硫化氢抑制顺铂致人骨髓间充质干细胞的损伤

背景：在使用顺铂进行化疗时,常因造血干细胞损伤造成严重的骨髓抑制,而目前临床上还没有一种有效的化疗细胞保护剂来减轻其不良反应。目的：探讨硫化氢对顺铂致人骨髓间充质干细胞损伤的保护作用。方法：应用硫氢化钠作为硫化氢的供体,用不同浓度的硫氢化钠与顺铂同时作用于人骨髓间充质干细胞48h后,甲氮甲唑蓝法（MTT）检测细胞存活率,Hoechst33258染色检测细胞凋亡,Western blot检测蛋白的表达。结果与结论：MTT检测发现顺铂可降低骨髓间充质干细胞的存活率,硫氢化钠可呈浓度依赖性的对抗顺铂对人骨髓间充质干细胞生长的抑制作用,0.5,1mmol/L硫氢化钠与20mg/L顺铂共同作用人骨髓间充质干细胞48h后会引起NF-κB（p65）上调和IκB-α的下调,1mmol/L硫氢化钠与20mg/L顺铂在作用6h后磷酸化蛋白激酶1/2明显上调。结果提示,硫化氢可能通过蛋白激酶-NF-κB信号通路来抑制顺铂致人骨髓间充质干细胞的损伤作用。     

甲钴胺体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化

背景：目前骨髓间充质干细胞移植到脊髓损伤动物体内后对脊髓损伤的恢复效果非常有限。甲钴胺是治疗神经系统疾病及损伤的常见药物,其对骨髓间充质干细胞的影响尚不清楚。目的：探讨甲钴胺体外定向诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的可行性,观察分化后的细胞增殖和生长情况。方法：取大鼠胫腓骨骨髓,采用密度梯度离心贴壁细胞培养法分离、培养骨髓间充质干细胞,取第四五代骨髓间充质干细胞,分别以25,50,100mg/L的甲钴胺进行诱导分化24,48和72h。倒置相差显微镜下连续观察细胞形态学变化,MTT法检测细胞活性,RT-PCR和Western blot法检测特异性标志物Nestin和NSE的表达。结果与结论：甲钴胺诱导骨髓间充质干细胞后大部分细胞变成神经元样细胞。与对照组比较,甲钴胺诱导后细胞活性无明显变化。不同剂量甲钴胺诱导48h后,Nestin和NSE在mRNA和蛋白水平表达均上调,其中100mg/L组表达上调最明显;100mg/L甲钴胺诱导24,48和72h后,Nestin和NSE在mRNA和蛋白水平表达均上调,其中72h表达上调最明显。说明甲钴胺可定向诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化,100mg/L为甲钴胺的较佳诱导浓度。     

乙醇诱导大鼠骨髓间充质干细胞的凋亡机制

背景：有研究表明乙醇可诱导骨髓间充质干细胞凋亡并引起成骨细胞和破骨细胞数量减少,但乙醇对骨髓间充质干细胞凋亡的影响以及作用机制目前尚不十分清楚。目的：观察乙醇对大鼠骨髓间充质干细胞凋亡、线粒体功能的影响及bcl-2、Caspase-3表达的变化。方法：应用全骨髓培养法分离培养SD大鼠骨髓间质干细胞,置于0,100,200,300,400,500,600,700,800,900mmol/L乙醇中作用24h,MTT法进行细胞毒性药物实验;置于0,100,200,300,400,500mmol/L乙醇中作用6,12,24h,AnnexinV/PI双标记法流式细胞仪检测细胞凋亡和线粒体膜电位变化情况;置于0,427mmol/L乙醇中作用24h,RT-PCR法检测与凋亡有关的基因bcl-2和Caspase-3mRNA表达水平。结果与结论：MTT检测结果显示427mmol/L是乙醇对大鼠骨髓间充质干细胞生长的半数抑制浓度;AnnexinV/PI检测结果表明,与0mmol/L组比较,随作用时间的延长与乙醇浓度的增加,骨髓间充质干细胞凋亡率及线粒体跨膜电位的破坏水平明显升高（P〈0.05）。与0mmol/L组比较,乙醇作用24h后427mmol/L组bcl-2mRNA表达水平下降,Caspase-3mRNA表达水平增加（P〈0.05）。说明乙醇能诱导大鼠骨髓间充质干细胞凋亡,凋亡的发生可能与线粒体膜电位破坏、线粒体功能障碍、bcl-2和Caspase-3激活有关。     

