麦冬皂苷D通过降低自噬抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥大

目的麦冬皂苷D是否抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)所引起的心肌肥大及其可能机制。方法体外培养大鼠心肌细胞系H9c2,MTS法检测麦冬皂苷D的细胞毒性;其次将1μmol·L~(-1)的AngⅡ作用于H9c2细胞24h后引起心肌肥大,用不同浓度的麦冬皂苷D(ophiopogonin D,OPD)共处理,BCA法检测总蛋白含量;实时荧光定量PCR技术检测标志性肥大基因BNP和β-MHC的mRNA表达;Western blot法检测自噬蛋白LC3B的表达,同时运用高内涵筛选技术检测心肌细胞自噬蛋白LC3B的表达以及线粒体膜电位的改变。结果细胞活力的检测结果显示,与对照组相比,AngⅡ不同浓度作用24 h后,对细胞活力无明显影响,而麦冬皂苷D的高浓度(50~100μmol·L~(-1))可明显抑制细胞的活性;AngⅡ作用于心肌细胞24h后,可引起心肌肥大,导致特异性肥大基因mRNA表达上调,并且明显增加细胞总蛋白含量;同时使心肌细胞自噬增强;线粒体膜电位降低,而麦冬皂苷D共处理能明显逆转上述指标。结论麦冬皂苷D对AngⅡ所诱导的心肌肥大有抑制作用。     

氧化苦参碱通过COX-2/PINK1/Parkin信号通路介导的线粒体自噬对MG63骨肉瘤细胞的促凋亡机制

目的 基于环氧合酶2(COX-2)/PTEN诱导激酶1(PINK1)/帕金森病蛋白2(Parkin)信号通路介导的线粒体自噬研究氧化苦参碱对人骨肉瘤MG63细胞的促凋亡机制。方法 取MG63细胞经2.0、4.0、8.0 mg/mL的氧化苦参碱和6μmol/L的5-氟尿嘧啶（5-FU）作用后,检测细胞凋亡率、凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白（Bax）]表达水平、线粒体膜电位降低比例、线粒体自噬水平以及PINK1、Parkin、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ（LC3-Ⅱ）蛋白表达水平。采用PINK1小干扰RNA(PINK1siRNA)干扰PINK1的表达,将细胞分为对照组、PINK1 siRNA组、氧化苦参碱组、PINK1 siRNA+氧化苦参碱组,检测细胞中PINK1、Parkin、LC3-Ⅱ蛋白表达水平和线粒体膜电位降低比例以及细胞凋亡率。采用慢病毒感染使COX-2过表达,将细胞分为对照组、氧化苦参碱组、COX-2组、COX-2+氧化苦参碱组,检测细胞中COX-2、PINK1和Parkin蛋白表达水平以及线粒体膜电位降低比例。结果 经氧化苦参碱干预后,细胞凋亡率...     

