多层螺旋CT在耳硬化症中的诊断价值

目的:评价多层螺旋CT在诊断耳硬化症中的价值。材料与方法:回顾性分析2012年3月至2014年12月间经手术确诊的耳硬化症患者共30例,患者术前均行多层螺旋CT检查。结果:30例共54耳显示异常。依据病变部位分为窗型、耳蜗型及混合型。窗型共40耳,其中前庭窗受累30耳,前庭窗及蜗窗共同受累10耳;耳蜗型共6耳,仅耳蜗周围骨质受累;混合型共8耳,耳蜗、前庭窗、蜗窗、内耳迷路广泛受累,其中1耳伴有颈静脉球高位。结论:多层螺旋CT能够清晰显示耳硬化病变部位及范围,对术前评估提供重要信息。     

水通道蛋白-4在正常兔脊髓内的分布研究

目的明确正常兔脊髓水通道蛋白-4（AQP4）的表达分布规律，为进一步研究脊髓组织中水分子的运输及平衡调节提供理论依据。方法采用免疫组化技术检测AQP4在兔脊髓内的表达分布。结果AQP4在灰质的分布明显多于白质，主要为神经胶质细胞的细胞膜着色，脊髓中央管周围、软脊膜以及血管周围呈极性分布，邻近蛛网膜下腔、毛细血管内皮细胞和神经元的胶质细胞突起表达非常丰富。结论AQP4在兔脊髓内具有广泛的表达并且呈极性分布，主要集中在与水分子转运关系密切的部位，表明AQP4在脊髓内主要参与脊髓水代谢的调节。     

新生C57小鼠耳蜗螺旋神经节细胞的原代培养

背景:目前在原代细胞培养领域内,对耳蜗螺旋神经节细胞培养条件的报道各有差异,个别方法重复性较差,不利于实际应用.目的:原代培养并鉴定新生C57小鼠螺旋神经节细胞.方法:显微解剖分离新生C57小鼠蜗轴组织,经胰酶消化+差速贴壁+化学药物相结合方法培养;倒置相差显微镜及苏木精-伊红染色观察细胞生长状态,免疫组织化学染色鉴别细胞来源.结果与结论:蜗轴组织细胞纯化后,胞体呈椭圆形或三角形,有细长的突起,Nuen染色胞核呈棕黄色阳性反应,β3-Tubulin染色细胞胞浆与轴突均呈棕黄色阳性反应.提示实验成功培养出小鼠螺旋神经节细胞.     

庆大霉素中毒性耳聋豚鼠耳蜗热休克蛋白70的表达及川芎嗪的保护作用

景川芎嗪具有降低庆大霉素的耳毒性作用,但川芎嗪能否通过增加耳蜗热休克蛋白70表达,从而拮抗庆大霉素的耳蜗毒性作用.目的应用免疫组化及图像分析技术并结合听性脑干反应测试,观察川芎嗪对庆大霉素耳中毒豚鼠耳蜗热休克蛋白70表达的影响.设计随机对照实验,直线相关分析.单位沈阳医学院生理教研室和中国医科大学听力研究室.材料选用清洁级耳郭反射灵敏的健康白色红目豚鼠40只,体质量200～250 g,雌雄不拘.随机分为庆大霉素组、川芎嗪+庆大霉素组、川芎嗪组、正常对照组,每组10只.方法川芎嗪+庆大霉素组每日左侧腹腔注射川芎嗪注射液140 mg/kg,同时在右侧腹腔注射硫酸庆大霉素注射液100 mg/kg.庆大霉素组每日腹腔注射硫酸庆大霉素注射液100 mg/kg.川芎嗪组每日腹腔注射川芎嗪注射液140 rmg/kg.正常对照组每日腹腔注射生理盐水2.5 mL/kg,各组皆连续用药10 d.各组动物混合饲养,每日测量体质量调整药量.在用药前和停药后分别检测各组大鼠听性脑干反应阈值,停药处死后应用SABC免疫组化和图像分析技术,观察各组豚鼠耳蜗热休克蛋白70表达情况.主要观察指标①各组大鼠听性脑干反应阈值.②各组大鼠耳蜗热休克蛋白70表达.结果①豚鼠听性脑干反应阈值川芎嗪+庆大霉素组、庆大霉素组均明显高于正常对照组[(21.09±4.50)dBnHL,(36.55±6.13)dBnHL,(2.50±2.75)dBnHL,t=15.764～22.665,P＜0.001].川芎嗪+庆大霉素组明显低于庆大霉素组(t=9.092,P＜0.001).②豚鼠耳蜗各部位热休克蛋白70表达庆大霉素组耳蜗Corti's器、血管纹和螺旋韧带、螺旋缘、螺旋神经节4个部位细胞热休克蛋白70阳性反应产物平均灰度值低于正常对照组[(88.24±4.34,96.85±1.05;121.24±0.92,128.76±1.59;96.15±1.10,98.78±0.54;117.73±1.18,120.51±0.80),(t=6.097～18.307,P＜0.001)].川芎嗪+庆大霉素组耳蜗Corti's器、血管纹和螺旋韧带、螺旋缘、螺旋神经节4个部位细胞热休克蛋白70阳性反应产物平均灰度值明显高于庆大霉素组(92.53±2.25,88.24±4.34;125.20±1.43,121.24±0.92;98.71±0.91,96.15±1.10;118.91±0.46,117.73±1 18,t=3.925～10.415,P＜0.001).③各组各部位热休克蛋白70阳性反应产物平均灰度值与听性脑干反应阈值高度相关(r=-0.8141～-0.9841,P＜0.001).结论应用川芎嗪注射液可降低听性脑干反应阈值和庆大霉素中毒耳蜗热休克蛋白70的表达,以减轻庆大霉素的耳毒性损伤,从而改善听功能.     