乙醇诱导大鼠骨髓间充质干细胞的凋亡机制

背景:有研究表明乙醇可诱导骨髓间充质干细胞凋亡并引起成骨细胞和破骨细胞数量减少,但乙醇对骨髓间充质干细胞凋亡的影响以及作用机制目前尚不十分清楚。目的:观察乙醇对大鼠骨髓间充质干细胞凋亡、线粒体功能的影响及bcl-2、Caspase-3表达的变化。方法:应用全骨髓培养法分离培养SD大鼠骨髓间质干细胞,置于0,100,200,300,400,500,600,700,800,900mmol/L乙醇中作用24h,MTT法进行细胞毒性药物实验;置于0,100,200,300,400,500mmol/L乙醇中作用6,12,24h,AnnexinV/PI双标记法流式细胞仪检测细胞凋亡和线粒体膜电位变化情况;置于0,427mmol/L乙醇中作用24h,RT-PCR法检测与凋亡有关的基因bcl-2和Caspase-3mRNA表达水平。结果与结论:MTT检测结果显示427mmol/L是乙醇对大鼠骨髓间充质干细胞生长的半数抑制浓度;AnnexinV/PI检测结果表明,与0mmol/L组比较,随作用时间的延长与乙醇浓度的增加,骨髓间充质干细胞凋亡率及线粒体跨膜电位的破坏水平明显升高(P<0.05)。与0mmol/L组比较,乙醇作用24h后427mmol/L组bcl-2mRNA表达水平下降,Caspase-3mRNA表达水平增加(P<0.05)。说明乙醇能诱导大鼠骨髓间充质干细胞凋亡,凋亡的发生可能与线粒体膜电位破坏、线粒体功能障碍、bcl-2和Caspase-3激活有关。     

芒果苷对缺氧损伤骨髓间充质干细胞的保护作用

背景：研究表明骨髓间充质干细胞移植在临床治疗方面具有广阔的应用前景。然而,移植细胞的死亡限制了组织再生,寻找新的抗自由基和保护骨髓间充质干细胞的药物有着重要意义。目的：研究芒果苷对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞缺氧损伤的保护作用。方法：采用氯化钴（CoCl 2）建立体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞缺氧损伤模型。将细胞分为正常对照组、氯化钴缺氧损伤组、氯化钴加芒果苷20,40,80,160μmol/L组。缺氧损伤12,24 h检测各组骨髓间充质干细胞培养上清液中超氧化物歧化酶、丙二醛、过氧化氢酶水平。缺氧损伤3,6,12,24 h检测各组骨髓间充质干细胞内活性氧变化。结果与结论：芒果苷能明显提高缺氧损伤的骨髓间充质干细胞的存活率,提高细胞内超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活性,降低细胞内丙二醛、活性氧水平,有效保护缺氧损伤下的骨髓间充质干细胞。芒果苷具有较强的抗氧化能力及缺氧保护作用,可明显减轻骨髓间充质干细胞的氧化应激损伤。     

辛伐他汀对高糖高脂诱导人骨髓间充质干细胞凋亡的影响

背景：研究表明,他汀类药物能够促进骨髓间充质干细胞的增殖与黏附能力,抑制高糖高脂培养下骨髓间充质干细胞的凋亡。目的：观察辛伐他汀对高糖高脂诱导条件下人骨髓间充质干细胞凋亡的影响。方法：将0.001,0.01,0.1,1.0μmol/L辛伐他汀分别与高糖高脂诱导条件下人骨髓间充质干细胞培养48h,以正常培养骨髓间充质干细胞及高糖高脂诱导条件下培养的骨髓间充质干细胞为对照。倒置显微镜下观察细胞形态,MTT法比较不同浓度辛伐他汀对高糖高脂环境下骨髓间充质干细胞存活率的影响,应用流式细胞术检测细胞凋亡,加入PI3K/Akt信号转导通路抑制剂LY294002后辛伐他汀对骨髓间充质干细胞凋亡的影响。结果与结论：与高糖高脂诱导组比较,辛伐他汀0.01,0.1,1.0μmol/L组骨髓间充质干细胞存活率均升高（P〈0.01）,其中辛伐他汀浓度在0.1μmol/L时骨髓间充质干细胞存活率升高最显著（P〈0.01）;同时流式细胞仪检测结果显示,辛伐他汀0.01,0.1,1.0μmol/L组细胞凋亡率下降（P〈0.01）,其中0.1μmol/L组凋亡率下降最显著（P〈0.01）。0.1μmol/L辛伐他汀对骨髓间充质干细胞的影响可被LY294002阻断。说明辛伐他汀能抑制高糖高脂诱导条件下骨髓间充质干细胞的凋亡,其机制可能与PI3K/Akt信号途径有关。     