小檗碱对心肌缺血再灌注损伤大鼠线粒体自噬及对PINK1/Parkin通路的影响

目的探讨小檗碱对心肌缺血再灌注损伤大鼠线粒体自噬及PTEN诱导激酶1(PTENinducedputativekinase1,PINK1)/帕金森病蛋白(Parkin)通路的影响。方法建立心肌缺血再灌注损伤大鼠模型,随机分组为模型组、小檗碱低、高剂量(75、150 mg/kg)组,自噬抑制剂三甲基腺嘌呤(3-MA,100 mmol/L)组、小檗碱+3-MA(150 mg/kg+100 mmol/L)组,每组12只,另取12只正常大鼠设为假手术组。分组处理后,超声检测大鼠左室功能,记录左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左心射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(FS);三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测各组大鼠心肌梗死面积,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组大鼠血清中磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白I(cTnI)水平;HE染色观察大鼠心肌组织病理变化;透射电镜观察心肌细胞超微结构及线粒体自噬并分析线粒体损伤评分;蛋白免疫印迹法检测各组大鼠心肌组织PINK1、Parkin蛋白及微管轻链蛋白3B(LC3B)、线粒体自噬受体p62(p62)、泛素特异性蛋白酶30(USP30)蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠心肌组织病理损伤严重,线粒体肿胀及空泡化损伤较多,线粒体损伤评分、心肌梗死面积、LVEDD、LVESD、CK-MB、cTnI水平及PINK1、Parkin、LC3B、p62蛋白表达升高(P0.05),LVEF及FS、USP30蛋白表达降低(P0.05)。与模型组比较,3-MA组大鼠心肌组织及线粒体病理损伤加重,LVEF、FS、PINK1、Parkin、LC3B、p62蛋白表达降低(P0.05),线粒体损伤评分、心肌梗死面积、LVEDD、LVESD、CK-MB、cTnI水平、USP30蛋白表达升高(P0.05);小檗碱低、高剂量大鼠心肌组织及线粒体病理损伤减轻,LVEF、FS、PINK1、Parkin、LC3B、p62、USP30蛋白表达升高(P0.05),线粒体损伤评分、心肌梗死面积、LVEDD、LVESD、CK-MB、c TnI水平降低(P0.05)。小檗碱+3-MA组大鼠上述各项指标均与小檗碱高剂量组变化趋势相反,且有统计学差异(P0.05)。结论小檗碱可能通过激活PINK1/Parkin/P62/LC3B通路促进线粒体自噬,升高USP30表达,减少异常自噬,缓解心肌缺血再灌注损伤。     

线粒体自噬在纳米氧化锌致心肌细胞毒性中的作用

目的探讨纳米氧化锌(Zinc Oxide Nanoparticles, ZnO NPs)对人源心肌细胞(A human cardiomyocytes, AC16)的毒性作用特征,并从线粒体自噬角度探讨其作用机制。方法利用透射电镜(Transmission electron microscope, TEM)和动态光散射法(Dynamic light scattering, DLS)对ZnO NPs进行表征,将AC16细胞给予不同剂量的ZnO NPs处理,光学显微镜观察细胞形态学改变,利用CCK-8法测定细胞存活率。流式细胞术检测线粒体活性氧自由基(Reactive oxygen species, ROS)和线粒体膜电位(Mitochondrial membrane potential, MMP)改变,Western blot检测线粒体自噬蛋白PINK1和Parkin的表达水平。结果透射电镜显示ZnO NPs为棒状结构,平均粒径约为50 nm, Zeta电位为-17.57±3.07 mV。ZnO NPs呈剂量-时间依赖性降低AC16细胞存活率,导致线粒体功能损伤,表现为线粒体ROS蓄积和MMP下降。细胞给予50μmol/L ZnO NPs处理6 h可增加PINK1和Parkin的表达,提示线粒体自噬激活;线粒体自噬抑制剂(Mitochondrial division inhibitor, Mdivi-1)可抑制PINK1和Parkin蛋白表达,加剧ZnO NPs引起的细胞毒性。结论 ZnO NPs可剂量和时间依赖性引起人源心肌细胞毒性和线粒体功能紊乱,提示线粒体自噬可作为一种细胞自我保护机制而抑制ZnO NPs的毒性。     

金合欢素对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡和迁移的影响及机制研究

目的 探讨金合欢素（Aca）通过调节PTEN诱导激酶1(PINK1)/E3泛素连接酶（Parkin）通路介导的线粒体自噬对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法 将肝癌HepG2细胞分为对照组（正常培养的HepG2细胞）、Aca组（10μmol/L Aca）、PINK1小干扰RNA阴性对照（si-NC）组（转染si-NC）、PINK1小干扰RNA(si-PINK1)组（转染si-PINK1）、Aca+si-NC组（转染si-NC后用10μmol/L Aca处理）、Aca+si-PINK1组（转染si-PINK1后用10μmol/L Aca处理）。CCK-8法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；Transwell实验检测细胞迁移；透射电镜观察自噬小体的形成；Western blot检测细胞中自噬相关蛋白[Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅰ、LC3-Ⅱ]及PINK1/Parkin通路相关蛋白表达。结果 与对照组比较，Aca组HepG2细胞存活率、迁移细胞数目降低，凋亡率、自噬小体数量、Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、PINK1、Parkin蛋白表达水平...     

