叉头框蛋白E1对肝癌细胞侵袭及迁移能力的影响

目的研究叉头框蛋白(FOX)E1对肝癌细胞侵袭及迁移能力的影响。方法分别用qRT-PCR和Western印迹法测定肝癌细胞SMCC7721、Hep G2、HCCLM3和正常肝细胞HL7702中FOXE1 mRNA和蛋白水平。在HCCLM3细胞中转染FOXE1真核表达载体和对照空载体记为FOXE1组和Vector组,以不做处理的HCCLM3细胞为WT组。细胞划痕实验测定细胞迁移,Transwell小室测定细胞侵袭,Western印迹测定细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-2、神经钙黏素(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、上皮钙黏附素(E-cadherin)蛋白水平。结果肝癌细胞SMCC7721、Hep G2、HCCLM3中FOXE1 mRNA和蛋白水平均明显低于正常肝细胞HL7702(P0.05)。HCCLM3细胞中FOXE1 mRNA和蛋白水平显著低于SMCC7721、Hep G2(P0.05)。Vector组细胞侵袭、迁移及细胞中MMP-2、N-cadherin、Vimentin、E-cadherin蛋白与WT组相比差异无统计学意义(P0.05)。FOXE1组细胞侵袭、迁移及细胞中MMP-2、N-cadherin、Vimentin水平均明显低于WT组,而E-cadherin水平明显高于WT组,差异有统计学意义(P0.05)。结论FOXE1在肝癌细胞中低表达,FOXE1降低肝癌细胞侵袭和迁移能力,下调细胞中MMP-2、N-cadherin、Vimentin水平,促进细胞中E-cadherin表达。     

IL-8对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制研究

目的探讨白细胞介素-8(IL-8)在肝癌细胞中的表达及其对增殖、迁移、侵袭的影响并分析其可能作用机制。方法采用qRT-PCR与Western blot方法分别检测肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721及正常肝细胞L02中IL-8 mRNA和蛋白表达水平。将IL-8 siRNA转染至HepG2细胞,MTT检测沉默IL-8对HepG2细胞增殖能力的影响,Transwell迁移及侵袭实验检测沉默IL-8对HepG2细胞迁移及侵袭能力的影响,采用qRT-PCR与Western blot方法分别检测MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达水平。Western blot法检测沉默IL-8对磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路蛋白表达的影响。HepG2细胞中加入PI3K/Akt信号通路抑制剂(LY294002),观察其对HepG2细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果相较于L02相,肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721中IL-8 mRNA及蛋白表达均显著升高(P 0. 05); HepG2细胞中敲低IL-8后细胞增殖、迁移及侵袭能力均明显减弱,MMP-2、MMP-9及PI3K、p-AKT表达水平均明显降低;加入LY294002可明显抑制HepG2细胞增殖、迁移及侵袭能力。结论 IL-8可能通过激活PI3K/Akt信号通路进而增强肝癌细胞增殖、迁移、侵袭能力。     

小干扰RNA沉默甲胎蛋白基因对HepG2细胞迁移及侵袭的影响

目的研究甲胎蛋白(AFP)对肝癌HepG2细胞迁移和侵袭能力的影响及其机制。方法应用合成的靶向沉默AFP小干扰RNA(siRNA)转染肝癌HepG2细胞,分为空白对照、阴性对照组及AFP siRNA组,各组细胞干预48 h后,采用实时定量PCR(qRT-PCR)和ELISA法检测细胞转染后的沉默效率,Transwell小室实验检测沉默AFP基因后HepG2细胞的侵袭、迁移能力,用Western blotting法观察沉默AFP基因的表达对上皮-间质转化(EMT)相关蛋白(N-cadherin、Vimentin和E-cadherin)、AKT和p-AKT蛋白表达的影响。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果转染沉默后,与空白对照组相比,AFP siRNA组中AFP mRNA的相对表达量明显降低(P 0.01),抑制率达86.440%,同时AFP siR NA组细胞上清液中AFP蛋白表达水平同样明显降低(P 0.01)。与空白对照组相比,AFP siRNA组的迁移细胞数和侵袭细胞数显著下降,差异具有统计学意义(P值均0.01)。沉默HepG2细胞中AFP基因的表达后,与空白对照组比较,AFP siRNA组EMT相关蛋白E-cadherin蛋白的表达水平升高(P 0.01),而N-cadherin及Vimentin表达水平均明显降低(P值均0.05),且PI3K/AKT信号通路相关蛋白p-AKT的表达水平明显降低(P 0.01)。结论沉默AFP可抑制肝癌细胞转移,基于HepG2细胞株的机制研究可能与阻断PI3K/Akt通路抑制EMT相关。     