辛伐他汀对高糖高脂诱导人骨髓间充质干细胞凋亡的影响

背景:研究表明,他汀类药物能够促进骨髓间充质干细胞的增殖与黏附能力,抑制高糖高脂培养下骨髓间充质干细胞的凋亡.目的:观察辛伐他汀对高糖高脂诱导条件下人骨髓间充质干细胞凋亡的影响.方法:将0.001,0.01,0.1,1.0 μmol/L辛伐他汀分别与高糖高脂诱导条件下人骨髓间充质干细胞培养48 h,以正常培养骨髓间充质干细胞及高糖高脂诱导条件下培养的骨髓间充质干细胞为对照.倒置显微镜下观察细胞形态,MTT法比较不同浓度辛伐他汀对高糖高脂环境下骨髓间充质干细胞存活率的影响,应用流式细胞术检测细胞凋亡,加入PI3K/Akt信号转导通路抑制剂LY294002后辛伐他汀对骨髓间充质干细胞凋亡的影响.结果与结论:与高糖高脂诱导组比较,辛伐他汀0.01,0.1,1.0 μmol/L组骨髓间充质干细胞存活率均升高(P<0.01),其中辛伐他汀浓度在0.1 μmol/L时骨髓间充质干细胞存活率升高最显著(P<0.01);同时流式细胞仪检测结果显示,辛伐他汀0.01,0.1,1.0 μmol/L组细胞凋亡率下降(P<0.01),其中0.1 μmol/L组凋亡率下降最显著(P<0.01).0.1 μmol/L辛伐他汀对骨髓间充质干细胞的影响可被LY294002阻断.说明辛伐他汀能抑制高糖高脂诱导条件下骨髓间充质干细胞的凋亡,其机制可能与PI3K/Akt信号途径有关.     

地塞米松对大鼠骨髓间充质干细胞凋亡的影响

背景:研究发现地塞米松能有选择性地促进骨髓间充质干细胞凋亡.目的:了解地塞米松对骨髓间充质干细胞凋亡的影响以及作用机制.方法:体外培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,传至第2代后分两组培养,对照组不加地塞米松,实验组分别加入10-9,10-8,10-7 mol/L地塞米松,作用3,6,12,24 h后通过流式细胞仪检测凋亡率.MTT法检测地塞米松对骨髓间充质干细胞增殖率的影响.取10-7 mol/L地塞米松作用骨髓间充质干细胞24 h,反转录后检测Caspase-3和bcl-2的表达.结果与结论:与对照组比较,10-8,10-7 mol/L地塞米松作用12~24 h对骨髓间充质干细胞的凋亡有明显促进作用,且与作用浓度和时间存在相关性,随着作用浓度的增大和时间的延长骨髓间充质干细胞的凋亡率有增高的趋势.MTT结果表明10-8,10-7 mol/L地塞米松作用24 h对骨髓间充质干细胞增殖率影响显著,这与上述流式细胞仪的检测结果相符.RT-PCR提示地塞米松作用组Caspase-3显著增高,bcl-2降低.结果证实地塞米松可能是通过细胞外通路和(或)线粒体通路促进骨髓间充质干细胞凋亡.     

