苦瓜蛋白诱发胃癌细胞SGC7901凋亡的研究

目的：探讨苦瓜蛋白对胃癌细胞SGC7901增长的抑制并诱发其凋亡。方法：从新鲜的苦瓜种子中分离纯化的苦瓜蛋白,通过MTT比色法分析其对SGC7901细胞以及正常人二倍体细胞2BS增殖的影响。并应用光镜、电镜观察及流式细胞术等手段,研究苦瓜蛋白诱发胃癌细胞SGC7901的形态学、DNA含量变化。     

食欲素A促人胃癌SGC7901细胞凋亡

目的观察食欲素A对胃癌SGC7901细胞生长的影响,并初步探讨其机制。方法常规培养胃癌SGC7901细胞,单独食欲素A处理及食欲素A受体拮抗剂SB408124干预后再用食欲素A作用,MTT法检测药物对SGC7901细胞抑制率;Hoechst33258荧光染色法及流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot方法检测BCL-2、BAX、Cyt c和活化caspase-3蛋白的表达。结果食欲素A呈剂量-时间依赖性的抑制胃癌SGC7901细胞增殖,其中1.0μmol/L食欲素A作用24h对胃癌细胞增殖的抑制作用最强,抑制率为65.32%±2.51%(P0.01);食欲素A组可见较多凋亡细胞:胞核或胞质内可见浓染致密的蓝色荧光,有明显的核固缩,SB408124干预后,凋亡细胞数量明显减少(P0.05);食欲素A作用后,凋亡率为59.52%±1.38%,而SB408124干预后,凋亡率降至38.96%±1.82%(P0.05);食欲素A可上调凋亡相关蛋白BAX、Cyt c及活化caspase-3的表达,下调抗凋亡蛋白BCL-2的表达(P0.05),SB408124干预后,食欲素A作用减弱。结论食欲素A对胃癌SGC7901细胞生长具有明显的抑制增殖和促凋亡作用;食欲素A的作用是通过其选择性受体实现的。     

地高辛对人胃癌SGC7901细胞生长和凋亡的影响

目的:探究地高辛对人胃癌SGC7901细胞生长和凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法:选取人胃癌细胞SGC7901作为研究对象,采用CCK-8法检测地高辛的细胞毒作用并测定IC_(50),采用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,采用Western blot法检测c-Src、p-c-Src(Tyr416)、Akt、p-Akt(Ser473)、ERK1/2和p-ERK1/2(Tyr204)的蛋白水平,采用RT-PCR法检测c-Src的mRNA表达水平。结果:随着地高辛浓度逐渐升高,自50nmol/L开始,SGC7901细胞的存活率逐渐降低(P0.05),当地高辛浓度达到500 nmol/L时SGC7901细胞的存活率降至最低(P0.05),地高辛作用24 h的IC_(50)为191.45 nmol/L;200 nmol/L地高辛作用SGC7901细胞24 h后,与对照组相比,细胞凋亡率显著升高(P0.05),G_0/G_1期细胞比例明显升高(P0.05),c-Src、ERK1/2和Akt蛋白的磷酸化水平显著下降(P0.05),c-Src的mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P0.05),细胞迁移率降低(P0.05)。结论:地高辛可在体外诱导人胃癌细胞SGC7901的凋亡和G0/G1期阻滞,这可能与其下调c-Src基因表达以及抑制ERK1/2和Akt蛋白磷酸化有关。     

胃泌素对胃癌细胞SGC7901 Reg Ⅰ基因转录因子的效应

目的 探讨胃泌素对胃癌细胞SGC7901 Reg Ⅰ(Reg Ⅰ)基因转录因子的效应.方法 应用巢式PCR技术从胃癌细胞SGC7901基因组DNA扩增Reg Ⅰ基因启动子1414bp片段,将该片段插入pMD19-T载体,序列分析鉴定.应用随机引物法以地高辛分别标记1414bp及其HindⅢ酶切800bp和614bp片段,经灵敏度检测后,作为探针.应用Genomatix MatInspector在线分析软件分析Reg Ⅰ基因启动子1414bp片段的转录因子结合位点.分别以10-7 mol/L和10-8mol/L胃泌素G-17处理胃癌细胞SGC7901 48h,提取核蛋白.应用DNA-蛋白质印迹法(Southern blotting),分别以地高辛标记的1414bp、800bp和614bp片段为探针检测胃泌素对胃癌细胞SGC7901 Reg Ⅰ基因转录因子的效应.结果 1414bp探针可检测到20条蛋白主带.胃泌素孵育后,带型没有变化,但是一些条带的灰度值改变,带9、12、13、14、15和16的灰度值明显降低(P＜0.05);不同浓度胃泌素处理组之间上述6个条带的灰度值差异不明显(P＞0.05).614bp探针可检测到灰度值变化的6条主带中的带9、12和13,胃泌素处理后,此3条主带的灰度值明显降低(P＜0.05).800bp探针可检测到灰度值变化的6条主带中的带9、12和14,胃泌素处理后,仅带14的灰度值明显降低(P＜0.05).614bp和800bp探针均未检出带15和带16.结论 胃癌细胞SGC7901Reg Ⅰ基因表达由多个转录因子协同调控.降低几个转录因子的结合活性可能是胃泌素上调胃癌细胞SGC7901Reg Ⅰ基因表达的途径之一.     

