环化酶激活剂对大鼠背根节神经元的保护作用

目的 探讨环化酶激活剂对周围神经损伤后感觉神经元的保护作用。方法 在大鼠坐骨神经夹毁模型术后21天，取背根节用图像分析法观测腺苷、前列腺素E1和Zn^2＋对背根节（DRG）细胞数、核偏心率及核等圆径的影响，并与人胎盘神经生长因子（hNGF)的作用相比较。结果 NGF及环化酶激活剂组与夹毁对照组相比都能增进DRG细胞的存活和减轻核偏移；NGF组及高Zn^2 饲料组在细胞存数及核偏心率、核等圆径方面与假手术组无差别。结论 腺苷等环化酶激活剂对DRG神经元均有显的保护作用，其中Zn^2 的保护效应与NGF无差别，腺甘、前列腺素E1保护效应低于NGF。     

培养雪旺细胞NGF、CNTF和GDNF共表达和共定位实验研究

目的 探讨将雪旺细胞和背根节神经元共同培养后去除背根节神经元后雪旺细胞神经生长因子（nerve growth factor，NGF）、睫状神经营养因子（ciliang neurotrophic factor，CNTF）和胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic factot，GDNF）共表达变化特点及其细胞共定位。方法 运用多彩色荧光原位杂交和计算机图像处理技术实现雪旺细胞NGF、CNTF和GDNFmRNA共表达变化的定量分析和细胞共定位，并通过免疫组织化学方法验证有关结果。结果 NGF、CNTF和GDNFmRNA表达变化可同时定位于单个雪旺细胞；通过mRNA和蛋白表达水平的图像分析发现，去除背根节神经元后NGF和GDNF表达在迅速下降后随即逐渐增高，但2周时仍低于共培养表达水平（P〈0．05），CNTF表达则持续下降（P〈0．01）。结论 雪旺细胞和背根节神经元共同培养后建立相互营养支持的体系，当失去神经元营养支持后，需要分泌神经生长因子和多种神经营养因子以维持自身环境的稳定；同时上述研究提供的方法能对雪旺细胞中多种神经营养因子的共表达定位进行可视化研究。     

食管癌对神经生长及导向作用的研究

目的建立肿瘤与神经共培养模型,探讨食管癌对神经生长和导向的作用。方法采用原代分离培养的方法,取大鼠的背根神经节,将背根节与转染绿色荧光蛋白的食管癌EC109细胞共培养,观察肿瘤细胞对神经生长的影响,并计算神经轴突的数目与面积。采用实时定量PCR检测食管癌细胞系EC109和EC9706中神经生长因子（NGF）和脑源性神经生长因子（BDNF）的表达情况。结果食管癌细胞与背根节细胞混合普通培养,背根节细胞发出轴突靶向肿瘤细胞生长。食管癌细胞与背根节组织共培养后,近肿瘤细胞侧背根节长出的轴突较长、较浓密,远肿瘤侧则较短、较稀疏。共培养第7天,近肿瘤侧神经突的数目与面积分别为87个和346μm^2,远肿瘤侧分别为23个和141μm^2,差异均有统计学意义（P〈0．05）。PCR检测发现,NGF和BDNF均表达于食管癌细胞。结论食管癌细胞对神经纤维有促生长和导向作用,该作用的发挥可能与NGF和BDNF等神经营养因子的分泌有关。     

