基底膜α(Ⅳ)链染色正常的Alport综合征基因突变特点

目的　检测、分析编码基底膜Ⅳ型胶原α5链基因COL4A5突变及其特点 ,正确理解α5 (Ⅳ )链免疫荧光学检查结果及意义。方法　报告 1例 7岁男性患儿 ,血尿半年 ,肾功能、听力及眼部检查均正常 ;肾脏病理电镜示基底膜大部分均匀变薄 ;有血尿、肾功能不全家族史。应用间接免疫荧光学方法检测该患儿肾脏基底膜α3(Ⅳ )、α4 (Ⅳ )和α5 (Ⅳ )链以及皮肤基底膜α5 (Ⅳ )链。应用逆转录 聚合酶链反应和直接测序的方法分析α5 (Ⅳ )链mR NA ,应用PCR和直接测序方法分析COL4A5基因。结果　患儿肾小球基底膜α3(Ⅳ )、α4 (Ⅳ )和α5 (Ⅳ )链以及皮肤基底膜α5 (Ⅳ )链染色均正常。mRNA和基因组DNA分析均证实碱基替代突变 (917G >A) ,导致α5链第 2 39位甘氨酸被精氨酸取代 ,为新发现的突变。结论　首次报道了皮肤和肾小球基底膜α5 (Ⅳ )链染色正常 (阳性 )的我国X连锁型Alport综合征男性患者COL4A5基因突变及特点。提示应正确应用和理解基底膜α5 (Ⅳ )链免疫荧光学检查结果 ,X连锁型Alport综合征男性患者皮肤和肾小球基底膜α5 (Ⅳ )链染色即便正常 (阳性 ) ,当家族史及其它临床资料仍怀疑Alport综合征时 ,应进行COL4A5基因的检测和分析。     

Alport综合征的产前基因诊断

Alport综合征（AS）是最常见的遗传性。肾脏疾病,临床主要表现为血尿和进行性肾功能减退,伴随感音神经性耳聋和眼部异常等。目前已证实AS存在三种遗传方式：X连锁显性遗传（XLAS）、常染色体隐性遗传（ARAS）及常染色体显性遗传（ADAS）。其中,XLAS最常见,约占80％～85％,因COL4A5基因突变或COL4A5和COL4A6两个基因突变所致。ARAS约占AS的15％,因COL4A3或COL4A4基因突变所致。[第一段]     

不同遗传型Alport综合征的产前基因诊断

Alport综合征(Alport syndrome,AS)是最常见的遗传性肾脏疾病之一,临床主要表现为血尿和进行性肾功能减退,伴随感音神经性耳聋和眼部异常等.AS是一种遗传异质性疾病,目前已证实存在3种遗传方式:X连锁显性遗传(Xlinked dominant Alport syndrome,XLAS)最为常见,约占80%～85%,因COL4A5基因突变或COL4A5和COL4A6两个基因突变所致;常染色体隐性遗传(Autosome recessive Alport syndrome,ARAS)约占15%,常染色体显性遗传(Autosome dominant Alport syndrome,ADAS)非常少见,二者均因COL4A3或COL4A4基因突变所致[1-2].我们继往研究中对不少AS家系进行了基因诊断[3],并在国内开展了AS的产前基因诊断[4].在此,我们结合临床实施的几例不同遗传型AS的产前基因诊断家系,探讨此类疾病的产前基因诊断方法以及需要注意的问题.     

不同遗传型Alport综合征的产前基因诊断

Alport综合征(Alport syndrome,AS)是最常见的遗传性肾脏疾病之一,临床主要表现为血尿和进行性肾功能减退,伴随感音神经性耳聋和眼部异常等.AS是一种遗传异质性疾病,目前已证实存在3种遗传方式:X连锁显性遗传(Xlinked dominant Alport syndrome,XLAS)最为常见,约占80%～85%,因COL4A5基因突变或COL4A5和COL4A6两个基因突变所致;常染色体隐性遗传(Autosome recessive Alport syndrome,ARAS)约占15%,常染色体显性遗传(Autosome dominant Alport syndrome,ADAS)非常少见,二者均因COL4A3或COL4A4基因突变所致[1-2].我们继往研究中对不少AS家系进行了基因诊断[3],并在国内开展了AS的产前基因诊断[4].在此,我们结合临床实施的几例不同遗传型AS的产前基因诊断家系,探讨此类疾病的产前基因诊断方法以及需要注意的问题.     