Integrin β1对胃癌细胞SGC7901多药耐药性的影响

目的:探究整合素β1(integrinβ1)对胃癌多药耐药性的影响及可能的作用机制。方法:Western blot法及q PCR实验检测胃癌细胞株SGC-7901及胃癌耐药细胞株SGC-7901/DDP中integrinβ1的表达情况。采用integrinβ1反义寡核苷酸转染,敲减胃癌耐药细胞株SGC-7901/DDP中integrinβ1的表达,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测integrinβ1、Bcl-2/Bax、cleaved caspase-3/caspase-3、细胞色素C(CytC)和p-AKT/AKT的蛋白水平。结果:耐药细胞株SGC7901/DDP中integrinβ1的mRNA及蛋白表达水平均明显高于亲本细胞株;并且在亲本细胞株SGC7901中加入顺铂、长春新碱及5-氟尿嘧啶等化疗药物刺激后,integrinβ1的蛋白表达水平明显升高。敲减integrinβ1的表达可诱导胃癌耐药细胞SGC7901/DDP的凋亡,增加细胞对化疗药物的敏感性;此外下调Bcl-2/Bax、p-AKT~(Ser473)和p-AKT~(Thr308)的蛋白水平,同时促进线粒体Cyt-C的释放,上调cleaved caspase-3的蛋白水平。结论:敲减胃癌顺铂耐药细胞SGC7901/DDP的integrinβ1表达可恢复细胞对化疗药物的敏感性,促进细胞经线粒体路径的凋亡,其机制可能与抑制AKT的磷酸化,阻断该信号通路有关。     

survivin反义寡核苷酸诱导SGC7901细胞凋亡及增强紫杉醇敏感性

目的 研究转染生存素(survivin)反义寡核苷酸(Asodn)抗肿瘤作用以及是否增强紫杉醇敏感性.方法 实验分为:空白对照组(Control组)、脂质体组(Lip组)、正义寡核苷酸组(Sodn组)及反义寡核苷酸组(Asodn组).人工合成Asodn,经脂质体转染SGC7901细胞,MTT检测细胞增值抑制率,Western blot检测survivin蛋白表达,Hoechst33258染色荧光显微镜下观察细胞凋亡形态学改变及流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 ① 荧光显微镜下Control组、Lip组及Sodn组细胞核呈均匀蓝色、圆形或椭圆形,而Asodn组细胞核染色增强,核质浓缩,核碎裂;② Asodn 组细胞增殖抑制率增高,并呈时间-剂量依赖性;survivin 蛋白表达减低;凋亡率增高.与Control组、Lip组及Sodn组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);③ Asodn联合紫杉醇组其抑制率 (78.1±0.8)%明显高于单纯 Asodn组(54.9±1.6)%和紫杉醇组 (56.7±0.7)% (P<0.05).结论 转染Asodn 能明显抑制SGC7901细胞增殖、诱导凋亡并增强紫杉醇抗肿瘤作用.     

E-钙黏蛋白siRNA促进胃癌细胞SGC7901耐药与增殖

目的 研究E-钙黏蛋门siRNA对胃癌细胞SGC7901化疗敏感性和增殖能力的影响,并对其相关机制进行初步探讨.方法 用Lipofectamine 2000将E-钙黏蛋白siRNA及阴性对照序列转入细胞SGC7901,用MTT法检测细胞对药物的敏感性并观察细胞增殖能力.Western印迹法检测细胞E-钙黏蛋白、PTEN...     