白细胞介素—1β对体外培养及在体脊神经节感觉神经元的作用

目的 研究白细胞介素－1β（interleukin-1β,IL-1β）对体外培养大鼠背根神经节感觉神经元的作用,及其对周围神经损伤后脊神经节感觉神经元的保护作用。方法 （1）取乳鼠背根神经节行体外培养,培养基中分别加入IL－1β、PBS,培养48h后于相差显微镜下观察神经元的生长情况,MTT法测定神经元的活性。（2）Wistar大鼠20只,按手术先后顺序随机分成2组。切断右侧坐骨神经后用硅胶管套接神经的近端,管内分别注入1ng/ml的IL－1β（实验组10只大鼠）和PBS液15μβl（对照组10只大鼠）。术后2周取材,用图像分析系统测定神经元存活数目、胞体的直径和面积。结果 （1）两组间MTT值的差异,有非常显著性意义（t＝0．943,P＜0．01）。（2）两组损伤侧脊神经感觉神经 存海率的差异有非常显著性意义（t＝3．932,P＜0．01）。（3）对照组损伤侧与正常神经元胞体的直径和面积,两者差异有非常显著性意义（t＝9．188、8．379,P＜0．01）;而实验组损伤侧与正常侧相比,两者差异无显著性意义（t＝0．832、0．598,P＞0．05）。结论 IL－1β可明显促进体外培养的背根神经节感觉神经元的存活。外源性IL－1β对周围神经损伤后脊神经节内感觉神经元具有保护作用。     

白细胞介素 - 1β对体外培养及在体脊神经节感觉神经元的作用

目的研究白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）对体外培养大鼠背根神经节感觉神经元的作用,及其对周围神经损伤后脊神经节感觉神经元的保护作用。方法(1)取乳鼠背根神经节行体外培养,培养基中分别加入IL-1β、PBS,培养48h后于相差显微镜下观察神经元的生长情况,MTT法测定神经元的活性。(2)Wistar大鼠20只,按手术先后顺序随机分成2组。切断右侧坐骨神经后用硅胶管套接神经的近端,管内分别注入1ng/ml的IL-1β(实验组10只大鼠)和PBS液15μl(对照组10只大鼠)。术后2周取材,用图像分析系统测定神经元存活数目、胞体的直径和面积。结果(1)两组间MTT值的差异,有非常显著性意义（t=9.403,P＜0.01)。(2)两组损伤侧脊神经节感觉神经元存活率的差异有非常显著性意义（t=3.932,P＜0.01)。(3)对照组损伤侧与正常侧神经元胞体的直径和面积,两者差异有非常显著性意义(t=9.188、8.379,P＜0.01);而实验组损伤侧与正常侧相比,两者差异无显著性意义(t=0.832、0.598,P＞0.05)。结论IL-1β可明显促进体外培养的背根神经节感觉神经元的存活。外源性IL-1β对周围神经损伤后脊神经节内感觉神经元具有保护作用。     

不同营养因子组合对大鼠脊髓神经元的作用研究

[目的]探讨NGF、bFGF和BDNF的不同组合对大鼠脊髓神经元的作用。[方法]利用神经元培养技术，将新生1d的SD大鼠脊髓神经元接种于培养板，根据不同因子两两组合分为3个实验组、空白对照组和单因子对照组，因子终浓度均为50ng／ml。倒置相差显微镜动态观察，接种后第3、7d细胞爬片行β-tubulin3免疫荧光染色和Hoechst染色。测量阳性细胞最长突起长度，计算阳性细胞率，第1、3、5、7、9d行MTT检查，以OD值绘制生长曲线。[结果]各实验组神经元突起长度均优于对照组（P〈0．05），联合应用组优于单因子组，其中以A组（BDNF＋bFGF）突起最长，各实验组β-tubulin3阳性细胞率均高于对照组，MTT结果与染色结果一致。[结论]特定浓度下NGF、bFGF及BDNF可以有效促进大鼠脊髓神经元轴突的生长，并可有效维持神经元细胞存活，联合应用作用增强，BDNF＋bFGF作用最强。     

