真菌生长的临床意义及相关因素。方法回顾性分析149例诊断为新生儿肺炎且痰培养结果阳性住院新生儿的临床资料,根据痰培养结果将患儿分为真菌组、混合组和细菌组,运用Х^2检验及方差分析等统计学方法,比较三组的临床资料。结果（1）真菌组40例、混合组30例和细菌组79例,痰真菌生长占47．0％（70／149）。（2）三组间白细胞数分别为（10．3±3．5）×10^9／L、（11．7±5．2）×10^9／L和（14．4±10．5）×10^9／L,F=3．78,P=0．03;中性粒细胞数分别为（5．1±3．3）×10^9／L、（7．4±4．7）×10^9／L、（9．0±7．4）×10^9／L,F=5．50,P=0．01;下列因素所占比例,三组分别为：早产儿32．5％（13／40）、20％（6／30）和12．7％（10／79）,Х^2=6．68,P=0．04;母产前使用糖皮质激素10．0％（4／40）、6．7％（2／30）和0％（0／79）,P=0．01;使用三联抗生素治疗10．0％（4／40）、16．7％（5／30）和2．5％（2／79）,P=0．02;碳青霉烯类药物治疗32．5％（13／40）、63．3％（19／30）和17．7％（14／79）,Х^2=21．26,P=0．00。上述6个因素三组间差异均有显著统计学意义。（3）以痰真菌生长作为因变量进行Logistic回归分析,共2个变量进入最佳回归方程：碳青霉烯类药物（克倍宁或泰能）治疗（X1）、早产儿（X2）,建立影响痰真菌生长的主效应模型Logistic（SCF）=β0（0．12）＋1．63X1＋1．20X2（Х^2=43．04,P〈0．05）。（4）仅一次痰真菌生长,抗真菌治疗与否未愈率分别为10．0％（2／22）和0％（0／43）,P=0．111;继续住院时间分别为（225．8±7．7）d和（434．1±4．7）d,t=1．095,P=0．278,均无统计学意义。结论（1）在新生儿肺炎中,痰真菌生长比较普遍,以白色念珠菌为主。（2）早产儿、碳青霉烯类抗生素治疗可作为痰真菌生长的独立危险因素。（3）仅一次痰真菌生长只提示需作进一步真菌检查,不能凭此确诊肺部真菌感染或决定是否抗真菌治疗。     

促肝细胞生长素对大鼠肾缺血再灌注损伤细胞凋亡的干预

目的探讨促肝细胞生长素（pHGF）对肾缺血再灌注损伤（IRI）大鼠肾功能及‘肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法雄性Sprague—Dawley大鼠32只，随机分为假手术组（组I）、缺血再灌注组（组Ⅱ）、缺血再灌注前pHGF干预组（组Ⅲ）和缺血再灌注后pHGF干预组（组Ⅳ）。采用无损伤动脉夹钳夹大鼠双侧肾蒂45min，制作肾IRI模型。组I和组Ⅱ腹腔注射等量9g／L盐水（0．8mL），组Ⅲ和组Ⅳ分别在术前和术后腹腔注射pHGF 50mg／kg。于IRI 12 h股动脉采血，处死动物后迅速摘取其左侧肾脏。采用酶法检测血清肌酐（Scr），采用肾组织原位细胞凋亡标记法（TUNEL）检测肾小管上皮细胞凋亡。结果组Ⅱ血清Scr水平（120．850±22．237）μmol／L明显高于组I（22．775±6．508）μmol／L（P〈0．01），组Ⅲ（60．413±10．197）μmol／L和组Ⅳ（69．40±11．443）μmol／L表达水平均明显较组Ⅱ下降（Pa〈0．01）。组Ⅱ肾脏凋亡阳性细胞的表达（26．850±1．476）较组I（0．90±0．385）明显升高（P〈0．01），组Ⅲ（8．30±1．146）和组Ⅳ（9．0±0．869）均较组Ⅱ显著下调（Pa〈0．01）。组Ⅲ和组Ⅳ间各项值比较差异均无显著性差异（Pa〉0．05）。结论pHGF能显著降低肾缺血再灌注损伤大鼠血清Scr水平，显著抑制其肾小管上皮细胞凋亡，对缺血性急性肾衰竭既有保护又有治疗作用。     

