二氮嗪预处理缺氧复氧大鼠心肌微血管内皮细胞PI3K、Akt、FKN mRNA的表达

背景:在缺氧复氧早期,促使心肌微血管内皮细胞增殖的措施,涉及一系列相关基因的改变和受多种基因调控。目的:观察二氮嗪预处理对缺氧复氧大鼠心肌微血管内皮细胞增殖和PI3K、Akt和FKNmRNA表达的影响。方法:培养SD大鼠心肌微血管内皮细胞,按照不同的干预方式将细胞随机均分为正常对照组、缺氧/复氧组、二氮嗪组、二氮嗪+阻断剂组。观察凋亡细胞形态、活力及PI3K、Akt和FKNmRNA转录水平。结果与结论:与正常对照组比较,缺氧/复氧组细胞增殖率显著降低、Akt和FKN显著升高(P<0.01)。与缺氧/复氧组比较,二氮嗪组细胞增殖率显著升高(P<0.05);PI3K和Akt显著升高、FKN显著降低(P<0.01)。二氮嗪+阻断剂组取消了二氮嗪的作用,与缺氧/复氧组比较差异无显著性意义。说明二氮嗪预处理通过促使细胞增殖,上调PI3K、AktmRNA表达、下调FKNmRNA表达而实现对缺氧复氧心肌微血管内皮细胞损伤的保护。     

一氧化氮对缺氧/复氧乳鼠心肌细胞内游离钙的影响

目的研究一氧化氮供体S-亚硝基-已酰青酶胺(SNAP)对缺氧/复氧乳鼠心肌细胞内游离钙浓度的影响。方法培养20×5只SD大鼠(1~3)d的心肌细胞,随机分为5组:A组为正常对照组;B组为单纯缺氧/复氧组(A/R缺氧2 h复氧1 h);C组为NO预处理组加入SNAP使其终浓度分别为0.1 mmol/L,预处理20 min后行A/R;D组为NO预处理组加入SNAP使其终浓度为1 mmol/L,预处理20 min后行A/R;E组为NO预处理组加入SNAP使其终浓度为2 mmol/L,预处理20 min后行A/R。与复氧后应用特异性Ca2+荧光指示剂Fluo-3/AM负载细胞,激光共聚焦显微镜检测游离Ca2+浓度。结果与正常组相比,单纯缺氧/复氧组钙浓度明显升高(P<0.01);0.1 mmol/L和1 mmol/L SNAP能明显降低钙超载(与B组相比,P<0.01),2 mmol/L SNAP组加重钙超载(与B组相比,P>0.05)。结论一氧化氮通过降低细胞内钙超载而减轻缺氧/复氧对心肌细胞的损伤,其作用有浓度依赖性。     

松萝酸通过调节SphK1/S1P信号通路减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤

目的 探讨松萝酸（UA）对缺氧/复氧（H/R）诱导的心肌细胞损伤的影响及其作用机制。方法 构建H9c2细胞H/R模型,使用0.5～64μmol/L UA分别预处理H9c2细胞,MTT法筛选UA浓度;H9c2细胞随机分为对照组、模型组、UA低剂量组（1μmol/L）、UA中剂量组（4μmol/L）、UA高剂量组（16μmol/L）和UA高剂量+Benzyl butyl phthalate(BBP)组（16μmol/L UA+100 nmol/L BBP）,检测各组细胞增殖活力、细胞凋亡情况,白介素（IL）-1β、IL-6、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）、鞘氨醇激酶1(SphK1)、鞘氨醇-1-磷酸受体1(S1PR1)、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)蛋白表达水平。结果 1μmol/L以上浓度UA可以显著提高H/R H9c2细胞增殖活力。与对照组相比,模型组细胞增殖能力和ATP、SOD含量下降,细胞凋亡率和IL-1β、IL-6、MDA、SphK1、S1PR1、ERK1/2表达增加（P<0.05）;与模型组相比,UA低、中、高剂量组细胞增...     

一氧化氮对心肌细胞缺氧复氧时脂质过氧化损伤的保护作用

目的:研究一氧化氮对培养鼠心肌细胞缺氧复氧所致脂质过氧化损伤的保护作用,探讨心肌缺血修复机制。 方法:采用细胞缺氧复氧损伤模型,培养细胞随机分为4组:A组正常对照组(培养3 h);B组单纯缺氧/复氧(A/R缺氧2 h复氧1 h);C组缺氧预处理组(缺氧20 min后复氧20 min,然后缺氧复氧);D组一氧化氮预处理组[加入S-亚硝基-已酰青酶胺(s-nitroso-n-acetyl-penicillamine,SNAP)使其终浓度为l mmol/L,预处理40 min后A/R。与复氧后测定培养液中肌酸激酶(creatine kinase,CK)、乳酸脱氢酶(lacfic dehydrogenase,LDH)活性变化及细胞内丙二醛含量和细胞存活率。结果:与正常组比,单纯缺氧/复氧组CK[(941.35±152.53)nkat/L]、 LDH[(7 416.48+984.20)nkat/L]、丙二醛[(1.35±0.26)μmol/g],水平显著井高(P<0.01),细胞存活率(54.68±6.00)％显著降低(P<0.01)。1 mmol/L SNAP预处理组[细胞存活率为(74.55±4.11),CK为(582.45±140.86)nkat/L,LDH为(5 766.15±941.69)nkat/L,丙二醛为(0.89±0.16)μmol/g]和缺氧预处理组[细胞存活率为(74.69±6.14)。CK为(547.94±125.52)nkat/L,LDH为(5 882.34±844.67)nkat/L,丙二醛为(0.85±0.12)μmol/g]上述变化明显减轻(P<0.01)。 结论:一氧化氮可抑制脂质过氧化反应,减轻自由基对心肌     

