巯基乙酸对爪蟾卵母细胞体外核成熟的影响

背景与目的:探讨巯基乙酸(thioglycolic acid,TGA)对孕酮诱导的爪蟾卵母细胞核成熟的影响.材料与方法:用不同浓度的TGA(5、25、125 μg/ml)在体外预处理爪蟾卵母细胞2 h后,再用孕酮诱导成熟,实验并设不经TGA预处理的对照组.在培养过程中观察卵母细胞的外观和核形态,以判断生发泡破裂(GVBD)情况;在培养结束时(加入孕酮后8 h),收集卵母细胞进行荧光染色.观察染色体的状态. 结果:经不同浓度TGA处理后卵母细胞的GVBD50 明显缩短,与对照组比较均具有统计学意义(P均<0.05),说明TGA加快卵细胞GVBD的发生;荧光染色观察GV期卵母细胞未见凝集的染色体,第一次减数分裂中期细胞可见赤道板形成,第二次减数分裂中期细胞除染色体赤道板外,还可见第一极体(PB1).经25 mg/ml和125 mg/ml浓度的TGA处理后,排出PB1的爪蟾卵母细胞比例明显降低(P<0.05),即抑制了MI-MII转变和第一极体的释放.结论:TGA可抑制孕酮诱导的爪蟾卵母细胞体外成熟.     

巯基乙酸对爪蟾卵母细胞体外孤雌激活的影响及其机制研究

目的：探讨巯基乙酸（thioglycolic acid,TGA）对钙离子载体A23187诱导的非洲爪蟾卵母细胞体外孤雌激活的影响,探讨孤雌激活的机制。方法：体外孕酮诱导爪蟾卵母细胞成熟后,选取MII期细胞用不同浓度TGA（0、5、25、125μg/ml）处理2h,再用钙离子载体A23187诱导激活,在加入激活剂后不同时间（0、10、20、30、60min）记录激活的卵母细胞数量,计算其激活率;加入激活剂后60min收集卵母细胞,进行荧光染色观察原核形成情况;采用Western Blotting检测CyclinB2、Mos、p-ERK1/ERK1的表达。结果：不同浓度的TGA均降低非洲爪蟾卵母细胞的孤雌激活率,与对照组相比差异具有统计学意义（P〈0.05）;激活后对照组卵母细胞在动物极中央形成一个圆形的受精斑,而TGA125μg/ml处理后形成的受精斑形状不规则且周围毛糙不齐;荧光染色发现对照组细胞中有清晰的原核形成,而TGA处理组则未发现;WesternBlotting分析结果显示,经TGA处理可抑制CyclinB2、Mos、p-ERK1在孤雌激活时的降解。结论：TGA可以抑制钙离子载体A23187诱导的非洲爪蟾卵母细胞体外孤雌激活,其作用机制可能与干扰成熟促进因子（MPF）和丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）在孤雌激活时的正常降解有关。     

芹菜素对非洲爪蟾卵母细胞体外成熟的影响及其作用机制

目的： 探讨不同浓度的芹菜素对非洲爪蟾卵母细胞体外成熟的影响及作用机制。方法：将健康的非洲爪蟾卵母细胞移入含不同浓度 (0、20、80、160和500 μmol/L)的芹菜素培养液中培养,另设阳性对照 (孕酮5 μg/mL)组。每隔1 h观察生发泡破裂 (germinal vesicle breakdown,GVBD)发生情况、并记录发生GVBD的细胞数目;同时用10%的三氯乙酸固定,观察细胞核的变化;采用荧光染色法在激光共聚焦显微镜下观察细胞染色体的变化。收集上述各浓度芹菜素处理8 h后的卵母细胞,采用Western blot法检测卵母细胞成熟相关蛋白p-Erk1、Mos和CyclinB2的表达。结果：与阴性对照组相比,当芹菜素浓度为80~500 μmol/L且作用时间在4~8 h时,卵母细胞GVBD发生率均明显升高 (P均<0.05)。在80~500 μmol/L芹菜素处理细胞8 h后,p-Erk1、Mos和CyclinB2蛋白表达量明显高于阴性对照组 (P<0.05)。结论：芹菜素在卵母细胞体外培养过程中促进了第1次减数分裂的开启,其机制可能与MPF和MAPK信号通路的活化有关。     

