HBV核心蛋白结构与功能及其在基因治疗策略上的应用

核心蛋白对乙型肝炎病毒（HBV）复制过程起关键的作用。近年来对HBV核心蛋白（HBc)单体及其形成的核壳结构与功能有了深入的认识，HBc基因特定部位中插入外源基因后，其产物在细胞内仍能正确地折叠和自身装配，因而有可能在细胞内表达假HBc并掺入242粘野生型HBc后，共同形成核心壳结构，抑制基功能原发挥，干扰HBV复制。本文就HBc结构与功能区域的基础生物学及其在基因治疗策略上的应用进展作了综述。     

血清HBsAg滴度与HBcAg及HBV-DNA检测临床意义探讨

乙型肝炎 (乙肝 )病毒 (HBV)颗粒 ,又称 Dane颗粒。其表面由表面蛋白 (HBs Ag)构成。核心由核心蛋白 (HBc Ag)构成。 Dane颗粒通过裂解剂裂解 ,经 EL ISA法检出 HBc Ag阳性或经荧光定量 PCR检测 HBV- DNA阳性 ,表示 HBV在体内复制〔1 - 3〕。 HBs Ag为乙肝病毒感染指标 ,为探讨其滴度高低与乙肝病毒在体内复制状况的相关性及其临床意义 ,本文对血清 HBs Ag滴度与 HBc Ag及 HBV- DNA检测结果 ,报告分析如下。1　材料和方法1 .1　临床标本1 .1 .1　 HBs Ag阳性、HBe Ag阳性、抗 - HBc阳性 (简称“大三阳”)患者血清 80…     

乙型肝炎病毒C基因多态性及其蛋白特性分析

目的 调查中学生人群乙型肝炎病毒(HBV)C基因多态性及其乙型肝炎病毒C蛋白(HBc)特性变化,为了解乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)变异提供理论依据.方法 采用HBV-C基因特异性引物对23份义乌地区大学生HBV携带者(血清学检测为大三阳患者)血清标本进行PCR扩增鉴定,并取21份PCR检测阳性产物直接测序;进一步用Vector NTI 8.0和DNA Star软件分析HBV-C基因多态性及HBc蛋白特性的变化.结果 23份标本中,HBV-C DNA阳性率91.30％;与标准基因序列(Gen Bank X01587)比较,HBV-C基因同源性为93.3％～95.1％;分别形成54种突变模式,其中一处由于核苷酸的改变,翻译的氨基酸也发生了相应的改变,此处氨基酸序列的第130处脯氨酸(P)突变为苏氨酸(T),其余标本均为同义突变;但突变处编码蛋白在亲水性、表面可及性及抗原性与标准株相比较无明显变化.结论 义乌市大学生HBV携带者HBV-C基因序列有一定程度的变异.     

乙型肝炎病毒核衣壳组装调节剂最新进展

核衣壳组装调节剂作为新型抗HBV药物,能影响HBV复制,使共价闭合环状DNA（cccDNA）暴露而便于其被降解酶降解,从而同时减少cccDNA库。本文对主要的核衣壳组装调节剂及其与HBV核心蛋白之间相互作用方面的研究进展作一综述。     

乙肝病毒难治之缘由

乙肝病毒嗜肝性乙肝病毒感染人体后，随着血流进入肝脏，通过肝细胞膜上的乙肝病毒受体直接与肝细胞膜结合，先脱去外壳，其核心进入胞浆；然后脱去核壳，其病毒基因进入肝细胞核内复制(即相当于繁殖)。治疗药物必须是小分子才能进入细胞内，而且还要对肝细胞无毒性作用。     