基于网络药理学从线粒体自噬途径探讨八味沉香散抗缺血性心脏病的作用机制北大核心CSCD

目的基于网络药理学结合分子对接技术及细胞实验验证,探讨八味沉香散经线粒体自噬途径抗缺血性心脏病(ischemic heart disease,IHD)的潜在机制。方法利用Swiss target prediction平台预测八味沉香散入血成分靶点;从GeneCards、NCBI、OMIM数据库中筛选缺血性心脏病、线粒体自噬相关靶点;取三者交集得到八味沉香散经线粒体自噬途径抗缺血性心脏病的潜在靶点。构建“成分-疾病-潜在靶点”网络及蛋白质相互作用网络,分别进行网络分析筛选出关键活性成分和核心靶点,并进行分子对接。利用DAVID数据库进行GO富集及KEGG富集分析。构建H9C2细胞缺氧模型,考察八味沉香散含药血清对H9C2细胞存活率、自噬水平及关键通路相关蛋白表达的影响。结果筛选得到八味沉香散经线粒体自噬途径抗IHD的关键活性成分9种,核心靶点8个;分子对接结果显示关键活性物质和核心靶点均有较好的结合活性。KEGG结果显示八味沉香散经线粒体自噬途径抗IHD的作用可能与EGFR、PI3K-Akt、MAPK、FoxO等信号通路有关。细胞实验结果表明八味沉香散可增加缺氧条件下H9C2细胞的细胞活性,明显降低细胞中LC3、p62的蛋白相对表达量,升高p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT的蛋白相对表达量。结论八味沉香散可能通过槲皮素、山奈酚、柚皮素、去氢二异丁香酚等活性成分作用于AKT1、STAT3、MAPK3,EGFR等多个靶点调控线粒体自噬发挥抗缺血性心脏病的作用,其具体机制可能与PI3K-AKT信号通路相关。     

麦冬皂苷D对细菌脂多糖所致小肠上皮细胞损伤的保护作用

目的研究麦冬皂苷D(ophiopogonin D,OPD)对小肠上皮细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法体外培养大鼠小肠上皮细胞IEC-6,用噻唑兰(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)法检测麦冬皂苷D对大鼠小肠上皮细胞IEC-6活性的影响;建立细菌脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)损伤大鼠小肠上皮细胞IEC-6模型,检测麦冬皂苷D对上皮细胞的凋亡作用以及紧密连接屏障功能作用的影响。结果 LPS可显著降低IEC-6细胞的存活率;LPS显著促进炎症指标核转录因子NF-κB、凋亡相关蛋白caspase-9以及可导致紧密连接功能紊乱的肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)的表达;LPS抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。麦冬皂苷D可逆转LPS造成的功能紊乱,包括促进Bcl-2的表达,抑制caspase-3及MLCK的表达,一定程度上恢复黏膜屏障功能。结论麦冬皂苷D可缓解LPS造成的肠上皮细胞损伤,该作用与抗炎、抑制细胞凋亡及降低MLCK表达相关;麦冬皂苷D可能成为炎症性肠病临床治疗的一个潜在的候选药物。     

蛇床子素通过PINK1/Parkin通路诱导HeLa细胞自噬

目的 探讨蛇床子素促进宫颈癌HeLa细胞发生自噬的潜在作用机制。方法 不同浓度蛇床子素(0、10、20、40、80、160、240、320 mg·L^-1)作用于HeLa细胞,MTT法检测蛇床子素对HeLa细胞增殖的抑制作用;透射电镜观察经蛇床子素干预的HeLa细胞形态;单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine, MDC)染色检测自噬水平;流式细胞术检测活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平;Western blot分析线粒体相关蛋白MFN1、DPR1表达水平;JC-1荧光探针检测线粒体膜电位变化;建立裸鼠宫颈癌体内移植瘤模型探讨蛇床子素对宫颈癌的抑制作用;Western blot检测PINK1、Parkin和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平。结果 蛇床子素能明显抑制HeLa细胞增殖;通过透射电镜观察,经蛇床子素干预的HeLa细胞有典型的自噬小体形成;MDC染色荧光强度增强,细胞发生自噬;线粒体融合蛋白MFN1表达下调,分裂蛋白DRP1表达上调;JC-1显示线粒体膜电位下降;流式细胞术检测结果显示细胞内ROS水平升高,且能被自噬...     