E-钙黏蛋白siRNA促进胃癌细胞SGC7901耐药与增殖

目的研究E-钙黏蛋白siRNA对胃癌细胞SGC7901化疗敏感性和增殖能力的影响,并对其相关机制进行初步探讨。方法用Lipofectamine 2000将E-钙黏蛋白siRNA及阴性对照序列转入细胞SGC7901,用MTT法检测细胞对药物的敏感性并观察细胞增殖能力。Western印迹法检测细胞E-钙黏蛋白、PTEN、AKT、p-AKT、BAX和BCL-2蛋白表达。结果 SGC7901细胞转染E-钙黏蛋白siRNA后显著抑制细胞E-钙黏蛋白蛋白表达(P<0.05)。转染E-钙黏蛋白siRNA后细胞对CDDP、5-FU、紫杉醇和ADR的IC50分别为(mg/L):4.375±0.199、6.855±0.780、2.530±0.259和0.368±0.042;阴性对照组分别为(mg/L):2.882±0.166、4.058±0.946、1.483±0.225和0.228±0.012,转染E-钙黏蛋白siRNA细胞对CDDP、5-FU、紫杉醇和ADR的IC50显著高于阴性对照组(P<0.05)。转染E-钙黏蛋白siRNA细胞增殖能力显著高于阴性对照组(P<0.05)。转染E-钙黏蛋白siRNA72 h后PTEN和BA...     

大蒜素联合生存素反义寡核苷酸对胃癌细胞SGC7901生长的影响

目的 探讨大蒜素联合生存素反义寡核苷酸(ASODN)对人胃癌细胞株SGC7901的体外生长的影响。方法 大蒜素联合生存素ASODN处理胃癌细胞株SGC7901,MTT法检测SGC7901的生长;流式细胞仪检测细胞凋亡率;免疫细胞化学法检测Ki67的表达。结果 大蒜素联合生存素ASODN用药对SGC7901生长抑制率明显高于大蒜素和生存素ASODN单药组(P<0.05),联合指数为0.46。大蒜素联合生存素ASODN作用于SGC7901细胞12、24和48h后,细胞凋亡率分别为7.30%、10.44%和16.44%,明显高于单药组(P<0.05)。与大蒜素组、生存素ASODN组和对照组比较,大蒜素联合生存素ASODN作用48h后,Ki67的阳性表达率下降(P<0.05)。结论 大蒜素联合生存素ASODN在抑制胃癌SGC7901细胞的生长和诱导细胞凋亡方面具有协同作用。     

Apogossypol增强SGC7901胃癌荷瘤小鼠的免疫功能并抑制肿瘤生长

目的探讨新型棉酚衍生物apogossypol对胃癌SGC7901移植瘤抑制及免疫功能之间的关系。方法体外培养扩增SGC7901胃癌细胞,接种裸鼠,建立小鼠移植瘤模型。计算肿瘤的抑瘤率,测定自然杀伤(NK)细胞活性,腹腔巨噬细胞一氧化氮(NO)的产生量,NK细胞活性,T淋巴细胞增殖能力及白细胞介素-2(IL-2)的活性。结果 Apogossypol可明显提高荷瘤小鼠吞噬细胞的功能并抑制肿瘤的增殖,NO产生量增加并可显著促进IL-2分泌,进而影响淋巴细胞的活性,最终导致NK细胞功能增强。结论 Apogossypol可增强荷瘤小鼠的免疫功能,抑制肿瘤的生长。     

Livin通过Akt信号途径促进胃癌SGC7901细胞的上皮细胞间质转换

目的探讨胃癌SGC7901细胞中Livin基因的表达对细胞上皮细胞间质转换(EMT)的影响。方法用Livin基因的shRNA慢病毒感染胃癌SGC7901细胞,筛选稳定沉默的细胞株,Transwell检测细胞的侵袭能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测E-cadherin和vimentin表达,同时检测Akt信号通路的激活状态。结果沉默Livin基因后,胃癌SGC7901细胞侵袭迁移能力明显降低(P0.05),E-cadherin明显上调,vimentin则明显下调(P0.05),同时明显抑制Akt信号通路信号的激活(P0.05)。结论 Livin能够通过激活Akt信号通路从而诱导SGC7901细胞发生EMT,从而促进肿瘤细胞体外侵袭及迁移能力。     

