应用正交设计探讨肾虚胚胎着床障碍小鼠病症结合模型制作中药物的最佳配比

目的探索羟基脲及米非司酮在肾虚胚胎着床障碍小鼠病症结合模型制作中的最佳配比。方法以羟基脲、米非司酮作为影响因素,选择L9(34)表安排实验,观察羟基脲及米非司酮不同剂量配比组合对小鼠肾虚胚胎着床障碍模型的影响。结果研究范围内,当羟基脲因素A取1水平、米非司酮因素B取1水平时(AⅠBⅠ),妊娠第5天、第8天时子宫内胚胎着床点数、子宫指数是最少的。在肾虚胚胎着床障碍小鼠模型的制作中,米非司酮的贡献度最大,羟基脲的贡献度次之,一定程度上,胚胎的着床点和子宫指数与羟基脲和米非司酮的用量成反比。结论综合多项指标,在研究范围内,AⅠBⅠ较为合适作为肾虚胚胎着床障碍小鼠模型用于药物干预研究。     

一氧化氮对小鼠胚胎着床的作用

为探讨一氧化氮（NO）在胚胎着床中可能发挥的作用及其机制,进行小鼠胚胎着床实验,分3个实验进行。实验1及实验2,于小鼠妊娠第3d和第1－6d分别腹腔内注射N－硝基－L－精氨酸甲酯[L－NAME,一氧化氮合酶（NOS）的非特异性竞争抑制剂]0.5-5mg和3mg,观察其对胚胎着床的影响。实验3,给予L－NAME＋L－精氨酸（NO的前体）,观察L－精氨酸对L－NAME作用的影响,并评价胚胎发育情况。上术3个实验均取子宫内膜行组织学检查。结果发现：与对照组相比,妊娠第3d腹腔注射L－NAME1－5mg可减少胚胎的着床位点数（P＜0.05）,腹腔注射4、5mg的L－NAME可完全抑制小鼠胚胎着床的发生。围着床期（妊娠3－5d）给予L－NAME均可减少胚胎着床位点数。此时,子宫内膜血管通透性的改变被抑制,缺少蜕膜样变,同时胚胎发育阻滞。L－NAME的这种抑制作用可被同时给予的L－精氨酸抵消。提示NO通过增加子宫内膜的血管通透性、子宫内膜的蜕膜化以及胚胎的发育而促进小鼠胚胎着床的发生。     

不同工艺制备的补肾益气活血汤治疗小鼠胚胎着床障碍效果比较

目的 比较2种工艺制备的补肾益气活血汤治疗小鼠胚胎着床障碍的疗效,评价工艺的合理性。方法 将妊娠小鼠随机分成4组,从妊娠第1d开始,传统组、改进组分别灌服不同工艺制备的补肾益气活血汤,模型组、正常组则灌服等量生理盐水,除正常组外,其余3组小鼠于第3、4d每天皮下注射吲哚美辛溶液(44mg/kg)2次,各组于第5d各取3只小鼠制作子宫切片,观察子宫内膜腺体上皮、间质及血管的组织形态和超微结构,于第8d,观察胚胎着床率和着床位点数。结果 传统组组织形态与模型组相似,而改进组则与正常组相似;改进组胚胎着床率和着床位点数明显高于模型组(P<0.05),且胚胎着床率高于传统组。结论 改进工艺制备的汤剂作用效果明显高于传统工艺制备的汤剂。     

白血病抑制因子在小鼠胚胎着床机制的体外探究

目的 运用已有的小鼠体外三维着床模型观察LIF抑制状态下对胚胎着床这一过程中的影响以及其转导通路中下游STAT3和pSTAT3蛋白表达水平的变化,从而探究LIF及其转导通路在胚胎着床中的功能.方法 将小鼠内膜组织置于有不同浓度LIF抗体（0.1和1.0μg/ml）及正常IgG对照和阴性对照的培养基中预培养0.5h.然后进行内膜组织和囊胚的共培养,观察比较胚胎与内膜的黏着率的不同,并对抗体处理后的内膜进行STAT3及pSTAT3的免疫组化染色.结果 运用1.0％抗体预处理组的黏着率与正常IgG对照组及阴性对照组之间均有统计学差异.pSTAT3的表达在经LIF抗体预处理的内膜中明显高于对照组.结论 LIF在小鼠胚胎着床中起着非常重要的作用,通过LIF表达的降调节可以显著降低胚胎黏着率.LIF对胚胎黏着的作用可能是通过JAK/STAT通路中STAT3的磷酸化活化而实现的.     

