人重组粒细胞集落刺激因子突变体的构建,表达和其 …

目的 为提高人重组炷细胞集落刺激因子（ｈｕｍａｎ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔ ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ ｃｏｌｏｎｙｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ,ｒｈＧ－ＧＳＦ）的稳定性和活性,对ｒｈＧ－ＧＳＦ进行改造和体内、外活性研究。方法 利用定向点突变技术,将人重组粒细胞集落刺激因子第１７位游离的半胱氨酸编码序列突变为丙氨酸序列,ＤＮＡ序列分析证明后,在大肠杆菌中表达突变蛋白。利用Ｇ－ＣＳＦ依赖细胞株ＮＦＳ     

抗rhG—CSF单克隆抗体的研制及初步鉴定

利用淋巴细胞杂交瘤技术，以ｒｈＧ－ＣＳＦ为免疫原，建立了６株稳定分泌抗Ｇ－ＣＳＦ单抗的杂交瘤细胞株，并研究了其分泌抗体的某些生物学特性。１材料与方法１．１抗原ｒｈＧ－ＣＳＦ，人用制剂，由北京医科大学免疫学系马大龙教授赠送。１．２细胞及动物Ｂａｌｂ／ｃ...     

血清TSGF、CA-125、M-CSF在卵巢肿瘤诊断中的应用评价

本文联合恶性肿瘤特异性生长因子 (ＴＳＧＦ)、人类巨噬细胞集落刺激因子 (Ｍ -ＣＳＦ)与糖蛋白抗原 12 5 (ＣＡ - 12 5 )三种肿瘤标志物对卵巢癌患者分组检查 ,以探讨它们在卵巢恶性肿瘤诊断中的价值。对象和方法一、对象 :(一 )对照组 :正常对照组 5 9例 ,年龄 38～ 6 6岁 ,平均 4 9岁 ,均为我院门诊健康查体者。 36例卵巢囊肿患者年龄 38～ 6 7岁 ,平均 5 3岁 ,均经病理确诊。(二 )卵巢癌组 :86例 ,均来自我院与市立医院 ,年龄 4 3～ 72岁 ,平均 5 6 3岁 ,全部病例均经临床诊断确诊。二、方法 :(一 )试剂来源 :ＴＳＧＦ采用比浊法检测 ,…     

脑膜炎患儿CSF中IL-2,IL-8,TNF-α检测的临床意义

为观察脑膜炎患儿脑脊液 (ＣＳＦ)中白细胞介素 - 2 (ＩＬ - 2 )、白细胞介素 - 8(ＩＬ - 8)和肿瘤坏死因子 -α(ＴＮＦ -α)的变化 ,自1999年 8月～2 0 0 1年 3月 ,我们对 10 3例脑膜炎患儿ＣＳＦ中的ＩＬ- 2、ＩＬ - 8、ＴＮＦ -α进行了检测 ,现将结果报告如下。材料和方法一、一般材料 :10 3例患儿 (男 5 6 ,女 47) ,年龄 2月～ 9岁 ,平均 2 6± 1 8岁。全部患儿均为我院住院患者 ,并根据病史、临床症状、体征、ＣＳＦ实验室检查等资料确诊。其中病毒性脑膜炎 (病脑 ) 38例 ,结核性脑膜炎 (结脑 ) 34例 ,化脓性脑膜炎(化脑 ) 31例。另…     

人重组粒细胞集落刺激因子突变体的构建、表达和其体内外生物学活性研究

目的为提高人重组粒细胞集落刺激因子（ｈｕｍａｎｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｃｏｌｏｎｙ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ,ｒｈＧ－ＣＳＦ）的稳定性和活性,对ｒｈＧ－ＣＳＦ进行改造和体内、外活性研究。方法利用定向点突变技术,将人重组粒细胞集落刺激因子第１７位游离的半胱氨酸编码序列突变为丙氨酸序列,ＤＮＡ序列分析证明后,在大肠杆菌中表达突变蛋白。利用Ｇ－ＣＳＦ依赖细胞株ＮＦＳ－６０,对在不同温度及在人血浆中保存的Ｇ－ＣＳＦ蛋白（Ｇ－ＣＳＦ－Ａｌａ１７）和野生型的Ｇ－ＣＳＦ进行活性测定。腹腔注射后小鼠外周血白细胞计数检测其体内生物学活性。结果ＤＮＡ序列分析表明１７位半胱氨酸突变为丙氨酸,并在大肠杆菌中表达成功Ｇ－ＣＳＦ－Ａｌａ１７。纯化的突变蛋白对ＮＦＳ－６０细胞具有刺激活性;与野生型Ｇ－ＣＳＦ相比,在各种温度储存的突变蛋白保留更高的活性,与人血浆孵育５０小时后突变蛋白仍保持活性;小鼠一次性体内注射突变蛋白后外周血白细胞数明显高于野生型Ｇ－ＣＳＦ。结论Ｇ－ＣＳＦ突变体（Ｇ－ＣＳＦ－Ａｌａ１７）较野生型的Ｇ－ＣＳＦ具有更高的体外稳定性和体内造血刺激活性。     

