分泌抗HBeAg单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和初步应用

应用血清纯化的HBeAg免疫BALB/c小鼠,其脾细胞与Sp 2/0骨髓瘤细胞融合,获得两株分泌抗HBe的杂交瘤细胞株(HE_(20)IB_8、HE_(21)IIG_(11))。接种同系小鼠腹腔诱生的腹水中用ELISA测定抗HBe效价达3.2～6.4×10~6。因相捕捉HBeAg、HBsAg和HBcAg特异性试验以及中和试验证明是针对HBeAg的特异性抗体。临床应用作为ELISA检测HBeAg和抗HBe试剂中的包被抗体配合人抗HBe-HRP与Abbott试剂结果非常一致。     

酶标固相免疫测定(ELISA)检测乙型肝炎e抗体

前文报道我们用双抗体夹心法EIA检测乙型肝炎e抗原(HBeAg)获得成功。在此基础上我们建立了检测乙型肝炎e抗体(抗HBe)的EIA法。所用试剂和操作与检测HBeAg的方法基本相同,只是在检测时于血清标本中加入一定浓度的HBeAg阳性血清(中和试剂),以中和标本中相应量的抗HBe。具体操作如下:(1)用抗HBe IgG包被经鞣酸处理的聚苯乙烯反应板。(2)在测定孔中加入血     

乙型肝炎病毒e抗源单克隆抗体研制及临床初步应用

基因工程菌生产的HBeAg,用十二烷基磺酸钠(SDS)和2-巯基乙醇(2-ME)处理后作为抗原免疫雌牲BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与同系小鼠骨髓瘤细胞(Sp2/0)融合,共获约3000个杂交瘤细胞克隆。经二种不同的ELISA筛选,得到16个分泌抗HBe McAb的杂交瘤细胞系。其中以94.127二株杂交瘤细胞分泌的抗HBe McAb效价较高(ELISA效价均为10~(-6),与HBeAg作琼脂糖双向扩散时还可出现肉眼所见沉淀线)。染色体检查证实为杂交瘤     

用间接血凝和血凝抑制试验测定HBV携带者血清中的抗HBe和HBeAg

本文报告用纯化的HBeAg包被于醛化绵羊红细胞,建立了测定血清抗HBe的间接血凝试验(PHA)和HBeAg的间接血凝抑制试验(PHAI)。试验是特异性的,PHA和PHAI比琼脂糖凝胶双向免疫扩散(ID)分别敏感约1,000倍和250倍。对149例HBsAg阳性血清的测定结果表明,抗HBe的检出率由ID的20.13％提高到30.87,HBeAg的检出率由22.82％提高到53.69。抗HBe和HBeAg的总检出率为84.56％,比ID提高一倍。发现34例HBeAg阳性血清兼有抗HBe和HBeAg。统计表明,兼有抗HBe和HBeAg的血清显著地较单项抗HBe或HBeAg阳性血清易于在ID中被检出。     

ELISA和RIA测定小鼠血清中类别特异性抗体的敏感性比较

作者选用单抗球蛋白酶联免疫吸附试验(ELISA),双抗体球蛋白ELISA和双抗球蛋白放射免疫试验(RIA),在相同的实验条件下,检测小鼠血清中类别特异性抗体,以比较其优缺点。主要试剂有:鼠抗人血清白蛋白抗血清、兔抗鼠IgG_1、羊抗兔血清(分碱性磷酸酶标记和~(125)I标记两种)。二种ELISA技术均在硬质平底微板上进     

分泌抗HBe单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及初步鉴定

乙型肝炎e抗原(HBeAg)是乙型肝炎病毒核心颗粒主要构成蛋白,其合成受乙肝病毒遗传密码所控制。HBeAg检测对肝病临床诊断、传染性判定以及预后等方面均具有重要价值。目前常用的检测方法均是以乙肝患者血清中的e抗体(抗-HBe)作为检测试剂。由于试剂来源困难,且每批效价不一,很难制备统一,标准HBcAg检测试剂,不利于质量控制。近年来改用杂交瘤技术制备抗HBe单克隆抗体(McAb),先后已有一些成功的报道;这些抗HBe McAb对乙型肝炎研究、HBeAg的兔疫化学结构、HBeAg与乙型肝炎c抗原(HBcAg)之关系的研究起了很好的推动作用。但是这些抗HBe McAe效价尚不很理想,     

