用逆转录—聚合酶链反应检测＋Gz重复暴露大鼠脑组织c—fos和 …

目的 了解＋Ｇｚ重复暴露后大鼠脑组织ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ基因表达的变化，探讨＋Ｇｚ引起脑损害的分子机制，为＋Ｇｚ防护研究提供实验依据。方法 ２４只雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分成对照组、＋Ｇｚ重复暴露后３０ｍｉｎ、６ｈ和２４ｈ四组，每组６只。对照组大鼠Ｇ值为＋１Ｇｚ，实验组大鼠在动物离心机上经历了３次＋１０Ｇｚ／３ｍｉｎ（两次间间隔３０ｍｉｎ）作用。分别于暴露后３０ｍｉｎ、６ｈ和２４ｈ处死大鼠取脑，     

＋Gz重复暴露对大鼠心肌组织内皮素和一氧化氮合酶mRNA表 …

目的 探讨＋Ｇｚ作用后，大鼠心肌组织内内皮素－１（ＥＴ－１）和内皮型一氧化氮合酶（ｅＮＯＳ）ｍＲＮＡ表达变化。方法 ２４只雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分为对照组＋Ｇｚ重复暴露后３０ｍｉｎ，６ｈ和２４ｈ四组，每组６只，对照组大鼠Ｇ组为＋１Ｇｚ，实验组大鼠在动物离心机上经历了３次＋１０Ｇｚ／３ｍｉｎ（两次间间隔３０ｍｉｎ）作用。分别于暴露后３０ｍｉｎ，６ｈ和２４ｈ处死大鼠取心，提取总ＲＮＡ，用半定量反转录     

用mRNA差异显示法筛选和鉴定反复高GZ暴露大鼠脑损伤相关基因

目的 筛选和鉴定反复高Ｇｚ暴露大鼠脑损伤相关基因。方法 １６只ＳＤ大鼠随机分为对照组、＋Ｇｚ重复暴露后３０ｍｉｎ、６ｈ和２４ｈ４组,每组４只。对照组大鼠Ｇ值为＋１Ｇｚ,实验组大鼠在动物离心机上经历了３次＋１４Ｇｚ／４５ｓ（两次间间隔３０ｍｉｎ）作用。分别于暴露后３０ｍｉｎ、６ｈ和２４ｈ处死大鼠取脑,提取总ＲＮＡ。取对照组和＋Ｇｚ暴露后６ｈ组大鼠脑总ＲＮＡ,用ｍＲＮＡ差异显示（ＤＤＰＣＲ）的方法,筛选＋Ｇｚ暴露大鼠脑差异表达基因。用３组锚定引物和６组随机引物作不同组合进行ＰＣＲ扩增。用Ｓｌｏｔ ｂｌｏｔ方法分析差异表达基因在对照组和＋Ｇｚ暴露后３０ｍｉｎ、６ｈ和２４ｈ组大鼠脑中表达情况。结果 获得的差异表达片段,经斑点杂交进一步筛选,克隆了３个强阳性片段,并进行序列分析,与Ｇｅｎｅｂａｎｋ等数据库进行同源比较,没     

用逆转录-聚合酶链反应检测+GZ重复暴露大鼠脑组织c-fos和c-jun基因表达

目的了解＋ＧＺ重复暴露后大鼠脑组织ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ基因表达的变化，探讨＋ＧＺ引起脑损害的分子机制，为＋ＧＺ防护研究提供实验依据。方法２４只雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分成对照组、＋ＧＺ重复暴露后３０ｍｉｎ、６ｈ和２４ｈ四组，每组６只。对照组大鼠Ｇ值为＋１ＧＺ，实验组大鼠在动物离心机上经历了３次＋１０ＧＺ／３ｍｉｎ（两次间间隔３０ｍｉｎ）作用。分别于暴露后３０ｍｉｎ、６ｈ和２４ｈ处死大鼠取脑，提取总ＲＮＡ，用建立的反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）定量检测方法检测大鼠脑组织ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎｍＲＮＡ表达水平。结果＋ＧＺ重复暴露后３０ｍｉｎ大鼠脑组织ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎｍＲＮＡ明显升高，分别是对照组的２．８倍和１．５倍，但６ｈ和２４ｈ时恢复正常。结论＋ＧＺ重复暴露可诱发大鼠脑组织ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎｍＲＮＡ的表达，这种表达快速且短暂，在＋ＧＺ所致脑损害的病理过程中起一定作用。     

