淋巴管灌注技术的经验介绍

随着观察手段、相关学科技术的迅猛发展，现今淋巴管的观察方法主要包括淋巴管注射法、淋巴管造影法、动脉内墨汁-硝酸银水溶液注射法、淋巴管的同位素扫描法、过氧化氢涂抹法、光学显微镜观察法、扫描电镜观察法、电子透视显微镜观察法、酶组织化学法、免疫组织化学法等。这些方法各有其特点，并各自在实际应用中取得了良好的效果。     

壳寡糖诱导肺癌细胞A549凋亡及其机制初探

目的 研究壳寡糖对人肺癌细胞A549的增殖抑制作用及对凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Survivin表达的影响.方法 利用金属配位氧化法制备壳寡糖,采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度的壳寡糖处理不同时间对A549细胞增殖的抑制作用,Wright's-Giemsa染色后观察壳寡糖处理后的A549的形态学变化,利用免疫组织化学法分析壳寡糖对A549细胞中Bcl-2、Bax、Survivin表达量的影响.结果 5.0 mg/ml壳寡糖处理A549细胞48 h后对细胞增殖的抑制率为56.70％.荧光显微镜下观察Wright's-Giemsa染色后细胞的细胞膜褶皱,细胞核固缩,并出现凋亡小体.免疫组织化学法分析表明,壳寡糖能够上调促凋亡蛋白Bax的表达,下调抑制凋亡蛋白Bcl-2、Survivin的表达.结论 壳寡糖对人肺癌A549细胞的增殖有抑制作用,推测其可能通过上调Bax和下调Bcl-2、Survivin的表达诱导细胞凋亡.     

仙甲汤对前列腺增生大鼠前列腺组织EGF、TGF-β1表达影响的研究

目的:观察实验性前列腺增生大鼠前列腺组织生长因子EGF、TGF-β1的表达及仙甲汤对其的影响.方法:去势加丙酸睾酮注射法复制大鼠前列腺增生模型,免疫组织化学法检测大鼠前列腺组织生长因子EGF、TGF-β1的表达.结果:模型组大鼠前列腺组织EGF阳性表达率极显著高于其他各组(P<0.01),TGF-β1阳性表达率与仙甲汤高剂量组及正常组比较有显著差异(P<0.05).结论:模型大鼠前列腺组织存在生长因子调控失衡现象,仙甲汤可通过调节生长因子以抑制前列腺增生.     

推拿促进房水内源性前列腺素的生成调节大鼠睫状体淋巴管增生

目的：探讨推拿促进大鼠眼内前列腺素的生成,诱导大鼠眼部睫状体内淋巴管的增生,进而降低青光眼眼压的作用机制。方法：将48只SD大鼠造模后随机分为青光眼模型组、推拿组、拉坦前列腺素组和推拿结合拉坦前列腺素组,每组12例。治疗过程中分别抽取各组不同时间段房水进行酶联免疫吸附试验(ELISA),采用蛋白质印迹法、定量聚合酶链反应、免疫荧光法、免疫组织化学法检测同源盒基因转录因子1(Prox-1)、5′-核苷酸酶(5′-Nase)表达水平,淋巴管酶组织化学染色法检测各组睫状体内淋巴管的增生情况。结果：推拿结合拉坦前列腺素组眼压均低于其他组(P<0.05);推拿结合拉坦前列腺素组中Prox-1、5′-Nase表达水平均高于其他组(P<0.05);推拿结合拉坦前列腺素组睫状体组织淋巴增殖均高于其他组。结论：推拿可以有效促进睫状体淋巴管的增生,而增生的淋巴管能吸收多余的房水导致眼压下降。     

针灸作用机理的神经免疫组织学研究

为阐明含有CGRP(降钙素基因相关肽)和P物质(SP)的神经纤维与免疫系统的关系,运用酶抗体法观察了大鼠皮肤。以抗CGRP免血清和抗SP免血清作为初级抗体,用SAB法对Wistar系大鼠(n=7)皮肤进行染色并用光学显微镜观察。结果观察到含有CGRP和SP的神经纤维与血管(毛细血管和中小血管)及淋巴管(毛细淋巴管和中小淋巴管)紧邻走行。     

麻杏石甘汤对流感病毒肺部感染模型肺组织TLR2/4-MyD88信号通路蛋白表达的影响

目的:从肺组织TLR2/4-MyD88信号通路蛋白表达水平探索麻杏石甘汤抗流感病毒效应机制.方法:经鼻腔接种建立流感病毒肺部感染模型,设正常对照组、模型对照组、奥司他韦组、抗病毒口服液组、麻杏石甘汤组.各治疗组经灌胃给药3、7d,常规法检测肺指数、肺指数抑制率;HE染色法观察肺组织的病理变化;免疫组织化学法和免疫印迹法...     