雪旺细胞复合细胞外基质凝胶移植对神经元逆行性死亡保护作用的研究

目的　雪旺细胞 (SC)和细胞外基质 (ECM)凝胶复合 ,修复周围神经缺损 ,研究 SC的成活和对背根神经节内神经元逆行性死亡的保护作用。　方法　 1将 SC制成 1× 10 8/ ml的 ECM凝胶后 ,置入 PL A中空纤维管中 ,修复大鼠 10 mm坐骨神经缺损 ,以单纯 ECM凝胶组和生理盐水组作为对照。术后 8、 12周 ,组织学检测 ,评价其效果。 2将Brd U标记的 SC复合 ECM凝胶后 ,置入 PL A中空纤维管中 ,修复大鼠坐骨神经缺损 ,术后 3、6周取材 ,Brd U免疫组织化学染色 ,观察 SC存活情况。　结果　 1SC和 ECM凝胶复合移植 ,多数细胞可存活至 3周 ,部分细胞可存活至 6周。2 SC和 ECM凝胶复合组、ECM凝胶组 ,L5背根神经节内成活的神经元数量分别是健侧的 83.5 %和 81.3% ,显著高于单纯生理盐水组的 72 .9% (P<0 .0 5 )。　结论　 SC和 ECM凝胶复合移植 ,多数细胞能成活并能使背根神经节内 83.5 %神经元受到保护而免于死亡     

异丙酚对N-甲基-D-天冬氨酸诱发大鼠海马神经元内游离钙离子浓度的影响

目的观察异丙酚对N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）诱发大鼠海马神经元内游离钙离子浓度（[Ca^2＋]i）的影响。方法取当天新生的Wistar大鼠海马神经元，培养12d随机分为5组，对照组（C组）、NMDA组、异丙酚10μmol／L＋NMDA组（P1组）、异丙酚100μmol／L＋NMDA组（P2组）、异丙酚400μmol／L＋NMDA组（P3组）。NMDA组培养液中加入NMDA至终浓度20μmol／L，P1组、P2组及P3组加入NMDA前即刻分别加入异丙酚至终浓度为10、100、400μmol／L，加入异丙酚后11min用激光共轭聚焦显微技术测定[Ca^2＋]。结果NMDA可诱发海马神经元[Ca^2＋]．升高，预先加入异丙酚100、400μmol／L可抑制这种改变，异丙酚10μmol／L对NDMA诱发的上述改变无影响。结论高浓度异丙酚可抑制NMDA诱发的大鼠海马神经元细胞[Ca^2＋]．的升高，这可能是其神经保护作用的机制之一。     

青藤碱和环孢素A联合应用延长大鼠移植心的存活时间

目的探讨青藤碱在大鼠单个核细胞（PBMC）增殖中的作用；观察青藤碱和环孢素A（CsA）联合应用对大鼠心脏移植术后移植心存活时间的影响。方法分离出大鼠外周血单个核细胞，用刀豆蛋白A（ConA）和混合淋巴细胞培养（MLC）激活单个核细胞增殖，采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法及磷脂酰丝氨酸外翻分析（Annexin V）法检测单纯应用青藤碱或青藤碱＋CsA联合应用后对单个核细胞增殖作用的影响；以Wistar大鼠为供者，SD大鼠为受者，建立改良的颈部异位心脏移植模型，根据术后用药不同将其分为5组。（1）对照组：肌肉注射生理盐水1ml；（2）青藤碱组：肌肉注射青藤碱20mg·kg^-1·d^-1；（3）CsA组：肌肉注射CsA2mg·kg^-1·d^-1;（4）青藤碱＋CsA组：肌肉注射青藤碱20mg·kg^-1·d^-1＋CsA2mg·kg^-1·d^-1；（5）大剂量青藤碱组：肌肉注射青藤碱40mg·kg^-1·d^-1。观察各组移植心存活时间及病理学改变。结果（1）青藤碱能够显著的抑制ConA和MLC激活的单个核细胞增殖，并与CsA有协同作用。（2）青藤碱组及大剂量青藤碱组与对照组比较，移植心存活时间虽延长，但差异无统计学意义（P〉0．05）；青藤碱＋CsA组移植心存活时间明显延长，与其它4组比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论青藤碱能够显著的抑制单个核细胞的增殖；青藤碱联合小剂量环孢素A能明显延长移植心存活时间。     