X连锁显性遗传Alport综合征女性患者临床表型与不同组织X染色体失活方式的关系

目的探讨X连锁显性遗传Alport综合征(XLAS)女性患者临床表型的差异与不同组织X染色体失活方式的关系。方法以确诊的36例XLAS女性患者为研究对象,以尿蛋白作为判断临床表型严重程度的指标,检测所有患者外周血和其中12例患者皮肤组织的X染色体失活方式。采用限制性内切酶HpaⅡ酶消化后PCR扩增雄性激素受体基因第1外显子CAG重复序列多态性的方法检测X染色体失活。结果随着尿蛋白水平的增加,XLAS女性患者外周血中COL4A5致病等位基因所在X染色体失活比例的平均值降低,二者呈负相关(r=-0.543,P=0.002);XLAS女性患者尿蛋白水平与皮肤成纤维细胞中COL4A5致病等位基因所在X染色体失活比例无相关性(r=-0.131,P=0.701)。结论X染色体的失活方式也许能解释XLAS女性患者的临床表型差异,通过分析外周血中X染色体失活方式也许能够早期预测XLAS女性患者的预后。     

基因诊断儿童Alport综合征30例临床分析

目的　探讨儿童Alport综合征（Alport syndrome,AS）的临床表型与基因突变检测的临床意义。方法　回顾性分析2013年1月至2017年6月在广州医科大学附属广州市第一人民医院儿科收治的30例基因突变患儿的资料。采集患儿及其家系成员的外周血样品,应用基因测序外显子序列捕获技术,寻找样品中是否存在Ⅳ型胶原α3链（COL4A3）、α4链（COL4A4）或α5链（COL4A5）三个突变基因,并对直系亲属行基因验证。结果　经过基因检测确诊Alport综合征（AS）30例,18例（60.00%）进行肾活检,光镜检查结果呈多样化,5例（16.67%）电镜检查表现为肾小球基底膜（glomerularbasementmembrane,GBM）弥漫性变薄、增厚和撕裂分层; 4例（13.33%）电镜表现为薄基底膜病（thin basement membrane nephropathy,TBMN）改变;免疫荧光检查3例（10.00%）肾组织Ⅳ型胶原α3、α5链阴性。22例患儿基因诊断X连锁显性遗传Alport syndrome （X-linked Alport syndrome,XL-AS）,发现8个COL4A5新突变位点。8例患儿基因诊断为常染色体隐性遗传（autosomal recessive Alport Syndrome,AR-AS）,发现3个COL4A4新突变位点。结论　儿童Alport综合征临床表现多样化,缺乏特异性,肾组织病理类型各异,难以早期诊断。基因检测有助于AS的早期诊断,判断患儿的预后,避免不必要的药物治疗。     

儿童Alport综合征COL4A5基因型及临床特点分析

目的 探讨儿童Alport综合征（Alport syndrome,AS）致病基因COL4A5基因型与临床表型的特点。 方法 回顾性分析19例存在COL4A5基因突变的AS患儿的基因检测结果和临床资料。 结果 19例COL4A5基因突变导致的AS患儿中,1例（5%）存在COL4A5基因新突变位点c.3372A>G(p.P1124=),其表现为AS合并IgA血管炎肾炎;3例（16%）存在COL4A5基因大片段缺失,其中2例（例7为新突变位点：loss51-53）起病即存在肉眼血尿和蛋白尿,1例（例13,存在新突变位点：loss3-53）仅有镜下血尿;其余15例（79%）患儿均为AS的常见临床表型,其中7例存在COL4A5基因新突变位点。3例（16%）患儿合并COL4A4基因突变,1例（5%）合并COL4A3基因突变,在这些双基因突变患儿中有2例起病即为肉眼血尿合并蛋白尿。 结论 该研究拓展了AS致病基因COL4A5的基因型和表型谱;发生COL4A5基因大片段缺失突变或COL4A5合并COL4A3或COL4A4的双基因突变患儿的临床表现更严重。     