丙肝病毒核心蛋白抑制乙肝病毒复制的研究

目的探讨丙肝病毒(HCV)核心蛋白(Core)对乙肝病毒(HBV)复制的影响,并探讨其调节机制。方法将Core蛋白真核表达载体Flag2B-Core、HBV感染性克隆p HBV1.3及其启动子p HBV-Luc分别转染Hep G2和Hep G2.2.15细胞;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液中HBs Ag和HBe Ag含量;荧光定量PCR法检测细胞闭合环状DNA(ccc DNA);Luminometer荧光检测仪检测HBV启动子活性。结果随着HCV Core蛋白浓度的不断增加,Hep G2.2.15细胞上清中的HBs Ag和HBe Ag表达逐渐降低,0.0μg组、0.5μg组均显著高于1.0μg组、2.0μg组(P0.05);Hep G2.2.15细胞内HBV ccc DNA含量亦逐渐降低,并呈剂量依赖效应;Hep G2细胞荧光素酶的活性不断降低,0.0μg组、0.5μg组均显著高于1.0μg组、2.0μg组(P0.05),Core蛋白下调HBV启动子活性呈剂量依赖效应,Spearman相关分析显示两者相关性良好(P0.01)。结论 HCV Core蛋白在细胞水平抑制HBV的复制。     

乙肝病毒C基因及其编码蛋白研究概述

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染引起的一种严重危害人类健康的传染病.HBV核心蛋白在病毒的装配、肝炎的发生、发展中起重要作用.本文就HBV核心蛋白的编码C基因、蛋白的结构功能及所引起的细胞免疫应答特点,特别是HBV核心相关抗原(HBV,HBcrAg)作为一种重要的血清学指标在临床上的应用以及BCP(basal core promoter)双突变在对乙肝病情的影响等作了概述.     

稳定表达HBV C蛋白羧基端siRNA抑制HBV cccDNA的实验研究

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)C蛋白羧基端短小的干扰RNA(siRNA)对HBV超螺旋双链闭环DNA(cccDNA)水平的影响.方法设计合成1对能稳定表达针对HBV C基因羧基端(2389nt-2410nt)序列的22-mer siRNA寡核苷酸,其两端带有限制性酶切位点,表达后可形成发夹结构,退火后形成双链;然后将这一双链寡核苷酸与重组腺相关病毒载体(rAAV)连接,构建重组体rAAV-siRNA.将重组体rAAV-siRNA加入培养增殖良好的22.1.5细胞中孵育,72 h后用实时聚合酶链反应(Real timePCR)法检测经处理过的22.1.5细胞和培养上清中HBV cccDNA的表达水平和HBV DNA的复制水平.结果重组体rAAV-siRNA实验组HBV cccDNA水平较空白对照组显著降低(P＜0.01),HBVDNA的复制水平在实验组亦明显下降;在无关序列对照组未发现对HBV cccDNA水平影响和HBV DNA复制的抑制作用.结论HBV羧基端siRNA能显著降低HBV cccDNA的水平和HBVDNA的复制.     

乙型肝炎病毒血清标志物单独核心抗体阳性者中乙型肝炎病毒隐匿性感染的分子特性

目的 探讨乙肝血清标志物单独抗核心抗体(HBc Ab)阳性者中乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)隐匿性感染(occult HBV infection,OBI)流行状况和病毒分子特性。方法 应用ELISA方法对本院乙肝标志物检测单独HBc Ab阳性者进行复检,采用荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)方法对复检单独HBc Ab阳性者的HBV-DNA进行荧光定量,对病毒核酸检测阳性者扩增Pre S/S基因区并进行直接测序分析。结果 在总共复检的343列单独HBc Ab阳性者中,有338例样本复测HBc Ab单独阳性。定量PCR检测发现OBI者6例(1. 8%),其中成功测序4例。序列结果分析发现2例B2基因型,2例C1基因型。4例样本均在Pre S/S基因区发生了变异,S基因区变异多在B细胞表位和T细胞表位区,其中有3例样本存在a决定簇变异。结论 单独HBc Ab阳性者确实存在OBI,HBV基因组S区a决定簇内存在变异,可能与OBI的发生相关。临床上要注意单独HBc Ab阳性者HBV隐匿性感染的漏诊。     

