雄性糖尿病大鼠海马神经元凋亡及其相关蛋白表达的改变

目的：观察糖尿病（DM）大鼠海马神经元凋亡及其周期和相关蛋白的改变。 方法：链脲佐菌素（STZ）腹腔注射诱导DM大鼠模型,12周末通过流式细胞术检测其海马神经元凋亡,碘化丙啶（PI）单染检测其周期,罗丹明123染色检测其线粒体膜电位,免疫组化法检测其细胞色素c（Cyt c）和caspase-3蛋白表达。 结果：DM大鼠出现明显的多饮、多食、多尿及体重减轻现象。给药12 周末,与正常对照组相比,其海马神经元凋亡率显著增加（P<0.05）,G₀/G₁期细胞百分率显著增高（P<0.01）,即出现明显的G₀/G₁期阻滞,S期细胞显 著减少（P<0.05）;线粒体膜电位显著增高（P<0.05）;caspase-3和Cyt c蛋白表达均显著 增高（P<0.05）。 结论：上述参数的改变可能与DM所致胰岛素缺乏相关,进而引起海马结构的改变和认知功能的障碍。     

糖尿病脑病海马神经元凋亡的实验研究

目的 检测糖尿病大鼠学习与记忆成绩及海马神经元凋亡情况，探讨糖尿病对学习与记忆影响的机制。方法 Wistar大鼠共24只，随机分成2组，对照组12只，糖尿病组12只，糖尿病组用链脲服佐菌素（STZ）制模，满12周后，用Y-迷宫检测大鼠学习与记忆成绩，处死动物取脑，应用TUNEL法、HE染色及图像分析技术对大鼠海马进行观察。结果 糖尿病组大鼠学习成绩降低（P〈0．05），海马神经元数目较正常组减少（P〈0．05），并出现TUNEL法阳性细胞。结论 海马神经元凋亡可能是糖尿病大鼠学习与记忆障碍的机制之一．     

血管性痴呆大鼠海马神经元凋亡和蛋白表达实验研究

目的观察血管性痴呆(vascular dementia,VaD)大鼠海马CA1区神经元凋亡和bcl-2及Bax蛋白表达,探讨其在VaD发病过程中的作用。方法制备VaD大鼠模型,分别在造模后第7、14、21天用TUNEL法检测海马CA1区神经元凋亡,用免疫组织化学法检测其bcl-2及Bax蛋白表达。结果模型组大鼠海马CA1区可见大量凋亡神经元,14d时凋亡神经元达高峰,21d时仍有大量神经元凋亡。模型组bcl-2蛋白在7和21d时表达增加,14d时表达高峰,与正常组比较差异均有显著意义(P<0.01);模型组Bax蛋白表达在7d时达高峰,14d时开始下降,与正常组比较差异仍有显著性意义(P<0.01),至21d表达与正常组比较差异无显著性(P>0.05)。结论海马CA1区神经元的大量凋亡丢失,可能是脑卒中后发生VaD的病理基础;在脑卒中早期,从分子水平抑制Bax蛋白表达、促进bcl-2蛋白表达可能是阻抑神经元凋亡、避免脑卒中后VaD发病的最佳途径之一。     

低温复合丙泊酚对大鼠海马神经元凋亡蛋白表达及超微结构变化的影响

目的 观察低温复合丙泊酚对大鼠海马神经元凋亡蛋白Caspase-3、自噬相关蛋白Beclin 1和LC3-Ⅱ及其神经元超微结构变化的影响,探讨丙泊酚对低温所致大鼠海马神经元自噬与凋亡的干预作用.方法 将大鼠分为空白对照组(A组)、低温丙泊酚组(B组)和低温水合氯醛组(C组),B、C两组低温干预30 min,各组进行心脏灌注,断头取脑,制备大鼠海马神经元组织标本,用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Caspase-3的表达,用Western blot检测Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白的表达,透射电镜观察神经元超微结构的变化.结果 3组Caspase-3、Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白的水平差异有统计学意义(P＜0.05);透射电镜结果显示B、C组大鼠海马区神经元均有不同程度的改变,尤其是C组神经细胞凋亡现象明显.结论 低温状态下海马神经元仍有一定的自噬与凋亡现象,而丙泊酚则可减少这种损害,具有较好的神经元保护作用.     

