肿瘤患者红细胞调控球蛋白变化新的自然实验体系研究

目的采用血液免疫反应路线图实验体系探讨肿瘤患者红细胞对白细胞分泌球蛋白能力的调控作用。方法将癌细胞悬液(5×106/ml)0·2ml或生理盐水0·2ml加至枸橼酸抗凝全血细胞悬液(包括红细胞和所有白细胞)0·2ml或白细胞悬液0·2ml和血浆0·3ml中,37℃水浴1h,用OlympusAU100生化测定仪检测球蛋白含量。分组:①全血细胞实验组:癌细胞0·2ml加入全血细胞悬液0·2ml和血浆0·3ml;②全血细胞对照组:生理盐水0·2ml加入全血细胞悬液0·2ml和血浆0·3ml;③白细胞实验组:癌细胞悬液0·2ml加入白细胞悬液0·2ml和血浆0·3ml;④白细胞对照组:生理盐水0·2ml加入白细胞悬液0·2ml和血浆0·3ml。结果肿瘤患者全血细胞自然实验组球蛋白激活率(0·31±0·09)明显低于正常人全血细胞自然实验组球蛋白激活率(0·39±0·14)。肿瘤患者全血细胞自然对照组红细胞对球蛋白吸附率(0·09±0·08)也明显低于正常人全血细胞自然对照组红细胞对球蛋白的吸附率(0·29±0·14)。结论血液免疫反应路线图自然实验体系用于测定红细胞对球蛋白的调控作用,方法简便,实用,肿瘤患者红细胞对球蛋白含量的调控能力明显下降。     

脐血红细胞CD35调控白细胞CXCR4表达能力的变化

目的探讨脐血红细胞调控白细胞CXCR4表达能力的变化。方法采用灭活癌细胞(S180,5×106/ml)0·2ml(或生理盐水)加入全血细胞(或白细胞)0·2ml和血浆0·3ml中,37℃温育1h,用流式细胞仪免疫荧光法测定红细胞CD35和白细胞(淋巴细胞、粒细胞)CXCR4分子表达量。分组:①癌细胞悬液0·2ml加全血细胞悬液0·2ml和血浆0·3ml;②生理盐水0·2ml加全血细胞悬液0·2ml和血浆0·3ml;③癌细胞悬液0·2ml加白细胞悬液0·2ml和血浆0·3ml;④生理盐水0·2ml加白细胞悬液0·2ml和血浆0·3ml。结果脐血红细胞CD35表达量在S180激活后下降不如正常人红细胞明显,而白细胞CXCR4表达量在S180激活后上升不明显;正常人全血红细胞CD35表达量在S180激活后明显下降(40·21%±11·52%vs28·65%±8·08%,P<0·01),而粒细胞CXCR4表达量明显上升(40·62%±17·89%vs64·18%±11·69%,P<0·01)。结论脐血红细胞免疫调控能力和白细胞免疫功能都明显低下。     

原发性肝癌患者红细胞调控IL-8新的实验体系研究

目的采用血液免疫反应路线图实验体系探讨原发性肝癌患者红细胞调控白细胞分泌IL-8的能力。方法将癌细胞(S180)悬液0·2ml(5×106/ml)或生理盐水0·2ml加至枸橼酸抗凝全血细胞悬液(或白细胞悬液)0·2ml和血浆0·3ml中,37℃水浴1h,酶联免疫法测定反应液中IL-8含量。结果原发性肝癌患者全血细胞实验组、全血细胞对照组、白细胞实验组和白细胞对照组的IL-8含量(pg/ml)分别为376·35±243·96、353·64±271·92、461·27±277·11和424·97±278·93,正常人相应各组则分别为11·36±6·93、4·98±4·35、29·41±30·66和20·77±24·20;原发性肝癌患者全血细胞实验组、白细胞实验组和正常人全血细胞实验组、白细胞实验组的癌细胞激活率(%)分别为0·22±0·24、0·25±0·53、2·49±2·33和0·75±0·21;原发性肝癌患者全血细胞实验组、全血细胞对照组和正常人全血细胞实验组、全血细胞对照组的红细胞IL-8吸附率(%)分别为0·22±0·18、0·17±0·33、1·18±2·29和0·86±0·49。原发性肝癌患者红细胞IL-8激活率及IL-8吸附率均明显低于正常人(P<0·01)。结论采用血液免疫反应路线图实验体系测定红细胞对IL-8的调控作用方法简便、实用。原发性肝癌患者红细胞对IL-8含量的调控能力明显下降。     