＋Gz重复暴露对大鼠脑组织一氧化氮合酶分布的影响

目的 探讨反复＋Ｇｚ暴露对脑的病理生理影响及其机制。 方法 １８只雄性ＳＤ大鼠随机分为对照组、＋Ｇｚ重复暴露后１ｈ组和６ｈ组三组，每组６只。实验组大鼠在动物离心机上经历３次＋１０Ｇｚ／３ｍｉｎ（两次之间间歇３０ｍｉｎ）作用。对照组大鼠Ｇ值为＋１Ｇｚ。分别于暴露于１ｈ及６ｈ将大鼠麻醉后原位固定，完整取脑，利用ＮＡＤＰＨ－ｄ组织化学方法，观察大鼠脑组织一氧化氮合酶（ＮＯＳ）阳性神经元分布与染色强度的变     

+GZ重复暴露对大鼠心肌组织内皮素和一氧化氮合酶mRNA表达的影响

目的探讨＋ＧＺ作用后，大鼠心肌组织内内皮素－１（ＥＴ－１）和内皮型一氧化氮合酶（ｅＮＯＳ）ｍＲＮＡ表达变化。方法２４只雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分成对照组、＋ＧＺ重复暴露后３０ｍｉｎ、６ｈ和２４ｈ四组，每组６只。对照组大鼠Ｇ值为＋１ＧＺ，实验组大鼠在动物离心机上经历了３次＋１０ＧＺ／３ｍｉｎ（两次间间隔３０ｍｉｎ）作用。分别于暴露后３０ｍｉｎ、６ｈ和２４ｈ处死大鼠取心，提取总ＲＮＡ，用半定量反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测方法检测大鼠心肌组织ＥＴ－１和ｅＮＯＳｍＲＮＡ表达水平。结果＋ＧＺ暴露后３０ｍｉｎ和６ｈ大鼠心肌组织ＥＴ－１ｍＲＮＡ明显升高，ｅＮＯＳｍＲＮＡ明显降低，但２４ｈ时均恢复正常。结论＋ＧＺ暴露可使大鼠心肌组织内ＥＴ－１和ｅＮＯＳｍＲＮＡ表达发生改变，其在心肌损伤中可能起一定的作用，但这种变化是可逆的。     

＋Gz重复暴露对大鼠脑组织一氧化氮合成酶基因表达的影响

目的为了解＋ＧＺ重复暴露后大鼠脑组织一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）基因表达的变化，探讨＋ＧＺ引起脑损害的分子机制。方法２４只雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分成对照组、＋ＧＺ重复暴露后３０ｍｉｎ、６ｈ和２４ｈ四组，每组６只。实验组大鼠在动物离心机上经历了３次＋１０ＧＺ／３ｍｉｎ（两次间间隔３０ｍｉｎ）作用，对照组大鼠Ｇ值为＋１ＧＺ。分别于暴露后３０ｍｉｎ、６ｈ和２４ｈ处死大鼠取脑，提取总ＲＮＡ，用建立的反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）定量检测方法检测大鼠脑组织内ＮＯＳｍＲＮＡ表达水平。结果＋ＧＺ重复暴露后３０ｍｉｎ和６ｈ大鼠脑组织ＮＯＳｍＲＮＡ明显升高，但２４ｈ时恢复正常。结论＋ＧＺ重复暴露可刺激大鼠脑组织ＮＯＳｍＲＮＡ的表达，ＮＯ可能参与了＋ＧＺ所致脑损害的病理过程，但这种损害是可逆的。     

＋GZ重复暴露对大鼠脑组织神经生长因子和碱性成纤维细胞生长因子基因表达的影响

目的了解＋ＧＺ重复暴露后大鼠脑组织神经生长因子（ＮＧＦ）和碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）基因表达的变化,探讨两种生长因子在＋ＧＺ暴露所致脑损伤中的作用和意义。方法２４只雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分成对照组、＋ＧＺ重复暴露后３０ｍｉｎ、６ｈ和２４ｈ四组,每组６只。对照组大鼠Ｇ值为＋１ＧＺ,实验组大鼠在动物离心机上经历了３次＋１０ＧＺ／３ｍｉｎ（两次间间隔３０ｍｉｎ）作用。分别于暴露后３０ｍｉｎ、６ｈ和２４ｈ处死大鼠取脑,提取总ＲＮＡ,用半定量反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测方法检测＋ＧＺ重复暴露后大鼠脑组织ＮＧＦ和ｂＦＧＦｍＲＮＡ表达水平。结果＋ＧＺ重复暴露后３０ｍｉｎ和６ｈ,大鼠脑组织ＮＧＦ和ｂＦＧＦｍＲＮＡ明显升高,２４ｈ降至正常。结论＋ＧＺ重复暴露可诱导大鼠脑组织ＮＧＦ和ｂＦＧＦｍＲＮＡ的表达增加,这两种生长因子的表达增加可能对神经细胞具有保护和损伤修复作用,是脑的自身保护机制之一。     

