凡德他尼诱导甲状腺癌细胞SW579凋亡及其机制

目的:检测凡德他尼对甲状腺癌SW579细胞的作用及其机制。方法:采用MTT比色法检测凡德他尼处理后SW579细胞的增殖情况。利用流式细胞技术检测SW579细胞的凋亡比例。为了检测凡德他尼对SW579细胞作用的机制,利用小分子对接技术初步模拟可能的信号传导通路。利用Western blot技术证实模拟的细胞信号传导通路。结果:凡德他尼可以明显抑制SW579细胞增殖,并且诱导凋亡。在凋亡过程中,凡德他尼能够结合Smad3并激活Smad传导通路。结论:凡德他尼通过Smad传导通路导致SW579细胞凋亡。     

白杨素对甲状腺癌细胞SW579增殖和侵袭的影响

目的:检测白杨素对甲状腺癌SW579细胞增殖和侵袭的影响及其机制。方法:利用MTT实验和Transwell实验检测细胞增殖和侵袭。Western blot技术检测相关蛋白变化。结果:白杨素可以明显抑制SW579细胞增殖和侵袭。白杨素处理后的细胞中E-cadherin表达增高,而N-cadherin表达降低。结论:白杨素能够通过EMT抑制SW579细胞侵袭。     

曲古抑菌素A诱导甲状腺鳞癌SW579细胞株凋亡的实验研究

目的：观察曲古抑菌素A（trichostatin A,TSA）对甲状腺鳞癌SW579细胞株生长增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法：四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测培养细胞的增殖情况;吖啶橙染色后荧光显微镜下观察细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT—PCR方法检测细胞凋亡相关基因caspase-3 mRNA表达。结果：TSA明显抑制SW579细胞生长,且呈剂量依赖性。吖啶橙染色后荧光显微镜下观察发现,经TSA处理的各组细胞均可见染色质浓集和边集,核膜出芽及凋亡小体等现象。流式细胞仪分析细胞凋亡率随TSA浓度的升高而升高（F〈0．05）。RT—PCR方法检测发现细胞凋亡相关基因caspase-3 mRNA表达水平上调。结论：不同浓度的TSA可抑制甲状腺鳞癌SW579细胞增殖,促进细胞凋亡,且呈剂量依赖性;其诱导细胞凋亡的作用机制可能与上调caspase-3基因表达,激活caspase途径有关。     

川芎嗪通过PTEN/AKT通路抑制外阴鳞癌SW962细胞增殖、侵袭和转移

目的:研究和探讨川芎嗪对人外阴鳞癌细胞SW962细胞功能（增殖、凋亡、转移、侵袭）的影响以及机制。方法:将不同浓度川芎嗪配置而成的培养基干预处理外阴鳞癌SW962细胞。MTT法检测川芎嗪梯度浓度变化和处理时间变化对SW962细胞增殖和生存率的影响；流式细胞术检测川芎嗪梯度浓度变化对SW962细胞凋亡的影响；Transwell小室实验检测川芎嗪梯度浓度变化对SW962细胞转移和侵袭的影响；划痕实验检测川芎嗪梯度浓度变化对SW962细胞转移的影响；Western blot电泳法检测川芎嗪对PTEN、AKT、p-AKT、cyclinD1蛋白表达的影响。结果:川芎嗪显著抑制SW962细胞增殖（P＜0.05），诱导SW962细胞凋亡增加细胞凋亡率（P＜0.05），抑制SW962细胞转移和侵袭（P＜0.05）。Western blot结果显示，川芎嗪处理细胞可以增加抑癌基因PTEN的表达，降低p-AKT和cyclinD1蛋白的表达（P＜0.05）。结论:川芎嗪可以通过影响PTEN/AKT/cyclinD1信号通路抑制外阴鳞癌细胞SW962的增殖，诱导凋亡，抑制SW962细胞转移和侵袭。     

Canstatin与tumstatin抑制甲状腺癌细胞SW579迁移的机制研究

目的:研究canstatin与tumstatin对甲状腺癌SW579细胞迁移的影响及其机制.方法:利用MTT实验和划痕实验检测SW579细胞增殖和迁移.Western blot技术检测运动相关蛋白的变化.结果:Canstatin与tumstatin可以明显抑制SW579细胞增殖和迁移.Canstatin与tumstatin处理后细胞的MMP 3、9和12蛋白水平明显下降.在canstatin作用下Wave2蛋白含量下降,而tumstatin没有类似作用.结论:Canstatin与tumstatin通过抑制MMP 3、9和12蛋白水平导致SW579细胞运动减弱.     