下调miR-421靶向Sirt3调控HepG2肝癌细胞生长和侵袭的机制研究

目的探讨下调miR-421靶向Sirt3调控肝癌细胞生长和侵袭的机制。方法 RT-PCR方法测定肝癌细胞和正常肝细胞中miR-421表达变化。在肝癌细胞中转染miR-421 inhibitor,MTT测定细胞增殖变化,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力变化,Western blotting检测细胞中MMP-9和MMP-2蛋白表达变化。在线靶基因预测软件发现Sirt3可能是miR-421的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。在肝癌细胞中共转染miR-421 inhibitor、Sirt3 siRNA,利用上述方法测定细胞增殖、侵袭、迁移能力和MMP-9、MMP-2蛋白表达水平。结果 miR-421在肝癌细胞中的表达水平高于正常肝细胞。miR-421 inhibitor转染后的肝癌细胞增殖能力下降,细胞侵袭和迁移能力降低,细胞中MMP-9和MMP-2蛋白表达减少。Sirt3受到miR-421的靶向负调控作用。Sirt3 siRNA能够逆转miR-421 inhibitor对肝癌细胞增殖、侵袭、迁移和MMP-9、MMP-2表达的抑制作用。结论下调miR-421靶向Sirt3抑制HepG2肝癌细胞生长和侵袭。     

ADAMTS9基因联合去甲氧基姜黄素对肝癌细胞侵袭迁移及PI3K/PTEN/AKT信号的影响

目的探讨过表达带有血小板凝血酶敏感蛋白样模体的解联蛋白金属蛋白酶(ADAMTS)9基因或去甲氧基姜黄素(DMC)单独或联合对肝癌细胞侵袭迁移及磷脂酰肌醇3-激酶/第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白/蛋白激酶B(PI3K/PTEN/AKT)信号的影响。方法 Western印迹检测肝癌(HepG2)、MHCC 97-L和MHCC97-H细胞中ADAMTS9的蛋白表达。将MHCC97-H细胞分为对照组、pcDNA3.1-ADAMTS9组、DMC组和pcDNA3.1-ADAMTS9+DMC组4个处理组,其中pcDNA3.1-ADAMTS9的转染参照LipofectamineTM 2000转染说明,收集处理48 h的细胞,CCK8法、Transwell小室分别检测细胞活力及侵袭和迁移能力。Western印迹检测ADAMTS9、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、PI3K、PTEN和p-AKT的蛋白表达。结果肝癌HepG2、MHCC97-L和MHCC97-H细胞中ADAMTS9表达均有不同程度的降低,与正常肝细胞HL-7702比较,差异具有统计学意义(P0.05)。pcDNA3.1-ADAMTS9组DAMTS9的蛋白表达显著高于对照组(P0.05)。pcDNA3.1-ADAMTS9组和DMC组细胞活力、侵袭和迁移能力及PCNA、MMP-2、MMP-9、PI3K和p-AKT的蛋白表达均显著低于对照组,PTEN蛋白表达显著高于对照组(P0.05),而pcDNA3.1-ADAMTS9+DMC组细胞活力、侵袭和迁移能力及PCNA、MMP-2、MMP-9、PI3K和p-AKT的蛋白表达均显著低于pcDNA3.1-ADAMTS9组和DMC组,PTEN蛋白表达显著高于pcDNA3.1-ADAMTS9组和DMC组(P0.05)。结论过表达ADAMTS9及DMC均可抑制肝癌细胞活力、侵袭和迁移能力,两者联用对细胞抑制作用更明显,机制可能与下调PCNA、MMP-2和MMP-9及PI3K/PTEN/AKT信号通路有关。     