抗肌红蛋白单克隆抗体的制备与鉴定及其初步应用

目的 制备和鉴定抗肌红蛋白(Mb)单克隆抗体,为人肌红蛋白检测试剂的研制奠定基础.方法 用人肌红蛋白抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术进行细胞融合,用ELISA方法筛选,有限稀释法进行克隆化培养阳性杂交瘤细胞株.ELISA法测定小鼠腹水滴度,CLIA法对抗体进行配对实验与特异性鉴定.结果 筛选培养出9株分泌抗肌红蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,腹水滴度为1∶5×104 ～ 1∶2×105.通过配对实验,有5株抗体6种组合可以成功配对.这5株抗体的亲和常数为6.46×108 ～ 3.68×109 L/mol.用5株抗体所建立的6种化学免疫分析方法与人Hb交叉反应率为7.434×103％ ～2.904×10-2％,与人ALB交叉反应率为4.980×10-7％ ～3.830×10-5％.用Mb17B6与Mb21E8两株抗体建立的CLIA标准曲线的线性系数为0.997,灵敏度为6.02ng/mL.结论 成功制备了可以应用于免疫分析的抗肌红蛋白单克隆抗体.     

抗禽流感病毒M2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备抗禽流感病毒M2蛋白的单克隆抗体(mAb)并进行特性鉴定.方法:利用纯化的融合蛋白GST-M2免疫BALB/c小鼠,然后以GST-M2 和 GST分别作为ELISA抗原进行筛选,选择GST-M2抗原检测强阳性、GST抗原检测阴性的杂交瘤细胞进行克隆,建立能稳定分泌抗AIV M2 mAb的杂交瘤细胞株.mAb的效价采用间接ELISA和琼脂扩散试验(AGP)测定,用夹心ELISA测定Ig亚类,Western blot、抗原捕获ELISA、间接免疫荧光及免疫组化染色法检测 mAb 的特性.结果:得到4株分泌抗禽流感病毒M2蛋白的mAb的杂交瘤细胞株1E1、2F8、4E3 和 5D6,小鼠腹水中抗体的ELISA效价大于210×100、AGP效价大于1:4.抗体亚类鉴定1E1和4E3为IgG2a,2178和5G6为IgG2b.抗原捕获ELISA表明,2F8 wAb能与H5、H9亚型AIV发生特异性反应,而不能与鸡新城疫病毒(NDV)和鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)反应.IFA和免疫组化试验表明,2F8 mAb能够与感染了禽流感病毒的MDCK细胞以及鸡体组织细胞发生特异性结合.结论:本研究获得4株抗禽流感病毒M2蛋白的mAb,其中2F8mAb的效价高、特异性强,可作为检测AIV方法的核心试剂.     

用生物素-抗生物素酶联免疫吸附试验作单纯疱疹病毒分型并与限制性核酸内切酶分析和应用单克隆抗体免疫荧光法的比较

应用捕捉法生物素-抗生物素酶联免疫收附试验(Capture B/SA ELISA)测定单纯疱疾病毒(HSV)的型别是在用单克隆抗体(McAb)分型的基础上发展起来的。兔抗HSVIgG用作捕捉抗体,生物素连接的特异性鼠抗HSV-1单克隆抗体或兔抗HSV-1、HSV-2型特异性多克隆抗体作为检测抗体。被捕捉的抗原用抗生物素连接的碱性磷酸酶以ELISA法检测,该抗生物素可与检测抗体中生物素分子反应。将捕捉法B/SA ELISA分型的效率     

