辐射诱发BEP 2 D恶性转化中Smad 7对TGF-β/SMADs信号通路的调控

目的 研究BEP2D细胞经辐射诱发恶性转化过程中，作为SMAD蛋白家族的抑制分子，Smad7对TGF-β／SMAD介导信号通路的调控。方法 用Northem blot检测TGF-β刺激之后，永生化BEP2D细胞及辐射诱发恶性转化的BERP 35T2细胞中Smad7 mRNA的表达水平。人工合成SMAD结合元件(SBE)重复序列，同报告基因碱性磷酸酶融合。构建好的载体同Smad7真核表达载体共转染，TGF-β刺激，通过报告基因的表达丰度来检测Smad7对TGF-β／SMADs介导的信号通路的调控。结果 Northern杂交结果表明，永生化细胞Smad7基因对TGF-β刺激的应答正常，恶性化细胞的应答降低。基因转染的结果表明，永生化细胞中SBE的基础活性较恶性化细胞高；TGF—β刺激之后，永生化细胞中SBE活性显著增强，恶性化细胞变化不明显；同Smad7真核表达载体共转染之后，两种细胞中SBE活性均显著降低。结论 在辐射诱发细胞发生恶性转化过程中，Smad7基因对TGF-β信号通路的反馈调节作用发生紊乱，使TGF-β信号通路持续处于抑制状态，TGF-β对细胞的负性调控作用减弱，细胞进一步向恶性化发展。     

PTD-NGF融合蛋白的制备、活性分析及其跨膜功能研究

目的:构建PTD-NGF融合基因,检测表达的重组蛋白生物学活性和跨膜转运功能.方法:提取小鼠大脑组织RNA逆转录后,钓取β-NGF基因.PCR技术构建PTD-NGF融合基因,插入表达质粒pBV220后,转化大肠杆菌DH5α进行表达与纯化.稀释法复性后,SDS-PAGE及Western印迹鉴定表达重组蛋白.PC12细胞分化培养检测融合蛋白的生物学活性.重组蛋白与HepG2细胞共孵育,免疫组化检测其跨膜功能.结果:PTD-NGF融合基因测序正确,表达产物与目的蛋白大小相符,能与NGF抗体发生结合反应.纯化后蛋白纯度可约达90%以上,重组蛋白经复性可诱导PC12细胞出现明显分化,并能跨膜进入HepG2细胞内部.结论:成功构建了融合基因,表达的重组蛋白具有显著的生物学活性及跨膜转运功能.     

Schlafen2基因在细胞中的表达及其生物学特性研究

目的:建立Schlafen2(Slfn2)基因稳定表达的细胞系以进一步研究其生物学功能.方法:构建pEGFP- Slfn2真核表达载体;瞬时转染pEGFP- Slfn2载体及其对照载体于NIH/3T3细胞,观察细胞中Slfn2基因的表达及分布;稳定转染pEGFP-Slfn2及其对照空载体于NIH/3T3细胞,G418筛选获得抵制的细胞株,用Northern印迹进一步鉴定Slfn2在各细胞株中的表达情况;利用细胞生长曲线和Transwell细胞侵袭实验检测Slfn2对细胞增殖及迁移能力的影响.结果:本研究获得了稳定表达Slfn2的细胞株,该基因表达的蛋白在细胞核及细胞浆均有分布;稳定表达该基因的细胞株的增殖及迁移能力均显著降低.结论:Slfn2基因可能是一个潜在的肿瘤抑制基因.     

模拟失重下氧化应激对EA.hy926细胞miRNA表达谱的影响及生物信息学分析

目的探索模拟失重条件下EA.hy926细胞氧化应激后microRNAs(miRNAs)表达谱的变化及生物学意义。方法 EA.hy926细胞分为对照组(Con组)、对照氧化应激组(Con+H2O2)、模拟失重组(MG组)和模拟失重后氧化应激组(MG+H2O2),采用Illumina HiSeq 2500平台开展miRNAs测序并筛选差异表达miRNAs。筛选出的miRNAs以qRT-PCR进行验证,对验证具有显著差异表达的miRNAs进行靶基因预测、靶基因Gene Ontology(GO)功能富集分析、KEGG信号通路分析以及STRING蛋白互作分析。结果模拟失重下氧化应激导致EA.hy926细胞内miRNAs表达谱发生改变。qRT-PCR结果显示,与Con+H2O2组相比,MG+H2O2组细胞内hsa-miR-29b-3p、hsa-miR-200c-3p表达增加,与miRNA测序结果一致。GO及KEGG通路显著性富集分析结果显示,hsa-miR-29b-3p靶基因显著富集于细胞外基质等生物学过程及局部黏附信号通路,hsa-miR-200c-3p靶基因显著富集于调控细胞代谢过程等生物学过程及miRNA癌症通路等信号通路。蛋白互作分析结果表明,hsa-miR-29b-3p靶基因中COL家族蛋白处于互作关键位置,hsa-miR-200c-3p靶基因中RHOA处于互作关键位置。结论模拟失重下氧化应激可导致EA.hy926细胞miRNAs表达出现显著差异,其中hsa-miR-29b-3p和hsa-miR-200c-3p可通过对靶基因及其信号通路调节对内皮细胞功能发挥调控作用。     