巯基乙酸对小鼠成熟卵母细胞皮质颗粒分布和MAPK活性的影响

背景与目的:探讨巯基乙酸(thioglycolic acid ,TGA)对小鼠卵母细胞胞浆成熟和相关生化指标的影响.材料与方法:以不同浓度TGA(0.2、1.0、2.5 mmol/L)体外培养小鼠卵母细胞,并设M16培养液对照组,培养16 h后在体视显微镜下,观测卵母细胞生发泡破裂和第一极体排出情况,用免疫荧光染色方法对皮质颗粒(cortical granules,CGs)进行标记,采用western blot方法对p44/42MAPK进行检测.结果:各组生发泡破裂率均达到90%左右,各组间差异无统计学意义(P＞0.05).随着TGA剂量的增加,第一极体排出率下降,各剂量组和对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).各剂量组均可观察到CGs在细胞膜下的线状排列,但随着TGA吼剂量的增加,质膜下CGs的密度降低,胞浆中CGs的密度有增加的趋势.对照组卵母细胞中有非常明显的无皮质颗粒区(cortical granules free domain,CGFD)形成,0.2 mmol/L组也形成了CGFD,但1.0 matol/L和2.5 mmol/L两个剂量组未观察到CGFD.1.0 mmol/L和2.5mmol/L TGA可抑制p44/42MAPK的活化.结论:TGA可影响小鼠卵母细胞细胞质成熟和MAPK的活性,具有一定的生殖毒性.     

雷帕霉素对人淋巴瘤Raji细胞株增殖影响及其机制的探讨

目的:探讨雷帕霉素(宜欣可)对人淋巴瘤细胞株Raji细胞体外增殖及细胞周期的影响,并分析其分子作用机制.方法:采用MTT法检测不同浓度(0、1、5、10、20、40、50和100 nmol/L)雷帕霉素作用不同时间(24、48和72 h)对Raji细胞增殖的影响.用流式细胞仪测定雷帕霉素对Raji细胞周期分布和凋亡的影响.应用蛋白质印迹法检测雷帕霉素对Raji细胞周期蛋白Cyclin D1、Cyclin E、Cyclin A和p27及凋亡蛋白抑制因子Survivin蛋白表达的影响.结果:雷帕霉素浓度＞5 nmol/L对Raji细胞增殖有明显的抑制作用(P＜0.05).且呈现明显的剂量-效应和时间-效应依赖关系.雷帕霉素处理后,可明显抑制Raji细胞周期发展(P＜0.05),随着药物浓度的加大、作用时间的延长,处于G0/G1期细胞逐渐增多,S期和G2/M期细胞则逐渐减少.但Raji细胞没有发生明显的凋亡现象(P＞0.05).50 nmol/L雷帕霉素处理后,Raji细胞的Cyclin D1、Cyclin E、p27表达水平没有明显变化(P＞0.05),但Cyclin A和Survivin表达水平被明显抑制(P＜0.05).结论:雷帕霉素通过阻滞细胞周期发展抑制Raji细胞增殖,其作用机制可能与下调细胞Cyclin A和Survivin表达有关.     

