腺病毒介导的野生型p53基因逆转乳腺癌耐药细胞株MCF-7/A耐药性的研究

目的 探讨野生型p53基因对乳腺癌耐药细胞株MCF-7/A耐药性的逆转作用及其机制.方法 选用含野生型p53基因的重组腺病毒载体,转染乳腺癌耐药细胞株MCF-7/A,绘制细胞生长曲线,利用流式细胞计数仪检测细胞周期分布及凋亡分析、TUNEL法检测细胞凋亡的发生,并采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot印迹转移检测p53基因的表达情况.结果 野生型p53基因转染MCF-7/A后的24、48 h均检测到p53基因的表达,并显著抑制MCF-7/A细胞的增殖;细胞周期发生改变,转染后的MCF-7/A的G0%G1期DNA百分含量(76.22%)明显高于对照组(43.64%,P<0.05),凋亡率(10.76%)与对照组(1.48%)之间差异有统计学意义(P<0.05).结论 重组腺病毒介导的野生型p53基因对乳腺癌耐药细胞株MCF-7/A的耐药性有明显的逆转作用,其机制可能是引起明显的G1期阻滞并诱导细胞凋亡.     

p21waf1基因转染对乳腺癌细胞中心体复制和增殖活性的影响

目的 观察p21waf1基因转染对人乳腺癌细胞增殖活性和中心体复制的影响.方法 应用脂质体介导法将pIRES-p21waf1真核表达载体转染人人乳腺癌细胞系MCF-7,MTF法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期分布,免疫荧光技术检测乳腺癌细胞的中心体复制情况.结果 p21waf1基因转染后乳腺癌细胞生长显著受抑制,细胞周期停滞于G1期,转染组G1期、S期和G2/M期细胞比例分别为(70.52±3.21)%、(16.38 4±1.17)%、(9.42 ±0.98)%,未转染组则为(49.84±1.58)%、(36.83±1.36)%、(15.64±1.09)%,两者比较差异有统计学意义,P值分别《0.01、《0.05、《0.05.中心体复制异常的乳腺癌细胞数较转染前明显减少(P《0.01).结论 p21waf1基因转染能够抑制人乳腺癌细胞增殖和中心体的异常复制,进而阻止乳腺癌的发生发展,可能成为乳腺癌治疗的一种新手段.     

肿瘤抑制基因DBC2抑制乳腺癌MDA-MB-435S细胞增殖并诱导凋亡

目的 观察肿瘤抑癌基因DBC2(deletion in breast cancer 2)的过表达在乳腺癌MDA-MB-435S细胞中的功能.方法 野生型DBC2基因的真核表达载体pEBG-DBC2瞬时转染MDA-MB-435S细胞72 h,噻唑蓝(MTT)比色法绘制DBC2转染前后MDA-MB-435S细胞生长曲线;流式细胞术检测DBC2的瞬时过表达对MDA-MB-435S细胞周期的影响,TUNEL方法 原位检测DBC2的过表达诱导MDA-MB-435S细胞凋亡.结果 DBC2基因在MDA-MB-435S细胞中的过表达可显著抑制该细胞的增殖,同时DBC2基因的过表达可诱导该乳腺癌细胞周期的G_1期阻滞(64.05%比71.72%)和细胞凋亡(0.09%比5.29%).TUNEL实验证实DBC2诱导MDA-MB-435S细胞凋亡的百分比为8%.结论 DBC2基因体外抑制乳腺癌细胞生长的功能,可能通过细胞周期G_1期停滞,以及诱导细胞凋亡等机制实现.     

PTEN基因对人胃癌细胞SGC-7901的生物学效应

目的　研究PTEN基因对人胃癌细胞SGC 790 1增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法　将携带有PTEN基因的真核表达载体pBabe Puro PTEN以及pBabe Puro ,以脂质体介导的基因转染方法转入SGC 790 1细胞系中 ,嘌呤霉素筛选获得稳定表达PTEN基因的转染细胞 ,通过细胞活力实验、流式细胞仪和DNA凝胶电泳 ,观察PTEN基因对SGC 790 1细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。结果稳定转染PTEN基因的SGC 790 1细胞中PTEN蛋白稳定表达 ,转染PTEN基因的SGC 790 1细胞生长速度较对照组明显减慢。流式细胞仪显示 ,细胞周期发生G1期阻滞。转染PTEN的细胞在透射电镜下可出现典型的凋亡形态学的改变 ;细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞特有的“梯状”条带 ,而对照组没有出现。结论　外源性PTEN基因导入SGC 790 1细胞后 ,可引起SGC 790 1细胞G1期阻滞 ,抑制肿瘤细胞增殖 ,并促进凋亡的发生     