黄芪甲甙对大鼠骨髓间充质干细胞多种造血相关因子表达的影响

背景:黄芪甲甙是中药黄芪的主要有效成分,能促进骨髓间充质干细胞的增殖及诱导分化,但涉及具体作用机制的报道较少.目的:探讨中药黄芪甲甙对大鼠骨髓间充质干细胞造血相关因子表达的影响.方法:全骨髓贴壁法和单克隆培养法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,接种于96孔板中,加药组分别用25,50,100,200 g/L黄芪甲甙100 μL孵育72 h,对照组仅加等量DMEM-LG培养液.间接免疫荧光法鉴定其生物学特性,MTT法检测黄芪甲甙对骨髓间充质干细胞增殖的影响,RT-PCR法检测黄芪甲甙干预后骨髓间充质干细胞造血相关因子的表达.结果与结论:第3代骨髓间充质于细胞高表达CD44,低表达造血细胞表面标志CD45.与对照组比较,黄芪甲甙呈时间及剂量依赖性促进骨髓间充质干细胞的增殖,以200g/L黄芪甲甙干预72 h促增殖作用最强(P＜0.05).与对照组比较,加药组骨髓间充质干细胞SCF的表达显著增加(P＜0.01),TPO,GM-CSF,TGF-β1等细胞因子的表达无明显变化(P＞0.05),不表达自细胞介索3.黄芪甲甙可促进骨髓间充质干细胞的体外增殖,可能与其诱导骨髓间充质干细胞分泌SCF有关.     

地塞米松对大鼠骨髓间充质干细胞凋亡的影响

背景：研究发现地塞米松能有选择性地促进骨髓间充质干细胞凋亡。目的：了解地塞米松对骨髓间充质干细胞凋亡的影响以及作用机制。方法：体外培养 SD 大鼠骨髓间充质干细胞,传至第 2 代后分两组培养,对照组不加地塞米松,实验组分别加入 10-9,10-8,10-7 mol/L 地塞米松,作用 3,6,12,24 h 后通过流式细胞仪检测凋亡率。MTT 法检测地塞米松对骨髓间充质干细胞增殖率的影响。取 10-7 mol/L 地塞米松作用骨髓间充质干细胞 24 h,反转录后检测 Caspase-3 和 bcl-2 的表达。结果与结论：与对照组比较,10-8,10-7 mol/L 地塞米松作用 12~24 h 对骨髓间充质干细胞的凋亡有明显促进作用,且与作用浓度和时间存在相关性,随着作用浓度的增大和时间的延长骨髓间充质干细胞的凋亡率有增高的趋势。MTT 结果表明10-8,10-7 mol/L 地塞米松作用 24 h 对骨髓间充质干细胞增殖率影响显著,这与上述流式细胞仪的检测结果相符。RT-PCR提示地塞米松作用组 Caspase-3 显著增高,bcl-2 降低。结果证实地塞米松可能是通过细胞外通路和（或）线粒体通路促进骨髓间充质干细胞凋亡。     

硫化氢对脂多糖诱导大鼠肺动脉反应性和损伤的影响

目的 观察硫化氢(H2S)对脂多糖(LPS)所致肺动脉反应性紊乱和肺动脉损伤的影响.方法 72只SD大鼠按随机数字表法分为对照组、LPS组、H2S供体硫氢化钠(NaHS)+LPS组和NaHS+生理盐水(NS)组,每组18只.采用气管内滴注0.8 ml/kg LPS(200 μg/200 μl)染毒.滴注LPS之前10 min和之后2 h分别经腹腔注射0.5 ml NaHS(28 μmol/kg).实验12 h处死大鼠,取颈动脉血,检测血清H2S含量;制备肺动脉环(PARs),采用离体血管环张力测定技术检测血管反应性变化;检测肺动脉丙二醛(MDA)含量,并观察肺动脉形态学改变.结果 与对照组相比,滴注LPS后,PARs对苯肾上腺素(PE,10-6 mol/L)的收缩反应(g/mg)明显升高(0.86±0.20比0.56±0.13),对乙酰胆碱(ACh,10-6 mol/L)的舒张反应明显降低[(65.18±7.05)%比(84.13±8.84)%],肺动脉组织MDA含量(mmol/L)升高(32.03±7.81比5.82±0.92),血清中H2S含量(μmol/L)降低(175.23±27.36比238.12±16.38),差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);组织形态学观察显示,肺动脉内皮细胞和组织结构严重受损.给予NaHS后可明显改善LPS引起的上述变化,血管收缩反应下降[(0.61±0.17) g/mg],血管舒张反应升高[(82.92±9.71)%],肺动脉组织MDA含量下降[(16.88±3.54) mmol/L],血清H2S含量升高[(242.70±38.80) μmol/L],差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);肺动脉内皮细胞和组织结构损伤也得到明显改善.NaHS+NS组除H2S含量显著高于对照组外,余指标与对照组比较差异无统计学意义.结论 外源性应用H2S不仅可逆转LPS引起的肺动脉反应性紊乱,还可减轻LPS引起的肺动脉组织损伤.     