阿帕替尼调控WWOX对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其机制研究

目的:探讨阿帕替尼（Apatinib）是否通过包含氧化还原酶的WW结构域（WWOX）影响子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭。方法:噻唑蓝（MTT）比色法检测4 μmol/L、8 μmol/L、16 μmol/L、32 μmol/L Apatinib作用于子宫内膜癌细胞HEC-1 24 h、48 h、72 h后的细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、p21、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、WWOX蛋白水平,Transwell小室法检测迁移细胞数、侵袭细胞数。在HEC-1中转染pcDNA3.1-WWOX,或转染si-WWOX并用16 μmol/L Apatinib进行处理,采用上述方法评估细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭情况。结果:Apatinib明显降低HEC-1细胞活性（P＜0.05）,呈剂量、时间依赖性;Apatinib显著增加HEC-1细胞凋亡率及p21、Bax蛋白表达量（P＜0.05）,呈剂量依赖性;Apatinib明显降低Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达量（P＜0.05）,呈剂量依赖性;16 μmol/L Apatinib显著减少HEC-1细胞的迁移细胞数、侵袭细胞数、MMP-2蛋白表达量（P＜0.05）,明显提高E-cadherin、WWOX蛋白表达量（P＜0.05）。过表达WWOX明显降低HEC-1细胞中Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2蛋白表达量、细胞活性、迁移细胞数、侵袭细胞数（P＜0.05）,提高p21、Bax、E-cadherin、WWOX蛋白表达量及细胞凋亡率（P＜0.05）。抑制WWOX表达逆转了Apatinib对HEC-1细胞中Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2蛋白表达量、细胞活性、迁移、侵袭的抑制作用,以及逆转了其对p21、Bax、E-cadherin、WWOX蛋白表达量、细胞凋亡的促进作用。结论:阿帕替尼通过调控WWOX表达,抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移、侵袭,并诱导细胞凋亡。     

紫花牡荆素体外抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖的研究

背景与目的:紫花牡荆素(Casticin)是一种从蔓荆子中提取的具有广泛药理活性的多甲基黄酮化合物.有研究表明Casticin能诱导多种肿瘤细胞凋亡,但其对人宫颈癌细胞的作用尚缺乏文献资料.本研究旨在探讨Casticin抑制体外培养人宫颈癌HeLa细胞增殖作用及其机制.方法:MTT法检测Casticin对人宫颈癌HeLa细胞活性的抑制作用;平皿集落形成法检测Casticin对HeLa细胞集落形成率的影响;流式细胞术(FCM)检测Casticin对HeLa细胞周期的影响;采用Western blot分析蛋白表达的变化.结果:Casticin对人宫颈癌HeLa细胞增殖活性有较强的抑制作用,呈剂量和时间依赖性,作用48 h的IC50值为2.82 μ g/mL;与对照组比较,细胞集落形成率明显下降(P＜0.05);Casticin作用48 h,以浓度依赖方式阻滞HeLa细胞于G2/M期,同时降低Cyclin B1蛋白表达,增高P21蛋白表达.结论:Casticin抑制HeLa细胞的增殖作用可能与其降低Cyclin B1蛋白表达、活化P21蛋白有关.     

Effects of p38 MAPK signaling pathway on apoptosis stimulated by olaquindox in human hepatoma G2 cells

目的:研究p38 MAPK信号通路在喹乙醇诱导的HepG2细胞凋亡中的作用.方法:分别用不同浓度(0、200、400、800μg/ml)的喹乙醇染毒HepG2细胞24h和800μg/ml喹乙醇染毒HepG2细胞不同时间(0、0.5、1、2、4、6、12、24 h)后,采用Western blot法检测细胞内磷酸化p38蛋白和p38总蛋白的表达情况,以p38 MAPK磷酸化水平反映p38 MAPK信号通路的活性.分别采用0、10、20μmol/L的p38 MAPK特异性抑制剂SB203580预处理HepG2细胞1h后,再用800μg/ml喹乙醇染毒24h,采用Annexin VFITC/PI法检测细胞凋亡.结果:随着喹乙醇染毒浓度和时间的增加,HepG2细胞的p38磷酸化蛋白表达量逐步增加,其中800μg/ml喹乙醇染毒细胞24h的实验组与对照组相比,p38磷酸化蛋白的表达量明显上调(P＜0.01).10、20μmol/L的SB203580对喹乙醇诱导细胞凋亡有促进作用,细胞的凋亡率分别为35.4％±2.83％、40.2％±3.98％,较喹乙醇对照组(23.1％±3.59％)明显升高(P＜0.05).结论:喹乙醇能激活p38 MAPK信号通路,且p38 MAPK信号通路的激活参与抑制喹乙醇介导的HepG2细胞凋亡的过程.     