PTEN基因对人胃癌细胞SGC-7901的生物学效应

目的 研究PFEN基因对人胃癌细胞SGC-7901增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法 将携带有PTEN基因的真核表达载体pBabe-Puro-PTEN以及pBabe-Puro，以脂质体介导的基因转染方法转入SGC-7901细胞系中，嘌呤霉素筛选获得稳定表达PTEN基因的转染细胞，通过细胞活力实验、流式细胞仪和DNA凝胶电泳，观察PTEN基因对SGC-7901细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。结果 稳定转染PTEN基因的SGC-7901细胞中PTEN蛋白稳定表达，转染PTEN基因的SGC-7901细胞生长速度较对照组明显减慢。流式细胞仪显示，细胞周期发生G1期阻滞。转染PTEN的细胞在透射电镜下可出现典型的凋亡形态学的改变；细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞特有的“梯状”条带，而对照组没有出现。结论 外源性PTEN基因导入SGC-7901细胞后，可引起SGC-7901细胞G1期阻滞，抑制肿瘤细胞增殖，并促进凋亡的发生。     

靶向沉默Notch1基因对人膀胱癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨沉默Notch1基因对人膀胱癌细胞生物学行为的影响. 方法 将靶向Notch1的siRNA真核表达载体psiRNA Notch1-1转染膀胱癌细胞株T24和BIU-87,噻唑盐法、流式细胞术检测沉默Notch1后膀胱癌细胞生长、细胞周期和凋亡情况.RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染前后Notch1基因mRNA和蛋白表达的变化. 结果 转染后72 h,T24和BIU-87细胞G0/G1期细胞比例明显增加,分别为(80.13±2.69)%和(69.44±2.41)%,与T24对照组(23.89±1.32)%和BIU-87对照组(24.63±1.68)%比较差异有统计学意义(P值均<0.05).转染后72 h,T24和BIU-87细胞凋亡率分别为(13.75±1.23)%和(8.72±1.01)%,与T24对照组(1.28±0.14)%和BIU-87对照组(1.01±0.27)%比较差异均有统计学意义(P值均<0.05).转染后24 h细胞生长明显受到抑制,该抑制作用持续到转染后96 h.转染后72 h,T24和BIU-87细胞中Notch1基因mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05). 结论 Notch1在膀胱癌细胞株中可能起致癌作用.沉默Notch1基因能够抑制膀胱癌细胞的增殖.     

靶向Survivin的小分子干扰RNA对骨肉瘤细胞的体内外抑制作用

目的 观察靶向Survivin基因的小分子干扰RNA(siRNA)表达载体对人骨肉瘤细胞MG-63的体内外抑制作用.方法 体外构建Survivin siRNA表达载体pSilence2.1-neo-Survivin,转染骨肉瘤细胞株MG-63、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组织化学(SP)法检测转染前后Survivin mRNA及蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞周期分布,吖啶橙荧光染色法观察细胞凋亡,建立裸鼠移植瘤模型,记录瘤体形成时间及肿瘤生长.结果 转染后MG-63细胞Survivin基因mRNA水平和蛋白表达显著下降,转染后mRAN表达抑制率为85.08%,增殖指数为空白组的28.20%;细胞周期分析显示:shRNA组G0/G1期细胞明显增多,而G2/M期、S期细胞数目减少;吖啶橙染色显示转染组细胞出现明显核碎裂等凋亡改变,转染组凋亡率为24.54%;稳定转染组细胞裸鼠体内致瘤能力降低,转染组成瘤时间为(13.2±2.0)d,空白组为(6.5±1.6)d,两者比较差异有统计学意义(P＜0.01).4周时同空白组相比转染组瘤体体积小62.89%(P＜0.01),重量轻59.07%(P＜0.01).结论 靶向Survivin基因的siRNA表达载体可以显著抑制骨肉瘤细胞MG-63增殖,促进细胞凋亡;明显抑制人骨肉瘤细胞的致瘤活性及裸鼠移植瘤的生长.     