抗血小板药物对人骨髓间充质干细胞增殖及分泌功能的影响

背景：有研究指出氯吡格雷、噻氯匹定可引起粒细胞减少，阿司匹林可抑制内皮祖细胞增殖。目前缺乏这些抗血小板药物会对移植入心肌的骨髓间充质干细胞产生何种作用的报道。目的：探讨氯毗格雷、噻氯匹定和阿司匹林对人骨髓间充质干细胞增殖及分泌功能的影响。设计、时间和地点：细胞学体外观察，于2006—03／12在上海市疾病预防控制中心毒理学实验室完成。材料：第2代人骨髓间充质干细胞由上海第九人民医院组织工程研究中心提供。氯吡格雷、噻氯匹定为杭州赛诺菲圣德拉堡民生制药有限公司产品，批号分别为国药准字J20040006和国药准字H19980186。阿司匹林由拜耳医药有限公司生产，批号为国药准字20050059。方法：骨髓间充质干细胞解冻后，加入含100U／mL青霉素、100mg/L链霉素、10％胎牛血清的低糖DMEM体外扩增培养，传至第6代，分别用不同浓度的氯吡格雷、噻氯匹定、阿司匹林进行干预处理，并设立空白对照。主要观察指标：MTT比色法检测细胞增殖情况，流式细胞仪检测细胞表面抗原表达，EHSA法测定细胞培养液中血管内皮生长因子浓度。结果：反映骨髓间充质干细胞增殖变化的A570值在0．02，0．1，0．4，2，10，40μmol／L氯吡格雷或噻氯匹定作用后均明显高于空白对照（P〈0．01）；经60，600，2000μmol/L阿司匹林处理后则低于空白对照（P〈0．05）。细胞表面抗原CD34、CD105、CD106阳性细胞百分率经3种抗血小板药物作用后与空白对照基本相似。与空白对照比较，经0．02μmol／L氯毗格雷及5，2000μmol/L阿司匹林处理后血管内皮生长因子含量无明显变化（P〉0．05）；40μmol／L氯吡格雷或噻氯匹定作用后血管内皮生长因子含量均显著降低：0．02μmol／L噻氯匹定作用后血管内皮生长因子含量显著升高（P〈0．01）。结论：氯吡格雷和噻氯匹定对人骨髓间充质干细胞具有明显的促增殖作用，阿司匹林可抑制其增殖。高浓度氯吡格雷和噻氯匹定能够抑制人骨髓间充质干细胞分泌血管内皮生长因子，低浓度噻氯匹定可促进其分泌。此3种抗血小板药物对人骨髓间充质干细胞的进一步分化无明显影响。     