毛蕊花糖苷通过调节线粒体自噬保护帕金森病神经细胞的作用研究

目的 探讨毛蕊花糖苷(ACT)对帕金森病(PD)细胞模型的保护作用，并揭示其可能的机制。方法 应用鱼藤酮(ROT)和6-羟基多巴胺(6-OHDA)干预PC-12和SH-SY5Y细胞构建PD细胞模型，采用MTT比色法检测不同浓度ACT对PC-12细胞活性的影响；流式细胞技术分别检测ACT对6-OHDA和ROT损伤的SH-SY5Y细胞凋亡的作用。利用激光共聚焦显微镜观察ACT对NRK和PC-12细胞线粒体自噬的影响。应用分子对接技术预测ACT与PINK1、Parkin的对接姿势和能量。结果 ACT对PC-12细胞作用24 h的IC₅₀值为695.5μM;ACT能降低ROT和6-OHDA损伤的SH-SY5Y细胞的凋亡发生率，差异有统计学意义(P<0.01),且明显提高NRK和PC-12细胞的线粒体自噬水平；ACT对PINK1和Parkin均具有较强的对接亲和力，其亲和能量均为-9.0 kcal/mol。结论 ACT可能通过抑制细胞凋亡和调节PINK1/Parkin介导的线粒体自噬而保护PD神经细胞。     

黄芪甲苷调控线粒体自噬减轻5-Fu诱导老龄大鼠心肌毒性的实验研究#br#

目的　探索黄芪甲苷（AS-Ⅳ）通过PINK1/Parkin信号通路调控自噬减轻5-氟尿嘧啶（5-Fu）诱导老龄大鼠心肌毒性的疗效及机制。方法　18月龄雄性SD大鼠36只,按随机数字表法分为对照组、模型组、AS-Ⅳ组,每组12只。以5-Fu注射液30 mg/kg,腹腔注射,隔日1次,连续7次建立模型组;AS-Ⅳ稀释液,20 mg/kg,灌胃,每日1次,连续14次,建立AS-Ⅳ组。检测血清肌钙蛋白I（cTnI）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、心肌线粒体腺苷三磷酸（ATP）及膜电位水平、行HE及Masson染色观察心肌病理改变、免疫荧光染色检测微管相关蛋白LC3Ⅱ表达、电镜观察线粒体结构并采用Western blot检测PINK1/Parkin通路关键分子PINK1、Parkin、Beclin1、LAMP、LC3蛋白表达。结果　与模型组相比,AS-Ⅳ可减缓大鼠体质量下降,降低心肌cTnI及CK-MB水平,抑制线粒体ATP水平下降（P＜0.05）。与对照组相比,模型组心肌纤维排列紊乱,胶原纤维沉积,胶原容积百分比升高;经AS-Ⅳ干预后,胶原容积百分比减低（P＜0.05）。电镜及LC3Ⅱ荧光染色显示,经AS-Ⅳ干预后,线粒体损伤程度减轻,LC3Ⅱ表达量减低（P＜0.05）。Western blot结果提示AS-Ⅳ苷干预后Beclin1、PINK1、Parkin、LAMP和LC3Ⅱ/Ⅰ表达较模型组降低（P＜0.05）。结论　5-Fu可诱导心肌线粒体损伤,线粒体自噬过度,AS-Ⅳ可通过调节自噬减轻5-Fu心肌毒性。     

基于药物相互作用研究麦冬皂苷D对麦冬皂苷D′急性和亚急性毒性的影响

目的 基于药物相互作用研究麦冬皂苷D(OPD)对麦冬皂苷D′(OPD′)急性和亚急性毒性的影响。方法 (1)采用Bliss法测定急性毒性：小鼠分为OPD′单用、OPD+OPD′(OPD和OPD′提前混合)和OPD→OPD′(先注射OPD间隔15 min再注射OPD′)组,其中OPD′单用组5个剂量分别为3.127,6.460,9.979,10.245和13.098 mg·kg^-1;OPD+OPD′组OPD和OPD′1∶1混合,5个剂量分别为5.711,6.129,7.626,8.712和10.262 mg·kg^-1;OPD→OPD′组OPD固定为1.0 mg·kg^-1,OPD′5个剂量分别为11.351,15.551,22.732,26.568和30.137 mg·kg^-1。单次尾静脉注射,观察给药后14 d内小鼠的行为表征和死亡数。(2)亚急性毒性试验：SD大鼠随机分为5组,分别为正常对照、OPD单用(0.25 mg·kg^-1)、OPD′单用(0.25 mg·kg^-...     