人参皂苷Rg3诱导淋巴管内皮细胞凋亡作用的研究

目的：探讨人参皂苷Rg3（20（R）-Ginsenoside Rg3）对淋巴管内皮细胞的抑制效应及凋亡诱导作用。方法：取健康猪的胸导管内皮细胞进行分离、培养;VIII因子对淋巴管内皮细胞进行鉴定。用含不同浓度人参皂苷Rg3处理淋巴管内皮细胞,采用MTT法检测药物对细胞的抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态学改变;Hoechst 33258荧光染色检测淋巴管内皮细胞凋亡。结果：经VIII因子对培养的淋巴管细胞进行鉴定,为典型淋巴管内皮细胞。随着药物浓度的升高,作用时间的延长,人参皂苷Rg3对淋巴管内皮细胞的生长抑制率逐渐增高;在人参皂苷Rg3作用下,淋巴管内皮细胞呈凋亡改变,出现凋亡小体。结论：人参皂苷Rg3能诱导淋巴管内皮细胞凋亡,抑制淋巴管内皮细胞增殖。     

补肾泻肝汤对大鼠前列腺组织SnoN蛋白表达的影响

目的：观察补肾泻肝汤对实验性大鼠前列腺增生组织SnoN蛋白表达的影响及探讨SnoN蛋白表达在前列腺增生中的作用。方法：去势加丙酸睾酮注射法复制大鼠前列腺增生模型,免疫组织化学法检测大鼠前列腺增生组织及正常前列腺组织SnoN蛋白的表达。结果：模型组大鼠前列腺组织SnoN表达水平升高,与正常前列腺组织及补肾泻肝汤组阳性表达率比较,差别有显著意义（P〈0.05）。结论：SnoN参与了前列腺增生的病理过程,补肾泻肝汤对前列腺增生组织SnoN表达的改变有调节作用。     

仙甲汤对前列腺增生大鼠前列腺组织bcl-2及bax表达影响的研究

目的　观察实验性前列腺增生大鼠前列腺组织bcl- 2及bax的表达及仙甲汤对其的影响。方法　去势加丙酸睾酮注射法复制大鼠前列腺增生模型 ,采用免疫组织化学法检测各组大鼠前列腺组织bcl- 2及bax的表达。结果　bcl- 2表达率模型组显著高于正常组 (P <0 .0 5 ) ,bax表达率模型组显著低于正常组 (P <0 .0 5 ) ;仙甲汤中剂量组、高剂量组及癃闭舒组的bcl- 2 ,bax表达率均接近正常组 (P均 >0 .0 5 )。结论　模型大鼠前列腺组织bcl- 2和bax调控失衡 ,仙甲汤可通过调节凋亡基因的平衡而起到抑制前列腺增生的作用     

免疫组织化学法检测结直肠癌四种DNA错配修复蛋白表达缺失对判断肿瘤微卫星状态的价值

目的分析免疫组织化学法检测结直肠癌四种DNA错配修复蛋白表达缺失在肿瘤微卫星状态判断中的价值。方法选择云南省红河州第三人民医院2018年9月~2019年9月收治的37例结直肠癌患者,对其病灶组织行切片处理,所有患者先行免疫组织化学法检测,后行PCR-毛细管电泳法检测,观察两种方式的诊断结果。结果常规切片免疫组织化学法检测结果:31例患者四种MMR蛋白呈现出弥漫强阳性表达,5例患者至少存在一种蛋白阴性表达,1例患者至少存在一种蛋白局灶阳性表达。组织芯片PCR-毛细管电泳法检测结果:30例患者四种MMR蛋白呈现出弥漫强阳性表达,6例患者至少存在一种蛋白阴性表达,1例患者至少存在一种蛋白局灶阳性表达。两种检测方式准确度、敏感度及特异度未有明显的组间差异(P>0.05)。结论通过免疫组织化学法检测结直肠癌四种DNA蛋白表达情况,在结直肠癌肿瘤微卫星状态的预测中敏感度和特异度较高,且具有一定的经济性,可有效筛选出结直肠癌,其较高的准确性能对优化治疗方案有关键作用。     