顺铂内耳中毒豚鼠耳蜗热休克蛋白70表达的研究

目的观察顺铂内耳中毒豚鼠耳蜗热休克蛋白70(HSP70)的表达特点。方法制备顺铂内耳中毒听力损伤模型,分别于第3天,第6天处死豚鼠,取耳蜗做石蜡包埋切片,进行HSP70免疫组化(SP法)染色,检测耳蜗HSP70的表达和分布特点。图像分析采用计算机图像分析系统。结果对照组中Corti器、血管纹、螺旋缘、螺旋神经节呈弱阳性。Ⅱ组中Corti器、血管纹、螺旋缘、螺旋神经节的HSP70表达增强。Ⅲ组中Corti器、血管纹、螺旋缘、螺旋神经节呈强阳性。Ⅲ组平均灰度值较对照组有显著性差异(P<0.01)。结论顺铂能够诱导HSP70在豚鼠耳蜗中的表达,使HSP70在豚鼠耳蜗中的表达增强。     

组织工程小血管支架应用于异种血管移植的可行性

背景:具有α半乳糖基末端的糖蛋白是引起超急性排斥反应的主要异种抗原.目的:观察脱细胞小血管支架与Wistar大鼠和日本大耳白兔两种种属实验动物血管壁内皮细胞和平滑肌细胞内α半乳糖基的分布特点,探讨经脱细胞处理后的小血管支架应用于异种血管移植的可行性.设计、时间及地点:观察对比实验,于2003-03/2004-12在中国医科大学解剖学教研室完成.材料:采集Wistar大鼠正常尾动脉30条,其中选择15条进行脱细胞处理得小血管支架(小血管支架组),剩余15条未进行脱细胞处理(尾动脉组);采集日本大耳白兔耳背面中央动脉,左右耳各1条,共取15条(中央动脉组).方法:采用亲和组织化学法,将16 mg/L植物凝集素加入组织片作DAB显色后,利用MetaMorth/C5050/BX41显微图像分析系统,检测α半乳糖基阳性反应产物.主要观察指标:光镜下血管壁细胞显色变化;α半乳糖基阳性反应产物的吸光度值.结果:中央动脉组α半乳糖基的表达主要集中于内皮细胞膜和细胞核;尾动脉组内皮细胞膜α半乳糖基表达呈极强阳性;小血管支架组呈弱阳性或阴性表达.3组血管细胞α半乳糖基表达的吸光度值中,尾动脉组内膜低于中央动脉组(P＜0.001);小血管支架组内膜低于中央动脉组、尾动脉组(P＜0.001);小血管支架组中膜低于中央动脉组、尾动脉组(P＜0.001).结论:①Wistar大鼠尾动脉内皮细胞膜异种抗原性比日本大耳白兔中央动脉的抗原性强.②Wistar大鼠脱细胞的尾动脉支架可作为异种组织工程血管材料应用于异种血管移植.     

3D FLAIR增强扫描在内耳内淋巴成像中的应用探讨

目的:探讨分析3D FLAIR增强扫描在内耳内淋巴成像中的应用效果。方法:2017年6月-2019年10月,本院收治行内耳内淋巴成像患者25例、健康体检者12例,对患者实施3D FLAIR增强扫描与耳蜗电图检查,对比检测结果。结果:四组的内淋巴积水程度对比存在明显差异(P<0.05)。3D FLAIR增强扫描判断内淋巴积水阳性率与耳蜗电图判断内淋巴积水阳性率存在明显差异(P<0.05)。结论:3D FLAIR增强扫描在内耳内淋巴成像中应用,可辅助临床更快、更准确的检出内耳内淋巴积水,值得在临床推广应用。     