高原环境对大鼠海马神经元凋亡的影响

目的:观察高原低氧应激对大鼠海马神经元凋亡的影响.方法:将Wistar大鼠随机分为3组,即平原对照组(山东菏泽,海拔50 m)、高原实验Ⅰ组(青海玉树结古镇,海拔3 700 m)、高原实验Ⅱ组(青海玉树治多县,海拔4 950 m),在不同海拔高度生活4 h后,取大鼠海马,应用流式细胞仪检测海马神经元凋亡率.结果:暴露于高原后的大鼠海马神经元凋亡率明显高于平原对照组,且随海拔的增加而明显升高.结论:高原低氧应激可诱导海马神经元凋亡.     

腹腔注射利血平对大鼠海马神经元凋亡的影响

目的：研究利血平导致的行为性抑郁大鼠海马神经细胞凋亡与神经元数量的改变。方法：腹腔注射利血平（4mg／kg）复制大鼠的行为性抑郁模型,用自发活动检测大鼠的行为性抑郁,以TUNEL法检测海马神经元凋亡,用尼氏染色观察海马神经元数量。结果：腹腔注射利血平48h后大鼠出现行为性抑郁。利血平可导致大鼠海马CA1区（P〈0．01）、CA3区（P〈0．05）和齿状回神经元（P〈0．001）数量减少,同时检测到此三个区域神经元凋亡的增加（CA1区P〈0．01,CA3区P〈0．001,齿状回区P〈0．001）。结论：利血平诱导的行为性抑郁大鼠可出现海马神经元数量减少,海马神经元凋亡增加是其原因之一。     

胰岛素对糖尿病认知功能障碍大鼠海马InsR表达的影响

目的检测海马胰岛素受体(insulin receptor,InsR)表达的变化,探讨InsR的表达对糖尿病大鼠认知功能的影响以及胰岛素的干预效果。方法成年健康雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠36只,随机分为3组:糖尿病组(12只)、胰岛素干预组(12只)及对照组(12只),每组再均分为1、3个月组。应用单次腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)的方法制作糖尿病模型。对照组给予单次腹腔注射柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液,血糖正常。所有大鼠每周2个固定时间点测血糖。胰岛素干预组大鼠每日皮下注射2~3 U低精蛋白锌胰岛素,根据血糖情况调整用量,保证空腹血糖处于正常范围。于1、3个月分批行Morris水迷宫实验评估认知功能水平后处死,取脑、切片,行免疫组织化学染色,观察各组大鼠海马InsR表达的变化。结果糖尿病1个月组大鼠,逃避潜伏期延长,脑内InsR表达减少,与对照组比较,差异均有显著性意义(P<0.05)。糖尿病3个月组大鼠,逃避潜伏期延长明显,海马InsR表达减少明显,与糖尿病1个月组比较,差异均有显著性意义(P<0.05)。胰岛素干预1个月组,与对照组比较,逃避潜伏期略延长,海马InsR表达减少,差异均无显著性意义;与糖尿病1个月组比较,逃避潜伏期缩短,海马InsR表达增加,差异均有显著性意义(P<0.05)。胰岛素干预3个月组与干预1个月组比较,逃避潜伏期延长,海马InsR表达减少明显,差异均有显著性意义(P<0.05);与糖尿病3个月组比较,逃避潜伏期、InsR表达差异均无明显。结论 InsR表达减少是糖尿病认知功能障碍的原因之一;早期应用胰岛素干预可以延缓认知功能损害,具体机制需进一步探讨。     