积雪草苷调控SIRT1-FOXO3-PINK1-Parkin通路介导的线粒体自噬保护肾缺血再灌注损伤的机制研究

目的　探讨积雪草苷（AC）调控沉默信息调节因子1（SIRT1）-叉头盒转录因子O3（FOXO3）-PTEN诱导性激酶蛋白1（PINK1）-E3泛素连接酶（Parkin）通路介导线粒体自噬对肾缺血再灌注损伤（RIRI）的保护作用及机制。方法　采用随机数字表法将50只雄性SD大鼠分为假手术组（Sham组）、模型组（Model组）、AC组、AC+SIRT1抑制剂（EX-527）组、EX-527组,每组10只。构建RIRI模型;AC组造模前予以AC混悬液80 mg/（kg·d）连续灌胃4周;AC+EX-527组造模前3 d予以含EX-527（5 mg/kg）的1% DMSO溶液腹腔注射,术中再灌注前20 min腹腔注射1次,余处理同AC组;EX-527组仅予以等量含EX-527的1%DMSO溶液腹腔注射。造模24 h后取材,检测血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）水平,HE染色观察肾组织病理改变及评分,Western blot检测组织SIRT1、FOXO3、PINK1、Parkin通路蛋白和自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白轻链3（LC3）A/B-Ⅰ、LC3A/B-Ⅱ表达水平,并计算（LC3A/B-Ⅱ）/（LC3A/B-Ⅰ）;紫外分光光度法检测组织ATP含量;JC染色法检测线粒体膜电位变化。结果　与Sham组比较,Model组Scr、BUN水平升高,肾组织发生病理损伤,通路及自噬相关蛋白表达量出现不同程度升高,ATP含量减少,线粒体膜电位水平下降（P＜0.05）;相比Model组,AC组Scr、BUN水平明显降低,肾组织病理损伤减轻,通路及自噬相关蛋白表达水平升高,ATP含量增高,线粒体膜电位升高（P＜0.05）;与AC组比较,经EX-527干预的AC+EX-527、EX-527组Scr、BUN水平出现不同程度升高,组织病理损伤加重现象,通路及自噬相关蛋白表达量均减少,ATP含量减少,线粒体膜电位水平下降（P＜0.05）,EX-527组程度较为明显。结论　AC通过上调SIRT1-FOXO3-PINK1-Parkin信号通路蛋白表达,促进线粒体自噬来改善肾组织细胞线粒体功能,抑制细胞凋亡,对RIRI起到保护作用。     

地榆皂苷Ⅰ对脓毒症大鼠急性肺损伤的保护作用及机制研究

目的 基于网络药理学方法探讨地榆皂苷Ⅰ对脓毒症大鼠急性肺损伤的保护作用及机制,并通过实验进行验证。方法使用网络药理学方法预测地榆皂苷Ⅰ治疗脓毒症急性肺损伤的潜在靶点。采用盲肠结扎穿孔术复制大鼠脓毒症模型进行实验验证。将192只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组（Sham组）、脓毒症组（Sep组）、常规治疗组（CT组）和地榆皂苷Ⅰ治疗组（ZgⅠ组）。Sham组、Sep组给予无菌生理盐水,CT组和ZgⅠ组大鼠给予相应剂量的林格氏液和地榆皂苷Ⅰ。观察各组大鼠动脉血气、血清炎症因子、肺湿/干质量比、肺组织病理变化、肺血管通透性、肺静脉紧密连接蛋白1(ZO-1)和血管内皮钙黏蛋白（VEcadherin）蛋白表达、72 h存活情况。结果 网络药理学结果显示,地榆皂苷Ⅰ治疗脓毒症的潜在靶点有47个,基因本体功能富集分析和京都基因与基因组百科全书通路富集分析结果显示,其机制可能与活性氧族代谢正向调控（positive regulation of reactive oxygen species metabolic process）、损伤修复（would healing）、内皮细胞增殖调控（regulat...     