儿童Alport综合征COL4A5基因4种新突变分析

目的 分析4例儿童Alport综合征的基因型和临床表型特点。方法 总结4例患儿的临床特点,采用外显子捕获-第二代测序技术对4例诊断为Alport综合征患儿的COL4A5、COL4A4和COL4A3基因进行突变检测。结果 4例均为男性,年龄6～8岁,首发症状均为血尿,均伴有不同程度的蛋白尿。1例表现为高频听力区受损,1例右侧视网膜脱色素改变。4例肾功能均正常。肾穿刺活检电镜检查均显示典型Alport综合征基底膜病变。在4个家系中发现4种COL4A5基因突变,分别为Gly132Glu、Gly1238Arg、Gly267Arg和Gly1033Ser, 均为未报道的新突变。经家系验证Gly132Glu和Gly1033Ser为新生突变。用 SIFT 和PolyPhen 软件进行蛋白功能预测均显示4种突变为有害突变。结论 本研究采用外显子捕获-第二代测序技术共检测到4种COL4A5基因新突变,其中2种为新生突变。为人类Alport综合征基因突变数据库增添了4个新成员,对进一步研究中国人群Alport综合征的发病机制以及遗传咨询和产前诊断有重大意义。     

Alport综合征患儿临床表型及基因型单中心分析

目的 了解儿童Alport综合征(AS)临床表型及基因突变的特点.方法 回顾性分析2011年5月至2014年5月于上海交通大学附属儿童医院肾脏风湿科明确诊断并具有完整资料(临床、肾组织病理、基因检测结果)的AS患儿25例.采用外显子捕获-二代测序技术进行基因检测,包括COL4A3、COL4A4、COL4A5基因,并同时进行家系验证.结果 (1)25例患儿中X连锁AS(XL-AS)19例(76％),常染色体隐性遗传AS (AR-AS)6例(24％).25例患儿均以血尿和(或)蛋白尿起病,8例以上呼吸道感染为诱因.其中2例(8％)存在听力损伤,1例(4％)患儿存在眼部病变.(2)25例均行肾组织活检,光镜表现为:16例轻微病变,8例系膜增生,1例局灶节段硬化.电镜下仅2例(8％)见肾小球基底膜致密层撕裂分层等典型AS改变,另4例表现为薄基底膜病,8例系膜增生性改变,6例轻微病变,5例未见肾小球.肾组织Ⅳ型胶原α链间接免疫荧光检测中21例(84％)存在表达缺失.(3)对25例(来自23个家系)行COL4A3、COL4A4及COL4A5基因突变检查,发现突变类型24种(16种突变未见报道).其中COL4A3基因突变1种(4％),COL4A4基因突变5种(21％),COL4A5基因突变18种(75％).同时对25例患儿的直系家庭成员全部可疑致病突变进行了验证,结果发现13例突变遗传自母亲,3例遗传自父亲,2例(同胞姐妹)患儿的1种突变遗传自父亲、另一种遗传自母亲,7例为新生突变.结论 (1)AS以X连锁显性遗传为主,病理检查多表现为轻微病变或系膜增生性改变,电镜下少数患儿可表现为薄基底膜病.(2)25例患儿共检出24种COL4A3、COL4A4、COL4A5基因突变,其中16种未见报道.     

Alport综合征的诊疗和管理研究进展

Alport综合征(AS)分为X连锁AS(XLAS)、常染色体AS和双基因遗传AS 3类。携带COL4A3、COL4A4或COL4A5基因致病变异者可诊断为AS。大于12～24月龄的XLAS男性、常染色体隐性遗传型AS、COL4A3和COL4A4单基因致病变异反式遗传型AS患者一经诊断, 无论是否存在血尿或蛋白尿都应立即开始血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)治疗;大于12～24月龄的XLAS女性、常染色体显性遗传型AS、COL4A3和COL4A4单基因致病变异顺式遗传型AS患者出现微量白蛋白尿即开始ACEI治疗。携带COL4A3、COL4A4或COL4A5致病变异者不适合作为肾脏供体。     