前交叉韧带离断联合半月板切除诱发的骨关节炎早期模型相关基因芯片数据的生物信息学分析

目的:探讨前交叉韧带(anterior cruciate ligament,ACL)离断联合半月板切除诱发的骨关节炎(osteoarthritis,OA)的基因表达和生物过程的改变,为OA分子机制的进一步研究提供生物信息学依据。方法:从GEO数据库下载Appleton等构建的ACL离断联合半月板切除诱发的OA早期大鼠模型的基因芯片数据集,应用生物信息学方法筛选差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),并进行基因本体论(Gene ontology,GO)和日本京都基因和基因组百科全书代谢通路数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析。结果:共筛选出170个DEGs,其中包括97个上调基因和73个下调基因。上调基因主要富集在细胞外基质,并与细胞外基质交互通路等信号通路关系密切。而下调基因主要富集在肌肉收缩的生物学功能中,并与PPAR通路等信号通路关系密切。结论:细胞外基质和肌肉收缩的改变对OA的发生发展起着关键作用。细胞外基质受体交互通路和PPAR信号通路与OA密切相关,值得进一步深入研究。     

CDC42在HBx介导肝细胞恶性转化中作用的定量蛋白质组学研究

目的寻找在乙肝病毒 X 蛋白（HBx）诱发肝细胞恶性转化过程中 CDC42信号通路发挥作用的介导因子。方法利用基于质量亏损的准等重二甲基标记（pIDL）的定量蛋白质组学方法,检测 CDC42基因敲除前后HBx 转基因细胞蛋白质组的差异。筛选差异蛋白并对差异蛋白进行基因本体（gene ontology,GO）功能分析。结果与结论共定量到3409个蛋白,筛选出220个差异蛋白,通过 GO 分析发现与细胞骨架组织相关的 palladin、成蛋白样亚家族1（formin-like 1,FMNL1）和角蛋白-19均发生显著下调。该研究为 CDC42在 HBx 介导 Huh7细胞恶性转化的机制研究提供了候选基因和蛋白。     

MTAP在人BEP2D细胞辐射致癌模型和肺癌中表达研究

目的探索甲硫腺苷磷酸化酶(Methyhhioadenosine Phosphorylase，MTAP)在人支气管上皮BEP2D永生化细胞的恶性转化过程和临床非小细胞肺癌中的表达变化。方法培养BEP2D和BERP35T-2细胞，制备细胞总蛋白，进行双相电泳和质谱分析；选择有表达差异的蛋白质点MTAP，在细胞模型中进行NorthernBlot分析；对获得的15例肺癌标本用RT—PGR方法分析验证MTAP的表达水平。结果双相电泳发现MTAP在恶性转化细胞BERP35T-2中表达降低；Northern Blot分析表明MTAP mRNA在BEP2D永生化细胞中表达水平很高，而在BERP35T-2恶转细胞中表达极低；对15例非小细胞肺癌进行RT-PCR分析，发现MTAP在73．3％(11／15)的肿瘤组织中低表达；在中／低分化组肺癌的低表达频率(90．9％)显著高于高分化组(25％)，在腺癌与鳞癌组则没有显著性差异。结论MTAP低表达现象与肺癌恶性转化密切相关，可能发挥抑癌基因的生物学功能。     