麦冬皂苷B诱导人肝癌HepG2细胞自噬的分子机制研究

目的:研究麦冬皂苷B诱导人肝癌HepG2细胞自噬的分子机制.为临床抗肿瘤治疗提供理论依据.方法:MTT比色法检测人肝癌HepG2细胞增殖;流式细胞仪检测HepG2细胞的凋亡及细胞周期变化;吖啶橙、Lyso-Tracker Red(溶酶体红色荧光探针)染色、HepG2-GFP-LC3转染细胞等检测细胞自噬;Western blotting(蛋白质印迹法)检测人肝癌HepG2细胞自噬信号通路中关键蛋白的变化.结果:人肝癌HepG2细胞的增殖被麦冬皂苷B抑制,而且麦冬皂苷B可诱导人肝癌HepG2细胞发生自噬,但不诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞,可导致LC3I转变为LC3II和Beclin-1(自噬标志性蛋白)表达增加,自噬抑制剂3-MA几乎完全逆转其抗增殖作用.Western blotting检测结果表明,AKT、mTOR和p70S6K的磷酸化及PTEN上调是被麦冬皂苷B抑制的结果.结论:麦冬皂苷B通过抑制Akt/mTOR信号通路诱导人肝癌HepG2细胞发生自噬.     

癫痫清颗粒介导线粒体自噬对P301S小鼠tau蛋白的影响

目的 研究癫痫清颗粒介导线粒体自噬对P301S小鼠tau蛋白的影响。方法 将36只P301S小鼠按体重分为模型组、癫痫清颗粒组（12.48 g/kg）和盐酸多奈哌齐组（阳性对照，1.3 mg/kg），每组12只；另取C57BL6小鼠10只，作为对照组。各药物组小鼠灌胃相应药液，对照组和模型组灌胃等体积水；灌胃体积均为20 mL/kg，每天1次，连续5个月。实验期间，观察各组小鼠的一般状况；末次给药后，借助Y迷宫和Morris水迷宫实验检测小鼠的学习记忆能力；以苏木精-伊红染色法观察其脑组织形态学改变，以尼氏染色法观察其脑组织神经细胞结构和尼氏体数量；以免疫组织化学法检测其脑组织中丝氨酸202/苏氨酸205位点磷酸化tau（简称“AT8”）蛋白的表达水平，Western blot法检测脑组织中线粒体自噬相关蛋白[PTEN诱导激酶1(PINK1)、Parkin、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)、p62]、突触相关蛋白[突触后密度蛋白95(PSD-95)、突触生长蛋白（SYP）、生长相关蛋白43(GAP-43)]的表达水平和tau蛋白的磷酸化水平[以丝氨酸199(Ser199)、Ser20...     