年龄和组织类型对X连锁Alport综合征女性患者X染色体失活方式的影响

目的 探讨不同年龄和组织类型对X连锁Alport综合征（XLAS）女性患者X染色体失活方式的影响。方法 纳入1997年1月至2006年12月北京大学第一医院（我院）儿科肾脏病遗传门诊就诊符合XLAS诊断标准的家系。根据年龄,将XLAS家系中女性患者分为两组,年龄≤30岁为A组,年龄>30岁为B组。采集患者及其家属静脉血3 mL,盐析法提取淋巴细胞基因组DNA。对家系中的女性患者在前臂下1/3处进行皮肤活检,并进行成纤维细胞培养。通过PCR扩增雄性激素受体（AR）基因第一外显子CAG重复序列的多肽性分析X染色体失活。每一标本X染色体失活分析均检测2次,取其平均值用于两组X染色体失活的差异分析,以X染色体失活率≥80%作为X染色体失活倾斜的标准。结果 研究期间我院儿科肾脏病遗传门诊共诊断XLAS家系186个,符合纳入和排除标准的XLAS家系共32个,包括36例女性患者,32例男性患者。A组和B组分别为13和23例,平均年龄分别为（17.9±11.7）和（38.6±6.2）岁。①36例女性患者中,外周血中AR基因位点杂合者32例,异质性为88.9%;AR基因位点纯合者4例。外周血中X染色体失活倾斜比例为12.5%（4/32例）,其中A组0例,B组4/20例（20.0%）,两组差异无统计学意义（χ2=2.743,P=0.098）。②12例女性患者同时分析外周血和皮肤成纤维细胞X染色体失活,结果显示两种组织中X染色体失活方式明显不同,3例患者仅皮肤成纤维细胞显示为X染色体失活倾斜而外周血无失活倾斜;1例外周血显示X染色体失活倾斜而皮肤成纤维细胞无失活倾斜。7/12例（58.3%）患者两种组织中以同一条X染色体失活为主;5/12例（41.7%）患者则相反,两种组织间X染色体失活明显不同。结论 不同组织类型而不是年龄可影响XLAS女性患者的X染色体失活方式,这可能是有关XLAS女性患者和X染色体失活研究结果不一致的一个主要原因。     

X连锁显性遗传Alport综合征的产前基因诊断

目的Alport综合征（As）是最常见的遗传性肾脏疾病,预后较差,无特异有效的治疗。x连锁显性（XLAS）是其主要遗传方式,因COL4A5基因突变或COL4A5和COL4A6两个基因突变所致。通过对两个XLAS家系进行遗传咨询和基因诊断,并对其中一个家系实施产前基因诊断,探讨AS产前基因诊断的方法及临床应用价值。方法对两个XLAS家系进行详细的遗传咨询后,采用巢式PCR扩增外周血淋巴细胞COL4A5 mRNA的整个编码区序列筛查两个家系的基因突变,然后扩增COMA5相应的外显子从基因组DNA水平进一步证实突变。产前基因诊断通过羊水细胞cDNA和DNA两个水平来检测胎儿突变情况,通过PCR扩增Y染色体性别决定基因SRY联合核型分析检测胎儿性别,通过三个x染色体微卫星标记（AR、DXS6797和DXS6807）连锁分析除外羊水中母体细胞污染的可能。结果突变筛查显示家系一为新发突变,先证者COL4A5第2696～2705位缺失GTATGATGGG共10个碱基,但母亲外周血基因组DNA不携带该缺失突变,通过遗传咨询,该家系未进行羊水穿刺和产前基因诊断。家系二COL4A5基因第4271位G被A取代,1424位G〉E,家系其他患者包括孕母均携带该突变。对家系二孕母进行了羊水穿刺和产前基因诊断。羊水细胞cDNA和DNA水平检测均显示胎儿无突变,PCR扩增SRY基因和羊水细胞核型分析均显示胎儿为男性。连锁分析显示羊水细胞中无母体细胞污染,且间接提示胎儿从母体遗传了携带正常COL4A5等位基因的x染色体。结论基于外周血淋巴细胞cDNA水平的COL4A5基因突变检测技术可快速用于XLAS产前基因诊断时家系基因突变筛查,有利于客观进行遗传咨询;产前基因诊断时联合eDNA和DNA两个水平检测胎儿基因突变情况更准确可信,PCR扩增SRY基因可以快速鉴定胎儿性别,x染色体微卫星标记连锁分析不但可以排除羊水中母体细胞污染,而且可以间接证明胎儿是否携带致病等位基因。     