小鼠胃癌Cyclin G1和其它相关基因表达及凋亡研究

目的:探讨胃癌中Cyclin G1、Cyclin D、p21、p16、p53、bcl-2等基因的表达水平、细胞周期变化和凋亡情况.方法:建立胃癌模型;免疫组化法检测小鼠胃癌中Cyclin G1、Cyclin D、p21、p16、p53、bcl-2等基因蛋白表达,RT-PCR技术检测Cyclin G1mRNA的表达;流式细胞术检测小鼠胃癌细胞的凋亡率和细胞周期.结果:阳性组的CvclinG1、Cyclin D表达明显高于正常组和化疗组(P＜0.05),p16则相反;各组p21、bcl-2的表达无明显差异;阳性组p53的表达为阴性,而化疗组与正常组表达无明显差异(P＞0.05);阳性组中Cvclin G1mRNA的表达水平明显高于正常组和化疗组(P＜0.05);化疗组和阳性组的细胞凋亡率均较正常组增高(P＜0.05),且化疗组的凋亡率比阳性组明显增高(P＜0.01).结论:CyclinG1、Cyclin D高表达、p16低表达可能与胃癌的发生、发展有关.     

新型拓扑异构酶抑制剂抗肿瘤活性及其机制研究

目的 拓扑异构酶是近年来发现的多种肿瘤化疗的重要靶点,与肿瘤细胞的发生、增殖和发展密切相关.本研究分析两种新型拓扑酶抑制剂的体外抗肿瘤活性,并初步探讨其作用机制.方法 采用MTT法检测两种受试物对人肿瘤细胞增殖的抑制作用;质粒pBR322解旋反应检测抑制剂对TopoⅠ催化活性的影响,蛋白质印迹法检测细胞中Topo Ⅰ和TopoⅡ的蛋白表达变化;Hoechst 33258荧光染色、AO荧光染色、彗星实验和流式细胞术等方法观察两种受试物对HEp-2细胞凋亡和细胞周期的影响.结果 MTT法的结果显示,受试物1和2对9种人肿瘤细胞株均有显著的抗肿瘤活性(P＜0.05),并呈现浓度依赖性;受试物1和2可抑制Topo Ⅰ介导的质粒DNA超螺旋的解旋,并且两种受试物都可下调细胞中Topo Ⅰ、Ⅱ的蛋白表达,P＜0.05;Hoechst 33258荧光染色表明受试物可诱导HEp-2细胞凋亡,AO染色也得到相同的结果;彗星实验检测出两种受试物可导致DNA损伤;流式细胞仪检测的结果表明,处理组的细胞凋亡率高于对照组(P＜0.05),并且,受试物1使HEp-2细胞周期在S期和G2/M期发生阻滞(P＜0.01),而受试物2使其阻滞在G1期(72 h),P＜0.05;蛋白质印迹法结果显示促凋亡蛋白Bid、Bax和JNK表达增加(P＜0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少(P＜0.01),细胞周期蛋白Cyclin B1和Cyclin D1表达减少(P＜0.05).结论 受试物1和2可以抑制HEp-2细胞的生长,这可能与以下机制有关:通过抑制Topo Ⅰ的催化活性并下调细胞中TopoⅠ和TopoⅡ的表达;调控凋亡相关基因的表达,诱导其凋亡;造成肿瘤细胞周期紊乱,促进凋亡.     