＋Gz致脑缺血对兔脑组织一氧化氮合成酶分布的影响

为探讨短期内反复发生脑缺血Ｇ－ＬＯＣ中的重要性，将新西兰兔随机分为对照组，＋Ｇｚ暴露后即刻组，１ｈ组和６ｈ组。实验组动物对离心机上暴露至服水平动脉血压降到０ｋｐａ后持续３０ｓ，重复３次，每次间隔３０ｍｉｎ对照组不进行＋Ｇｚ暴露。灌注固定，完整取脑，利用ＮＡＤＰＨ－ｄ组织化学方法，观察一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）阳性神经元在兔脑组织内的分布变化。结果：＋Ｇａ重复暴露后ＮＯＳ阳性神经元在脑内某些部位显著增     

＋Gz对大鼠血浆和肾脏内皮素含量的影响

为了解＋Ｇｚ暴露对血浆及肾脏内皮素含量的影响。将４８只雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分成Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ４组。Ａ：地面未受离心机＋Ｇｚ暴露；Ｂ：＋１Ｇｚ；Ｄ：＋１０Ｇｚ。每次暴露３ｍｉｎ，共３次，每次间隔４０ｍｉｎ。Ｂ、Ｃ组在＋Ｇｚ暴露后１０ｍｉｎ，Ｄ组在＋Ｇｚ暴露后２４ｈ，留取血液及肾组织标本。     

+Gz重复暴露大鼠海马细胞凋亡及相关基因bcl-2和p53表达的观察

目的 探讨细胞凋亡在反复高＋Gz暴露所致脑损伤中的病理作用。方法20只SD大鼠随机分成对照组,＋Gz重复暴露后30min,6h,24h和48h5组,每组4只,对照组大鼠G值为＋1Gz,实验组大鼠在动物离心机上经历了3次＋14Gz/45s(两次间间隔30min)作用,分别于暴露后30min,6h,24h,48h处死大鼠取脑,固定包埋,用原位末端标记法TUNETL检测大鼠海马细胞凋亡及用免疫组化方法检测调亡相关基因bcl-2和p53表达变化,6h组海马CA1区可见部分细胞凋亡和明显的bcl-2,p53表达变化,但在24h组和48h组基本恢复正常。结论 ＋Gz重复暴露可引起大鼠海马细胞凋亡及凋亡相关基因 bcl-2,p53的表达变化,细胞凋亡是反复高Gz暴露致脑操作的机制之一。     

+GZ重复暴露对大鼠脑组织细胞间粘附因子-1基因表达的影响

目的：了解＋Gz重复暴露后大鼠脑组织细胞间粘附因子－1（ICAM－1）基因表达的变化,探讨＋Gz引起脑损伤的分子机制。方法：24只SD大鼠随机分成对照组,＋Gz重复暴露后30min,6h和24h四组,6h和24h四组,每组6只。实验组大鼠在动脉离心机上经历了3次＋10Gz/3min（两次中间间隔30min)作用,对照组大鼠G值为＋1Gz。分别于暴露后30min,6h和24h处死大鼠取脑,提取总RNA,用半定量反转录聚合酶链反应（RT－PCR）检测方法检测＋Gz重复暴露后大鼠脑组织ICAM－1 mNRA表达水平。结果：＋Gz重复暴露后30min,6h和24h大鼠脑组织ICAM－1 mRNA均明显升高,分别是对照组的1,7倍,3．0倍和1．9倍。结论：＋Gz重复暴露可诱导大鼠组织ICAM－1 mRNA的表达,介导了白细胞,脑微血管内皮细胞的粘附增强,在＋Gz所致脑损害的病理过程中起一定作用。     