藤黄酸增强人胃癌SGC7901/DDP细胞对顺铂的敏感性

目的 探讨藤黄酸（GA）对人胃癌SGC7901/DDP细胞顺铂敏感性的影响及其分子机制。方法 采用顺铂（DDP）浓度梯度递增法构建人胃癌顺铂耐药株SGC7901/DDP细胞,采用细胞计数盒-8（CCK-8）法检测藤黄酸和顺铂对SGC7901/DDP细胞的毒性作用,采用Chou-Talalay中效分析法定量评价藤黄酸和顺铂的联合作用效果,采用流式细胞术检测细胞凋亡,采用Western blotting方法检测Bcl-2、Bax、Survivin、多药耐药相关蛋白2（MRP2）、磷酸化氨基末端蛋白激酶（p-JNK）（Thr183/Tyr185）和JNK的蛋白水平。结果 藤黄酸与顺铂各自单独作用48 h的IC₅₀分别为2.94 μmmol/L和39.76 μmmol/L;当抑制率超过20%时,两者联合应用呈协同效应;藤黄酸可协同增强顺铂诱导的细胞凋亡（P<0.05）,下调Survivin和MRP2蛋白水平（P<0.05）,上调Bax蛋白水平（P<0.05）,抑制JNK磷酸化（P<0.05）;JNK特异性抑制剂SP600125可下调MRP2蛋白水平（P<0.05）。结论 藤黄酸可增强人胃癌SGC7901/DDP细胞对顺铂的敏感性,这可能与藤黄酸通过抑制JNK信号通路下调MRP2蛋白表达,以及上调Bax蛋白表达和下调Survivin蛋白表达有关。     

胃癌SGC7901/DDP细胞microRNA的表达谱分析及其在耐药逆转中的作用

 目的：分析胃癌SGC7901/DDP细胞microRNA表达谱及其耐药特性,研究筛选出的microRNA-200c对SGC7901/DDP细胞耐药的影响。方法：采用MTT法检测细胞的药物敏感性;应用microRNA芯片进行表达谱分析;运用生物信息学对筛选出的microRNA进行靶点预测和生物学进程分析。采用实时荧光定量RT-PCR检测microRNA-200c的表达;采用细胞转染分析microRNA-200c对SGC7901/DDP细胞药物敏感性的影响。结果：SGC7901/DDP细胞对顺铂、阿霉素、5-氟脲嘧啶及紫杉醇的IC50均显著高于SGC7901细胞(P<0.05)。与SGC7901细胞相比,SGC7901/DDP细胞中表达上调和下调超过2倍的microRNA分别有5和14个。microRNA高低表达组预测的靶点均广泛参与信号传导、细胞周期、分化、凋亡、增殖等生物学进程。实时荧光定量RT-PCR分析证实microRNA-200c在SGC7901/DDP细胞中的表达显著降低(P<0.05),microRNA-200c能够显著降低SGC7901/DDP细胞对顺铂、阿霉素、5-氟脲嘧啶及紫杉醇的IC50(P<0.05)。结论：SGC7901/DDP细胞的多药耐药特性可能与microRNA表达谱的改变有关,其耐药表型的逆转可能与microRNA-200c的表达有关。     

多药耐药性相关蛋白MRP在胃癌耐药细胞SGC7901中的表达

肿瘤多药耐药性的产生是导致临床上化疗失败的主要原因。本研究观测了胃癌阿霉素耐药细胞ＳＧＣ７９０１／Ａｄｒ中，多药耐药相关蛋白（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ，ＭＲＰ）的表达，以了解其在胃癌细胞耐药中的作用。１材料和方法１．１药物与试剂阿霉素（ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ，ＡＤＲ）（ＦａｒｍｉｔａｌｉａｃａｒｌｏＥｒｂａ），ＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏ），ＱＣＲＬ１杂交瘤上清（加拿大Ｃｏｌｅ教授惠赠［１］）。１．２细胞培养人胃低分化腺癌细胞系ＳＧＣ７９０１（军事医…     

miR-143靶向调控ER-α36影响胃癌细胞系SGC7901的侵袭

目的探讨miR-143通过靶向雌激素受体ER-α36介导人胃癌细胞系SGC7901的侵袭。方法通过慢病毒载体的构建及包装生成上调/下调miR-143的慢病毒LV-miR-143 up和LV-miR-143 down并感染人胃癌细胞系SGC7901,用Western blot检测ER-α36的蛋白表达水平和细胞的侵袭能力;生物信息学软件预测miR-143的靶基因;荧光素酶报告基因实验验证靶基因。结果 LV-miR-143 up与LV-miR-143 down慢病毒病毒颗粒分别感染人胃癌细胞系SGC7901,感染效率均在80%以上;上调miR-143,人胃癌细胞系SGC7901的ER-α36表达水平明显下降,侵袭能力明显降低(P<0.05),反之则增加。结论 miR-143通过靶向雌激素受体ER-α36负向调控胃癌细胞SGC7901的侵袭。     