慢性应激对大鼠行为及海马各区神经元凋亡的影响

应激是机体对内外环境刺激的反应 ,对机体既有有利的一面 ,如 :动员机体非特异性适应系统 ,提高机体对内外环境干扰因素的抵抗 ,提高机体的免疫能力 ;也有不利的一面 ,如反应不适当会导致不同程度的心理生理障碍 ,甚至引起严重的躯体疾病。海马是介导应激反应的最重要的脑区之一 ,是应激激素作用的主要脑区[1] 。海马既能调节应激反应 ,又受到应激反应的影响。研究发现急性应激时海马结构和功能无明显影响 ,但慢性应激可引起海马结构及功能的损害 ,最终诱发抑郁症。试验参照Katz[2 ] 等使大鼠连续三周处于应激状态 ,研究慢性应激对大鼠行为…     

神经生长因子对新生大鼠HIBD后海马区凋亡相关蛋白表达的影响

目的:应用新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型,观察神经生长因子对海马区细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2和Bax的影响,探讨其神经保护作用的分子生物学机制. 方法:72只大鼠随机分为对照组、HIBD组和NGF治疗组. 应用改良RICE法制作大鼠HIBD模型,TUNEL法检测各组动物海马区细胞凋亡数,免疫组化染色观察Bcl-2, Bax蛋白的表达. 结果:与假手术组相比,新生大鼠HIBD后海马区存在不同程度的细胞凋亡,Bcl-2表达轻度升高,Bax表达明显升高. 与HIBD组比较,NGF治疗后,凋亡细胞减少(P＜0.01),Bcl-2蛋白表达升高(P＜0.01),Bax表达下降(P＜0.01). 结论:HIBD后,新生大鼠海马区细胞存在细胞凋亡,NGF治疗增强Bcl-2表达,减少损伤基因Bax表达,抑制细胞凋亡,具有脑保护作用.     

慢性应激对大鼠行为及海马各区神经元凋亡的影响

应激是机体对内外环境刺激的反应,对机体既有有利的一面,如:动员机体非特异性适应系统,提高机体对内外环境干扰因素的抵抗,提高机体的免疫能力;也有不利的一面,如反应不适当会导致不同程度的心理生理障碍,甚至引起严重的躯体疾病.海马是介导应激反应的最重要的脑区之一,是应激激素作用的主要脑区[1].海马既能调节应激反应,又受到应激反应的影响.研究发现急性应激时海马结构和功能无明显影响,但慢性应激可引起海马结构及功能的损害,最终诱发抑郁症.试验参照Katz[2]等使大鼠连续三周处于应激状态,研究慢性应激对大鼠行为及海马不同区域神经元细胞凋亡的影响.     

丙泊酚对糖尿病大鼠海马组织蛋白质表达影响的蛋白组学研究

目的采用蛋白组学方法研究丙泊酚对2型糖尿病Goto-Kakizaki(GK)大鼠海马组织蛋白质表达的影响。方法将清洁级GK大鼠随机分为对照组(n=12)、丙泊酚麻醉组(n=12)和参数组(n=5),丙泊酚组和参数组腹腔注射丙泊酚100 mg/kg,在1 h和2 h后追加剂量50 mg/kg,维持麻醉3 h,对照组采用同样方法给予等体积生理盐水。丙泊酚组分别在麻醉结束后3、24、72 h和1周4个时间点随机选取3只大鼠,取海马组织,双向电泳法分离蛋白后进行凝胶扫描和图像分析,与相应时间点的对照组进行比较,选取4倍差异点进行质谱分析。观察参数组丙泊酚给药后0.5、1.5和2.5 h时间点血气分析指标的变化。结果与对照组相比,丙泊酚组麻醉后3 h发现7个蛋白点下调,24 h有3个蛋白点下调,72 h有2个蛋白点下调,1周则出现2个蛋白点上调,经质谱鉴定发现14个差异表达蛋白,涉及氧化还原、能量代谢、突触信息传递、细胞骨架和运动、细胞凋亡等生物学过程。血气分析指标监测结果显示:参数组丙泊酚给药后0.5 h与2.5 h时点的pH值和氧分压(PaO2)比较差异有统计学意义(P<0.05),但均在正常生理指标范围内。结论丙...     