葛花解酲方对肝癌细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡及上皮间质转化的影响

目的 探讨葛花解酲方含药血清对肝癌细胞侵袭、迁移和上皮间质转化的影响及其可能的作用机制。方法 以稳定高表达、高侵袭的HepG2肝癌细胞为体外研究模型,用不同浓度的葛花解酲方含药血清进行干预。CCK8法检测含药血清对HepG2细胞增殖的抑制作用,Transwell法观察含药血清对HepG2细胞的迁移和侵袭能力的影响,Western印迹法检测HepG2细胞中上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和神经型钙黏蛋白(N-cadherin)表达水平。结果 CCK8法检测结果显示含药血清可显著抑制HepG2细胞的增殖,抑制作用呈时间和剂量依赖性(P<0.05)。不同浓度的含药血清可显著抑制HepG2细胞的迁移和侵袭,显著下调肝癌细胞中N-cadherin的表达,显著上调E-cadherin的表达(P<0.05)。结论 葛花解酲方含药血清能抑制肝癌细胞的侵袭、迁移,其作用机制可能与抑制上皮间质转化有关。     

桂皮醛通过TGF-beta信号通路调控结直肠癌细胞侵袭和转移研究

目的研究桂皮醛通过转化生长因子-β(TGF-β)信号通路调控结直肠癌细胞侵袭和转移的机制。方法用不同浓度桂皮醛处理人结肠癌SW480细胞,观察SW480细胞增殖活性、细胞凋亡、侵袭、转移能力及凋亡、上皮间质转化(EMT)、TGF-β/Smad3信号途径关键蛋白表达情况;用10 ng/m L的TGF-β1处理诱导SW480细胞EMT,并用80 mg/L的桂皮醇进行干预,观察SW480细胞中EMT、TGF-β/Smad3信号途径关键蛋白表达。结果桂皮醛处理后SW480细胞Bcl-2/Bax比率、细胞侵袭率、划痕愈合率、波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、TGF-β、Smad3、Snail蛋白表达降低,细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、E-cadherin蛋白表达升高,差异有统计学意义(P 0. 05);桂皮醛干预后能够缓解TGF-β1处理后诱导的Vimentin、N-cadherin、MMP-9、Smad3、Snail蛋白表达升高,E-cadherin蛋白表达降低,差异有统计学意义(P 0. 05)。结论桂皮醛可能通过抑制人结肠癌细胞系SW480中TGF-beta/Smad3信号途径来抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,并抑制EMT,降低其侵袭转移能力。     

WWOX对胆囊癌细胞侵袭及迁移能力的影响

目的研究含WW域的氧化还原酶(WW Domain-containing Oxidoreductase,WWOX)对胆囊癌细胞侵袭及迁移能力影响。方法胆囊癌细胞株GBC转染过表达WWOX的真核表达载体(pc DNA3. 1-WWOX)和对照载体(pc DNA3. 1),同时以不做转染的细胞为Control,qRT-PCR检测WWOX水平,Western blotting检测WWOX、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、波形蛋白(Vimentin)、上皮钙黏附素(E-cadherin)水平,CCK8检测细胞增殖活性,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力。结果 pc DNA3. 1细胞中WWOX、MMP-2、MMP-9、Vimentin、E-cadherin水平和细胞增殖、迁移、侵袭能力与Control相比,差异无统计学意义(P 0. 05)。pc DNA3. 1-WWOX中WWOX水平明显升高,其细胞增殖、迁移、侵袭能力明显降低,细胞中MMP-2、MMP-9、Vimentin水平下降,E-cadherin水平升高,与Control相比差异有统计学意义(P 0. 05)。结论 WWOX抑制胆囊癌细胞侵袭和迁移,下调细胞中MMP-2、MMP-9、Vimentin水平,提高细胞中E-cadherin表达。     