硫化氢逆转脂多糖诱导大鼠肺动脉低反应性以及与一氧化碳的关系

目的 观察整体水平应用硫化氢(H2S)后脂多糖(LPS)诱导的离体肺动脉对H2S舒张反应的变化及其与一氧化碳(CO)的关系.方法 将48只大鼠按照随机数字表法分为对照组[给予生理盐水(NS)]、LPS组、H2S供体硫氢化钠(NaHS)+LPS组和NaHS+NS组4组,每组12只.采用经大鼠气管内滴注LPS(0.8 ml/kg)染毒;NaHS±+LPS组和NaHS±NS组滴注LPS或NS之前10 min和之后2 h腹腔注射NaHS各0.5 ml(28 μmol/kg).各组取6只大鼠于染毒后12 h制备肺动脉环(PARs),采用离体血管环张力测定技术检测用血红素氧合酶-1(HO-1)抑制剂锌原卟啉Ⅸ(ZnPPⅨ)孵育前后PARs对累积浓度NaHS的舒张反应变化;各组另取6只大鼠于染毒后12 h检测出肺血(EPB)和入肺血(APB)中碳氧血红蛋白(COHb)含量,以其差值反映肺循环CO生成的水平.结果 与对照组相比,滴注LPS后PARs对NaHS的最大舒张反应百分比明显降低[(75.72±7.22)%比(96.40±4.40)%,P＜0.01＝;用ZnPPⅨ孵育PARs后,LPS诱导的PARs对NaHS舒张反应进一步降低[(62.91±8.22)%比(75.72±7.22)%,P＜0.01＝.腹腔注射NaHS可明显逆转LPS诱导的PARs对NaHS的低反应性,PARs对NaHS的最大舒张反应百分比明显升高[(94.65±8.45)%比(75.72±7.22)%,P＜0.01＝;但用ZnPPⅨ孵育PARs后,PARs对NaHS的舒张反应较孵育前显著下降[(83.75±9.76)%比(94.65±8.45)%,P＜0.01＝.NaHS+NS组中PARs对NaHS的舒张反应与对照组相比无明显差异,且在ZnPPⅨ孵育前后也无明显变化.COHb检测结果显示,与对照组相比,滴注LPS后APB和EPB中COHb水平的差值明显增高[(3.12±0.48)%比(2.12±0.32)%,P＜0.05＝;腹腔注射NaHS后,COHb水平的差值[(4.03±0.56)%]较LPS组进一步升高(P＜0.01＝.结论 腹腔注射H2S可以改善LPS诱导的离体肺动脉对H2S的低反应性,其机制可能与增强肺动脉HO-1/CO体系有关.

Abstract：

Objective To explore the effect of hydrogen sulfide (H2S) on abnormal pulmonary artery reactivity induced by lipopolysaccharide (LPS) and its relationship with carbon monoxide (CO). Methods Forty-eight rats were divided into four groups randomly according to table of random number: control group (normal saline, NS), LPS group, a donor of H2S sodium hydrosulfide (NaHS)+LPS group, and NaHS+NS group (n=12 in each group). Rats were given LPS by intratracheal instillation (0. 8 ml/kg). 0. 5 ml of NaHS (28 μmol/kg) was injected intraperitoneally 10 minutes before LPS or NS instillation and 2 hours after LPS or NS instillation in NaHS+LPS and NaHS+NS groups. Twelve hours after instillation of LPS, 6 rats from each group were sacrificed. The pulmonary artery rings (PARs) were prepared and the changes in cumulative relaxation response of PARs to NaHS were detected before and after incubation with an inhibitor of heme oxygenase-1 (HO-1) zinc protoporphyrin Ⅸ (ZnPP Ⅸ ) using isolated vascular ring tension detecting technique. Twelve hours after LPS instillation, the remaining 6 rats in each group were sacrificed, and the contents of carboxyhemoglobin (COHb) in efferent pulmonary blood (EPB) and afferent pulmonary blood (APB) were measured, and the difference between the contents of COHb in EPB and that of APB was calculated to represent content of CO from pulmonary circulation. Results In the present study, compared with control group, after the instillation of LPS the percentage of relaxation response of PARs to NaHS was significantly declined [(75. 72±7. 22)% vs. (96. 40±4. 40)%, P＜0. 01]. After being incubated with ZnPP Ⅸ, the decreased relaxation response of PARs to NaHS induced by LPS was further depressed [(62. 91 ±8. 22) % vs. ( 75. 72 ± 7. 22) %, P ＜ 0. 01]. Administration of NaHS intraperitoneally reversed the hyporesponsiveness of PARs to NaHS, the percentage of relaxation response of PARs to NaHS was significantly increased [(94.65± 8.45)% vs. (75.72 ± 7.22)%, P＜0.01]. However ZnPP Ⅸ also attenuated the effect [(83. 75 ± 9. 76)% vs. (94. 65 ± 8. 45)%, P ＜ 0. 01]. NO significant changes were observed between NaHS+NS group and control group, also between the results before and after ZnPP Ⅸincubation. Compared with control group, the difference between the contents of COHb in EPB and that of APB increased after instillation of LPS [(3. 12±0. 48)% vs. (2. 12±0. 32)%, P＜0. 05], which further increased after intraperitoneal administration of NaHS [(4.03 ± 0. 56) %, P ＜ 0. 01]. Conclusion The results suggested that intraperitoneal administration of H2S could reverse hyporesponsiveness of PARs to H2S induced by LPS, and the result might be related to an intensification of HO-1/CO system in pulmonary artery tissue.     