NT-3基因修饰许旺细胞与神经干细胞联合移植促进大鼠全横断脊髓受损伤神经元的存活及其轴突再生

目的探讨神经营养素-3基因修饰许旺细胞（NT-3-SCs）与神经干细胞（NSCs）联合移植对大鼠因脊髓全横断而受损伤的神经元存活及其轴突再生的作用。方法将NT-3-SCs及LacZ报告基因修饰SCs（LacZ-SCs）与NSCs联合移植到全横断性脊髓损伤处，60d后在脊髓横断处尾侧注射荧光金（FG）进行逆行标记。第67天，取材进行组织学检测大脑皮质体感区、红核及脊髓横断处头侧FG标记神经元；大脑皮质体感区、红核和脊髓背核内存活的神经元以及脊髓损伤处再生的轴突。结果大脑皮质体感区、红核及脊髓L1背核内存活的神经元由多到少依次为NT-3-SCs与NSCs联合组、LacZ—SCs与NSCs联合组和实验对照组。NT-3-SCs与NSCs联合组和LacZ—SCs与NSCs联合组的大脑皮质体感区、红核和脊髓横断处头侧有FG标记神经元；脊髓横断处及其附近组织有5-HT、CGRP和SP阳性神经纤维。结论NT-3-SCs与NSCs联合移植能够促进脊髓全横断损伤后神经元的存活以及轴突再生。     

Comparison of neuropathic pain and neuronal apoptosis following nerve root or spinal nerve compression

Altered dorsal root ganglion (DRG) function is associated with neuropathic pain following spinal nerve injury. However, compression of the cauda equina and dorsal rhizotomy proximal to the DRG do not induce significant pain, whereas in the spinal nerve and peripheral nerve, injury distal to the DRG does induce neuropathic pain. Caspase signaling induces apoptosis, and caspase inhibitors prevent pain-related behavior. The degree of DRG neuronal apoptosis is thought to play a role in pain behavior. We suggest that differences in pain behavior according to the injury sites within the DRG may be related to imbalances in apoptotic injuries. The aim of this study was to determine which compression injury was more painful and to compare behavior with expression of tumor necrosis factor (TNF)-alpha in DRG and apoptosis in the DRG following crush injury to the L5 nerve root or L5 spinal nerve. Sprague–Dawley rats received a crush injury to the L5 spinal nerve (distal to the DRG), crush injury to the L5 nerve root (proximal to the DRG), or no crush injury (sham). Mechanical allodynia was determined by the von Frey test. Expression of TNF-alpha was compared among three groups using immunoblot findings. Furthermore, we compared the percentage of neurons injured in the DRG using immunostaining for apoptotic cells and localization of activated caspase 3. Mechanical allodynia was observed in both crush injury groups. The duration of mechanical allodynia in the distal crush group was significantly longer than in the proximal crush group (P < 0.05). TNF-alpha expression was increased in DRG neurons following injury. DRG apoptosis in the distal crush group was significantly higher than in the proximal group at each time point (P < 0.05). This study suggests that spinal nerve crush injuries produce a greater degree of DRG apoptosis than do corresponding nerve root crush injuries, and that the former injuries are associated with longer lasting mechanical allodynia. Thus, differences in the time course of mechanical allodynia might be associated with an imbalance in DRG apoptosis.     

复方中药对神经损伤后感觉神经元超微结构变化的研究

目的 研究复方中药对大鼠坐骨神经损伤后感觉神经元超微结构的变化。方法 雄性ＳＤ大鼠１２只,根据术后用药的不同随机分成中药组与对照组,每组６只大鼠。选择左侧坐骨神经切断加近端神经双重结扎的模型。于术后７、１４、２８ｄ取Ｌ５背根神经节,按常规方法制成切片后,在电镜下观察感觉神经元的变化。结果 对照组的背根神经节感觉神经元,其超微结构随着时间的推移,线粒体肿胀,及线粒体嵴、基质丢失。细胞核逐渐变小,核质     