亚精胺促进线粒体自噬缓解急性胰腺炎的分子机制研究

目的 探讨亚精胺促进线粒体自噬缓解急性胰腺炎的疗效及作用机制。方法 将C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组、亚精胺组、亚精胺＋环孢菌素A组，每组5只。通过每小时向小鼠腹膜内注射1次50 μg/kg的蛙皮素构建急性胰腺炎模型。对照组按照同模型组的处理方式注射等体积无菌生理盐水；亚精胺组腹膜内注射100 mmol的亚精胺；亚精胺＋环孢菌素A组在给予亚精胺治疗的同时，腹膜内注射10 mg/kg的环孢菌素A。苏木精–伊红（HE）染色评估小鼠胰腺组织损伤程度。TUNEL染色评估胰腺腺泡细胞凋亡情况。ELISA法测定小鼠血清炎症因子白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤细胞坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、C反应蛋白（CRP）的水平。免疫组织化学染色（IHC）评估髓过氧化物酶（MPO）水平。JC-1染料测定胰腺组织提取的总线粒体的线粒体膜电势水平。Western blotting法测定胰腺组织细胞质基质型LC3（LC-3Ⅰ）、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ（LC-3Ⅱ）、泛素结合蛋白（p62）、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase-1）、cleaved-Caspase-1、IL-1β、PTEN诱导假定激酶1（PINK1）、磷酸化Parkin（p-Parkin）和Parkin的表达水平。结果 与模型组相比，亚精胺组胰腺组织几乎不存在中性粒细胞的大量浸润，腺泡细胞肿胀程度明显减弱，基本无腺泡细胞坏死；TUNEL染色阳性细胞数和MPO IHC阳性染色细胞数明显降低；小鼠血清IL-6、TNF-α、IL-1β、CRP的水平明显降低；胰腺组织LC-3Ⅰ/Ⅱ、NLRP3、IL-1β、cleaved-Caspase-1、PINK1和p-Parkin的表达水平明显降低，p62的表达水平明显增强；胰腺组织总线粒体膜电势水平明显增强（P＜0.05）。与亚精胺组相比，亚精胺＋环孢菌素A组完全逆转了亚精胺的治疗效果。结论 亚精胺可以促进线粒体自噬缓解急性胰腺炎。     

碲化镉量子点抑制人脐静脉内皮细胞存活并损伤线粒体

目的观察碲化镉量子点(Cd Te QD)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)线粒体自噬的诱导作用,探讨Cd Te QD对血管内皮细胞的毒理特性。方法原代培养的HUVEC采用免疫荧光法鉴定后与Cd Te QD(0.1~100 mg·L~(-1))共孵育24 h,MTT法检测细胞存活;Mitotracker标记、激光共聚焦显微术观察线粒体断裂情况;JC-1染色、流式细胞术检测Cd Te QD对HUVEC线粒体膜电位的影响;Western蛋白印迹法检测线粒体自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3Ⅰ/Ⅱ(LC3Ⅰ/Ⅱ)、膜突蛋白样BCL2作用蛋白1(Beclin1)、同源性磷酸酶张力蛋白诱导的激酶1(PINK1)和动力相关蛋白1(DRP1)水平的变化。结果经鉴定,原代培养的HUVEC>95%为血管内皮细胞。MTT结果显示,Cd Te QD作用于HUVEC 24 h后,细胞存活率显著下降(P<0.05,P<0.01)。激光共聚焦显微术检测发现,Cd Te QD导致HUVEC胞内线粒体大量断裂。流式细胞术检测染色结果表明,Cd Te QD 0.1,1和10 mg·L~(-1)使HUVEC的线粒体膜电位下降,膜电位较高的HUVEC比例分别由正常对照组的(91.8±0.6)%下降至(90.2±1.1)%,(84.4±0.9)%和(78.1±1.3)%(P<0.05,P<0.01)。Western蛋白印迹结果显示,Cd Te QD 10 mg·L~(-1)诱导自噬相关蛋白Beclin1,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值PINK1和DRP1的水平升高(P<0.05,P<0.01),Cd Te QD 1 mg·L~(-1)还造成线粒体自噬相关蛋白PINK1和DRP1表达显著上升(P<0.05,P<0.01)。结论 Cd Te QD可诱导HUVEC线粒体损伤并激活线粒体自噬。     

线粒体相关内质网膜在缺血性脑卒中的作用

线粒体相关内质网膜(mitochondria-associated endoplasmic reticulum membranes,MAM)是内质网(endoplasmic reticulum,ER)膜与线粒体外膜紧密连接的特化部分,构成ER和线粒体之间通讯的物理基础,并在Ca~(2+)稳态、氧化应激、炎症、线粒体形态功能调控、脂质代谢、细胞凋亡、自噬等过程中发挥重要作用。深入研究发现,MAM功能与缺血性脑卒中病理生理机制高度相关。另一方面,多种具有明确抗缺血性脑卒中作用的药物或化合物通过影响MAM相关蛋白发挥作用。该文就MAM在缺血性脑卒中病理进程中的作用,以及其作为抗缺血性脑卒中的潜在药物靶点作一综述。     