宫颈癌中转移相关基因MTA1高表达的临床意义及其协同表达基因的生物信息学分析

目的 分析转移相关基因MTA1高表达与宫颈癌临床转移的相关性,并筛选MTA1协同表达基因网络中的潜在干预靶点基因.方法 应用SPSS软件分析TCGA-CESC数据集中MTA1与宫颈癌转移和病理分级的相关性,应用edgeR软件分析该数据集中MTA1高表达组与低表达组的全转录组差异表达基因,应用DAVID平台对这些差异表达基因进行聚类分析,应用STRING在线平台和Cytospace软件对这些基因进行互作网络分析,筛选关键的网络节点基因.结果 TCGA-CESC宫颈癌数据库中MTA1表达水平与肿瘤临床转移和病理分级呈显著正相关(P＜o.o1),在不同MTA1表达水平的宫颈癌转录组中存在显著且较一致的差异表达基因集,这些基因主要聚集在癌症通路、干细胞通路、细胞转移、细胞分化等方面,与肿瘤的恶性生物学行为显著相关.基因筛选显示,宫颈癌中与MTA1协同表达的Agt、Acta1、Fpr2、Pmch和RGS18等基因是差异表达基因集中最重要的节点基因,这些基因聚集在GPCR相关通路.结论 MTA1高表达与宫颈癌转移显著相关,且与肿瘤细胞的干细胞通路、趋化因子受体通路、细胞转移、细胞分化等基因调控网络活化相关.MTA1的协同表达基因网络中的节点基因可能参与了宫颈癌的转移调控,并最有可能成为宫颈癌治疗的分子靶点.     

肺腺癌细胞表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂耐药相关上皮间质转化基因筛选及其调控通路分析

目的基于生物信息学方法,在肺腺癌细胞中筛选出与表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)耐药、与上皮间质转化(EMT)相关的差异基因,构建蛋白互作网络,进一步筛选出枢纽基因,分析枢纽基因在肺腺癌与正常组织之间的差异表达。方法用GEO数据库中的肺腺癌细胞EGFR-TKI耐药基因表达谱芯片和EMT基因表达谱芯片共同筛选,STRING构建蛋白互作网络,MCODE分析蛋白互作网络的功能模块与枢纽基因,Oncomine分析枢纽基因在肺腺癌与正常组织之间的差异表达。结果细胞周期依赖性激酶阻滞基因1B(CDKN1B)、肌微管素相关蛋白3(MTMR3)是网络枢纽基因。CDKN1B参与有丝分裂细胞周期、苏氨酸激酶、酶复合物、P53信号通路、PI3K/AKT信号通路等调控过程; MTMR3参与磷脂酰肌醇信号通路、磷脂醇激酶、肌酸肌醇代谢等调控过程。与正常组织比较,CDKN1B在肺腺癌组织的表达降低,MTMR3在肺腺癌组织的表达升高,差异均有统计学意义(P <0. 05)。结论本研究发现了与肺腺癌细胞EGFR-TKI耐药与EMT相关的枢纽基因CDKN1B、MTMR3及其调控通路,这有助于分析肺腺癌EGFR-TKI耐药机制,寻找靶向治疗的分子标记物。     

绵羊中miRNA-150和miRNA-143的组织表达谱研究

miRNA与畜禽的主要生产性能和生长发育密切相关,主要参与调控细胞分化增殖、组织器官生长发育等生理过程。miRNA表达具有组织特异性和发育的时序性,在细胞生长发育的不同阶段表达不同种类和数量的miRNA。本研究利用Stem-loop实时定量PCR检测miRNA-150和miRNA-143在阿勒泰羊体外胚胎5个发育阶段、瘤胃、肝脏等13种组织中的表达量,分析了miRNA-150和miRNA-143在阿勒泰羊不同组织中的表达特征。结果表明,绵羊miRNA-150和miRNA-143均为广泛性表达miRNA。miRNA-143在瘤胃、直肠、皱胃中显著高于其他组织的表达水平, miRNA-150在肝脏和骨骼肌中表达水平显著高于其他组织。胚胎时期miRNA-143在卵母细胞中显著高于其他时期的表达水平。miRNA-150在4细胞中表达水平显著高于其他时期。生物信息学分析显示,预测的miRNA-150的靶基因在mTOR信号通路、胰岛素信号通路和脂肪细胞因子信号通路富集;miRNA-143的靶基因在粘着连接、ECM受体相互作用通路和刺猬信号通路富集。总之,miRNA-150和miRNA-143为广泛性时序表达miRNA,可能参与绵羊诸多器官发育和胚胎发育相关的生物学过程的调控。     

报告基因显像监测基因治疗研究进展

为评价基因治疗,需要随时对治疗基因的定位和表达进行监测。放射性核素报告基因技术是检测基因表达的最好方法。用基因融合、双顺反子、双启动子及双向转录等重组技术,构建表达报告基因的腺病毒载体,导入靶细胞或组织内,然后注射与报告基因偶合的核素标记的探针,进行PET、SPECT或γ-照相,可无创伤地、重复地定量显示报告基因表达。目前,用于基因治疗的报告基因和报告探针系统有:HSV1-tk(单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因)和碘、氟同位素标记的尿嘧啶、鸟嘌呤的衍生物;突变的多巴胺D₂R(多巴胺2型受体)基因和(18F-FESP(18F-氟乙基螺环哌丁苯);SSTr2(生长抑素2型受体基因)和生长抑素类似物等。其中,部分已用于临床试验治疗。     