黄芪联合胰岛素对糖尿病大鼠胰岛素抵抗的作用及其机制

［摘 要］ 目的:探讨黄芪联合胰岛素对糖尿病大鼠胰岛素抵抗的作用,并阐明其作用机制。方法:链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病大鼠模型,将诱导成功的糖尿病大鼠随机分为模型组(DM)、黄芪组(RA)、黄芪联合胰岛素组（RA+Ins）和胰岛素组(Ins),同时设立正常大鼠为对照组（Control）。对照组和DM组大鼠无任何处理因素;RA组大鼠给予每日黄芪灌胃;Ins组大鼠每日胰岛素注射;RA+Ins组大鼠给予黄芪灌胃和胰岛素注射。8周后测定大鼠空腹血糖(FBG)值和空腹胰岛素(FINS)水平。腹主动脉取血,检测大鼠血清丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活力、肿瘤坏死因子α（TNF-α）含量及大鼠骨骼肌胰岛素受体底物-1（IRS-1）和p38MAPK的表达水平。结果：DM组、RA组、Ins组和RA+Ins组大鼠FBG水平显著高于对照组（P<0.05）,RA组、Ins组和RA+Ins组大鼠FBG水平显著低于DM组（P<0.05）,Ins组和RA+Ins组大鼠FBG水平显著低于RA组（P<0.05）,并且RA+Ins组大鼠FBG水平高于Ins组（P<0.05）。Ins组、RA+Ins组大鼠FINS水平显著高于对照组、DM组和RA组（P<0.01）,RA+Ins组大鼠FINS水平显著低于Ins组（P<0.01）。DM组、RA组、Ins组和RA+Ins组大鼠血清MDA含量显著高于对照组（P<0.05）,RA组、Ins组和RA+Ins组大鼠血清MDA含量明显低于DM组（P<0.05),RA组和Ins组大鼠血清MDA含量明显高于RA+Ins组（P<0.05）。DM组、RA组、Ins组和RA+Ins组大鼠SOD活力显著低于对照组（P<0.05）,RA组、Ins组和RA+Ins组大鼠血清SOD活力显著高于DM组（P<0.05),RA组和Ins组大鼠血清SOD活力显著低于RA+Ins组（P<0.05）。DM组、RA组、Ins组和RA+Ins组大鼠血清TNF-α含量显著高于对照组（P<0.05）,RA组、Ins组和RA+Ins组大鼠血清TNF-α含量明显低于DM组（P<0.05）,RA+Ins组大鼠血清TNF-α含量明显低于RA组和Ins组（P<0.05)。DM组、RA组、Ins组和RA+Ins组大鼠IRS-1表达低于对照组（P<0.05）,RA+Ins组大鼠IRS-1表达高于DM组、RA组和Ins组（P<0.05)。DM组、RA组、Ins组和RA+Ins组大鼠p38MAPK表达高于对照组（P<0.05),RA+Ins组大鼠p38MAPK表达低于DM组、RA组和Ins组（P<0.05)。结论：黄芪联合胰岛素明显改善了糖尿病大鼠氧化应激及胰岛素抵抗状态,并且疗效优于单纯胰岛素的应用。     