水杨酸钠对顺铂导致的螺旋神经节细胞毒性的保护作用

目的:探讨水杨酸钠对顺铂导致的螺旋神经节细胞(SGNs)毒性的保护作用。方法:体外培养SGNs。分组:空白对照组,不同浓度水杨酸钠组、顺铂组和顺铂+水杨酸钠组(100～900μg/mL),加药48h后,通过显微镜下细胞计数及噻唑蓝(MTT)比色法对SGNs进行药物毒性检测,通过Hoechst33258进行细胞核染色,观察细胞凋亡情况。结果:顺铂(4、6、8μg/mL)对SGNs有明显毒性,促使细胞凋亡,并且随浓度增加,细胞数量明显减少,与空白对照组相比差异具有显著统计学意义(P<0.05)。结论:在体外培养的条件下,水杨酸钠在一定浓度范围内可以拮抗顺铂导致的SGNs毒性,其保护机制可能与抑制细胞凋亡有关。     

血红素加氧酶-1对原代培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡及线粒体跨膜电位的影响

目的 探讨血红素加氧酶-1 (HO-1)对过氧化氢(H2O2)氧化损伤肺泡Ⅰ型上皮细胞(AEC Ⅰ)凋亡以及线粒体跨膜电位(MTMP)的影响.方法 将24只健康雄性SD大鼠腹腔注射麻醉处死后取肺,分离纯化AEC Ⅰ接种于培养板,原代培养24 h后等量分为正常对照组、H2O2损伤组、HO-1保护组、HO-1抑制组4组.采用0.5 mmol/L H2O2刺激AEC Ⅰ 2.5 h建立细胞氧化损伤模型.制模后用0.2μmol/L HO-1或20μmol/L锌原卟啉Ⅸ处理给予保护或抑制.处理2.5h后用荧光显微镜观察细胞的形态学变化;分别于处理0.5、1.0、1.5、2.0、2.5h5个时间点用流式细胞仪检测细胞凋亡率及MTMP去极化比例的变化.结果 荧光显微镜下观察.:H2O2损伤组可见大量呈绿色(凋亡早期)、红色(凋亡中晚期)荧光的凋亡细胞;HO-1保护组所见绿色或红色荧光细胞明显减少;HO-1抑制组与H2O2损伤组镜下所见相似.流式细胞仪检测结果显示:与正常对照组比较,H2O2损伤组细胞凋亡率增加,且随H2O2作用时间延长逐渐增加,2.5h达峰值[0.5 h:(30.27±0.74)％比(3.76±0.81)％,2.5 h:(40.46±0.91)％比(22.74±0.60)％,均P＜0.05],MTMP去极化比例明显降低(0.99±0.21比1.91±0.16,P＜0.05);与H2O2损伤组比较,HO-1保护组AEC Ⅰ细胞凋亡率明显降低[0.5 h:(5.99±0.60)％比(30.27±0.74)％,2.5h:(22.69±1.69)％比(40.46±0.91)％,均P＜0.05],MTMP去极化比例明显升高(2.02±0.12比0.99±0.21,P＜0.05);与HO-1保护组比较,HO-1抑制组细胞凋亡率明显增加[0.5 h:(30.73±1.08)％比(5.99±0.60)％,2.5h:(41.38±0.57)％比(22.69±1.69)％,均P＜0.05],MTMP去极化比例明显降低(0.98±0.09比2.02±0.12,P＜0.05).结论HO-1可保护AEC Ⅰ细胞完整性,降低细胞凋亡率并且稳定MTMP,对H2O2所致大鼠AEC Ⅰ氧化损伤具有一定的保护作用.     

硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶在内毒素性急性肺损伤发生中的作用

目的 探讨硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶(H2S/CSE)体系在内毒素所致大鼠急性肺损伤(ALI)中的作用并初探其机制.方法 将64只SD大鼠随机分为对照组、ALl组(经气管内滴注脂多糖(LPS)复制ALI模型]、硫氢化钠(NaHS)组和炔丙基甘氨酸(PPG)组,各组再分为给药后4 h和8 h亚组,每个亚组8只.于各时间点处死动物,光镜下观察肺组织病理学改变;化学法检测血浆H2S、一氧化氮(NO)和一氧化碳(CO)含量、肺组织丙二醛(MDA)含量、髓过氧化物酶(MPO)、CSE、诱生型一氧化氮合酶(iNOS)和血红素加氧酶(HO)活性;放射免疫法检测肺组织P-选择素含量,用免疫组化法检测肺组织iNOS、HO-1的蛋白表达.结果 气管内滴注LPS可引起肺组织明显的病理学改变;肺组织MDA含量、MPO活性和P-选择素水平升高,血浆iNOS、HO活性和肺组织iNOS、HO-1蛋白表达增强,血浆NO、CO含量增加,血浆H2S含量和肺组织CSE活性下降(P<0.05或P<0.01).预先给予NaHS可显著减轻内毒素所致上述指标的改变;而预先给予PPG可加重内毒素所致肺损伤,使肺组织MDA含量、MPO活性、P-选择素水平,血浆NO含量,肺组织iNOS活性和iNOS蛋白表达进一步增加,但对血浆CO含量、肺组织HO活性和HO-1蛋白表达无明显影响.结论 H2S/CSE体系的下调在内毒素所致大鼠ALI的发病学中有一定作用,内、外源性H2S具有抗内毒素所致ALI的作用,该作用可能与其抗氧化效应、减轻中性粒细胞所致肺过度的炎症反应以及下调NO/iNOS体系、上调CO/HO-1体系有一定关系.     

端粒酶活性的抑制对顺铂诱导HL—60细胞凋亡的影响

采用端粒酶聚合酶链反应-酶联免疫吸附测定(PCR ELISA)的方法,检测人类端粒酶逆转录酶(hTERT)基因反义寡脱氧核苷酸(ASODN)处理HL-60细胞前后端粒酶活性的改变,并进一步通过姬姆萨染色及流式细胞术方法,分析HL-60细胞的端粒酶活性受到抑制后顺铂对HL60细胞凋亡的影响.结果显示hTERT基因ASODN作用于HL60细胞后,端粒酶活性表现逐渐下降;hTERT ASODN与顺铂联合可诱导HL-60细胞出现一系列特征性的凋亡细胞的形态学变化;hTERT基因ASODN作用于HL-60细胞24小时再加入顺铂,用流式细胞术测定凋亡细胞的百分率明显高于正义寡核苷酸(S)DN)联合顺铂作用组和单用顺铂作用组(P＜0.01).然而,hTERT基因的ASODN下调HL-60细胞的端粒酶活性以后,再用DNR和Ara-c处理不能加速HL-60细胞的凋亡.以上的结果表明了端粒酶活性的下调可选择性促进顺铂诱导HL-60细胞凋亡.     

Regulatory effects of hydrogen sulfide on alveolar epithelial cell endoplasmic reticulum stress in rats with acute lung injury

BACKGROUND: The present study was undertaken to examine the regulatory effect of hydrogen sulfide(H2S) on endoplasmic reticulum stress in alveolar epithelial cells of rats with acute lung injury(ALI) induced by oleic acid(OA).METHODS: Seventy-two male Sprague Dawley(SD) rats were divided into control group, oleic acid-induced ALI group(OA group), oleic acid-induced ALI with sodium hydrosulfide(Na HS) pretreatment group(OA+Na HS group), and sodium hydrosulfide treatment group(Na HS group). Rats of each group were further subdivided into 3 subgroups. Index of quantitative assessment of histological lung injury(IQA), wet/dry weight ratio(W/D) and H2 S level of lung tissues were measured. The expressions of endoplasmic reticulum stress markers including glucose-regulated protein 78(GRP78) and α-subunit of eukaryotic translation initiation factor-2(el F2α) in lung tissues were measured by immunohistochemical staining and Western blotting.RESULTS: The IQA score and W/D ratio of lung tissues at the three time points significantly increased in rats injected with OA, but significantly decreased in other rats injected with OA and Na HS. The level of H2 S in lung tissue at the three time points significantly decreased in rats injected with OA, but significantly increased in other rats injected with both OA and Na HS. GRP78 and el F2α decreased in rats injected with OA, but increased in other rats injected with both OA and Na HS, especially at 4-hour and 6-hour time points.CONCLUSION: The results suggested that H2 S could promote alveolar epithelial cell endoplasmic reticulum stress in rats with ALI.