FHIT基因研究进展

FHIT基因是定位于染色体3p14.2区域的候选肿瘤抑制基因,在许多肿瘤,特别是环境致癌物引起的上皮肿瘤中经常发生改变,在辐射引起的癌症中也有改变,参与细胞周期和细胞凋亡的调控,但其作用的机理尚未完全阐明。     

基因治疗的现状与展望

综述了近三年人类基因治疗研究的有关进展,认为概念上比传统观点有所拓宽,从而开阔了思路,形成了策略多种和方法多样的局面。在临床上候选的治疗病种日益增多,已从先天性遗传病扩展到后天获得的疾病,如肿瘤等。同时也列举了目前有待解决的问题,指出了光明的前景。     

放射技术与基因治疗

基因治疗是一个融合了多学科、多种技术的全新医学领域 ,已成为世界医学界的研究热点。放射学技术可在以下方面中发挥独特作用 :选择靶向治疗位点 ,发展和完善载体导入途径 ,建立监测治疗的影象学方法 ,评估基因表达 ,以及放疗与基因治疗的结合等 ,从而在这一迅速发展的诊断和治疗领域作出特有的贡献     

非病毒载体基因递送系统的研究进展

非病毒载体基因递送系统是相对于以病毒为载体的基因递送系统的另一种基因递送系统。具有高安全性、低免疫原性及易于生产的特性。本文就非病毒基因载体的种类、在疾病治疗中的应用前景及存在的主要问题作一综述。     

利用RNAi技术抑制ARPC2基因表达的研究

目的 构建pSUPER-ARPC2表达载体,并在真核细胞中进行表达,验证ARPC2基因表达是否受到抑制。方法 设计特异性针对ARPC2基因的寡核苷酸序列,退火后利用常规酶切、连接方法将其重组至pSUPER basic载体中。对阳性克隆进行酶切和测序鉴定后,转染HEK293细胞,利用RT-PCR和Western blot检测ARPC2基因的表达情况。结果 构建的pSUPER-ARPC2载体导入HEK293细胞时,ARPC2基因的表达受到抑制,蛋白合成减少。结论 成功构建了ARPC2的RNAi表达载体,并证实其能对ARPC2基因的表达产生抑制作用,为进一步研究ARPC2的生理功能提供了重要的实验材料。     

人降钙素基因在大肠杆菌中的克隆与表达

目的：利用大肠杆菌表达具有生物活性的人降钙素（ｈＣＴ）。方法：以人类基因组ＤＮＡ，为模板，经ＰＣＲ扩增获取ｈＣＴ基因片段，测序分析克隆到ｐＵＣ１９载体中的ＰＣＲ产物，确定得到两种ＣＴ基因序列，其中１＾＃与文献报道完全一致，２＾＃序列中含有（Ｇ６４／Ａ）点突变，采用带有热诱导启动子的高效表达载体ｐＢＶ２２０，对所获得的基因进行了表达，并利用大鼠降血钙实验，对表达产物的活性进行了检测。结果：所获得的ｒ     

脓毒症与基因多态性相关性研究进展

脓毒症是机体对严重感染的全身反应,其预后与疾病的严重程度,治疗及机体的遗传背景等多种因素有关。遗传背景在脓毒症产生和转归中的作用日益受到重视。笔者对与脓毒症相关的基因多态性进行以下综述。     

纤维黏连蛋白基因在翼状胬肉中表达的研究

 目的 以50例中国翼状胬肉患者为研究对象,探讨纤维黏连蛋白(fibronectin ,FN)表达水平的改变在翼状胬肉发生中的作用.方法 以正常眼结膜组织体为对照,应用半定量RT-PCR方法检测翼状胬肉组织中FN基因mRNA表达水平;应用Western印迹杂交检测FN蛋白表达的改变.结果 在50例样本中,40例FN蛋白在翼状胬肉中表达升高,其中包括39例FN mRNA表达水平上调.结论 翼状胬肉组织中FN mRNA和蛋白表达水平明显上调,提示其有可能在翼状胬肉的发生中发挥一定的作用.     

STK15基因在胃癌中高表达的研究

 目的研究胃癌中STK15基因的mRNA表达水平.方法提取52例胃癌组织样本及相应癌旁正常组织的RNA,反转录合成cDNA,以β-actin为内对照,进行PCR扩增,产物进行电泳,应用软件分析电泳结果.结果在检测的52例胃癌中,有31例(60%)存在STK15基因的高表达,经统计学分析,肿瘤组与对照组差异显著(P＜0.01).结论胃癌中存在STK15基因mRNA的高表达,这可能是导致胃癌发生的多因素之一.