尿多酸肽对乳腺癌细胞周期的影响

目的研究肿瘤细胞分化诱导剂尿多酸肽（CDA-Ⅱ）对乳腺癌细胞周期的影响。方法将CDA-Ⅱ与乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231进行体外培养，同时以维甲酸为阳性对照，观察其对乳腺癌细胞生长曲线、细胞周期、形态学等方面的影响。结果CDA-Ⅱ可减缓两株乳腺癌细胞的生长和增殖能力，使乳腺癌细胞的细胞周期的分布出现S期比例减少，G0／G1期增加。结论CDA-11可抑制不同生物学特性的两株乳腺癌细胞的生长和增殖能力，细胞周期出现G0／G1期阻滞，为CDA-Ⅱ治疗乳腺癌提供了实验依据。     

siRNA沉默HIF-1α基因对前列腺癌PC-3细胞多西紫杉醇化疗敏感性的影响

目的:探讨沉默缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因对前列腺癌PC-3细胞多西紫杉醇(docetaxel,DTX)化疗敏感性的影响。方法:实验分为PC-3组,PC-3+NCsiRNA组,PC-3+HIF-lαsiRNA组。用脂质体Lipofectamine2000将经过筛选证实有效的HIF-1αsiRNA序列和阴性NC siRNA序列转染PC-3细胞。待细胞转染或不转染后继续培养,根据实验要求时间点加入DTX。采用CCK-8法检测转染后96 h内各组细胞的生长增殖情况,流式细胞仪检测加DTX后48 h各组细胞的周期分布、凋亡率及多药耐药基因P糖蛋白(MDR/P-gp)的表达。结果:PC-3+HIF-1αsiRNA组肿瘤抑制率高于PC-3+NC siRNA组,尤以转染后48 h表现的较为明显;转染后48 h,PC-3+HIF-1αsiRNA组细胞存活率均明显低于PC-3组和PC-3+NCsiRNA组(P均0.01)。细胞周期分布变化,PC-3+HIF-1αsiRNA组较两对照组比较,G0/G1期细胞百分数较低,而G2/M期细胞百分数稍高(P均0.01)。细胞凋亡结果,PC-3+HIF-1αsiRNA组细胞凋亡率明显高于两对照组(P均0.01)。各组细胞MDR/P-gp表达无明显差异(P均0.05)。结论:沉默HIF-1α基因能增强DTX对前列腺癌PC-3细胞的生长抑制,通过调整细胞周期重新分布、诱导细胞凋亡,增加前列腺癌PC-3细胞对化疗的敏感性,而这一作用与MDR/P-gp无明显相关。     

人抑癌基因PTEN对前列腺癌细胞系生物学行为的影响

目的　探讨外源性人抑癌基因PTEN表达对前列腺癌细胞系LNCaP、DU 14 5细胞增殖和侵袭转移能力的影响。　方法　利用携带人PTEN基因的可调控性腺病毒 (Ad PTEN ) ,体外转染人前列腺癌细胞系LNCaP、DU 14 5,RT PCR、Westernblot检测目的基因不同水平的表达 ,通过细胞生长试验、流式细胞仪分析技术以及Boyden小室法检测LNCaP、DU 14 5转染前后细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和细胞体外侵袭力的变化。　结果　转染Ad PTEN后LNCaP、DU 14 5细胞的PTEN表达由阴性转为阳性 ,转染后对LNCaP、DU 14 5细胞生长有抑制作用 ,阻滞于G0 ～G1期 ,早期细胞凋亡率增加 ,LNCaP细胞 (6.89± 0 .51) % ;DU14 5细胞 (5.44± 1.13 ) % ,与对照组相比差异有显著性 ,Boyden小室法检测转染后体外侵袭力受到明显抑制。 　结论　重组腺病毒介导的人PTEN基因在体外对前列腺癌细胞系LNCaP、DU 14 5的细胞增殖和体外侵袭力有明显抑制作用 ,可望作为前列腺癌基因治疗的有效工具