测定重组人粒细胞集落刺激因子生物学活性的MTT比色法

用粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）的依赖细胞株（ＮＦＳ－６０细胞株）为靶细胞，以ＭＴＴ比色法测定重组人粒细胞集落刺激因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ）的生物学活性，确定了在ＭＴＴ比色法中ＮＦＳ－６０细胞浓度为３×１０４／孔以及ｒｈＧ－ＣＳＦ浓度与ＮＦＳ－６０细胞有量效关系的范围为２ｎｇ／ｍｌ～７．８ｐｇ／ｍｌ，对几种溶解液进行了比较，选定１０％ＳＤＳ－０．０１ｍｏｌ／ＬＨＣｌ作为ＭＴＴ结晶的溶解液，对ＭＴＴ比色法的特异性、精密度和方法回收率进行了研究。     

rhGM—CSF／IL—3融合蛋白对人骨髓造血祖细胞体外培养的研究

研究了ｒｈＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ－３融合蛋白对人骨髓造血祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－ＧＥＭＭ、ＢＦＵ－Ｅ）集落形成的影响，结果表明ｒｈＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ－３能显著促进ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－ＧＥＭＭ、ＢＦＵ－Ｅ集落的形成，分别与ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－３单独或联合用药比较，差异有显著性（Ｐ〈０．００１），ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ＝ＧＥＭＭ、ＢＦＵ－Ｅ集落的形成对融合蛋白均有剂量依赖性，培养体系浓度在５￣１０ｎ     

具有G—CSF抗原结合活性的三个重组噬菌体单链抗体基因？…

利用固相化Ｇ－ＣＳＦ亲和吸附法,从已构建的抗ｒｈＧ－ＣＳＦ全套单链抗体噬菌体表面展示文库中,筛选出含有特异抗体片段的噬菌体颗粒。结合直接感染法和酸性洗脱液洗脱法,进行４轮亲和富集筛选,并通过ＥＬＩＳＡ法结合双酶切鉴定,共筛选出９个具有Ｇ－ＣＳＦ结合活性的完整的重组噬菌粒克隆。对其中３个阳性克隆进行了ＳｃＦｖ基因全序列测定,获得６个抗体可变区基因的全序列。计算机分析表明,它们均为新发现的小鼠免疫球蛋     

肝硬化患者血清TGF-α,SF联检的临床意义

本文报告 6 6例肝硬化患者血清ＴＧＦ -α和ＳＦ联检的临床价值 ,现报告如下对象和方法一、对象 :(一 )正常人 :30人 (男 2 0 ,女 10 )。均为我院预防保健科体检合格的健康人 ,无心、肝、肺、肾等重要脏器疾患 ,肝、肾功能试验正常。年龄 2 1～ 30岁 ,平均 2 7 2岁。(二 )病人组 :6 6人 (男 44 ,女 2 2 ) ,年龄 38～ 6 7岁 ,平均5 5 6岁。均为临床上明确诊断的肝硬化患者 (包括体征、Ｂ超、ＣＴ、实验室肝硬化的系列检测指标 ,部分病例经核磁共振明确诊断 ) ,最后经肝穿刺活检明确诊断。二、方法 :放射免疫分析法。血清ＴＧＦ -α试剂盒由…     

ELISA法测定粒系集落刺激因子的初步研究

鼠抗人ｒｈＧ－ＣＳＦ单抗为包被抗体。兔抗人ｒｈＧ－ＣＳＦ多抗为酶标抗体。建立Ｇ－ＣＳＦ定量测定的ＥＬＩＳＡ法。试验敏感度为０．０９５ｎｇ／ｍｌ。批内变异系数为７．３％。批间变异系数为１２．７％。临床初步应用证实１８正常人群对照均未检出，３５例ＡＰＬ患检出率为１４．４％（４／３５），６例感染患均检出，平均０．３５±０．２５ｎｇ／Ｌ．     