新生鼠窒息后心肌基质金属蛋白酶活性与心肌损害的相关性

目的探讨新生鼠窒息后心肌组织心肌基质金属蛋白酶（MMPs）表达与心肌损害的相关性。方法60只7—10日龄Wistar鼠,随机分成对照组（D组）、窒息组（A、B、C3组,分别为窒息复氧后1、7、14d）,每组15只。窒息组模拟新生鼠常压窒息模型,测定cTnI水平;心肌组织MMPs-3、9活性;心肌病理积分及胶原含量。结果cTnI（ng／m1）A组（0．3680±0．40）明显高于D组（0．0783±0．06）P〈0．05,B组下降（0．1889-i-0．15）P仍〈0．05,C组降至正常（0．1338±0．07）P〉0．05;心肌组织MMPs-3活性A组（0．1847±0．04）,B组最高（O．2780±0．05）,C组（0．2014±0．05）,与D组（0．1213±0．03）比较P均〈0．05;MMPs-9活性A、B、C组逐渐增高（0．1502±0．01、0．1715±0．01、0．1868±0．03、P均〈0．05）;心肌胶原含量A、B、C组逐渐增高（35．59±1．09、38．94±0．67、40．69±0．75ng／ml分别为P〉0．05、P〈0．05、P〈0．05）;MMPs-3、9表达与心肌病理积分呈正相关（r分别为0．669、0．667,P均〈0．05）,与胶原含量呈正相关（r分别为0．482、0．679,P均〈0．05）。结论新生鼠窒息后心肌MMPs-3、9过度激活,继发胶原含量增高,MMPs-3、9活性与心肌病理损害密切相关。提示MMPs参与了窒息后心肌损害,可能是心肌间质重塑的因素之一。     

低体积分数氧预处理对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马区脑红蛋白变化的影响

目的观察低体积分数氧（低氧）预处理对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠脑红蛋白（NGB）变化的影响，探讨低氧预处理与NGB的关系。方法随机将出生7d Wistar大鼠110只分为3组：假手术组（n=10）、HIBD组（n=50）、低氧预处理后HIBD组（n=50），HIBD组和低氧预处理后HIBD组在模型建立后1、5、15、30和60min各个时间点再分为5个亚组。采用双侧颈总动脉结扎的方法建立HIBD模型，应用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组织化学方法检测在低氧预处理干预下脑缺氧缺血后NGB mRNA及蛋白质在不同时间的表达量。结果RT-PCR半定量分析：HIBD组NGB mRNA在1、5min时相对表达量均显著高于假手术组（Pa〈0．05）；15、30和60min表达下降，与假手术组比较无统计学意义（Pa〉0．05）。与HIBD组比较，低氧预处理后HIBD组1、5min NGB mRNA相对表达量增加，15、30和60min下降，但差异均无统计学意义（Pa〉0.05）。免疫组织化学结果显示低氧预处理后HIBD组海马区域NGB在1、5、15、30和60min平均吸光度（195．0±11．26，202．41±12．20，182．60±15．72，178．22±14．37，164．86±28．99）与HIBD组（195．59±11．59，201．40±13．61，178．09±18．92，173．75±14．30，163．45±18．66）比较无统计学意义（Pa〉0．05）。结论低氧预处理对新生大鼠的脑保护作用可能与NGB的变化关系不大。     

儿童乙型肝炎病毒相关性肾炎74例临床病理分析

目的探讨儿童乙型肝炎病毒相关性肾炎（HBV-GN）的临床和病理特点。方法收集经肾活检确诊为HBV—GN的74例患儿入院时临床表现（水肿、血压）及实验室检查结果（尿常规、24h尿蛋白定量、乙肝5项、血清清蛋白、血HBVDNA等），并对其肾组织进行光镜（常规染色及特殊染色）及免疫组织化学检查（IgG、IgA、IgM、C3e、C4e、HBsAg、HBcAg）。根据血清HBVDNA水平不同将74例HBV—GN患儿分为高病毒载量组（HBVDNA〉1．0×10^8copies／L）58例和低病毒载量组（HBVDNA〈1．0×10^8copies／L）16例，并比较分析其临床病理特点。结果临床表现：肾病综合征（NS）52例（70．3％）；血尿和蛋白尿13例（17．6％）；单纯性蛋白尿6例（8．1％）；单纯性血尿3例（4．1％）。病理分型：膜性肾病（MN）56例（75．7％）；系膜增生性肾小球肾炎（MsPGN）12例（16．2％）；膜增生性肾小球肾炎（MPGN）5例（6．6％）；毛细血管内增生性肾小球肾炎（EnPGN）1例。高病毒载量组与低病毒载量组入院时血清清蛋白[（22．04±7．69）g／L vs（31．95±5．83）g／L]，C3[（0．759±0．252）g/L vs （0．986±0．330）g／L]比较均有统计学差异（Pa〈0．05）。高病毒载量组病理类型多样，而低病毒载量组相对单一，以MsPGN、MN为主。结论HBV—GN患儿学龄期多见，且男多于女，临床表现以NS为主，病理类型以MN多见，血清HBVDNA水平与HBV—GN病变密切相关。     