汉滩病毒G2重组腺病毒的表达及其基因免疫的研究

目的:在VeroE6细胞中表达汉滩病毒(HTNV)囊膜糖蛋白G2重组腺病毒(AdenoG2),并探讨其诱导免疫应答特性。方法:以HTNVAdenoG2病毒原种(滴度约1×1013pfu/L)感染VeroE6细胞,用IFA法检测其表达产物。以表达产物免疫BALB/c小鼠后,用ELISA、微量细胞培养中和试验及淋巴细胞增殖试验检测体液及细胞免疫应答。结果:用HTNVAdenoG2感染VeroE6细胞后,可检测到HTNV糖蛋白G2的表达。用HTNVAdenoG2免疫小鼠后,可诱导产生抗HTNV糖蛋白G2的特异性抗体,抗体效价为1∶40。微量细胞培养中和试验的结果表明,HTNVAdenoG2还可刺激小鼠产生低水平的中和抗体;但淋巴细胞的增殖反应不明显。结论:在VeroE6细胞中成功地表达了HTNV糖蛋白G2。以HTNVAdenoG2免疫小鼠后,主要刺激小鼠产生特异性的抗HTNV体液免疫应答,而特异性的细胞免疫应答不明显。本研究结果为HTNV基因工程疫苗的研制提供了实验依据。     

突变型乙肝病毒前C-C基因疫苗免疫BALB/C小鼠的研究

目的 了解乙肝病毒前C-C基因疫苗(VEC)的突变型VE2、VE4免疫BALB/c小鼠后诱发特异性体液和细胞免疫的效果.方法 分别用突变型和非突变型DNA疫苗免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠抗HBc、抗HBelgG,免疫第28天取小鼠脾细胞用酶免疫斑点(ELISPOt)方法和CTL杀伤试验检测特异性细胞免疫功能.结果 VE2、VFA组抗HBe水平高于VEC组,抗HBc水平差异无统计学意义.3种质粒均能引发特异性细胞免疫反应,VE4、VE2强于VEC;联用VM7免疫后能使VEC、VE2、VE4特异性细胞免疫反应增强.结论 突变型前C-C基因疫苗在诱导BALB/c小鼠特异性体液和细胞免疫方面优于突变前.γ干扰素基因可作为基因佐剂增强HBV DNA疫苗诱导的特异性细胞免疫反应.     

用于定量ELISA方法的抗人β2微球蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备抗人β2微球蛋白(β2-microglobulin,β2-MG)特异性单克隆抗体并建立其双抗体夹心定量ELISA免疫检测方法。方法以高纯度的人β2-MG作为免疫原,采用常规免疫和脾内免疫相结合的方法免疫纯系Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术制备抗人β2-MG单克隆抗体并鉴定,以此为基础建立双抗体夹心ELISA检测方法。结果制备出5株稳定分泌抗人β2-MG的单克隆抗体,经鉴定5株单抗皆为IgG1类,均为β2-MG抗原特异性抗体。经抗体配对试验筛选出1对可用于ELISA检测的配对抗体,建立了定量ELISA检测方法。结论制备出抗人β2-MG单克隆抗体并建立了双抗体夹心定量ELISA免疫检测方法,与国外试剂盒检测结果相关性良好。     

抗人精胺氧化酶单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备小鼠抗人精胺氧化酶(SMO)单克隆抗体(mAb),并验证其在Western blot,免疫组织化学等方法中的应用价值.方法:用pET-15b/SMO质粒转化BL2 (DE3)后,IPTG诱导表达带6×His标签的SMO重组蛋白并用Ni-NTA树脂亲和层析纯化.用SMO重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞杂交融合,获得能高效合成和分泌抗SMO mAb的杂交瘤细胞株.所得抗体的特异性和效价用ELISA和Western blot法以及免疫组织化学技术检测.结果:成功建立了稳定分泌鼠抗人SMO的mAb杂交瘤细胞株,获得的mAb效价高、特异性强,可用于ELISA,Western blot,免疫组织化学等分析技术.结论:成功制备出高特异性并能用于多种生物分析技术的SMO mAb.     