短期胰岛素治疗对糖尿病大鼠内脏脂肪抵抗素mRNA表达的影响

目的观察短期胰岛素治疗后糖尿病(DM)大鼠内脏脂肪组织抵抗素(resistin)mRNA表达及血清抵抗素水平的变化。方法采用小剂量链脲佐菌素(STZ)注射联合高糖高脂饲料喂养制备糖尿病大鼠模型,予胰岛素控制部分糖尿病大鼠血糖,设立空白对照组、血糖未控制组、血糖控制组。分别检测3组大鼠血清抵抗素水平及内脏脂肪组织抵抗素mRNA的表达;观察3组大鼠血清抵抗素、游离脂肪酸(FFA)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)水平及内脏脂肪抵抗素mRNA表达的变化。结果与空白对照组比较,血糖未控制组大鼠血清抵抗素及内脏脂肪组织抵抗素mRNA的表达显著增高[(696.23±187.77)vs(538.31±142.14);(62.26±25.79)vs(10.15±12.13),P<0.05];与血糖控制组大鼠比较,血糖未控制组大鼠内脏脂肪组织抵抗素mRNA的表达亦显著增高[(62.26±25.79)vs(10.45±2.99),P<0.05]。血糖控制组大鼠FFA较血糖未控制组大鼠FFA水平显著降低[(0.53±0.16)vs(0.73±0.19),P<0.05],而TC水平显著增高[(1.92±0.16)vs(1.22±0.38),P<0.05]。结论短期的胰岛素治疗能降低糖尿病大鼠内脏脂肪组织抵抗素mRNA的表达,可能与血糖控制后胰岛素抵抗改善及胰岛素负调节抵抗素mRNA表达有关。     

胰岛素对糖尿病大鼠认知功能及脑星形胶质细胞GFAP表达的影响

[目的]观察胰岛素治疗糖尿病大鼠不同时期的空间学习能力变化及脑星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达,探讨胰岛素对大鼠认知功能的影响.[方法]健康成年雄性SD大鼠52只等量随机分入1个月组与3个月组.每组动物再随机分入糖尿病组(10只)、胰岛素组(10只)与对照组(6只).糖尿病组与胰岛素组以链脲佐菌素( STZ)腹腔注射制备大鼠糖尿病模型;胰岛素组根据血糖水平注射胰岛素.建模成功后分别于1与3个月用Morris水迷宫实验测试大鼠空间学习能力,而后处死,免疫组化法检测海马、尾壳核及脑室旁白质星形胶质细胞GFAP表达情况.[结果]逃避潜伏期在糖尿病组1与3个月时均较对照组延长(P＜0.05);与糖尿病组相比,胰岛素组在1个月时缩短(P＜0.05),但3个月时无明显差异.GFAP表达在糖尿病组1个月时尾壳核区、海马区增多(P＜0.05),3个月时各脑区均增多(P＜0.05);与糖尿病组相比,胰岛素组在1个月时尾壳核区、海马区表达减少(P＜0.05),但3个月时各脑区均无明显差异.[结论]随着糖尿病病程进展大鼠认知功能损害逐渐加重,同时伴星形胶质细胞反应性增生;胰岛素治疗可适当延缓糖尿病认知功能损害出现时间,但不能阻止其发生.     

强化治疗对初诊糖尿病患者炎性因子的影响

目的:观察胰岛素每日多点注射(MDI)和持续皮下胰岛素输注(CSII)对初诊断2型糖尿病患者体内C反应蛋白(CRP)和细胞间黏附因子-1(ICAM-1)的影响。方法:将38名初诊的2型糖尿病患者随机分为两组,分别进行CSII和MDI方案强化治疗1个月,采用酶联免疫法分别测定比较治疗前后两组CRP和ICAM-1水平。结果:初诊的2型糖尿病患者采用CSII和MDI方案强化治疗后,CRP水平均显著降低,由治疗前2044.82±1801.93ng/ml、3167.73±1960.00ng/ml分别下降为1540.49±1205.29ng/ml、2014.10±1600.40ng/ml,但两组间比较无统计学差异;治疗后,两组ICAM-1水平均有下降趋势,但都无统计学意义。结论:初诊断的2型糖尿病患者采用两种强化治疗方案均可在良好控制血糖的同时有效降低CRP水平。     