构建现代系统免疫学新的实验研究体系

1981年Siegel等提出红细胞免疫系统的新概念，1982年郭峰首先发现红细胞能黏附补体包被的酵母菌。郭峰于1986年发现红细胞可黏附补体包被的癌细胞，并于1999年发现1滴血细胞悬液（包括红细胞、白细胞）能黏附补体包被的癌细胞，在各种血细胞黏附癌细胞形成的花环（黏附率）中，红细胞黏附率占99％，而白细胞黏附率只占1％。2001年郭峰发现红细胞促进淋巴细胞CR1天然免疫活性（或T淋巴细胞或NK细胞活性）与红细胞CR1基因密度多态性表达密切相关。2004年郭峰提出“红细胞天然免疫主干道理论”，认为存在血液免疫反应路线图：抗原（如癌细胞或酵母菌等）进入血循环可首先激活血浆中的补体，黏附上C3b等补体成分，然后黏附上红细胞，经处理后，最终黏附上白细胞，激活一系列血液免疫反应。郭峰认为在抗致病原的过程中存在4个要素：抗原、血浆（补体）、红细胞、白细胞。红细胞和补体在血液免疫反应调控中扮演重要的角色。我们构建了“现代免疫学新的实验研究体系”。癌细胞（或酵母菌）是一种抗原性细胞，能激活血液免疫反应，可以建立一种“血液免疫反应路线图”新的实验体系。各种免疫指标的变化（包括黏附率、IL-8、IL-12、CD35、CD44、CD55、CD59、CD4、C138、CD2、CD25、CXCR4、Fy6等）显示癌细胞（如S180）能激活血液免疫反应。因此，在此新的实验系统中，我们可以用许多新的有效的免疫学方法，研究血细胞和血浆之问、红细胞与白细胞之间的内在联系，并为天然免疫和适应性免疫研究及临床免疫治疗提供一种有用的方法。     

红细胞CD35在抗原激活淋巴细胞免疫反应中的作用

目的探讨红细胞CD35在抗原激活淋巴细胞免疫反应中的作用。方法用淋巴细胞分离液分离健康成人ACD抗凝全血获得淋巴细胞悬液(1×106/ml)和红细胞悬液(1×108/ml),以灭活腹水癌细胞S180(1×106/ml)作为激活抗原,以自体血浆作为反应基质,考察红细胞对淋巴细胞的调控能力,流式细胞仪检测淋巴细胞表面CD25的表达阳性率。单抗封闭红细胞CD35或EDTA破坏补体,观察淋巴细胞CD25表达的变化。结果CD35单抗封闭后淋巴细胞CD25表达量(18·22%±4·27%)明显降低;EDTA破坏补体后,淋巴细胞CD25表达量(18·79%±3·90%)比ACD抗凝组(23·29%±4·40%)明显降低,与CD35阻断组基本相同,但仍高于Hanks′液对照组(13·19%±2·96%)。结论红细胞CD35和血浆补体对抗原激活淋巴细胞免疫反应起着重要的调控作用;血浆中还存在其他调控淋巴细胞活化的机制。促进红细胞表面CD35分子表达、保持血浆补体活性对提高淋巴细胞免疫活性有着重要意义。     

红细胞调控白细胞免疫功能新的自然实验研究体系

目的用血液免疫反应路线图实验体系评估红细胞在白细胞免疫活性中的作用。方法将0·3ml血浆加入0·2ml全血细胞悬液(全血细胞组)或0·2ml白细胞悬液(白细胞组)中,37℃温育1h,用免疫酶联法测定IL-8和IL-12水平,流式细胞仪测定白细胞膜CD4、CD8、CD35和CXCR4表达量。结果全血细胞组IL-8和IL-12水平(分别为5·96±4·26、9·84±2·23ρB·pg-1·ml-1)明显低于白细胞组(分别为15·09±9·86、13·59±3·69ρB·pg-1·ml-1,P<0·05),淋巴细胞CD4、CD35、CXCR4表达量(分别为37·79±12·00、154·66±70·00、34·40±20·45)明显高于白细胞组(分别为18·54±11·32、83·26±35·99、16·69±11·09,P<0.01),粒细胞CD35表达量(603·63±257·64)明显高于白细胞组(384·86±174·16,P<0.01)。成人全血细胞组淋巴细胞和粒细胞CD35和CXCR4表达量明显高于脐血全血细胞组(P<0·05或P<0·01)。结论红细胞是白细胞(包括T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞、树突状细胞、粒细胞等)免疫功能的调控者和指导者,脐血红细胞免疫调节功能明显下降;本研究为红细胞免疫调控活性测定提供了新的近似自然的方法。     

消化道出血性休克患者输注红细胞悬液的意义

因食管胃底静脉曲张破裂,数小时内失血量超过1000ml,或循环血量的20%以上,同时伴有周围循环障碍,血压下降,有效循环血量减少,组织灌量不足,组织含氧量减少。因此改善微循环,治疗出血性休克,首选快速输注红细胞悬液补充血容量。在应用生理盐水,林格氏液,右旋糖酐或其他血浆代用品,均应选输血治疗,红细胞悬液在抢救过程中优于全血。     

新鲜血细胞对癌细胞的天然免疫反应性研究

为证实新鲜血细胞是否存在对癌细胞的快速天然免疫反应性 ,将癌细胞 (S180 )加入枸橼酸抗凝血中 37℃水浴 30min。结果显示 ,35例标本中 ,红细胞能免疫粘附癌细胞 ,白细胞也能免疫粘附癌细胞 ,但红细胞粘附癌细胞形成花环率 [(2 6 49± 18 9) % ]明显高于白细胞粘附癌细胞形成的花环率 [(0 86± 2 74) % ](P <0 0 1)。这种免疫反应可被抗CR1完全阻断。提示在新鲜血中存在对癌细胞的快速天然免疫反应 ,红细胞在新鲜血快速天然免疫反应中起重要作用     