仙甲汤对实验性前列腺增生大鼠前列腺组织FAS蛋白表达的影响

目的观察实验性前列腺增生大鼠前列腺组织FAS蛋白的表达及仙甲汤对其影响。方法90只大鼠随机分为正常组、对照组、癃闭舒组、仙甲汤低、中、高剂量组各15只,应用去势加丙酸睾酮注射法复制大鼠前列腺增生模型,采用免疫组织化学法检测大鼠前列腺组织FAS蛋白的表达。结果模型组大鼠前列腺组织FAS蛋白阳性表达率显著低于正常组(P<0.01),仙甲汤高剂量组与正常组比较无显著性差异(P>0.05)。结论FAS蛋白表达减少导致前列腺细胞凋亡减少,是引起前列腺增生的重要因素之一,仙甲汤可通过调节FAS表达以抑制前列腺增生。     

蒲公英超微细粉体特性探讨

目的 :对蒲公英超微细粉体组织特征和有效成分溶出特性进行观察。方法 :显微观察法、薄层色谱法。结果与结论 :蒲公英经超微粉碎后 ,显微镜下观察基本无完整细胞存在 ;其有效成分溶出特性有明显改变。     

仙甲汤对实验性前列腺增生大鼠前列腺组织FAS蛋白表达的影响

目的观察实验性前列腺增生大鼠前列腺组织FAS蛋白的表达及仙甲汤对其影响。方法90只大鼠随机分为正常组、对照组、癃闭舒组、仙甲汤低、中、高剂量组各15只，应用去势加丙酸睾酮注射法复制大鼠前列腺增生模型，采用免疫组织化学法检测大鼠前列腺组织FAS蛋白的表达。结果模型组大鼠前列腺组织FAS蛋白阳性表达率显著低于正常组（P〈0．01），仙甲汤高剂量组与正常组比较无显著性差异（P〉0．05）。结论FAS蛋白表达减少导致前列腺细胞凋亡减少，是引起前列腺增生的重要因素之一，仙甲汤可通过调节FAS表达以抑制前列腺增生。     

针刺、穴位注射治疗脑干出血后遗症验案1例

目的:应用A、B两组针刺和药物穴位注射法轮换治疗重症脑干出血后遗症.方法:单日用A组针刺、药物穴位注射法,上午用头针(留针)、体针、电针法,下午用“醒脑开窍“针刺法、A组药物穴位注射法.双日用B组针刺、药物穴位注射法,上午用头针(留针)、体针、电针法,下午用“醒脑开窍“针刺法、B组药物穴位注射法,如此轮换治疗.结果:经上述A、B两组针刺和药物穴位注射法轮换治疗93天,诸症显著好转.结论:本法治疗1例重症脑干出血后遗症,获显著疗效,值得临床试用.     

补肾泻肝汤对前列腺组织Smad2、Smad4表达的影响

目的:观察补肾泻肝汤对实验性大鼠前列腺增生组织Smad2和Smad4表达的影响及意义。方法:去势加丙酸睾酮注射法复制大鼠前列腺增生模型,免疫组织化学法检测大鼠前列腺增生组织及正常前列腺组织Smad2和Smad4的表达。结果:模型组大鼠前列腺组织Smad2和Smad4表达水平均下调,不论Smad2还是Smad4,其在前列腺增生组织中的阳性表达率与正常前列腺组织及补肾泻肝汤组阳性表达率比较,差别有显著意义(P0.05)。结论:Smad2和Smad4参与了前列腺增生的病理过程,补肾泻肝汤对前列腺增生组织Smad2和Smad4表达的改变有调节作用。     

疏肝解郁法对老年性痴呆模型神经细胞凋亡的机理研究

目的:观察疏肝解郁法对β-淀粉样多肽25-35片段(Aβ25-35)联合D-半乳糖诱导的老年性痴呆(AD)模型大鼠神经细胞凋亡的影响,探讨其作用机制与内质网应激的关系.方法:双侧海马内一次性注射Aβ25-35,联合长期颈部皮下注射D-半乳糖制作大鼠AD动物模型.TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组织化学法检测大鼠脑组织内质网应激相关凋亡通路标志蛋白CHOP的表达情况,自动图像分析系统计数阳性细胞及平均灰度值.结果:疏肝解郁法组大鼠CHOP蛋白表达水平较模型组有明显降低,神经细胞凋亡数目明显减少.结论:疏肝解郁法对老年性痴呆模型大鼠神经细胞凋亡具有明显改善作用,其作用机制可能与阻断内质网应激细胞凋亡信号通路相关.     