针刺对胚胎着床障碍大鼠子宫CD68+巨噬细胞的影响

目的 观察针刺对胚胎着床障碍大鼠子宫CD68+ 巨噬细胞的影响。方法 将48只妊娠大鼠随机分为正常组(N)、模型组(M)、针刺组(A)和黄体酮组(P)。其中M、A 和P组于妊娠第1天(D1)给予米非司酮-麻油溶液造模,N 组作为对照仅给予等量麻油溶液。同时,A 组用自制布袋固定并于D1开始每天针刺三阴交、后三里,N 组和M 组仅固定,P组则肌肉注射黄体酮,直至处死。于D8、D10分别收集各组子宫样本,采用免疫组织化学法、Westernblot和Real-timePCR等方法测定子宫CD68的表达。结果 与N 组相比,M 组大鼠D8、D10子宫CD68蛋白和mRNA 的表达均明显降低(P <0.05);与M 组相比,A 组和P组大鼠D8、D10子宫CD68蛋白的表达明显增高(P<0.05);与M 组相比,A 组大鼠D8和P组大鼠D8、D10子宫CD68mRNA 的表达明显增高(P<0.05)。结论 针刺可能通过调节大鼠子宫CD68+ 巨噬细胞的表达而改善胚胎着床障碍,从而促进胚胎着床。     

针刺对胚胎着床障碍大鼠子宫内膜CCR2的影响

目的观察针刺对胚胎着床障碍大鼠子宫内膜趋化因子受体CCR2表达的影响。方法将72只孕鼠随机分为正常组（N ）、胚胎着床障碍组（M ）、针刺治疗组（A ）和黄体酮治疗组（W ）,每组随机再分为第6天组（D6）、第8天组（D8）、第10天组（D10）。其中M 组、A 组和W 组大鼠妊娠第1天给予米非司酮麻油溶液造模,N 组仅给予等量麻油溶液。同时,A 组固定并每天针刺三阴交、后三里,N 组和M 组仅固定,W 组肌肉注射黄体酮,直至处死。用免疫组织化学法、Western blot 和 Real-time PCR等方法测定着床点子宫内膜 CCR2的表达。结果与 N 组相比,M 组大鼠子宫内膜 CCR2蛋白和mRNA的表达均明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）;与 M 组相比,A 组和 W 组大鼠子宫内膜CCR2蛋白和 mRNA 的表达则明显增高（P＜0.05）。结论针刺能上调胚胎着床障碍大鼠母胎界面CCR2的表达,从而促进胚胎的着床和胎盘的形成。     

GFP小鼠对三维体外着床模型的定位及验证

目的 本研究将基于已经建立的三维小鼠体外胚胎着床模型,运用绿色荧光（GFP）小鼠胚胎替代ICR小鼠胚胎,验证三维着床模型的可行性。方法 将孕第4天GFP小鼠及ICR小鼠囊胚与ICR小鼠的内膜组织进行体外共培养。观察两组胚胎黏着率的差异。对GFP小鼠囊胚组通过荧光显微镜进行观察,共培养后进行组织学研究。结果 GFP小鼠囊胚及ICR小鼠囊胚与ICR小鼠子宫内膜组织共培养28h后的胚胎黏着率分别为46.6%及54.8%;两组黏着率之间差异无统计学意义（P=0.364）。GFP小鼠囊胚与ICR小鼠子宫内膜组织共培养28h及40h后均可在荧光显微镜下见到胚胎,组织学研究证实GFP小鼠囊胚可以黏着于ICR小鼠子宫内膜。结论 三维着床模型确实能够实现不同来源小鼠胚胎的黏附着床。运用GFP小鼠胚胎还发现了胚胎与子宫内膜组织之间存在着信息及分子联系。     

超声波对小鼠胚胎表达整合素及其着床能力的影响

目的：研究超声波照射对小胎胚表达整合素α1、α5、β1、β3的影响充及与其着床能力的关系。方法：取小鼠二细胞胚经超声波照射后体外培养至囊胚期,用免疫组化法检测其整合素α1、α5、β1、β3的表达及其着床能力的改变,并与未经照射的正常胚胎比较,结果：1、超声波照射组胚贴附率,滋养细胞外延生长率均显著低于正常胚胎。2、正常胚胎桑椹胚期即有α5、β1、β3整合素表达,而无α1表达：囊胚期α5、β1、β3表达增强,仍无α1表达：α1只出现在外延生长的滋养细胞。3、超声波照射组胚胎β3整合素的表达明显弱于正常组。且未见α1表达,而α5、β1的表达两组间无差异。结论：超声波照射使胚胎着床能力明显降低。可能与其影响胚胎细胞α1、3整合素的正常表达有关。     