重组腺病毒对体外培养耳蜗Corti器的转染特性

目的:腺病毒载体是在内耳基因治疗的实验研究中应用最广泛的载体之一,但载体的靶向性不明显。通过重组腺病毒携带报告基因EGFP转染体外培养耳蜗器官,观察各型细胞的转染特性。方法:实验于2004-08/2006-01在美国纽约州立大学布法罗分校听力耳聋研究中心完成。①实验材料:Fisher大鼠来源于布法罗大学的实验动物中心。AdV/EGFP是Buffalo大学Dr.Lee惠赠。②实验方法:选取出生3d的大鼠分离获取耳蜗组织。使用携带报告基因-EGFP的重组腺病毒(AdV/EGFP),以1×107,1×108,1×109,2×109VP/mL作用耳蜗,于感染后6,12,24,48h和3d,固定组织,观察感染特性。分离出生3d的大鼠耳蜗Corti器,基底膜分离后,立即进入2mL滴度为1×109VP/mL,含2mmol/L的庆大霉素病毒溶液,作用3h后平铺到胶粒上,加入含2mmol/L庆大霉素的生长培养基,作用24h后收获样品。③实验评估:采用TRITC-labeledphaloidin组织化学染色,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白EGFP和TRIC在耳蜗细胞中的表达定位。结果:①重组腺病毒可转染离体培养耳蜗组织中的各种类型细胞,外沟细胞感染率最高,其次为齿间细胞。仅有很少部分的毛细胞和螺旋神经元被感染。②在病毒滴度在107～109VP/mL的范围内,重组腺病毒感染耳蜗具有剂量依赖性,但大于这个滴度并不会增加感染效率,而且高浓度的重组病毒可造成毛细胞和外沟细胞破坏。③EGFP最早于感染后6h出现,48h达到高峰,外源基因高表达至少可维持7d。④庆大霉素损伤所有的毛细胞后,重组腺病毒能够感染多数的Deiters’细胞,齿间细胞的感染效率高于腺病毒对正常耳蜗组织的感染。结论:重组腺病毒转染效率在耳蜗各种类型细胞明显不同,重组腺病毒优先感染耳蜗支持细胞。     

顺铂内耳中毒豚鼠耳蜗热休克蛋白70表达的研究

目的：观察顺铂内耳中毒豚鼠耳蜗热休克蛋白70（HSP70）的表达特点。方法：制备顺铂内耳中毒听力损伤模型。分别于第3天、第6天处死豚鼠，取耳蜗做石蜡包埋切片，进行HSP70免疫组化（SP法）染色，检测耳蜗HSP70的表达和分布特点，图像分析采用计算机图像分析系统。结果，对照组中Corti器，血管纹，螺旋缘、螺旋神经节呈弱阳性，Ⅱ组中Corti器，血管纹，螺旋缘，螺旋神经节的HSP70表达增强。Ⅲ组中Corti器，血管纹，螺旋缘，螺旋神经节呈强阳性。Ⅲ组平均灰度值较对照组有显性差异（P＜0．01）。结论：顺铂能够诱导HSP70在豚鼠耳蜗中的表达，使HSP70在豚鼠耳蜗中的表达增强。     

一氧化氮合酶3种异构体在豚鼠耳蜗的定位表达及其内耳听觉过程中的作用

背景一氧化氮由一氧化氮合酶催化而成,关于一氧化氮合酶的3种异构体在豚鼠耳蜗结构中的确切定位和表达,目前尚存争议.目的观察一氧化氮合酶3种异构体在豚鼠耳蜗的定位表达情况,探讨一氧化氮在内耳听觉生理和病理生理过程中的作用.设计观察对比实验.单位锦州医学院生理学教研室、锦州市附属第二医院骨科及锦州市中心医院耳鼻咽喉科.材料实验于2000-05/11在中国医科大学听力研究室完成.选用健康纯白红目雄性豚鼠10只,体质量250～300 g,耳郭反射灵敏.方法豚鼠经腹腔麻醉后,断头处死,速取听泡.打开圆窗和卵圆窗并缓慢灌流含40g/L多聚甲醛的磷酸盐缓冲液,再将标本浸入该溶液固定2 h.100 g/L乙二胺四乙酸溶液脱钙1周后,移入250g/L蔗糖溶液中过夜沉淀.包埋耳蜗,制成20μm恒冷冰冻切片用于免疫组织化学染色.主要观察指标豚鼠耳蜗内一氧化氮合酶3种异构体的定位表达情况.结果10只豚鼠全部进入结果分析,无脱失.[1]神经元型和内皮型一氧化氮合酶免疫反应阳性见于耳蜗螺旋器的内、外毛细胞和螺旋神经节细胞.此外,也见于血管纹边缘细胞、螺旋韧带细胞和神经纤维.[2]诱导型一氧化氮合酶免疫反应活性在生理状态下也见于耳蜗的上述各部位.结论一氧化氮在哺乳类动物耳蜗神经传导、血流调节及细胞毒性等生理和病理生理过程中可能起重要作用.