PTEN、MAPK、Cyclin D1在肺癌组织中表达及与其预后的相关性

目的探讨PTEN蛋白、MAPK信号及周期素Cyclin D1表达与肺癌预后的相关性。方法应用免疫组织化学染色法,检测PTEN蛋白、MAPK信号及周期素Cyclin D1在肺癌组织中的表达情况,采用Cox回归模型及Kaplan-Meier进行单因素分析。结果肺癌中PTEN蛋白阳性率为75%,其阳性表达与肿瘤大小、淋巴结转移及患者吸烟情况显著相关（P〈0.01）,PTEN阳性表达与非小细胞肺癌分化程度显著相关。肺癌中MAPK蛋白阳性率为33.87%,其阳性表达与肿瘤淋巴结转移及分化程度显著相关（P〈0.05）。肺癌中Cyclin D1蛋白阳性率为66.13%,其阳性表达率与患者吸烟及肿瘤淋巴结转移显著相关。PTEN与MAPK蛋白表达呈明显负相关（P〈0.05）。采用Cox比例风险模型进行多因素分析,结果提示吸烟、肿瘤分化程度、PTEN蛋白表达及临床分期4个变量是患者生存危险因素。采用Kaplan-Meier生存曲线与Wilcoxon检验结果示：PTEN表达阴性患者较阳性患者生存时间短。结论 PTEN、MAPK、Cyclin D1蛋白在肺癌中呈阳性表达是一个常见事件,PTEN蛋白表达与肺癌预后密切相关。     

p38 MAPK在喹乙醇诱导HepG2细胞凋亡中的作用

目的:研究p38 MAPK信号通路在喹乙醇诱导的HepG2细胞凋亡中的作用。方法:分别用不同浓度(0、200、400、800μg/ml)的喹乙醇染毒HepG2细胞24 h和800μg/ml喹乙醇染毒HepG2细胞不同时间(0、0.5、1、2、4、6、12、24 h)后,采用Westernblot法检测细胞内磷酸化p38蛋白和p38总蛋白的表达情况,以p38 MAPK磷酸化水平反映p38 MAPK信号通路的活性。分别采用0、10、20μmol/L的p38 MAPK特异性抑制剂SB203580预处理HepG2细胞1 h后,再用800μg/ml喹乙醇染毒24 h,采用Annexin VFITC/PI法检测细胞凋亡。结果:随着喹乙醇染毒浓度和时间的增加,HepG2细胞的p38磷酸化蛋白表达量逐步增加,其中800μg/ml喹乙醇染毒细胞24 h的实验组与对照组相比,p38磷酸化蛋白的表达量明显上调(P0.01)。10、20μmol/L的SB203580对喹乙醇诱导细胞凋亡有促进作用,细胞的凋亡率分别为35.4%±2.83%、40.2%±3.98%,较喹乙醇对照组(23.1%±3.59%)明显升高(P0.05)。结论:喹乙醇能激活p38 MAPK信号通路,且p38 MAPK信号通路的激活参与抑制喹乙醇介导的HepG2细胞凋亡的过程。     

Dynein抑制剂对卵母细胞体外成熟及cyclinB1 mRNA水平的影响

背景与目的 :胞浆Dynein(动力蛋白)做为微管负极方向的马达蛋白在细胞增殖进程中发挥重要作用。本实验采用原钒酸钠特异抑制Dynein生物活性后,观察卵母细胞体外培养成熟率和cyclinB1基因转录水平变化 ,探讨Dynein功能异常对卵母细胞成熟分裂进程的影响及相关机制。材料与方法 :应用卵母细胞体外培养成熟技术、半定量RT_PCR和单细胞RT_PCR方法 ,分别检测加入Dynein抑制剂前后卵母细胞成熟率和cyclinB1基因转录水平的变化。结果 :12h量效实验结果证实 ,不同浓度原钒酸钠作用后 ,5μmol/L原钒酸钠即可明显降低小鼠卵母细胞成熟率 ,0～400μmol/L卵母细胞成熟率随着剂量的增加而显著减少 ;同时检测发现 ,50～500μmol/L原钒酸钠组卵母细胞cyclinB1mRNA表达呈剂量依赖性增加。时程结果表明 ,卵母细胞与400μmol/L原钒酸钠作用1h以上 ,卵母细胞成熟率明显减少 ;体外分别培养4h或8h后再放入含有原钒酸钠培养基中培养至12h ,仍可明显抑制卵母细胞第一极体排放。400μmol/L原钒酸钠作用后 ,卵母细胞内cyclinB1mRNA时程表达水平与对照组相比...     