黄芪甲苷对缺氧/复氧损伤血管内皮细胞核转录因子-κB表达的影响

目的:观察黄芪甲苷对血管内皮细胞缺氧/复氧损伤中核转录因子-κB(NF-κB)表达的干预作用。方法:人脐静脉内皮细胞原代培养,传至3代后随机分为3组。对照组:常规培养;缺氧/复氧组:先缺氧处理1 h,再复氧1 h;药物干预组:培养液中加入终浓度分别为20、40和80 mg/L的黄芪甲苷预处理,12 h后进行缺氧/复氧处理。分别用酶联免疫吸附技术、硫代巴比妥法检测细胞上清液中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)浓度、丙二醛(MDA)含量;用免疫化学法测定血管内皮细胞NF-κB的表达。结果:与对照组比较,缺氧/复氧组细胞培养液中MDA含量、ICAM-1浓度均显著增加〔MDA(6.98±1.15)μmol/L比(2.38±0.49)μmol/L,ICAM-1(3 169.01±132.75)ng/L比(995.14±74.93)ng/L,P均<0.01〕,内皮细胞NF-κB阳性细胞率明显增强〔(58.02±12.01)%比(6.28±1.43)%,P<0.01〕。与缺氧/复氧组比较,药物干预组细胞培养液中MDA含量均明显减少(P均<0.01)、ICAM-1浓度均明显降低(P均<0.01),内皮细胞NF-κB阳性细胞率均明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:黄芪甲苷能显著抑制缺氧/复氧引起的血管内皮细胞NF-κB表达,且呈剂量依赖性,对缺氧/复氧损伤的血管内皮细胞具有保护作用。     

丹参素对缺氧/复氧诱导H9C2心肌细胞损伤和内质网应激的改善作用

目的观察丹参素(DLA)通过抑制内质网应激和凋亡对H9C2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)后损伤的保护作用。方法将离体培养的H9C2心肌细胞随机分为3组:对照组、缺氧/复氧组(H/R组)、DLA+H/R组(DLA组)。H/R组先缺氧6h后复氧24h;DLA组于缺氧时给予DLA(10-6M)培养6h,再复氧24h。对照组心肌细胞正常培养至实验结束。ELISA测定细胞中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)和丙二醛(MDA)的含量;Western blot检测细胞中内质网应激蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、Caspase-12、Bax、Bcl-2和SOD的蛋白含量。结果与对照组比较,H/R组细胞LDH、CK-MB和MDA的含量显著升高(P<0.05),GRP78、Caspase-12和Bax蛋白表达明显增加(P<0.05),而Bcl-2和SOD的蛋白含量明显降低(P<0.05);给予DLA可明显改善上述指标的变化。结论H/R可诱导H9C2心肌细胞发生凋亡、氧化应激和内质网应激,引起细胞损伤和凋亡;DLA可以通过抑制凋亡、氧化应激和内质网应激,减少细胞损伤,发挥保护细胞的作用。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探究丹参素减轻滋养细胞氧化应激反应的机制

目的 探讨丹参素通过经典Wnt/β-catenin信号通路改善滋养细胞氧化损伤中的作用机制。方法 将人绒毛滋养细胞系HTR-8/SVneo置于缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation, H/R)条件下,通过CCK-8以确定丹参素对细胞活力的影响以及后续实验的最佳处理浓度。设置正常对照组(normal control, NC)、正常培养+丹参素处理组(normal culture condition with danshensu treatment, NC+DS)、缺氧/复氧处理组(H/R condition, HR)和缺氧/复氧+丹参素处理组(H/R condition with danshensu treatment, HR+DS)。检测各组活性氧物质(reactive oxygen species, ROS)的水平差异。Western blot技术检测各组Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达水平。结果 根据CCK-8的检测结果,丹参素最佳处理浓度为10μmol·L^-1,处理48 h后可显著恢复细胞活力。HTR-8/SVneo在H/R处理后R...     