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??Objective??To analyze the features of clinical manifestions and gene mutations of Chinesse children with X-linked Alport syndrome??XLAS??. Methods??Retrospectively analyze the clinical and pathological features of 31 patients with Alport syndrome with COL4A5 mutations??who were treated in Shanghai Children’s Hospital from June 2011 to June 2016. Results??Of these 31 cases??there were 12??38.7%?? females and 19??61.3%?? males??and the average age of onset was 2.6 years old. Thirteen patients had an onset of hematuria and proteinuria and 22??70.9%?? patients had family medical history. One patient presented ocular changes and 2 patients had hearing loss. Renal pathology showed that 15 of them had minimal change disease??MCD?? and 5 mesangial proliferative glomerulonephritis??and only 6 had typical pathologic changes of Alport syndrome. We identified 31 different mutations in all patients??and there were 19??61.3%?? cases of missense mutations??2??6.5%??cases of large deletion mutations??4??12.9%?? cases of spice-site mutations and 6??19.3%?? cases of frame shift mutations. Among these 19 missense mutations??16??84.2%?? cases were Gly-X-Y mutations. Conclusion??Most of XLAS children show MCD in renal biopsy and had missense mutations in COL4A5 gene. Clinical symptoms and pathology are not typical?? resulting in the difficulities in diagnosis of Alport syndrome.     

Familial hematuria due to type IV collagen mutations: Alport syndrome and thin basement membrane nephropathy

PURPOSE OF REVIEW: Recent molecular genetic studies have shown that mutations in type IV collagen account for a significant proportion of patients with persistent glomerular hematuria. This review will discuss the implications of these findings for the diagnosis and management of persistent glomerular hematuria. RECENT FINDINGS: Type IV collagen mutations are associated with a continuum of disease severity. Heterozygous mutations typically cause isolated, nonprogressive hematuria. Mutations in both alleles of the autosomal type IV collagen genes, or hemizygous mutations in the X-linked gene encoding the alpha 5 chain of type IV collagen, result in progressive renal disease that is often associated with sensorineural deafness (Alport syndrome). Animal models of Alport syndrome have begun to provide insights into the pathogenesis of end-stage renal disease in Alport syndrome, with potentially important implications for therapy. SUMMARY: Recognition that glomerular hematuria frequently has a genetic basis is important for accurate genetic counseling, early identification of individuals at risk for end-stage renal disease development, and institution of therapies to delay the onset of ESRD.     

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??Objective??To investigate the clinical significance of the clinical phenotype and gene mutation detection in children with Alport syndrome. Methods??The data of 30 children with gene mutation admitted to Guangzhou First People’s Hospital??Guangzhou Medical University from January 2013 to June 2017 were retrospectively analyzed. Collect peripheral blood samples from children and their family members .Then use gene sequencing exon sequence capture technology to find out whether there was mutation gene??including ?? type collagen alpha 3 chain??COL4A3????alpha 4 chain??COL4A4?? or alpha 5 chain??COL4A5??. Gene mutations of related family members were identified by Sanger method. Results??The 30 children with AS were diagnosed by gene detection. Renal biopsy was performed in 18 cases??60.00%?? of 30 children with AS??and the results of light microscopy were various. Electron microscopic examination revealed diffuse thinning??thickening and delamination of the glomerular basement membrane??GBM?? in 5 cases??16.67%??. The electron microscopic examination showed thin basement membrane disease in 4 cases??13.33%??. Three cases??10.00%?? of immunofluorescence showed type ?? collagen alpha 3??alpha 5 chain negative in renal tissue. Totally 22 cases were diagnosed with X linkage dominant hereditary Alport syndrome??XL-AS?? by gene text??and 8 new mutation sites of COL4A5 were found. Genetic diagnosis showed 8 children were autosomal recessive inheritance??and 3 new COL4A4 mutations were found. Conclusion??The clinical manifestations of children with Alport syndrome are diverse and lack of specificity??and the pathological types of renal tissue are different. It is difficult to diagnose early. Gene detection helps to early diagnose of AS??to judge the prognosis of the children??and to avoid unnecessary drug treatment.     