瞿麦对肾癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的调控

目的研究中药瞿麦对人肾癌细胞786-0增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法体外培养人肾癌786-0细胞,用不同浓度的瞿麦处理后,运用MTT检测瞿麦对肾癌细胞增殖活性的影响,运用流式细胞术检测瞿麦对肾癌细胞凋亡率的影响,运用qRT-PCR检测瞿麦对肾癌细胞中凋亡相关基因Bax和Bcl-2 mRNA表达水平的影响,运用Transwell侵袭实验检测瞿麦对肾癌细胞侵袭能力的影响,运用细胞划痕实验检测瞿麦对肾癌细胞迁移能力的影响,运用Western印迹检测瞿麦对肾癌细胞中上皮间质转化相关蛋白钙黏附蛋白E(E-cadherin)、神经性钙黏附素(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达水平的影响。结果瞿麦能够抑制肾癌细胞增殖,诱导肾癌细胞发生凋亡,上调肾癌细胞中Bax的表达,下调Bcl-2的表达;抑制肾癌细胞的侵袭能力;抑制肾癌细胞的迁移能力;有效降低肾癌细胞N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平,上调E-cadherin水平,且均呈浓度依赖性,差异均有统计学意义(均P0.05)。结论瞿麦在体外能够抑制肾癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,有效抑制肾癌细胞体外侵袭和迁移能力;其作用可能与上调Bax蛋白水平,下调Bcl-2、N-cadherin、Vimentin蛋白水平,上调E-cadherin水平相关。     

miR-302a靶向E2F1抑制胃癌BGC-823细胞EMT并降低细胞侵袭和迁移能力的实验研究

目的探讨miR-302a对胃癌BGC-823细胞上皮间质转化(EMT)、侵袭和迁移能力的影响和机制。方法在胃癌BGC-823细胞中转染miR-302a mimics,CCK-8测定细胞增殖变化,Transwell小室测定迁移和侵袭,Western blotting检测E-cadherin、Vimentin、N-cadherin蛋白表达。靶基因预测软件预测E2F1可能为miR-302a的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。在胃癌BGC-823细胞中共转染pcDNA 3.1-E2F1和miR-302a mimics,按照上述方法测定细胞增殖、侵袭、迁移和E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、E2F1蛋白表达水平。结果miR-302a mimics降低胃癌BGC-823细胞增殖、侵袭和迁移能力,下调细胞中Vimentin、N-cadherin蛋白表达水平,促进细胞中E-cadherin蛋白表达。miR-302a靶向负调控E2F1表达。pcDNA 3.1-E2F1能够提高miR-302a mimics条件下胃癌BGC-823细胞中E2F1蛋白表达水平,促进细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞中Vimentin、N-cadherin蛋白表达,减少细胞中E-cadherin蛋白表达。结论miR-302a靶向E2F1抑制胃癌BGC-823细胞EMT并降低细胞侵袭和迁移能力。     

HNF3β对SW480细胞株增殖、侵袭和转移的影响

目的 探究HNF3β对结直肠癌SW480细胞株细胞增殖、侵袭和转移的机制。方法 体外培养结直肠癌SW480细胞株细胞,并分为对照组、HNF3β转染组和空转质粒组;构建包含HNF3β蛋白全长的peDNA3. 1质粒对HNF3β转染组进行质粒转染,空转质粒组使用空白质粒转染;使用蛋白质印记检测各组细胞HNF3β蛋白表达情况;使用克隆形成实验检测细胞生长情况;使用Transwell小室检和划痕实验法测各组细胞运动能力;使用蛋白质印记检测增殖、侵袭转移相关蛋白质及JAK/STA信号通路相关蛋白表达情况。结果 与对照组相比,HNF3β转染组HNF3β蛋白表达、E-cadherin蛋白表达显著升高(P 0. 01),细胞克隆形成率、PCNA蛋白表达、Ki67蛋白表达、单位面积侵袭细胞数目、N-cadherin蛋白表达、Vimentin蛋白表达、JAK1蛋白表达、STAT3蛋白表达水平显著降低(P 0. 01);相比HNF3β转染组,空转质粒组HNF3β蛋白表达、E-cadherin蛋白表达显著降低(P 0. 01),细胞克隆形成率、PCNA蛋白表达、Ki67蛋白表达、单位面积侵袭细胞数目、N-cadherin蛋白表达、Vimentin蛋白表达、JAK1蛋白表达、STAT3蛋白表达水平显著升高(P 0. 01)。结论 HNF3β是结直肠癌的抑癌基因,可能通过调控JAK/STAT3信号通路抑制SW480细胞的增殖、侵袭和转移。     