阿曼托双黄酮通过JAK2-STAT3通路影响甲状腺癌SW579细胞的增殖和凋亡

目的：探讨阿曼托双黄酮（AF）对甲状腺癌SW579细胞中JAK2-STAT3通路活化及其细胞增殖和凋亡的影响。方法：用0、50、100、150、200μmol/L的AF处理SW579细胞24、48、72 h,采用CCK-8和Celigo计数、FCM、WB及qPCR法检测AF对SW579细胞的增殖、凋亡、JAK2-STAT3通路活化及其下游调控基因c-Myc、Bcl2、survivin的mRNA及蛋白表达水平的影响。结果：AF处理后,SW579细胞增殖能力显著下降（P<0.05）且呈浓度依赖性,细胞凋亡呈浓度依赖性增多（P<0.05）,细胞中JAK2-STAT3通路的活化受到显著抑制（P<0.05）,其下游基因c-Myc、Bcl2、survivin的mRNA及蛋白表达均明显下降（均P<0.05）。结论：AF可通过抑制SW579细胞中JAK2-STAT3通路活化及其下游基因的表达而抑制SW579细胞的增殖并促进其凋亡,有望成为治疗甲状腺癌的有效药物。     

选择性COX-2抑制剂对非小细胞肺癌细胞株毒性及分子机制的研究

目的：探讨选择性环氧化酶-2（cyclooxy-genase-2,COX-2）抑制剂Celecoxib对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞株增殖与凋亡的作用以及相关分子机制。方法：对3种NSCLC细胞株A549（腺癌）、GLC82（腺癌）和SW1573（肺泡细胞癌）使用MTT法测定细胞生长抑制率;Hoechest33258荧光染色观察细胞凋亡;流式细胞仪分析细胞凋亡及细胞周期分布;West-ern blot法检测COX-2、磷酸化AKT（p-AKT）、总丝苏氨酸激酶（serine/threonine kinase,AKT）、磷酸化ERK（p-ERK）及总细胞外信号调节激酶（ex-tracellular signal-regulated kinase,ERK）蛋白的表达。结果：Celecoxib抑制A549、GLC82和SW1573细胞增殖的IC50值分别为14.7、10.6和18.6μmol/L;Celecoxib对3种NSCLC细胞株都有较明显的凋亡诱导作用,Celecoxib作用12h凋亡率增加,24～48h更明显,Celecoxib10～40μmol/L作用可见凋亡率明显增加;Celecoxib作用于GLC82细胞后检测到胞内p-AKT及p-ERK蛋白表达下调。结论：COX-2抑制剂Celecoxib在体外能抑制细胞信号传导AKT及ERK通路的活化,诱导NSCLC细胞发生凋亡,抑制细胞增殖。     

曲古抑菌素A诱导甲状腺鳞癌SW579细胞株凋亡的实验研究

目的:观察曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对甲状腺鳞癌SW579细胞株生长增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测培养细胞的增殖情况;吖啶橙染色后荧光显微镜下观察细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR方法检测细胞凋亡相关基因 caspase-3 mRNA表达.结果:TSA明显抑制SW579细胞生长,且呈剂量依赖性.吖啶橙染色后荧光显微镜下观察发现,经TSA处理的各组细胞均可见染色质浓集和边集,核膜出芽及凋亡小体等现象.流式细胞仪分析细胞凋亡率随TSA浓度的升高而升高(P＜0.05) .RT-PCR方法检测发现细胞凋亡相关基因 caspase-3 mRNA表达水平上调.结论:不同浓度的TSA可抑制甲状腺鳞癌SW579细胞增殖,促进细胞凋亡,且呈剂量依赖性;其诱导细胞凋亡的作用机制可能与上调 caspase-3 基因表达,激活 caspase 途径有关.     

miR-93-5p靶向CCNG2基因对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的:研究miR-93-5p对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其机制。方法:运用qRT-PCR、Western blot检测甲状腺癌细胞SW579、人正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1中miR-93-5p、CCNG2的表达;将anti-miR-93-5p组（转染anti-miR-93-5p）、anti-miR-NC组（转染anti-miR-NC）、pcDNA组（转染pcDNA）、pcDNA-CCNG2组（转染pcDNA-CCNG2）、anti-miR-93-5p+si-con组（共转染anti-miR-93-5p和si-con）、anti-miR-93-5p+si-CCNG2组（共转染anti-miR-93-5p和si-CCNG2）,均用脂质体法转染至SW579细胞;MTT法检测各组细胞的增殖;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果:与人正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1相比,甲状腺癌细胞SW579中miR-93-5p表达显著升高,CCNG2表达显著降低（P<0.05）;抑制miR-93-5p、过表达CCNG2均可抑制SW579细胞增殖,促进凋亡;miR-93-5p可直接抑制SW579细胞中CCNG2的表达,敲减CCNG2可逆转抑制miR-93-5p对SW579细胞的增殖抑制和凋亡促进作用。结论:抑制miR-93-5p可抑制甲状腺癌细胞的增殖,促进凋亡,其机制可能与靶向负调控CCNG2有关,将可为分化型甲状腺癌的预防和治疗提供新靶点。     

ING4诱导甲状腺癌SW579细胞S早期阻滞的机制研究

目的:检测ING4对甲状腺癌SW579细胞周期的影响及其机制。方法:利用软琼脂克隆形成实验检测细胞增殖,并利用PI染色和Cldu/Idu双染检测细胞周期变化。Westernblot技术检测周期相关蛋白的变化。结果:ING4可以明显抑制SW579细胞增殖,并且导致其S早期阻滞。ING4处理后细胞p53表达明显升高,同时phospho-S345-Chk1和phospho-T68-Chk2等细胞周期相关蛋白表达水平升高。结论:ING4可导致SW579细胞出现S早期阻滞,p53表达明显升高,细胞周期相关蛋白表达水平升高,但是三者关系有待进一步研究。     