192例乙型肝炎患者七项血清学指标的观察

<正> 1986年我科应用ELISA和RIA方法检测了192例血清标本的HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc HBs/IgM复合物、pHSA-r(多聚人血清白蛋白受体)等七项乙型肝炎免疫学标志。样本均来自乙肝专科门诊及确诊乙肝的住院病人,年龄21岁～60岁,男性125例(65.1％),女性67例(34.8％)。 192份标本中HBsAg均为阳性,其它六项指标的阳性率分别为抗HBs 8.3％(16/192),抗HBc97.9％(188/192),HBeAg 54.6％(105/192),抗HBe 34.8％(67/192),HBs/IgM复合物73.4％(141/192),pHSA-r 78.1％(150/192)。其中HBe     

鼠单克隆抗HBc检测病人血清抗HBc应用的研究

<正> 我们在建立分泌抗 HBc 杂交瘤细胞株后,将获得的鼠单克隆抗 HBc 进行纯化和辣根过氧化物酶标记作为酶联免疫吸附试验(ELISA)检测病人血清抗 HBc 诊断试剂(下称单克隆抗 HBc 试剂),并与多年来应用HBsAg 携带者血清纯化的抗 HBe IgG 及其酶标记物作为试剂(下称多克隆抗 HBc 试剂)的酶联免疫吸附试验及应用纯化 HBcAg的免疫粘连血凝试验进行了比较。现将结果报告如下。     

抗人IgA单克隆抗体的特性分析和初步应用

用常规免疫法和脾内直接注射抗原(SIgA)法免疫小鼠,平行作细胞融合实验,建立4株分泌抗人IgA McAb杂交瘤细胞株,所得McAb对人IgA有较高特异性和抗体效价,经免疫印染法表明对α重链呈特异性。用抗原竞争抑制ELISA和ELISA添加试验分析McAb的抗原结合位点,均表明McAb A4与A1b、A3b、A9针对不同的抗原位点。用于检测EB病毒VCA和EA的IgA抗体,显示满意的特异性和敏感性,这将为有关试剂的生产提供稳定的抗体来源。     

复合前列腺特异性抗原的单克隆抗体制备及化学发光法免疫定量检测试剂研究

目的:获得特异性检测复合前列腺特异性抗原(c-PSA)的单克隆抗体配对,建立基于化学发光c-PSA 免疫定量试剂。方法:利用市购c-PSA 抗原免疫6 周龄雌性BALB/ c 小鼠,间接法ELISA 差异筛选抗c-PSA、游离前列腺特异性抗原(f-PSA)、总前列腺特异型抗原(t-PSA)的抗体,抗体配对后化学发光定量检测血清中c-PSA 蛋白。结果:获得抗体配对1A10/7D6-SAE,经c鄄PSA 标准品及临床血清样本初步筛选,该抗体配对适用于基于化学法发光的免疫反应定量检测试剂的开发;血清阳性样本与阴性样本检测结果显示具有统计学意义(P<0.000 1);阳性样本定量结果与Siemens 公司复合前列腺特异性抗原测定试剂盒(直接化学发光法)的相关系数为0.97;线性范围为0郾1 ~ 100 ng/ ml;检测灵敏度为0.005 ng/ ml。结论:成功筛选获得特异性检测c-PSA 的抗体配对,并开发c鄄PSA 化学发光免疫定量试剂,其检测能力与国际主流试剂相当。     

用McAb测定人血清中特异性IgE的研究

<正> 近年来,测定过敏病人血清中过敏原特异性IgE水平常采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和放射性过敏原吸附试验(RAST)。过去国内测定特异性IgE所用的试剂均为抗人IgE多克隆抗体(PcAb)。     

抗人IgG单克隆抗体在IgG抗-HBc检测中的初步应用

本文对分泌高滴度抗人IgG的杂交瘤进行克隆化培养,获得了单克隆抗人IgG抗体。其中一株(HE_(15)D_3)经免疫扩散等试验证实为抗人IgGγ链特异性抗体。但抗人IgG的亚类特异性尚待鉴定。 用此株单克隆抗体包被聚苯乙烯板(ELIA抗体捕获法)检测了236例肝炎患者及40例健     

抗鸡IgG单克隆抗体的研究

本研究利用小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞系与鸡IgG免疫的BALB/c小鼠脾细胞融合,建立了5个能持续分泌抗鸡IgG单克隆抗体(鸡IgG-McAbs)的杂交瘤细胞株(C_(41)、C_(42)、C_(43)、C_(44)C_(45));染色体数分别平均为99、99、101、102和99。用琼脂双扩散试验(ID)、间接ELISA和ELISA双抗体夹心法等试验证明:杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体只与鸡IgG发生特异性反