亚甲酰胺异羟肟酸联合索拉非尼对肝癌细胞迁移与侵袭的影响

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACI)亚甲酰胺异羟肟酸(SAHA)联合索拉非尼(SRFN)对HepG2细胞迁移和侵袭的影响。方法用SAHA、SRFN或SAHA联合SRFN后,采用划痕法、Transwell法和Western印迹等方法检测HepG2细胞的迁移、侵袭及相关蛋白表达。结果分别用SAHA、SRFN和联合治疗对HepG2细胞进行作用,与对照组相比,其侵袭能力分别为69.0%、47.8%和15.0%;分别用SAHA、SRFN和联合治疗对HepG2细胞进行治疗,与对照组相比,迁移能力分别为56.0%、47.0%和3.5%。与对照组相比,SAHA或SRFN显著上调E-cadherin蛋白,下调基质金属蛋白酶(MMP)-2、Vimentin表达(P0.05),SAHA联合SRFN组更加明显,而对MMP-9蛋白表达无明显影响。结论 SAHA或SRFN通过上调E-cadherin蛋白的表达,下调MMP-2和波形蛋白的表达,抑制HepG2细胞迁移和侵袭,SAHA和SRFN之间存在协同和叠加效应。     

敲低hnRNP H基因对子宫内膜癌细胞侵袭转移的影响

目的探讨敲低核不均一性核糖核蛋白H(hnRNP H)基因对子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭转移的影响。方法将hnRNP H siRNA转染至子宫内膜癌Ishikawa细胞,利用实时定量PCR、Western印迹方法检测(对照组、阴性对照组、siRNA组),确定siRNA沉默效率(hnRNP H mRNA、蛋白表达)、上皮间质转化(EMT)相关蛋白(E-钙黏着蛋白E-cadherin、神经型钙黏附蛋白N-cadherin)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-7表达情况,划痕实验及Transwell检测细胞迁移能力的改变。结果对照组E-cadherin表达少,而转染组E-cadherin表达明显升高,有统计学差异(P<0.05);对照组N-cadherin、MMP-2及MMP-7表达显著高于转染组(P<0.05)。结论沉默hnRNP H基因能抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞上皮间质转化,有效抑制子宫内膜癌细胞转移和侵袭。     

siRNA介导COX-2基因沉默对大肠癌LoVo细胞侵袭及上皮间质转化的影响

目的探讨靶向沉默环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达对大肠癌LoVo细胞侵袭能力及上皮间质转化的影响。方法在体外COX-2 siRNA转染大肠癌LoVo细胞,RT-PCR及免疫印迹法验证转染后COX-2 mRNA及蛋白表达,Transwell小室法检测细胞侵袭能力的改变;免疫印迹法检测EMT标志物(E-cadherin、Vimentin、Fibronectin)、ERK/MAPK和PI3K/Akt通路相关蛋白(Akt、p-Akt、p-GSK-3β、ERK、p-ERK)及MMP-9表达的变化情况。结果 COX-2 siRNA转染大肠癌LoVo细胞后,COX-2 mRNA及蛋白表达下调,同时细胞侵袭能力降低;上皮标记物E-cadherin表达上调,同时间叶标记物Vimentin和Fibronectin表达下调;细胞总的ERK、Akt蛋白表达水平无明显改变,而p-ERK、p-Akt表达降低,同时,Akt下游效应蛋白p-GSK-3β表达也下调; MMP-9表达下调。结论 COX-2 siRNA转染有效抑制了大肠癌LoVo细胞COX-2表达,并可能通过阻滞细胞ERK/MAPK和PI3K/Akt通路,进而抑制EMT,下调MMP-9表达,降低细胞侵袭能力。     