氟伐他汀对缺氧复氧处理的猪颈总动脉内皮细胞氧化还原功能及ICAM-1表达的影响

目的探讨3-羟-3-甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂在缺血再灌注过程中的内皮保护作用。方法培养猪颈动脉血管内皮细胞(PCAEC),以0.1μmol/L、0.2μmol/L、0.5μmol/L、1.0μmol/L的氟伐他汀(来适可)共生长44 h,经缺氧1 h复氧3 h处理,以血清免疫学及细胞免疫化学方法测定MTT、GSH-PX、MDA、SOD、ICAM-1的值,观察氟伐他汀对缺氧复氧(H/RI)处理的猪颈总动脉内皮细胞氧化还原功能及细胞间黏附因子-1(ICAM-1)表达的影响。结果0.5μmol/L氟伐他汀干预的H/RI后细胞活力与单纯H/RI组有明显差别(P=0.01);H/RI可明显降低培养细胞的SOD活性,产生MDA较氟伐他汀组及正常对照组间有明显升高(P=0.001),正常对照组及氟伐他汀组与H/RI组间GSH-PX对照有明显差别(P=0.002);ICAM-1细胞免疫化学染色各组间均有显著差别(P=0.018)。结论适当浓度的氟伐他汀对缺氧复氧的内皮细胞功能具有保护作用。     

羟基红花黄色素A对人肾小管上皮细胞冷缺氧/复氧凋亡的影响

目的探讨羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)预处理组对人肾小管上皮细胞(HK2细胞)冷缺氧/复氧(冷H/R)损伤导致的细胞凋亡的影响。方法 HK2细胞株消化传代后采用计算机随机方法分为sham组(对照组)、冷缺氧/复氧组(冷H/R组,细胞冷缺氧4 h,复氧4 h)、HSYA预处理组(HSYA各亚组,缺氧前0.5 h给予不同剂量的HSYA,余同冷H/R组)。采用CCK-8法测细胞存活率;采用细胞爬片免疫组化法和免疫印迹法检测各组HK-2细胞的Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达情况。结果 (1)与冷H/R组相比,HSYA不同剂量可不同程度提高细胞存活率,但仅HSYA25 μmol/L组效果最显著(74.000±5.500与59.000±3.800,P<0.05)。(2)免疫细胞化学半定量评分:与冷H/R组相比,HSYA25 μmol/L组HK2细胞中Bax、Caspase-3的表达明显降低[0(0,1)与8(6,8),Z=2.041,P<0.05和3.400±0.548与7.800±1.095,t=11.000,P<0.01];Bcl-2蛋白的表达明显升高(6.800±1.095与1.400±0.548,t=10.590、P<0.01);Bcl-2/Bax比值明显升高。(3)免疫印迹法检测蛋白:与冷H/R组相比,HSYA25 μmol/L组HK2细胞中Bax、Cleaved-Caspase-3和Pro-Caspase-3蛋白水平明显减少(0.707± 0.012与0.968±0.117,0.480±0.009与0.735±0.005,0.992±0.008与1.197±0.005,P均<0.01);Bcl-2蛋白表达水平显著增加,Bcl-2/Bax比值明显增高(0.410±0.009与0.273±0.008,0.582±0.016与0.282±0.080,P均<0.01)。实验结果与免疫细胞化学结果相一致。结论 HSYA可有效减少冷缺氧/复氧后HK2细胞的损伤。     

参附注射液对体外缺氧复氧心肌细胞的影响

目的 观察参附注射液对体外缺氧复氧损伤乳鼠心肌细胞凋亡率及Bcl-2、Caspase-3蛋白的影响,探讨其对缺氧复氧损伤心肌细胞保护作用机制.方法 在协和医科大学阜外心血管病医院卫生部心血管疾病再生医学重点实验室进行以下实验:取出生1～2 d SD乳鼠,采用培养乳鼠心肌细胞建立缺氧复氧损伤模型.将培养的心肌细胞随机分为四组:(1)正常对照组(Con组)37℃、5%CO<,2>孵箱中持续孵育20 h,未经缺氧复氧处理;(2)缺氧复氧组(H/R组) 给予培养的心肌细胞单纯缺氧4 h,复氧16 h;(3)低剂量参附注射液组(L-SFI组)在缺氧前30min加入终质量浓度为50μL/mL的参附注射液,余同缺氧复氧组;(4)高剂量参附注射液组(H-SFI组)在缺氧前30 min加入终质量浓度为100μL/mL的参附注射液,余同缺氧复氧组.采用异硫氰酸荧光素(FTI℃)标记的Annexin V(Annexin V-FITC)及碘化丙锭(PI)双染流式细胞仪检测细胞凋亡率.采用增强化学发光免疫印记技术(ECZ-Western blot)检测心肌细胞Bcl-2,Caspase-3蛋白水平.采用SPSS11.5统计软件进行分析,均数计量资料以均数±标准差(x±s)表示,组间比较单因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义.结果 与Con组比较,H/R组细胞凋亡的各个阶段的凋亡率显著增加(P<0.01);与H/R组比较,L-SFI组和H-SFI组凋亡率明显下降(P<0.01).免疫印迹检测结果显示,与Con组比较,H/R组Bcl-2蛋白表达水平显著降低,出现Caspase-3相对分子质量17 000的裂解片断;与H/R组比较,不同浓度的参附注射液组Bcl-2蛋白的表达明显升高,伴随Caspase-3相对分子质量17 000片断的表达减少.结论 参附注射液可以减少缺氧复氧诱导的细胞凋亡,其机制可能通过上调Bcl-2蛋白表达,抑制Caspase-3蛋白的激活,发挥其抗凋亡的作用.