Akt抑制剂MK-2206在缺氧环境下对结肠癌SW480细胞增殖、侵袭的影响

目的:探讨Akt抑制剂MK-2206在缺氧环境下对人结肠癌SW480细胞增殖、侵袭的影响。方法:根据CCK-8实验结果选择CoCl2和MK-2206的浓度,最后分成空白组、MK-2206组、CoCl2组、MK-2206+CoCl2组;Transwell小室实验检测四组细胞的迁移和侵袭能力;RT-PCR法检测各细胞组中Akt、mTOR、HIF-1α的mRNA表达水平;Western blot技术检测各细胞组中Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、HIF-1α蛋白表达的差异性情况。结果:CoCl2诱导的缺氧环境可以促进SW480细胞的侵袭、迁移(P＜0.05),同时能够促进HIF-1α的mRNA和蛋白表达(P＜0.05),但是低浓度范围内的CoCl2对SW480细胞增殖活性无明显影响(P＞0.05);MK-2206可以在体外的常氧和缺氧环境中抑制SW480细胞的增殖活性和侵袭、迁移能力(P＜0.05);MK-2206能在体外的常氧环境下抑制SW480细胞的Akt、mTOR、HIF-1α的mRNA表达(P＜0.05),缺氧环境无明显作用;同时MK-2206能够在常氧和缺氧环境中显著降低p-Akt、p-mTOR、HIF-1α的蛋白表达水平(P＜0.05)。 结论:Akt抑制剂MK-2206可以在体外的常氧和缺氧环境下抑制SW480细胞的增殖活性和侵袭能力,但缺氧环境可能会弱化MK-2206对SW480细胞迁移的抑制作用。     

p27、Cyclin D1在膀胱癌中的表达及免疫组织化学研究

目的 通过检测p27kip1与Cyclin D1在膀胱癌中的免疫组织化学研究,以探讨两者在膀胱癌发生、发展中的作用及其与临床病理特征的关系.方法 对70例标本进行SP免疫组织化学方法检测p27kip1,Cyclin D1的表达水平.其中正常组织28例,膀胱癌组织52例.结果 P27kip1,Cyclin D1在正常膀胱组织中的表达率和在膀胱癌组织中的表达均具有显著性差异(P＜0.01).p27蛋白在低分化组中的表达水平显著低于高分化组(P＜0.01)和中分化组(P＜0.01),Cyclin D1表达水平在低分化组中显著高于高分化组(P＜0.01),在中低分化组间无显著性差异(P＞0.05).结论 p27kip1的表达与临床分期无关而Cyclin D1的表达与临床分期相关.p27kip1与Cyclin D1的相互关系呈负相关.     