rL-RVG通过α7烟碱型乙酰胆碱受体诱导胃癌细胞系SGC凋亡的机制

目的探讨表达狂犬病毒疫苗糖蛋白的重组新城疫病毒(rL-RVG)通过乙酰胆碱受体诱导胃癌细胞凋亡的可能机制。方法将对数增殖期的胃癌细胞系SGC随机分成rL-RVG、新城疫病毒(NDV)组、PBS组,并同时分别设α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7-nAChR)抑制剂(MLA)及激动剂(ACB)预处理组。病毒感染24 h后,CCK8法测定病毒对SGC增殖影响;蛋白印迹检测α7-nAChR、RVG、NDV;凋亡蛋白cleved-caspase-3、BAX/BCL-2;P-ERK、ERK的表达。免疫荧光法测定P-ERK表达。结果随着rL-RVG、NDV病毒液浓度增加,胃癌细胞活力下降,rL-RVG在10~(-2)稀释倍数时抗增殖作用显著(P0.05);病毒组凋亡相关蛋白cleved-caspase-3、BAX/BCL-2相对表达量较PBS组明显升高,且rL-RVG组较NDV组及PBS组升高明显,乙酰胆碱受体抑制剂预处理后rL-RVG组、NDV组及PBS组凋亡蛋白水平明显增高,胆碱受体激动剂预处理组凋亡蛋白表达水平明显下降(P0.05);P-ERK在病毒组表达下降,且rL-RVG组较NDV组更低,乙酰胆碱受体抑制剂、激动剂预处理后分别下降、上升(P0.05)。结论rL-RVG通过α7-nAChR诱导胃癌细胞系SGC凋亡的机制之一是抑制ERK通路。     

小分子干扰RNA逆转胃癌SGC7901/VCR细胞mdr1介导的多药耐药

目的研究小分子干扰RNA（siRNA）逆转胃癌多药耐药细胞亚系SGC7901／VCR mdr1介导的多药耐药效应。方法根据mdr1cDNA已知序列，设计并体外转录2条含21个核苷酸的siRNA（mdr1si2631和mdr1si3071），转染SGC7901／VCR细胞，用RT-PCR检测mdr1基因mRNA的表达，免疫组织化学检测P-gp的表达，流式细胞仪检测阿霉素在细胞内的蓄积，MTT法检测细胞对阿霉素的敏感性。结果siRNA转染SGC7901／VCR细胞48h后，mdr1基因mRNA和P-gp的表达水平下降，细胞内阿霉素积累量增加，对阿霉素敏感性的相对逆转率各达79．59％及59．98％。结论siRNA可逆转SGC7901／VCR细胞mdr1介导的多药耐药。     

上皮间质转化在胃癌SGC7901细胞向胃癌干细胞转化过程中的作用

BACKGROUND: Studies have found that epithelial-mesenchymal transition is closely related with tumor invasion, metastasis, and drug resistance, but studies on the role of epithelial-mesenchymal transition in the transformation process of gastric cancer cells SGC7901 to gastric cancer stem-like cells are rarely reported. OBJECTIVE: To explore the effect of epithelial-mesenchymal transition in the transformation process of gastric cancer cells SGC7901 to gastric cancer stem-like cells. METHODS: Vincristine-induced SGC7901 cells were cultured and screened to prepare gastric cancer stem-like cells. CD44 phenotype, morphological changes, stem cell-related markers, and epithelial-mesenchymal transition related molecules were detected. RESULTS AND CONCLUSION: After passage, vincristine-induced SGC7901 cells presented with morphological changes, and clonal cell spheres generated after serum-free suspension culture. Meanwhile, the proportion of SGC7901 cells positive for CD44 was decreased. Expression levels of SOX2, OCT4, Snail1 mRNA, Twist mRNA and Vimentin mRNA were significantly higher in the gastric cancer stem-like cells than SGC7901 cells, but the expression level of E-caderin was lower in the gastric cancer stem-like cells than SGC7901 cells. These findings indicate that gastric cancer cells SGC7901 can be successfully transformed into gastric cancer stem-like cells, and the epithelial-mesenchymal transition is involved in this transforming progress.