annexin A2体外胚胎着床的功能阻滞研究

目的 将通过已有的小鼠体外胚胎着床模型对annexin A2在胚胎着床中的功能进行相应的研究。方法 将孕第4天ICR小鼠囊胚与ICR小鼠的内膜组织进行体外共培养。比较子宫内膜经annexin A2抗体预处理以及未经处理之间,各组胚胎黏着率的差异,并在共培养后进行组织学研究。结果 小鼠子宫内膜经浓度为1.0μg/ml及0.1μg/ml的annexin A2抗体预处理后小鼠囊胚在其上的黏着率分别为45.6%及53.6%;而抗体浓度为1.0μg/ml的正常IgG对照及未经抗体处理的空白对照组的黏着率分别为55.4%及59.0%。经过1.0μg/ml的annexin A2抗体预处理组与两组对照组之间的黏着率比较,差异无统计学意义。免疫组化实验发现,经过annexin A2抗体预处理后,未见到annexin A2表达明显降低。结论 annexin A2在第4天的子宫内膜组织表达明显高于第1天的子宫内膜组织。运用抗体进行阻滞实验时并不能显著降低体外胚胎在子宫内膜组织的黏着率。     

胚胎着床的子宫内膜免疫学研究现状与展望

胚胎着床的过程极为复杂,包括定位、黏附和侵入三个阶段.着床仅发生在一个极其有限的时间与空间范围内(即所谓的"着床窗"),需要子宫内膜和胚胎准确的同步化、相互作用和配合.     

病证结合动物模型的制作、评价与展望

从病证结合动物模型的制备和评价两个大方面,对病证结合模型的研究进展进行综述。对病证结合模型的研究意义;模型制备中,病证种类的选择,造模动物的选择,造模因素的选择等环节;模型评价中的评价方法和标准等方面分别进行了阐述。指出病证结合模型研究中存在的问题,并提出相应建议。     

病证结合动物模型判定标准的建立

证候动物模型是中药复方及中药制剂药效和药理研究的基本工具,而复制能充分体现中医证候特征的动物模型是准确反映中药药效的前提.从模型动物宏观表现判定或个别理化指标判定、以方测证、根据造模因素推测认定是病证结合证候动物模型目前使用的几种判定方法.通过分析这几种方法的不足,提出采用临床诊断标准的等效对应进行动物模型证候属性的判定是较为科学和合理的,并详细阐述了采用临床诊断标准的等效对应进行动物模型证候属性判定中的3个关键问题:证候临床诊断标准中的宏观指标在模型动物的宏观等效对应、证候临床诊断标准中的微观指标在模型动物的微观等效对应、证候临床诊断标准中的宏观指标在模型动物的微观等效对应及关联的方法.     

大鼠胚泡着床障碍动物模型的建立

目的 建立大鼠胚泡着床障碍动物模型.方法 将与雄性大鼠交配后的成年雌性SD大鼠随机分为正常组、小剂量组(5 mg/kg)、中剂量组(6 mg/kg)、大剂量组(8 mg/kg),小剂量组、中剂量组、大剂量组于妊娠第3天皮下一次性注射不同剂量的米非司酮,于妊娠第8天观察大鼠胚泡着床率及平均着床胚泡数,筛选最佳造模剂量.结果 与正常组相比,小剂量组和中剂量组着床率和平均着床胚泡数均显著降低(P＜0.01).中剂量组的着床率和平均着床胚泡数低于小剂量组组,差异无统计学意义(P＞0.05).当剂量达到8 mg/kg时,胚泡着床被完全抑制.结论 于妊娠第3天皮下注射5 mg/kg的米非司酮,可建立稳定可靠的大鼠胚泡着床障碍模型.     

病证结合模型的研究进展

中医动物模型重复性差,割裂了病与证的联系;单纯借鉴西医病理模型制备中医病和证的模型,不符合中医理论的要求;病证结合模型体现病与证的紧密联系,符合临床实践,已成为中医实验动物模型发展的新方向.本文对病证结合动物模型建立、优势及评价体系的构建等进行综述.     

病证结合脾肾阳虚型IBS-D大鼠模型的建立与评价

目的 建立并评价病证结合脾肾阳虚型腹泻型肠易激综合征(Diarrhea-predominant irritable bowel syndrome,IBS-D)大鼠模型.方法 72只雄性SD乳鼠随机选取18只作为正常组,余乳鼠进行母子分离21 d构建IBS-D疾病模型;母子分离结束后适应性喂养1周,54只大鼠随机分为高、...     