乙型肝炎病毒X基因变异与隐匿性感染的关系

隐匿性HBV感染指患者血清HBsAg阴性,而血清和(或)肝组织HBV DNA阳性,其发生机制仍未明了.目前,对HBV基因变异的研究大多集中在S基因,而X基因是病毒复制的重要调节区,是转录、反转录和正链合成的起点,此处变异可能会影响到病毒的转录和复制,但由于X基因结构和功能的复杂性,目前对其变异与隐匿性HBV感染的关系研究相对较少.此文就HBV X基因变异对隐匿性HBV感染的发生和影响进行综述.     

841人乙肝核心抗体(抗HBc)测定

研究资料证明,乙肝核心抗体(抗—HBc)是乙肝病毒(HBV)在机体内复制或感染后恢复的重要标志。1983年5—6月我们用酶联免疫吸附试验法(ELlSA)对广东省廉江县841人进行抗—HBC检测,现将结果整理汇报如下。     

单一抗—HBc阳性献血员与乙型肝炎传染性研究

乙型肝炎(以下简称乙肝)是由乙肝病毒(HBV)引起的一种严重危害人们生命健康的传染病。血液传播是乙肝的主要传播途径,故控制与管理献血员,是降低HBV感染水平的重要措施。当前,献血员在献血前一律检测HBsAg,如HBsAg阳性,则禁止献血。尽管如此,输血后乙肝感染率仍很高提示HB-sAg阴性血液仍有传染乙肝的可能性。据有关资料阐述,乙肝感染者血液中另一种标志物抗—HBc如滴度很高,可有HBV复制;但其滴度达到什么程度复制,其在乙肝传播中有什么作用未见报道。为回答这一问题,我们对单一抗—HBc阳性献血员与乙肝传播的关系进行了研究。     

关于乙型肝炎病毒Pre-S_2蛋白的研究概况

近年来,对乙型肝炎病毒基因上 Pre-S_2区及其所编码的蛋白(Pre-S_2 蛋白)的研究已成为乙型肝炎病毒(HBV)的新课题之一。据认为,Pre-S_2 蛋白上具有一个高免疫原性的抗原决定基和多聚白蛋白受体,它与 HBV的感染和复制有密切关系,并对临床早期诊     

乙型肝炎病毒标志物不同模式与血清丙氨酸转氨酶相关分析

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)核心抗体IgM(HBc IgM)和HBV血清标志物不同模式的乙型肝炎核酸(HBV DNA)阳性者血清丙氨酸转氨酶(ALT)的变化。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和酶速率法检测1093例HBV DNA阳性者血清病毒标志物和ALT,根据HBV血清标志物不同模式进行分组,比较各组间ALT值。结果各组ALT>60U/L(异常)例数及其异常增高百分率分别为:A组(HBc IgM阳性及乙型肝炎表面抗原、e抗原、核心抗体阳性)147例,占53.85%(147/273);B组(HBc IgM及乙型肝炎表面抗原、e抗体、核心抗体阳性)104例,占42.28%(104/246);C组(HBc IgM、乙型肝炎核心抗体阳性,乙型肝炎表面抗体、e抗体阴性或阳性)6例,占20.69%(6/29);D组(HBc IgM阴性,乙型肝炎表面抗原、核心抗体阳性,乙型肝炎e抗原、e抗体阴性或阳性)125例,占22.94%(125/545)。A组与B组、C组、D组间ALT异常增高率差异均有显著性(均P<0.01);B组与C组、D组间ALT异常增高率差异亦均有显著性(分别P<0.05,P<0.01);C组与D组间ALT异常增高率差异无显著性(P>0.05)。结论HBV DNA阳性患者中的HBc IgM阳性且HBsAg阳性者较HBc IgM阴性者或HBsAg阴性者ALT明显增高。     