Twist对膀胱癌细胞迁移、侵袭及MMP-2、MMP-9表达的影响

目的探讨Twist对膀胱癌细胞迁移、侵袭及基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9表达的影响。方法用qRT-PCR和Western印迹法分别检测膀胱癌5637、T24、BIU-87细胞和正常膀胱SVHUC-1细胞中Twist mRNA和蛋白水平,筛选表达水平最高的T24细胞,在T24细胞中转染shRNA Twist、shRNA对照命名为sh-Twist组和sh-NC组,并以不做处理的T24细胞为Con组,用qRT-PCR和Western印迹法测定各组细胞中Twist mRNA和蛋白水平,Transwell小室测定细胞侵袭和迁移,Western印迹测定各组细胞中上皮间质转化(EMT)相关蛋白波形蛋白(Vimentin)、上皮钙黏附素(E-cadherin)和侵袭迁移相关蛋白MMP-2、MMP-9表达水平。结果与正常膀胱SVHUC-1细胞比较,Twist在膀胱癌细胞中转录和表达水平均明显升高(P0.05)。sh-Twist组Twist mRNA和蛋白水平均明显低于Con组(P0.05),sh-NC组Twist mRNA和蛋白水平与Con组相比差异无统计学意义(P0.05)。sh-Twist组细胞迁移数目、侵袭数目及MMP-2、MMP-9蛋白水平均明显低于Con组(P0.05),sh-NC组细胞迁移数目、侵袭数目及MMP-2、MMP-9蛋白水平与Con组相比差异无统计学意义(P0.05)。sh-Twist组E-cadherin蛋白水平与Con组相比明显升高(P0.05),Vimentin蛋白水平与Con组相比明显下降(P0.05),而sh-NC组Vimentin、E-cadherin水平与Con组相比差异无统计学意义(P0.05)。结论 Twist敲低能够降低膀胱癌细胞侵袭和迁移能力,抑制膀胱癌细胞EMT。     

血管内皮细胞生长因子对肝癌细胞钙粘附蛋白表达的影响

目的 研究血管内皮细胞生长因子(VEGF)对肝癌HepG2细胞同质性粘附作用和钙粘附蛋白(E-cadherin)的影响.方法 采用3H-TdR掺入试验测定VEGF对肝癌HepG2细胞同质性粘附作用,激光扫描共聚焦显微镜检测VEGF对肝癌细胞E-cadherin表达作用.结果 1 ng/ml、5 ng/ml VEGF诱导HepG2细胞60 min、90 min 3H-TdR掺入实验(dpm/min)分别为1 758.67±289.46、1 380.03±328.55和3 124.3±2 262.14、2 245.6±273.24,10 ng/ml VEGF诱导HepG2细胞60min、90 min、120 min3 H-TdR掺入实验分别为1 232.32±201.04、2 337.5±333.04、2 236.99±237.07,显著低于对照组60、90、120分钟的2 184.49±336.03、3 560.±255.17和4 337.4±377.35.5 ng/ml VEGF降低肝癌细胞E-cadherin的表达,荧光强度为757±103,显著低于对照组的352±56.结论 VEGF降低肝癌细胞同质性粘附作用可能与其降低肝癌细胞E-cadherin有关.     

肝癌患者外周血Th17/Treg细胞和相关细胞因子的表达及IL-17对肝癌细胞侵袭的影响

目的探讨肝癌患者体内辅助性T细胞(Th)17/调节性T细胞(Treg)比例和相关细胞因子的表达水平及白细胞介素(IL)-17影响肝癌细胞侵袭的机制。方法选取在该院就诊的40例肝癌患者为观察组,同期在医院进行体检的40例健康人为对照组。采用流式细胞术检测两组人群外周血Th17和Treg细胞比例,酶联免疫吸附(ELISA)法检测两组外周血中IL-17、IL-10、IL-6和转化生长因子(TGF)-β的表达水平。在人肝癌细胞系SMMC7721中瞬时转染IL-17 siRNA及阴性对照,并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、ELISA及免疫印迹(Western blot)法检测沉默后IL-17 mRNA及蛋白水平的表达变化,然后采用Transwell法检测侵袭变化,qRT-PCR和Western印迹检测MMP-2、MMP-9表达水平。结果与对照组比较,观察组外周血中Th17细胞和Treg细胞上升,Th17/Treg比例下降(P<0.05);观察组外周血中IL-17、IL-10、IL-6和TGF-β表达水平均高于对照组(P<0.05)。与阴性对照比较,SMMC7721转染IL-17 siRNA后,IL-17表达水平显著下降(P<0.05),干扰IL-17后SMMC7721细胞侵袭能力显著下降(P<0.05),MMP-2和MMP-9表达水平明显降低(P<0.05)。结论 Th17/Treg在肝癌患者外周血中存在失衡现象,IL-17、IL-10、IL-6和TGF-β等细胞因子在肝癌患者外周血中高表达,沉默IL-17可抑制肝癌细胞侵袭并抑制MMP-2和MMP-9表达,IL-17可能通过调控MMP-2和MMP-9参与调节肝癌细胞的侵袭。     