以激素耐药型肾病综合征起病的Alport综合征15例临床分析

目的　对以儿童激素耐药型肾病综合征（steroid-resistant nephrotic syndrome,SRNS）起病的Alport综合征（Alport syndrome,AS）的临床资料、病理和基因检测情况进行临床分析,以提高对AS的认识。方法　选取2015年1月至2019年12月广州医科大学附属广州市第一人民医院儿科初治均诊断为原发性肾病综合征（primary nephrotic syndrome, PNS）, 经过治疗效果不佳, 从最初的激素依赖型肾病综合征（steroid-dependent nephrotic syndrome, SDNS）到SRNS, 最后经过基因检测确诊为AS的15例患儿, 综合分析其临床特点、 病理、 肾外表现及基因检测等情况。结果　（1）15例AS患儿中, 均有镜下血尿, 均有不同程度的水肿、 大量蛋白尿、 低蛋白血症和高脂血症, 其中蛋白尿伴肉眼血尿的3例, 出现尿素氮/血肌酐明显升高2例。（2）13例患儿行肾穿刺活检病理检测, AS患儿肾脏病理检查结果呈多样性, 中度系膜增生性肾小球肾炎3例, 局灶性节段性肾小球硬化（focal segmental glomerulosclerosis, FSGS）3例, IgA肾病3例, 薄基底膜肾病2例, 肾小球轻微病变1例, 轻度系膜增生性肾小球肾炎1例。（3）15例PNS患儿均进行基因检测, 发现COL4A5基因突变13例, COL4A4和COL4A3基因突变各1例。结论 临床对于SRNS治疗效果不佳, 应积极询问家族史, 尽早行AS基因检测, 早期诊断有助于判断患儿的预后, 避免不必要的药物治疗, 达到精准治疗。     

Nephropathy associated with Charcot-Marie-Tooth disease

In this report, we describe a case of 14-year-old girl with Charcot-Marie-Tooth (CMT) disease and the nephropathy which was characterized by heavy proteinuria and microscopic hematuria. She progressed to renal failure with clinical duration of 4 years from the onset of disease. Renal biopsy specimens revealed the features of focal segmental glomerulosclerosis (FSGS). The patient has also a bilateral sensorineural deafness. Although the clinical features show similarities to those of the Alport syndrome, electron microscopic examination did not disclose the glomerular basement membrane changes which were characteristic of the Alport syndrome. The association of nephropathy with CMT disease is discussed, as compared with previous report.     

1例遗传性血管病、肾病、动脉瘤和肌肉痉挛综合征幼儿的临床特征及COL4A1基因型研究

遗传性血管病、肾病、动脉瘤和肌肉痉挛（HANAC）综合征是由COL4A1基因变异导致的常染色体显性遗传病,主要表现为脑白质病变、动脉瘤、视网膜动脉迂曲、多囊肾、镜下血尿、肌肉痉挛等。该文报道1例COL4A1基因变异导致HANAC综合征的临床特征及基因型特点。患儿男,1岁8个月,幼儿期隐匿起病,主要表现为发热抽搐、侧脑室旁及双侧半卵圆中心脑白质病变、左侧基底节旁软化灶、视网膜动脉硬化、镜下血尿、肌肉痉挛。全外显子组测序结果证实患儿COL4A1基因存在（NM_001845）c.4150+1（IVS46）G > T致病性杂合新发变异,从而确诊为HANAC综合征。针对不明原因脑白质病变、卒中、血尿、多囊肾、白内障、视网膜动脉迂曲等病变的患儿或有相关家族史的家系,建议完善COL4A1基因检测。