原发性肝癌患者血清sTGF-α、sP-Selectin及ICAM-1水平测定

文献报道 ,原发性肝癌 (ＰＨＣ)患者血清转化生长因子 -α(ｓＴＧＦ -α)、血浆可溶性Ｐ -选择素 (ｓＰ -Ｓｅｌｅｃｔｉｎ)及细胞间粘附分子 - 1(ＩＣＡＭ - 1)水平显著高于正常对照组 ,且发现其水平的变化与ＰＨＣ的发生及发展关系密切[1 ] 。为进一步探讨患者三项指标的变化与发病的关系 ,本文测定了 4 0例ＰＨＣ患者上述三项标志物 ,现报道如下。对象和方法一、对象 :正常对照组 35名 (男 2 5 ,女 10 ) ,年龄 2 6～ 6 2岁。均系来院作健康检查的正常人 ,血液、尿常规、生化、免疫学指标及影像学检查均无异常。ＰＨＣ组 4 0例 (男 30 ,女…     

慢性肾衰竭患者透析前后甲状旁腺素、胃泌素水平的观察

本文报告慢性肾衰 (ＣＲＦ)患者单次透析前后血清甲状旁腺素 (ＰＴＨ)、胃泌素 (ＦＳＧ)水平的变化 ,并就其临床价值作初步探讨 ,现将结果报告如下。资料和方法一、对象 :(一 )对照组 :32人 ,均为我公司职工体检人员 ,无心、肺、肝、肾等重要脏器疾患 ,肝肾功能试验正常 ;年龄 2 3～ 5 8岁 ,平均 37 9岁。(二 )病人组 :32人 (男 2 5 ,女 7) ,均为在我院血透室治疗的ＣＲＦ患者 ,年龄 2 6～ 6 7岁 ,平均 4 6 3岁。二、方法 :ＰＴＨ、ＦＳＧＲＩＡｋｉｔ均由中国原子能科学研究院同位素研究所提供 ,按说明书操作。血透机为瑞典Ｇａｒｎｂｒｏ…     

AFP、CEA、SF、β2—m、CA50联检在原发性肝癌诊断中的应用

本文对 96例原发性肝癌 (ＰＨＣ)患者血清ＡＦＰ、ＣＥＡ、ＳＦ、β2 -ｍ、ＣＡ5 0水平进行了联合检测 ,现将结果报告如下。资料和方法一、临床资料 :肝病患者 15 3人 ,其中ＰＨＣ96人 (男 87,女9) ,肝硬化 35人、肝血管瘤 2 2人 ,全部经临床、Ｂ超、ＣＴ确诊 ,部分ＰＨＣ病例手术后细胞学确诊 ,年龄 33～ 75岁 ,平均5 5岁。正常对照组 :40人 (男 2 9,女 11) ,均为健康体检者 ,年龄2 6～ 72岁。二、方法 :空腹血 3ｍｌ,分离血清进行测定。ＡＦＰ、ＣＥＡ和β2 -ｍＲＩＡｋｉｔ由中国原子能研究所提供 ,ＳＦＲＩＡｋｉｔ由上海放射免疫分析技…     

国产重组人粒细胞集落刺激因子临床应用研究

利用基因技术生产的重组人粒细胞集落刺激因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ）能作用于中性粒细胞系，具有显著的刺激中性粒细胞生成，释放并增强成熟中性粒细胞的功能，且没有明显毒副作用．但其产品美国的生白能（ＧＭ－ＣＳＦ），价格昂贵，应用受到限制．在国内首家开发出中国 ｒｈＧ－ ＣＳＦ：“吉粒芬”得到卫生部批准试用．由于价格适中，临床已较普遍应用，现把我们近两年使用情况报告如下．１资料与方法１．１对象本组使用吉粒芬患者４２例次，均是本院的住院病人：男２６例次，女１６例次，年龄５～６５岁．其中急性白血病１２例次，慢粒１０…     

两种两液净化方式对慢性肾衰患者血清胃泌素水平的影响

消化道症状是慢性肾功能衰竭 (ＣＲＦ)患者最早发生和最常见的临床症状 ,其原因与患者高血清胃泌素 (ＦＳＧ)水平有关[1] 。本文就血液透析 (ＨＤ)和血液透析滤过 (ＨＤＦ)两种血液净化方式对ＣＲＦ患者治疗前后的ＦＳＧ水平进行了检测 ,以探讨不同的血液净化方式对ＦＳＧ水平的影响 ,并探讨其临床价值 ,现将结果报告如下。资料和方法一、资料 :(一 )对象 :正常对照组 30人 (男 18,女 12 ) ,均为我院保健科体检合格的健康人员 ,既往无消化系统、心、肝、肺、肾等疾患。年龄 2 3～ 5 1岁 ,平均 41.2岁。患者组 30例 (男 19,女 11) ,均为ＣＲ…     