+Gz重复暴露大鼠脑cDNA消减文库的构建

目的：应用抑制性消减杂交技术构建 Gz重复暴露大鼠脑和正常大鼠脑差异表达的cDNA消减文库，为筛选 Gz暴露大鼠脑差异表达基因，探讨 Gz引起脑损伤的分子机制奠定基础。方法：Wister大鼠随机分成对照组和 Gz重复暴露组，对照组大鼠G值为 1Gz，实验组大鼠在动物离心机上经历了3次 10Gz/min（两次间间隔30min）作用，于暴露后6h处死取脑。分别从 Gz重复暴露组和对照组大鼠脑中提取poly(A) RNA，依次合成单链及双链cDNA，用RsaI酶切成大小不等的片段。将 Gz重复暴露组cDNA分为两组，分别与两种不同的接头连接，再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR，将PCR产物与T/A载体连接构建 Gz暴露大鼠脑cDNA消减文库。结果：成功构建具有高消减效率的 Gz暴露大鼠脑cDNA消减文库，非特异性cDNA片段被有效地消减，特异表达的cDNA得到富集。结论： Gz暴露大鼠脑cDNA消减文库的建立为进一步筛选、克隆 Gz重复暴露大鼠脑差异表达基因奠定了基础。     

＋Gz重复暴露对大鼠脑组织热休克蛋白70基因表达的影响

目的探讨＋Ｇｚ重复暴露后大鼠脑组织热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）基因表达的变化及其在＋Ｇｚ所致脑损伤中的作用。方法用半定量反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测方法检测＋Ｇｚ重复暴露大鼠脑组织ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ表达水平。结果＋Ｇｚ重复暴露后３０ｍｉｎ、６ｈ大鼠脑组织ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ均有升高,分别是对照组的１．７倍和２．６倍,２４ｈ恢复正常。结论＋Ｇｚ重复暴露可诱导大鼠脑组织ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ的表达     

+Gz重复暴露对大鼠脑组织c-fos、c-jun和神经生长因子基因表达的影响

为了解＋Ｇｚ重复暴露后大鼠脑组织ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ和神经生长因子基因表达的变化,探讨它们在＋ＧＫ致脑损伤中的作用和意义,用半定量反转录聚合酶链反应检测方法检测＋Ｇｚ重复暴露后大鼠脑组织ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ和ＮＧＦ ｍＲＮＡ表达水平。     

Effect of repeated +Gz exposures on energy metabolism and some ion contents in brain tissues of rats

BACKGROUND: It has been demonstrated that during +Gz exposure cerebral blood flow is significantly reduced, resulting in brain ischemia. In pilots, such conditions could recur several times during centrifuge training and combat maneuvers and could possibly cause reversible change in brain energy metabolism. HYPOTHESIS: In rats there is an association between +10 Gz exposure and the decreased brain metabolism, as indicated by decreased adenosine triphosphate (ATP) and ATPase activity, and increased adenosine diphosphate (ADP) and lactate, etc. The aim of the present study was to examine the time course and recovery of brain energy metabolism, lactate, ATPase activity, Na+, K+, Ca2+ and water contents after three +10 Gz exposures in rats. METHODS: There were 64 male Sprague-Dawley rats that were restrained and placed on an animal centrifuge. They were divided into groups of 16. Control rats were exposed to +1 Gz and experimental rats were exposed to +10 Gz three times each for 3 min at 30-min intervals. After being euthanized, rat brains were removed 0 h, 1 h, or 6 h after the last centrifuge run. Brain samples were analyzed for energy metabolism, lactate, Na+-K+-ATPase activity, water and electrolytes contents. RESULTS: The cortical ATP content, Na+-K+-ATPase and lactate dehydrogenase (LDH) activities decreased significantly, whereas the cortical ADP, adenosine monophosphate (AMP) and lactate contents increased significantly 0 h after three +10 Gz exposures, as compared with those of control. The ATP, ADP, and AMP contents returned to their control levels 1 h after the +10 Gz exposures, however, lactate content, Na+-K+-ATPase and LDH activities delayed recovery 6 h after +10 Gz exposures. The cortical K+ content increased significantly 0 h and 1 h after +10 Gz exposures, and returned to the control level 6 h after +Gz exposures. Na+ and water contents increased significantly 1 h and 6 h after the +10 Gz exposures. There was no significant change in Ca2+ content after +Gz exposures. CONCLUSIONS: Three +10 Gz (3 min each) exposures were associated with transient depression of brain metabolism as indicated by a decrease in ATP, Na+-K+-ATPase activity, and an accumulation of lactate, and disturbance of ion homeostasis. It is suggested that a causal relationship might exist between repeated high +Gz exposures and brain metabolism.     