3方治疗颈肌痉挛性疼痛108例

目的 :观察中药外敷法、针刺疗法、穴位注射法治疗颈肌痉挛性疼痛的疗效。方法 :1 0 8例患者随机分为 3组 ,每组 36例 ,分别施以中药外敷法 :方药为自拟麻沸散 (川乌、生半夏、马钱子、威灵仙等 ) ;针刺疗法 :取穴风池 (双 )、患侧天宗、曲池等穴 ;穴位注射法 :穴位同针刺组 ,药物为利多卡因、维生素 B1、地塞米松。结果 :3组治疗结果各有所长。穴位注射法即时控制症状疗效最佳 ,但复发率高 ,其他两种方法控制复发较好。提示 :在急性期应该用穴位注射法 ,在缓解期配合另外两种方法 ,可取得更好效果。     

电针对帕金森病模型大鼠黑质TNF-α、IL-1β表达的影响

目的:探讨电针治疗帕金森病(PD)的作用机制.方法:取SD大鼠50只,随机分为正常组、假手术组、模型组和电针组.电针组针刺“风府”“太冲”,每日1次,共治疗2周,其它组不予治疗干预.以6-羟基多巴胺制备PD大鼠模型.采用免疫组织化学法观察黑质酪氨酸羟化酶(TH)、肿瘤坏死因子α( TNF-α)和白细胞介素1 β(IL-...     

小型猪经脉不通病理模型的宏观定量观察法

目的:建立小型猪经脉不通病理模型的宏观定量观察法,为中医理论的实验研究提供新途径。方法:使用凝胶注射法堵塞小型猪的胃经和肾经低流阻通道,制造经脉不通病理模型,测量造模前后小型猪24 h的饮水量、粪便湿重、干重和尿量,测量造模前后第52天的体质量和体尺以及造模后第52天的牙齿尺寸与个数,测量各脏器的最大面积和质量。在上述数据基础上,计算粪便含水量、脏器系数、脏器面积系数和肠长度系数。结果:获得上述指标的定量数据,初步建立了小型猪的宏观定量观察法。结论:使用该方法观察小型猪经脉不通病理模型具有可行性。     

大鼠“太冲”“涌泉”穴皮肤组织中淋巴管的显微结构研究

目的:通过观察大鼠"太冲""涌泉"穴皮肤组织中淋巴管的显微结构,探讨研究腧穴相关组织学特征的新方法。方法:将正常SD大鼠经4%多聚甲醛心脏灌流固定后,取下包含"太冲"和"涌泉"在内的5 mm×3 mm皮肤组织并进行后固定和脱水,用冰冻切片机制成30μm厚的矢状或平展组织切片,再以淋巴管内皮透明质酸酶受体1(LYVE-1)、鬼笔环肽(phalloidin)和降钙素基因相关肽(CGRP)对组织切片中的淋巴管、血管和神经纤维进行荧光免疫组织化学标记,最后使用荧光显微镜以及激光共聚焦显微镜对组织标本进行观察和记录。结果:在"太冲"和"涌泉"的皮肤组织中,标记的毛细淋巴管、毛细血管和神经纤维结构清晰,三者对比鲜明。其中毛细淋巴管起始于膨大的盲端,以多种形态分布在真皮和皮下组织,纵横交错;毛细淋巴管周围分布着大量粗细不等的毛细血管,与其伴行或交叉而过,在毛细淋巴管和毛细血管之间有游离的神经纤维分布。结论:本研究从组织学角度表明毛细淋巴管与周围的毛细血管和神经纤维一起广泛分布在"太冲"和"涌泉"的皮肤组织中。虽然毛细淋巴管的分布并不局限在穴区,但为以后进一步研究针灸可能通过穴区存在的毛细淋巴管来发挥免疫调节作用提供了组织结构依据。