双酚A对神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株移植瘤生长的影响

目的环境内分泌干扰物对人类健康的影响已引起全球的关注。本研究旨在观察双酚A（BPA）对神经母细胞瘤生长的影响及其可能机制。方法常规培养SK-N—SH细胞，接种于双侧卵巢切除（OVX）的裸小鼠皮下。可触摸到肿瘤结节时，将裸鼠随机分为3组：①对照组（OVX＋溶剂，OVX，n=9）；②E2组（OVX＋E2，500ug·kg^-1·d^-1，n=11）；③BPA组（OVX＋BPA，200mg·kg^-1·d^-1，BPAgroup，n=10）。每周2次检测皮下移植瘤体积（TV）和裸鼠体重。第18d，解剖处死所有裸鼠，称移植瘤重量。免疫组化方法检测肿瘤组织微血管内皮细胞的表达情况，在光学显微镜高倍视野下分别计数肿瘤组织的微血管密度（MVD））。用Western Blot方法检测肿瘤组织血管内皮细胞生长因子（VEGF）蛋白的表达情况。结果实验终点时，OVX组、E2组和BPA组的TV分别为（2．62±0．54）cm^3、（5．07±0．93）cm^3和（4．19±0．68）cm^3，BPA组较OVX组增高59％（P〈0．05）。3组裸鼠体重没有明显差异（P〉0．05）。3组瘤重分别为（1．64±0．18）g、（2．58±0．19）g、（2．96±0．27）g，BPA组较OVX组增高82％（P〈0．05）；3组中Ⅷ因子相关抗原均染色，E2组（22．73±1．46）及BPA组（27．76±2．24）MVD较对照组（15．14±1．12）明显增高（P〈0．01），VEGF的蛋白表达亦较对照组增高（P〈0．05）。结论BPA可促进人神经母细胞瘤裸鼠皮下移植瘤生长，微血管形成可能参与了促生长作用。     

基于人工神经网络的血清蛋白质指纹图谱模型在先天性巨结肠患儿诊断中的应用

目的建立蛋白质芯片技术检测血清蛋白质指纹图谱的方法，探讨基于人工神经网络（ANN）的血清蛋白质指纹图谱模型在先天性巨结肠（HD）患儿诊断中的应用价值。方法应用蛋白质指纹图谱分析仪测定HD患儿64例、巨结肠类缘病患儿25例和健康儿童23例血清标本的蛋白质指纹图谱，并结合ANN方法进行数据分析。112例标本随机分成训练组66例（HD40例，巨结肠类缘病14例，健康儿童12例）和盲法测试组46例（HD24例，巨结肠类缘病11例，健康儿童11例）。利用从训练组得出的基于ANN的血清蛋白质指纹图谱模型，对46例未知血清进行检测，并与X线影像学检查结果进行比较。结果筛选出质荷比（m／z）位于7211．6和2864．8的蛋白质标志物2个。在HD组表达强度分别为6．15±2．21和2．78±1．21，巨结肠类缘病组表达强度分别为12．82±7．56和4．86±0．91（Pa〈0．01）。筛选出m／z位于6884．2和5639．2的蛋白质标志物2个。HD组表达强度分别为4．09±1．78和15．57±8．87，健康对照组表达强度分别为8．31±3．07和30．31±6．18（P〈0．01）。应用该方法对HD患儿进行诊断的准确率、敏感度和特异度分别为89．13％（41／46例）、87．50％（21／24例）和90．91％（20／22例），明显高于x线影像学检查68．8％（77／112例）、82．8％（53／64例）和50．0％（24／48例）。结论在HD患儿的诊断中，利用从训练组得出的基于ANN的血清蛋白质指纹图谱模型较传统方法有更高的敏感性和特异性。