坐骨神经预损伤后miR-124-3p调节GAP-43表达并促进轴突生长的实验研究

 目的 通过研究坐骨神经预损伤后背根神经节中microRNA表达谱变化,探讨坐骨神经预损伤促进脊髓后索损伤修复机制。方法 利用微阵列芯片技术和生物信息学方法,研究与坐骨神经预损伤促进脊髓后索损伤修复有关的microRNA,并用RT-qPCR技术、Western blot技术、免疫荧光染色、反义miRNA寡核苷酸抑制剂等技术验证。结果 单纯脊髓后索损伤组miR-124-3p在大鼠脊髓后索损伤后7 d、14 d明显上调;坐骨神经预损伤组,脊髓后索损伤后7 d、14 d背根神经节中miR-124-3p明显下调。与正常背根神经节神经元相比,抑制miR-124-3p后GAP-43表达增加,神经元轴突延长。与对照组相比,各组各时间窗STAT3 mRNA表达差异无统计学意义,坐骨神经预损伤组STAT3蛋白在脊髓后索损伤后7 d和14 d表达上调而单纯脊髓后索损伤组脊髓后索损伤后7 d和14 d STAT3蛋白表达下调。与正常背根神经节神经元相比抑制miR-124-3p的神经元STAT3免疫荧光增强、轴突延长,p-STAT3、GAP-43蛋白表达明显上调。与正常背根神经节神经元相比AG490+AMO-124共同处理的神经元轴突长度无明显差异,STAT3表达明显上调,而p- STAT3和GAP-43表达无明显差异。结论 背根神经节神经元中miR-124-3p下调通过STAT3蛋白的上调促使GAP-43蛋白表达增加是坐骨神经预损伤促进脊髓后索损伤修复的机制之一。     

坐骨神经损伤对背根节细胞凋亡及细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的：观察大鼠坐骨神经条件性损伤后对背根节细胞凋亡及细胞凋亡相关蛋白表达的影响。方法：将45只成年Wistar大鼠,按手术的不同随机分为3组;正常对照组（A组,n=5）;坐骨神经压榨伤组（B组,n=20);坐骨神经切断组（C组,n=20)。B、C两组又按术后3d,2周,1个月和2个月取材时间分为4个时间组,每组5只大鼠。各时间组取鼠的L5背根神经节后,以TUNEL法检测细胞的凋亡数,以免疫组化技术检测Bcl-2和Bax的表达。结果：正常组及B、C两组伤后3d时未检出凋亡细胞;B、C两组的细胞凋亡率在伤后2周达到高峰,以后随时间的推移而逐渐降低。C组的细胞凋亡率明显高于B组。背根节细胞凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的表达,伤后2周达到高峰。B组中Bcl-2和Bax的表达呈现从低到高而后逐渐恢复正常的规律;而C组的表达始终保持在高水平。结论：细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax参与外周神经损伤后背根节细胞凋亡的调节。外周神经的不同损伤方式对背根节细胞凋亡及细胞凋亡相关蛋白的表达影响不同。     

Effect of acute nerve root compression on endoneurial fluid pressure and blood flow in rat dorsal root ganglia.

The objective of the current study was to test the hypothesis that crush injury to nerve root increases endoneurial fluid pressure (EFP) and decreases blood flow in the associated dorsal root ganglion (DRG). A total of 21 adult, female Sprague-Dawley rats had their left L5 nerve root and DRG exposed. The L5 nerve root was clamped for 2 s with a vascular suture clip just proximal to the DRG (compression group). Sham-operated animals without compression were used for control (control group). EFP was recorded with a servo-null micropipette system using a glass micropipette with tip diameter of 4 mum before and after 3 h of treatment. After the final measurement of EFP, DRG was excised and processed for histology. Blood flow in the DRG was continuously monitored by laser Doppler flow meter for 3 h. Three hours after treatment, EFP was 4.7+/-2.7 cm H(2)O in the compression group and 2.2+/-1.2 cm H(2)O in the control group (P<0.05). Edema was the principal pathologic findings seen consistently in the DRG from animals in the compression group. Blood flow in the compression group was reduced 10 min after compression. This reduction was statistically significant compared with that of the control (P<0.01). An acute compression to the nerve root increased endoneurial edema, increased EFP in the associated DRG, and reduced DRG blood flow. This combination of increased EFP and decreased blood flow in the DRG may result in neuronal ischemia and sensory dysfunction. These acute pathophysiologic changes may thus have a role in the pathogenesis of low back pain and sciatica due to disc herniation and spinal canal stenosis.