血糖波动对糖尿病大鼠胰岛素释放和胰岛素敏感性的影响

目的:观察血糖波动对糖尿病大鼠胰岛素释放和胰岛素敏感性的影响.方法:GK大鼠22只,随机分为糖尿病高血糖组、糖尿病血糖波动组,Wistar大鼠11只作为正常对照组,进行葡萄糖耐量实验(IPGTT)及在体胰岛分离后体外葡萄糖刺激下胰岛素释放实验(GSIS),并检测胰岛素相关基因的表达,以了解β细胞的胰岛素释放功能,进行胰岛素耐量试验以检测胰岛素敏感性的情况.结果:实验6周后血糖波动组和持续高血糖组体重无统计学差异.血糖波动组空腹血糖,糖负荷后15、30、60、120 min血糖,糖曲线下面积(AUCG)均高于持续高血糖组(P均<0.05).在体胰岛分离后体外葡萄糖刺激下胰岛素释放指数明显低于持续高血糖组(P均<0.05).血糖波动组胰岛素基因ins-1、ins-2和pdx-1表达及胰岛素敏感性较持续高血糖组显著降低(P均<0.05).结论:血糖波动使GK大鼠胰岛素释放功能降低并且胰岛素相关基因表达减少可能是胰岛素释放减少的原因之一,血糖波动使胰岛素敏感性降低.     

卡托普利对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的:探讨血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)卡托普利对糖尿病(DM)大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响。方法:成年雄性SD大鼠30只,随机分为正常对照组(NC组)、DM组、卡托普利治疗组(Cap组),每组10只。应用链脲佐菌素(STZ)诱导构建DM大鼠模型,Cap组每日灌胃给予卡托普利50 mg/kg,其余两组给予等容积的0.9%氯化钠溶液。用药12周后,原位缺口末端标记法(TUNEL法)检测计算心肌细胞凋亡指数(AI),Western blot法检测心肌Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达,透射电镜观察心肌超微结构变化。给药期间动态观察测定大鼠行为、体质量及血糖水平的改变。结果:与NC组相比,DM组大鼠心肌细胞AI明显升高,Bcl-2蛋白表达减少,Bax、Caspase-3蛋白表达增加;电镜示心肌细胞超微结构呈明显损伤性变化。与DM组相比,Cap组心肌细胞AI明显降低,Bcl-2蛋白表达增加,Bax、Caspase-3蛋白表达减少;超微结构损伤不同程度减轻。结论:卡托普利可能通过上调Bcl-2表达,下调Bax表达,减少Caspase-3依赖性的心肌细胞凋亡,从而起到保护DM大鼠心肌细胞的作用。     

帕立骨化醇上调糖尿病大鼠肾脏中胰岛素受体的表达

目的观察维生素D受体（VDR）激动剂-帕立骨化醇对糖尿病大鼠肾脏胰岛素受体表达的影响。方法 SD大鼠腹腔注射链脲菌素75 mg/kg建立糖尿病（DM）模型,将诱导成功的20只DM大鼠随机分为糖尿病组（DM组）、DM＋帕立骨化醇治疗组（DA组）。另设相配的10只SD大鼠为对照组（NC组）。第10周测体质量（BW）、收缩压（SBP）,空腹血糖（BG）、血肌酐（Cr）,24 h尿蛋白定量（24 h UP）及尿液足细胞（UPC）的排泄;RT-PCR检测肾组织nephrin、desmin、胰岛素受体α（IRα）的mRNA表达水平;Western boltting检测肾组织IRα蛋白和磷酸化蛋白激酶B（P-Akt）的表达水平。结果 DM组BG、Cr、24 h UP较NC组显著升高,BW显著降低,SBP、UPC无统计学差异。DM组nephrin mRNA、IRαmRNA及蛋白质,P-Akt蛋白质的表达较NC组显著降低;desmin mRNA的表达较NC组显著增加。帕立骨化醇降低DM大鼠的Cr、24 h UP,恢复肾组织nephrin、IRα、P-Akt的表达,抑制desmin的表达。结论帕立骨化醇上调nephrin并抑制desmin的表达,对足细胞起保护作用;改善胰岛素受体α的表达及磷酸化Akt水平,增强胰岛素信号通路,抑制高糖诱导的胰岛素对抗。