高+Gz反复暴露后大鼠心脏组织应激性差异表达基因的分离

目的筛选 Gz反复暴露后大鼠心脏组织特异性应激基因。方法采用动物离心机处理对照组和实验组大鼠,实验组G值为 10Gz,增长率为1G／s。峰值持续3min,共做3次,两次间歇30min．对照组动物在离心机经历类似实验步骤,所承受的G值为 1Gz;反复暴露后1h提取实验组和对照组大鼠心脏组织总RNA,分离纯化poly A RNA,与Atlas Rat Stress Array膜杂交。并用半定量RT—PCR进行差异基因表达的特异性鉴定。结果得到10个差异表达基因,其中8个在 Gz反复暴露后大鼠心脏组织中表达上调,2个表达下调,选取热休克蛋白70、P21和血红素加氧酶-1基因作为候选基因,经半定量RT—PCR得到特异性验证,P21和血红素加氧酶-1表达水平升高,热休克蛋白70表达下降。结论应用Atlas Rat Stress Array杂交技术可以发现与 Gz反复暴露相关的特异性应激基因,为 Gz反复暴露对心脏组织的作用机制研究提供新的思路和方法。     

+Gz诱导热休克蛋白表达及其对+Gz致脑损伤保护作用的研究

目的：探讨不同 Gz重复暴露后，大鼠不同脑区HSP70表达强度和时程的变化规律，及其与正加速度致脑损伤的相关性。方法：将雄性SD大鼠随机分为对照组、 2Gz、 4Gz、 6Gz和 10Gz暴露组。分别在暴露后6h，10h，1d，2d，4d和6d处死取脑，观察HSP70和HSP70mRNA在鼠脑不同部位的表达以及脑神经元形态学的变化。结果：低G值（ 2Gz）下，HSP70表达强度弱，持续时间短，但范围较广；高G值（ 10Gz）下，表达仅局限在下丘脑部位，呈中等强度反应；中等强度G值（ 4Gz和 6Gz）下，表达范围广，持续时间长。各组表达峰值均在暴露后1d左右，但暴露1次组2d后强度明显减弱，而暴露3-5次组在2d后仍然维持较高水平。不同 Gz暴露后HSP70mRNA的表达在分布上与蛋白表达无明显变化，但其表达高峰提前（10h），持续时间缩短。直接 10Gz/5min暴露后，在皮层、海马、丘脑等部位均可见到变性的神经元。而经过 4Gz/3min3次和5次预暴露再作 10Gz/5min暴露组，变性神经元的数目在顶叶皮层、梨状皮层、海马和丘脑下部等部位明显减少。结论： 4Gz和 6Gz诱导的HSP70表达比 2Gz和 10Gz诱导的HSP70表达强，持续时间也长。 4Gz/5min反复暴露3次和5次，再暴露于 10Gz/5min，其神经元损伤程度明显轻于 10Gz/5min单次暴露。     

＋Gz重复暴露对大鼠心肌组织内皮素和一氧化氮合酶mRNA表达的影响

目的　探讨＋ ＧＺ作用后，大鼠心肌组织内内皮素－１（ＥＴ－１）和内皮型一氧化氮合酶（ｅＮＯＳ）ｍ ＲＮＡ 表达变化。　方法　 ２４只雄性Ｗｉｓｔａｒ 大鼠随机分成对照组、＋ ＧＺ重复暴露后３０ ｍ ｉｎ、６ ｈ 和２４ ｈ四组，每组６只。对照组大鼠Ｇ 值为＋ １ ＧＺ， 实验组大鼠在动物离心机上经历了３次＋ １０ ＧＺ／３ ｍ ｉｎ（两次中间间隔３０ ｍ ｉｎ）作用。分别于暴露后３０ ｍ ｉｎ、６ ｈ 和２４ ｈ 处死大鼠取心，提取总ＲＮＡ，用半定量反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测方法检测大鼠心肌组织ＥＴ－１和ｅＮＯＳｍ ＲＮＡ 表达水平。　结果　＋ ＧＺ暴露后３０ ｍ ｉｎ 和６ ｈ 大鼠心肌组织ＥＴ－１ ｍ ＲＮＡ 明显升高，ｅＮＯＳｍ ＲＮＡ 明显降低，但２４ ｈ 时均恢复正常。　结论　＋ ＧＺ暴露可使大鼠心肌组织内ＥＴ－１和ｅＮＯＳｍ ＲＮＡ 表达发生改变，其在心肌损伤中可能起一定的作用，但这种变化是可逆的