下调蛋白激酶PINK1对Aβ_(25-35)所致阿尔茨海默病痴呆模型大鼠病理变化的影响

目的线粒体功能障碍是阿尔茨海默病(AD)发生发展过程中非常重要的机制之一。线粒体自噬可以清除受损的线粒体。磷酸酶及张力蛋白同源物诱导的蛋白激酶1(PINK1)是一种与线粒体自噬相关的蛋白激酶。本研究主要观察蛋白激酶PINK1对Aβ25-35所致阿尔茨海默病痴呆模型大鼠病理学的影响。方法体内采用采用5月龄雄性SD大鼠和同月龄纯合雄性PINK1-/-大鼠(SD背景),侧脑室注射Aβ25-35。采用Y迷宫、新物体辨别实验、避暗实验和Morris水迷宫实验考察学习记忆和认知能力,转棒实验和自发活动考察运动功能。ELISA检测大鼠海马炎症因子IL-18,IL-1β和TNF-α的含量,Western蛋白印迹法检测海马突触相关蛋白PSD95和SYP的表达,免疫荧光和Western蛋白印迹法检测Neun的表达。用线粒体分离试剂盒提取线粒体,观察LC3与线粒体共定位。体外采用si RNA下调PC12细胞PINK1表达,再加入Aβ25-35,确认PINK1下调后是否加重了Aβ25-35对细胞的损伤:观察细胞形态,考察细胞死亡率;JC-1染色考察线粒体膜电位;LPS作用于BV2细胞一定时间后,取条件培养基,加入PC12细胞(含PINK1 si RNA组),考察细胞死亡率,确认PINK1 si RNA组细胞是否对LPS诱导小胶质细胞所释放的炎症因子更敏感。结果行为学实验结果显示,PINK1-/-对动物的运动能力没有影响,但在避暗实验中与SD和SD+Aβ25-35组大鼠相比,PINK1-/-+Aβ组大鼠错误次数显著增加。与SD组大鼠相比,PINK1-/-、PINK1-/-+Aβ25-35组SYP,PSD95和Neun的表达显著减少;炎症因子IL-18,IL-1β和TNF-α的含量显著增加;PINK1-/-组LC3与线粒体的共定位显著减少。PINK1-/-+Aβ组LC3与线粒体的共定位显著增加。体外实验结果显示,与单独孵育Aβ25-35组细胞相比,PINK1沉默后给予Aβ25-35细胞生存率显著降低;线粒体膜电位显著降低;且PINK1沉默后给予条件培养基,细胞生存率也显著降低。结论PINK1敲除加重了Aβ25-35所致AD模型大鼠长时记忆障碍,加重Aβ25-35所致AD痴呆模型大鼠突触功能障碍,神经元损伤以及神经炎症。PINK1敲除抑制了部分线粒体自噬,加重了Aβ25-35对细胞的损伤,且对LPS诱导小胶质细胞所释放的炎症因子更敏感。     

麦冬皂苷D调控磷酸酶及张力蛋白同源物诱导激酶1/帕金蛋白通路对脓毒症心肌损伤的保护作用

目的 探讨麦冬皂苷D(OPD)对脓毒症大鼠心肌损伤及磷酸酶及张力蛋白同源物诱导激酶1/帕金蛋白(PINK1/parkin)通路的影响。方法 用盲肠结扎穿孔法构建脓毒症大鼠模型,并将造模成功的大鼠随机分为模型组、实验组、对照组和联合组,每组8只。在模型制备成功后12 h,实验组给予腹腔注射40 mg·kg^-1 OPD,对照组给予腹腔注射20 mg·kg^-1 3-MA,联合组给予腹腔注射40 mg·kg^-1 OPD和20 mg·kg^-1 3-MA;假手术组和模型组均给予腹腔注射等量0.9%NaCl。5组大鼠每12 h重复给药1次,连续给药6 d。用酶联免疫吸附试验法检测血清肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)水平,用蛋白质印迹法检测大鼠心肌组织中PINK1和parkin蛋白的表达水平。结果 实验组、对照组、联合组、模型组和假手术组的血清cTnⅠ水平分别为(0.98±0.20)、(3.44±0.69)、(1.64±0.38)、(2.39±0.45)和(0.37±0.07)mg·L^-1,PINK1蛋...