新型基质金属蛋白酶抑制剂LY52对肝癌细胞HepG2.2.15体外侵袭能力的影响

目的研究新型基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)抑制剂LY52对转染HBV的肝癌细胞HepG2.2.15中MMP的表达及细胞侵袭能力的影响。方法用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐细胞增殖检测试剂盒测定LY52对细胞增殖的影响;用明胶酶谱分析法研究药物对MMP-2及MMP-9表达的影响,并进一步应用蛋白印迹(Westernblotting,WB)杂交检测MMP-2蛋白表达的改变。用侵袭小室法检测药物作用后肿瘤细胞侵袭能力的改变。结果 LY52能够抑制肿瘤细胞的增殖;明胶酶谱法和WB杂交提示HepG2.2.15细胞表达较高水平的MMP-2和MMP-9;LY52作用后,HepG2.2.15细胞的MMP-2表达受到显著抑制,而MMP-9表达的抑制作用不明显,且HepG2.2.15细胞体外侵袭能力明显降低。结论 LY52能够通过抑制MMP-2的活性及表达,抑制肝癌细胞HepG2.2.15的侵袭能力。LY52作为有潜力的抗肿瘤侵袭药物值得进一步研究。     

HIF-1α基因沉默对食管鳞癌细胞功能性基因的影响

目的观察食管鳞癌细胞中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因与血管内皮生长因子（VEGF）、血红素加氧酶（HO-1）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）基因之间的关系及其对细胞周期的影响。方法以HIF-1α基因沉默的Eca-109细胞、化学模拟缺氧细胞及未干预细胞为研究对象，通过Western blot检测VEGF、HO-1、MMP-2基因在三种细胞中的表达差异以了解其与HIF-1α基因的关系，并通过流式细胞术分析了解HIF-1α基因沉默后细胞周期的变化。结果Western blot检测发现，同空白及模拟缺氧组比较，HIF-1α基因沉默后HIF-1α蛋白表达明显下调，同时VEGF、HO-1、MMP-2的蛋白表达均出现了明显下降。流式细胞分析表明，HIF-1α基因沉默后的Eca-109细胞组同对照组相比G1、G0期细胞明显增加，G2、M期细胞变化不大，S期细胞比例明显减少。结论HIF-1α与上述三种基因存在明显相关性，进而可能影响着食管鳞癌的血管生成、侵袭、应激保护等生物学行为，HIF-1α沉默可将食管鳞癌细胞阻滞于G1、G0期。     

全反式维甲酸对肝癌细胞HepG2的分化、侵袭迁移的影响

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对肝癌细胞HepG2的诱导分化作用及侵袭迁移的影响.方法:MTT法测定ATRA对肝癌细胞HepG2的抑制作用;平皿集落形成法检测ATRA对HepG2细胞锚定依赖性生长作用;ELISA法检测ATRA作用前后HepG2 AFP分泌量的变化;RT-PCR检测ATRA对HepG2细胞MMP-9及Nanog的mRNA表达的影响;Western blot检测ATRA对HepG2细胞MMP-9及Nanog蛋白表达的影响;Transwell及划痕实验检测其对侵袭及迁移能力的影响.结果:MTT法显示ATRA抑制体外培养人肝癌细胞HepG2细胞生长,呈剂量和时间依赖性;ELISA显示ATRA诱导HepG2细胞分化和凋亡,使代表肝细胞恶变的AFP分泌量明显下降(P<0.05);平皿克隆形成实验结果表明未经ATRA处理的HepG2可形成克隆,但经ATRA刺激后,其形成克隆变小且数目明显减少;ATRA呈时间及浓度依赖性下调Nanog mRNA及蛋白的表达,并在24h呈浓度依赖性下调MMP-9 mRNA及蛋白表达;Transwell实验和划痕实验结果显示ATRA能抑制HepG2细胞的侵袭和迁移能力.结论...