PCOS胚胎着床障碍中西医病因研究进展

多囊卵巢综合征(PCOS)是一种发病多因性、临床表现多态性的内分泌综合征,也是导致育龄期女性月经紊乱及不孕最常见的原因之一。临床PCOS患者在内分泌紊乱纠正、自然排卵或促排后仍出现低妊娠率、高流产率的现象。而胚胎着床又是一复杂的生理过程,受诸多因素调节。近年来,众多医家从传统医学的理、法、方、药及现代医学的角度联合分析了胚胎着床障碍的特点。文章就相关研究进展进行了综述。     

二补助育汤对胚胎着床障碍模型小鼠子宫内膜自噬基因 Beclin-1、LC3 B表达的影响

目的探讨二补助育汤对胚胎着床障碍模型小鼠胚胎着床率及子宫内膜自噬基因Beclin-1、微管相关蛋白轻链3(LC3B)mRNA及蛋白表达的影响。方法将50只妊娠ICR雌性小鼠随机分为空白组、模型组、二补助育汤低剂量组、二补助育汤高剂量组、阿司匹林组,每组10只。用米非司酮造成胚胎着床障碍模型,每组每日以相应药物灌胃,于妊娠第5天下午脱颈处死,观察各组子宫形态,计算各组妊娠率、平均着床位点数,检测子宫内膜Beclin-1、LC3B mRNA及蛋白的表达量。结果空白组小鼠子宫色泽红润,胚胎着床部位膨大,分布均匀;模型组小鼠子宫色白、较细;用药各组子宫较细,色泽淡红。模型组平均着床位点数较空白组减少(P0.001);与模型组相比,二补助育汤高剂量组与阿司匹林组平均胚胎着床位点数均增多(P0.05)。模型组小鼠子宫内膜Beclin-1、LC3B mRNA及蛋白表达水平均低于空白组(P0.05);与模型组相比,二补助育汤低、高剂量组与阿司匹林组Beclin-1、LC3B mRNA及蛋白表达水平均增加(P0.05)。结论二补助育汤可增加Beclin-1、LC3B mRNA及蛋白的表达,提高子宫内膜细胞自噬水平,从而改善子宫内膜容受性增加平均着床位点数。     

一氧化氮对小鼠胚胎着床的作用

为探讨一氧化氮（NO）在胚胎着床中可能发挥的作用及其机制,进行小鼠胚胎着床实验,分3个实验进行。实验1及实验2,于小鼠妊娠第3d和第1～6d分别腹腔内注射N-硝基-L-精氨酸甲酯〔L-NAME,一氧化氮合酶(NOS)的非特异性竞争抑制剂〕0.5～5mg和3mg,观察其对胚胎着床的影响。实验3,给予L-NAME+L-精氨酸（NO的前体）,观察L-精氨酸对L-NAME作用的影响,并评价胚胎发育情况。上述3个实验均取子宫内膜行组织学检查。结果发现与对照组相比,妊娠第3d腹腔注射L-NAME1～5mg可减少胚胎的着床位点数（P<0.05),腹腔注射4、5mg的L-NAME可完全抑制小鼠胚胎着床的发生。围着床期（妊娠3～5d）给予L-NAME均可减少胚胎着床位点数。此时,子宫内膜血管通透性的改变被抑制,缺少蜕膜样变,同时胚胎发育阻滞。L-NAME的这种抑制作用可被同时给予的L-精氨酸抵消。提示NO通过增加子宫内膜的血管通透性、子宫内膜的蜕膜化以及胚胎的发育而促进小鼠胚胎着床的发生。     

大鼠肾虚型颈椎病模型的建立

目的：采用病、证模型复合的方法建立大鼠肾亏型颈椎病动物模型。方法：选择3月龄雌性SPF级SD大鼠30只,随机分为正常组、颈椎病模型组和肾虚型颈椎病模型组,每组10只。采用动静力失衡性大鼠颈椎间盘退变模型复合去卵巢肾虚亏模型的方法建立肾虚型颈椎病模型。通过检测大鼠子宫及附件形态和质量、血清雌二醇（estradiol,E2）含量验证肾虚证;通过颈椎间盘组织病理学、Ⅱ型和Ⅹ型胶原的免疫组化检测及聚集蛋白聚糖（aggrecan-1,Agc1）、Ⅱ型前胶原基因（typeⅡprocolla-gen gene,Col2a1）、基质金属蛋白酶-13（matrix metalloproteinase-13,MMP-13）和基质金属蛋白酶抑制剂-1（tissue inhibitor of metalloproteinases-1,TI MP-1）的基因表达情况评判椎间盘退变。结果：与正常组和颈椎病模型组相比,肾虚型颈椎病模型组动物子宫及附件形态萎缩、质量减轻,血清雌二醇含量降低,颈椎间盘组织病理学退变更加明显,Ⅱ型胶原蛋白表达减少,Ⅹ型胶原表达增高,Agc1和Col2a1基因表达降低,MMP-13基因表达增高。结论：通过病、证模型复合的方式建立了肾虚型颈椎病模型,肾虚可以加重颈椎间盘的退变。