Cyclin G1在下咽鳞癌中的表达及其临床意义

背景与目的:细胞周期蛋白(Cyclin G1)可能参与多种恶性肿瘤的侵袭和转移,但鲜见Cyclin G1与下咽鳞癌关系的报道.本研究旨在探讨Cyclin G1在下咽鳞癌中的表达及其与临床生物学行为之间的关系.方法:取下咽鳞状细胞癌手术标本56例,正常黏膜标本14例,应用免疫组化方法检测Cyclin G1在下咽癌组织和正常黏膜中的表达;应用实时荧光定量RT-PCR检测Cyclin G1 mRNA表达.结果:免疫组化结果显示:Cyclin G1在下咽癌中表达主要位于细胞核,阳性率为53.6%(30/56),而正常黏膜未见表达(P＜0.01);随着肿瘤的增大,其阳性表达率逐渐增高(P＞0.05);Cyclin G1在颈部淋巴结转移组阳性率为64.9%(24/37),明显高于未转移组31.6%(6/19)(P＜0.05);Cyclin G1阳性表达患者3年内复发率为60.0%,阴性表达患者3年内复发率30.8%(P＜0.05);Cyclin G1阳性表达患者5年生存率为30.0%,明显低于阴性表达患者5年生存率57.7%(P＜0.05).RT-PCR检测Cyclin G1 mRNA在下咽癌组织中的相对表达量(1.081±0.302)高于正常黏膜组相对表达量(0.713±0.158)(P＜0.05);中晚期原发肿瘤、颈淋巴结转移及远处转移患者Cyclin G1 mRNA表达量均略高于早期肿瘤、无颈淋巴结及远处转移患者(P＞0.05),Cyclin G1 mRNA表达量越高肿瘤越容易复发(P＜0.05),患者生存时间也越短(P＜0.01),与免疫组化结果一致.结论:Cyclin G1在下咽鳞癌中存在高表达,其异常表达在下咽鳞癌的发生、发展中发挥着重要作用,可能是下咽鳞癌预后不良的指标之一.     

胃癌组织NGX6和Cyclin D1表达及其生物学意义的探讨

目的:探讨胃癌组织中NGX6和Cyclin D1的表达及其生物学意义.方法:采用免疫组化SP法检测89例胃癌组织和53例正常胃黏膜组织中NGX6和Cyclin D1蛋白的表达情况.结果:NGX6蛋白在胃癌组织中的阳性表达率为51.69％,胃癌组织中阳性表达率明显高于正常胃黏膜组织的83.02％,P＜0.05;而Cyclin D1蛋白在胃癌组织中的阳性表达率为74.16％,胃癌组织中阳性表达率显著高于正常胃黏膜组织的0,P＜0.05;免疫组织化学结果显示,胃癌组织中NGX6和Cyclin D1蛋白的阳性表达呈负相关,两者均与胃癌的临床分期、浸润深度及淋巴结转移有关(P＜0.05),而与组织学分级无关.结论:NGX6和Cyclin D1蛋白表达异常可能共同参与了胃癌的发生、发展、侵袭和转移;联合检测2种蛋白对于评价胃癌的恶性程度、判断其转移潜能和预后可能具有重要的临床意义.     

p38MAPK信号通路与uPA在乳腺癌细胞及组织中表达的相关性

背景与目的:p38MAPK信号通路介导多种转移相关基因表达调控,尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinase-type plasminogen activator,uPA)在肿瘤浸润和转移中发挥着重要作用.本实验研究人乳腺癌组织中3种信号分子p-p38、p-Akt、p-Erk及uPA表达与临床病理特征的关系,并分析它们与uPA表达的相关性,探讨p38MAPK通路对乳腺癌uPA蛋白表达的影响,分析p-p38和uPA表达与乳腺癌预后的关系.方法:应用免疫组织化学(SP)法检测p-p38、p-Akt、p-Erk和uPA在60例乳腺癌组织中的表达.Western blot检测人乳腺癌细胞MDA-MB-231及MCF-7中p-p38及uPA蛋白表达及用p38MAPK特异性抑制剂SB203580阻断p38MAPK信号通路后uPA蛋白表达水平的变化.结果:p-p38、p-Akt、p-Erk、uPA蛋白在乳腺癌组织中表达阳性率分别为56.7%、95.0%、93.3%、60.0%.p-p38与uPA表达存在正相关(r=0.316,P＜0.05),并与乳腺癌的TNM分期及淋巴结转移状况相关(P＜0.05),而与患者年龄、肿瘤大小无明显相关性(P＞0.05).p-Akt、p-Erk与uPA表达无明显相关性,p-Akt和p-Erk蛋白表达与乳腺癌的淋巴结转移有关(P＜0.05)而与患者年龄、肿瘤大小、TNM分期均无明显关系(P＞0.05).乳腺癌细胞MDA-MB-231中p-p38及uPA蛋白表达水平高于MCF-7.用SB203580阻断p38MAPK通路可降低uPA蛋白表达水平,且随着SB203580浓度升高uPA表达水平逐渐降低.乳腺癌中p-p38和uPA蛋白的表达与肿瘤的预后显著相关(分别为log-rank=4.98、5.40,P=0.0256、0.0201).结论:p38MAPK信号通路可能通过上调uPA的表达促进乳腺癌的恶性进展,p38MAPK信号通路可能是乳腺癌侵袭和转移的重要途径,p-p38和uPA的表达可辅助用于乳腺癌的预后评估.     