HBV X基因及其表达产物的研究进展

本文概述了乙型肝炎病毒(HBV)X基因的转录、翻译与调控,X基因变异,X蛋白与HBV复制、肝细胞癌发生的关系,以及X蛋白对MHC激活的研究进展。     

原发性肝癌110例HBV感染分析

110例 pHC住院患者采用ELISA法检测HBsAg、抗HBs、抗HBc( >1∶10 0 )、抗HBc -IgM、HBeAg、抗HBe ,RIA法检测HBcAg及血清AFP。结果为HBV总感染率 91% ;按HBV复制状况 ,可见 ,HBV活动性复制呈强传染性占2 0 % ,HBV活动性复制呈弱传染性占 5 8% ,无HBV活动性复制或无HBV感染占 2 2 % ;HBsAg( )及HBsAg( -)组血清AFP阳性率分别 92 2 %和 35 % ,两组对比差异有显著性 (P <0 0 1)。血清AFP测定对HBsAg( )PHC的诊断和监测具有更重要意义     

乙肝两对半探秘(三) e抗原和e抗体阳性的临床意义

乙型肝炎病毒(HBV)基因是一个环状、部分双链的DNA分子。分长链和短链,其中长链有4个开放读框,分别命名为S、C、P和X基因区。C基因编码两种蛋白,一种为非结构性分泌蛋白即e抗原(HBeAg);另一种为HBV核壳体蛋白(HBcAg)。HBeAg蛋白是由C基因编码,当HBV繁殖复制时产生大量HBeAg。一般来说,HBeAg只能在乙肝表面抗原(HBsAg)阳性血清中被检出,因为它通常出现于HBsAg出现在血清之后,消失在HBsAg消失之前,能在血中维持2～3个月左右。HBeAg与HBV DNA、DNA多聚酶(DNA—P)往往是同时存在,密切相关,是HBV活动性复制的重要标志,也和肝脏损害成正相关。如果HBeAg阳性,往往血清中HBsAg滴度高。HBsAg伴HBeAg阳性者其滴度比单独HBsAg阳性者强4～29倍。动物实验证明,二者血清的传染性相差10~8倍。因此,HBeAg阳性传染性强。     

怎样看乙型肝炎系统检查化验单

<正> 乙肝病毒(HBV)进入人体后,在肝细胞内除去外壳,由核心颗粒进入肝细胞核内进行复制后,穿过细胞核膜到达细胞浆中,包被其表面抗原(EBsAg)为完整的HBV。以后细胞破坏,病毒及多余的HBsAg进入血循环(血清中没有单独的核心抗原HBcAg)。在HBsAg出现后即     

HBV基因组内分子变异的临床意义

HBV基因组在正常复制周期可发生突变,导致出现新的变异株.本文综述了人体对HBV的体液免疫和细胞免疫,前核心基因的变异及其在不同地理区域与临床的联系,核心基因、前S基因和HBsAg变异的临床意义以及HBsAg阴性的肝病.     

HBV多表位复合基因在NS-1细胞的表达

目的 研究HB4颗粒为呈现载体的阳V多表垃复合基因在哺乳动物细胞NS-l内的表达。方法 PCR扩增HBc 1-72aa及93-183aa编码序列并合成HBV多表位复合基因，定向克隆至pcDNA3．1( )。经双酶切及核苷酸序列测定等方法筛选阳性克隆。阳性质粒以Lipofetamine介导转染NS-l细胞，通过ELISA及间接免疫荧光等方法检侧细胞表达产物。结果 双酶切及测序结果证实阳性质粒正确克隆了约890bp的HBc与HBV多表位复合基因的杂合基因。重组于成功转染NS-l细胞并表达HBc-Mep融合蛋白。结论 HBc颗粒为呈现载体的HBV多表位复合基因在哺乳动物细胞NS-l内正确表达目的蛋白。为研究pHBc-Mep作为DNA疫苗的免疫活性奠定基础。为后期检测核酸疫苗pHBcMep的细胞免疫效果提供靶细胞。