卵巢癌患者血清CA125、M-CSF测定的临床价值

文献报告[1 ] ,ＣＡ12 5对妇科卵巢癌的诊断阳性率一般超过 6 1%以上。人类巨噬细胞集落刺激因子 (Ｍ -ＣＳＦ)是一分子量为 85ＫＤ的糖蛋白 ,它能调节血细胞的个体发育 ,刺激巨噬细胞的成熟与分化[2 ] 。国内尚少见有对卵巢癌患者进行血清ＣＡ12 5、Ｍ -ＣＳＦ联合检测的报道。为此 ,我们进行了探讨 ,现将结果报告如下。对象和方法一、对象 :(一 )正常人 :30人。均为我院保健科体检合格的女性 ,年龄 2 1～ 6 5岁 ,平均 4 6岁。(二 )病人组 :36人。均为我院临床上明确诊断的卵巢癌病人 ,诊断均经手术和病理切片证实 ,其中浆液性卵巢癌 17例 …     

IL-3、G-CSF拮抗Ara-c诱导的白血病细胞凋亡的研究

目的 研究不同Ａｒａ－ｃ浓度时白血病细胞凋亡的情况和Ｇ－ＣＳＦ,ＩＬ３＋Ｇ－ＣＳＦ对其的拮抗作用,方法：分别用不同剂量Ａｒａ－ｃ诱导白血病细胞凋亡,同时加Ｇ－ＣＳＦ,ＩＬ－３＋Ｇ－ＣＳＦ作为拮抗剂,分Ｇ－ＣＳＦ,ＩＬ－３＋Ｇ－ＣＳＦ,Ａｒａ－ｃ三组。通过形态学,ＤＮＡ电泳,蛋白电泳免疫印迹法观察白血病细胞的凋亡情况,结果：随着Ａｒａ－ｃ剂量的增加,凋亡细胞数增高,Ｇ－ＣＳＦ能拮抗低剂量及常规剂量Ａ     

葡萄胎患者化疗前后血清EGF和IL-2/SIL-2R水平的观察

国内尚少见有葡萄胎患者化疗前后血清表皮生长因子（ＥＧＦ）和ＩＬ -２／ＳＩＬ -２Ｒ水平的报道。为此 ,我们进行了探讨 ,现将结果报告如下。对象和方法一、对象 :（一）正常人 :３０人。均为我院门诊体检合格的健康人 ,心、肝、肺、肾等重要脏器无疾患 ,肝、肾功能试验正常。（二）病人组 :３２人。全部病例均经临床明确诊断（包括体征、Ｂ超、血液β -ＨＣＧ稀释试验 ,病理切片等）。年龄２５～３８岁 ,平均３０．８岁。二、方法 :（一）ＥＧＦ测定 :放射免疫分析试剂盒由中国同位素公司北方免疫试剂研究所提供 ,操作按说明书。（二）Ｉ…     

多发性硬化患者血清和脑脊液中可溶性VCAM—1的变化

多发性硬化 (ｍｕｌｔｉｐｌｅｓｃｌｅｒｏｓｉｓＭＳ)是中枢神经系统的炎性脱髓鞘疾病 ,已有研究显示可溶性血管细胞粘附分子 1(ｓＶＣＡＭ 1)在ＭＳ患者中会发生变化 ,本研究目的是观察ｓＶＣＡＭ 1在ＭＳ患者血清和脑脊液 (ＣＳＦ)中的变化及与临床的关系。1　对象与方法1 1　研究对象　ＭＳ组 :共 19例 ,其中男 7例 ,女 12例 ;年龄 18～ 53岁 ,平均 32 9± 9 6岁 ,缓解期 3例 ,复发期 16例 ;均符合Ｐｏｓｅｒ关于ＭＳ的诊断标准[1] 。病人处于复发期的标准 :在平稳期至少 30ｄ后 ,出现新的症状或旧的症状加重持续 2 4ｈ至 6个月 ,不…     

G-CSF、GM-CSF的临床应用现状

粒细胞集落刺激因子（Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ ｃｏｌｏｎｙ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ, Ｇ－ＣＳＦ）、粒巨噬细胞集落刺激因子（ Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｃｏｌｏｎｙ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ,ＧＭ－ＣＳＦ）分别是促粒系、粒－单系造血祖细胞增殖、分化及成熟,并增强其成熟细胞功能的特异造血调控生长因子。重组ＤＮＡ技术的发展,使得利用基因工程方法大量生产细胞因子成为可能。目前,Ｇ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ基因重组产品已广泛应用于临床。在血液病的治疗,造血干细胞移植及恶…