羧甲基淀粉钠分离狗白细胞血小板的研究

为了适应极重度骨髓型急性放射病实验治疗工作的需要,在寻找红细胞沉降剂的研究中,发现作为一种新型代血浆而用于临床的羧甲基淀粉钠(即404代血浆)对狗血白细胞和血小板具有较好的分离作用,现简要报告如下: 在404代血浆内加入0.5％乙二胺四乙酸二钠(EDTA2Na)常规灭菌后置室温保存。狗血液6ml与404代血浆4ml混合后,于室温下静置3分钟红细胞即开始下沉,12分钟沉降完毕。     

羟乙基淀粉进行体外血液稀释后的血液流变学改变

目的 体外实验研究应用羟乙基淀粉（Hydroxyethyl-Starch,HES)进行体外血液稀释对血液流变学的影响。方法 选择声带息肉病人40例,随机分为中分子羟乙基淀粉（HES）（20例）及林格氏液组（20例）,采集静脉血12ml,等量分装于4支肝素抗凝试管中,以6％HES及林格氏液进行体外血液稀释,致使 血球压积（％）降至30、25、20,上机测定各标本全血粘度、血浆粘度、Hct、红细胞聚集指数、红细胞变形指数、纤维蛋白原等血液流变学指标。结果 HES组全血粘度、红细胞聚集指数、纤维蛋白原稀释后较稀释前明显降低（P＜0．05）,红细胞变形指数、血浆粘度明显升高（P＜0．05）,并且与对照组比较相差显著（P＜0．05）。结论 6％HES可降低全血粘度、红细胞聚集率,提高 红细胞变形指数,可明显改善体外血血液流变学状态。     

The measurement of limb blood flow using technetium-labelled red blood cells

A method for measuring blood flow below the knee during reactive hyperaemia induced by 3 min of arterial occlusion has been developed. Subjects are positioned with lower limbs within the field of view of a gamma camera and pneumatic cuffs are placed below the knees to isolate the blood and induce a hyperaemic response. The remaining blood pool is labelled with 99Tcm-labelled red cells. Blood flows have been derived from the initial gradients of time-activity curves and from equilibrium blood sampling. The technique has been validated using a tissue-equivalent leg phantom and peristaltic pump. The method has been applied to a small group of patients with peripheral vascular disease and to normal controls. The mean value (+/- SD) of limb perfusion for normal controls was found to be 16.4 +/- 3.0 ml/100 ml/min and for patients with intermittent claudication was 5.1 +/- 2.6 ml/100 ml/min. Flow measurements are found to correlate with clinical findings and with symptoms. Reproducibility (established by repeated measurements) is high. The method is well tolerated even by patients suffering from rest pain.     

Automatic recognition of five types of white blood cells in peripheral blood

This paper proposes image processing algorithms to recognize five types of white blood cells in peripheral blood automatically. First, a method based on Gram-Schmidt orthogonalization is proposed along with a snake algorithm to segment nucleus and cytoplasm of the cells. Then, a variety of features are extracted from the segmented regions. Next, most discriminative features are selected using a Sequential Forward Selection (SFS) algorithm and performances of two classifiers, Artificial Neural Network (ANN) and Support Vector Machine (SVM), are compared. The results demonstrate that the proposed methods are accurate and sufficiently fast to be used in hematological laboratories.     

Enzyme activity in human mononuclear blood cells

Summary Two different kinds of mononuclear blood cell samples (mixed blood cell population consisting of lymphocytes, monocytes, and platelets; pure lymphocyte population) were tested for enzyme activity of mitochondrial malic enzyme, peptidase A, and -fucosidase. None of the three enzymes was demonstrable in the pure lymphocyte preparation; the mixed cell population, however, exhibited a distinct enzyme activity. Positive reactivity is thus obviously dependent upon monocytes and/or platelets.     

Sickle red blood cells accumulate in tumor.

The preferential accumulation of sickle blood cells in tumor vasculature is demonstrated noninvasively using MRI and sickle red blood cells loaded with Gd-DTPA and invasively by two other techniques. The distribution of red blood cells in rat brain tumors relative to normal brains were measured using three separate techniques: MRI of Gd-DTPA loaded cells, fluorescent microscopy detection of Oregon Green 488 fluorescence conjugated to a streptavidin-biotin complex that binds to red blood cell surface proteins, and autoradiography using a technetium (99m)Tc-labeling kit. Labeled red cells were infused intravenously in rats with brain tumors. Sickle cells preferentially accumulated in tumor relative to normal brain, with highest concentrations near the tumor / normal tissue boundary, whereas control normal red cells did not preferentially aggregate at the tumor periphery. This demonstrates the potential of sickle red blood cells to accumulate in the abnormal tumor vessel network, and the ability to detect their aggregation noninvasively and at high spatial resolution using MRI. The application of the noninvasive measurement of sickle cells for imaging tumor neovasculature, or as a delivery tool for therapy, requires further study.