海芋粗提物对人肝癌细胞的细胞毒和凋亡诱导作用

目的:探讨海芋粗提物对人肝癌细胞的细胞毒和凋亡诱导作用及其作用机制.方法:用海芋粗提物处理人正常肝细胞(L02)及肝癌细胞(SMMC-7721),用细胞增殖试验(MTT法)、克隆形成试验、EdU掺入试验研究海芋粗提物对人正常肝细胞和肝癌细胞的增殖抑制作用;吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)染色检测细胞凋亡;流式细胞术检测海芋粗提物对细胞周期的影响;RT-PCR检测细胞周期及凋亡相关基因PPARγ、Cyclin D1、Rb、P21、Bax、Bcl-2基因mRNA表达.结果:用不同浓度海芋粗提物处理后,肿瘤细胞增殖活性降低(P＜0.05),呈时间-剂量-效应关系;克隆形成下降(P＜0.05);EdU标记指数降低(P＜0.05);AO/EB染色凋亡细胞增多(P＜0.01);细胞周期分布改变,凋亡指数显著增加(P＜0.01),G0/G1期细胞增加(P＜0.05),S期和G2/M期细胞减少(P＜0.05);RT-PCR结果显示,海芋粗提物(400μg/ml)处理后,PPARγ表达增加46.0%(P＜0.01)、Cyclin D1降低43.7% (P＜0.01)、Rb增加283.3%(P＜0.01)、Bax增加77.1% (P＜0.01)、Bcl-2降低24.8% (P＜0.05).结论:海芋粗提物对肝癌细胞具有细胞毒和诱导凋亡作用,其作用机理可能与激活PPARγ,上调Rb、Bax基因表达,下调Cyclin D1、Bcl-2基因表达有关.     

小剂量阿糖胞苷诱导神经母细胞瘤细胞分化的研究

[目的]通过人神经母细胞瘤(NB)SMS-KCNR细胞的体外实验,观察小剂量阿糖胞苷(Ara-C)对NB细胞的诱导分化作用.[方法]MTS法检测小剂量Ara-C对SMS-KCNR细胞增殖的影响;观察小剂量Ara-C处理后SMS-KCNR细胞的形态变化;流式细胞仪检测小剂量Ara-C处理后SMS-KCNR细胞的细胞周期分布;Western blot检测TrkA、N-myc蛋白的表达,RT-PCR检测TrkA及MYCN mRNA水平的变化.[结果]小剂量Ara-C对SMS-KCNR细胞的增殖具有抑制作用,诱导SMS-KCNR细胞周期停滞于S期,G2/M期细胞比例下降(P＜0.05).经小剂量Ara-C处理后SMS-KCNR细胞形态与正常神经节细胞类似,并使TrkA的表达上调(P＜0.05),MYCN的表达下调(P＜0.05).[结论]小剂量Ara-C对SMS-KCNR细胞具有诱导分化作用,该作用可能与TrkA表达上调,MYCN表达下调有关.