β-榄香烯联合顺铂对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨β-榄香烯联合顺铂对乳腺癌MCF-7细胞生长的影响。方法:体外培养乳腺癌MCF-7细胞,将β-榄香烯(浓度梯度为25、50、100、150、200μg/ml),单独作用于乳腺癌MCF-7细胞,加药24h、48h后用噻唑蓝(MTT法)法检测细胞增殖情况。用流式细胞术检测用药24h后对MCF-7细胞凋亡和细胞增殖周期的影响,选取合适的药物浓度(β-榄香烯125μg/ml),与顺铂(3μg/ml)进行联合用药。加药24h、48h用MTT法检测细胞增殖情况,用流式细胞术检测24h后药物组对MCF-7细胞凋亡和细胞增殖周期的影响。结果:MTT法结果显示β-榄香烯单独用药24h、48h后,与对照组相比,实验组乳腺癌MCF-7细胞的抑制率高于对照组(P<0.05),并且在一定程度上呈浓度和时间依赖性。联合用药时,细胞的抑制率和凋亡率要显著高于单独用药(P<0.01)。与对照组相比,榄香烯能够使MCF-7细胞产生明显的G0/G1期阻滞(P<0.01)。结论:β-榄香烯单独或与顺铂联合作用均能抑制MCF-7细胞的增殖,促进其凋亡,且β-榄香烯联合顺铂的作用要显著高于单独用药组,β-榄香烯和顺铂可协同(CDI<1)促进MCF-7细胞凋亡,其机制可能与G0/G1期阻滞有关。     

慢病毒介导的Canstatin基因转移对脐静脉血管内皮细胞增殖与凋亡的影响

目的：构建携带Canstatin基因的慢病毒载体,体外转染脐静脉血管内皮细胞ECV304,观察其体外培养的脐静脉血管内皮细胞增殖及凋亡的影响。方法：应用基因重组技术构建慢病毒载体表达质粒pGC-FU-Canstatin,通过酶切、测序验证Canstatin基因后,将pGC-FU-Canstatin质粒和包装质粒pHelper 1.0,pHelper 2.0共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,获得携带Canstatin基因重组慢病毒GC-FU-Cansta-tin,并测定病毒滴度。将重组慢病毒转染靶细胞人脐静脉血管内皮细胞ECV304,通过Western blotting检测靶细胞中Canstatin的表达。采用MTT法观察Canstatin基因对人脐静脉血管内皮细胞ECV304的体外细胞增殖的影响。TUNEL染色、流式细胞仪AnnexinV/碘化丙啶双染法,检测慢病毒介导的Canstatin基因诱导脐静脉血管内皮细胞的凋亡。结果：pGC-FU-Canstatin中携有正确的Canstatin基因序列;pGC-FU-Cansta-tin和包装质粒pHelper 1.0,pHelper 2.0共转染包装细胞293T产生重组病毒GC-FU-Canstatin;检测病毒滴度为1×109TU/ml;Western blotting检测到Canstatin蛋白在靶细胞中持续表达。Canstatin（感染复数分别为25和50）作用72h后,ECV304细胞增殖数目显著少于PBS组和空载体组（P〈0.01）;TUNEL染色,以MOI为25的重组慢病毒GC-FU-Canstatin作用于人脐静脉血管内皮细胞ECV304细胞72h后,出现典型的凋亡形态学改变。以感染复数为25的GC-FU-Canstatin处理ECV304细胞72h后,细胞凋亡率为（21.63±1.32）%,PBS组为（2.87±0.76）%,空载体组为（2.66±0.69）%,转基因组与空载体组、PBS组相比差异均有显著统计学意义（P〈0.01）。结论：慢病毒介导的Canstatin基因可显著抑制人脐静脉血管内皮细胞ECV304的体外增殖,同时对人脐静脉血管内皮细胞的凋亡具有促诱导作用。     

血管能抑素重组基因表达载体抗肺癌效应研究

目的:通过构建人血管能抑制素(Canstatin)真核表达载体,转染裸鼠肿瘤局部,探索其对肺癌治疗作用.方法:RT-PCR法获取Canstatin cDNA全长,定向克隆法构建Canstatin基因表达载体pCMV-Script-Cans.荧光定量PCR法检测转染细胞Canstatin mRNA的表达.台盼蓝拒染法、3H-TdR掺入法检测细胞生长增殖,TUNEL法检测细胞凋亡.基因枪转染重组载体到荷瘤裸鼠肿瘤局部,CD31单克隆抗体微血管记数检测抗血管生成效应.结果:成功构建pCMV-Script-Cans重组载体,并在转染的细胞株中检测到Canstatin mRNA的表达.人脐静脉内皮HUV-EC-C细胞株pCMV-Script-Cans质粒转染组比空载体组3H-TdR掺入量明显减低(P＜0.01),细胞凋亡率明显增加(P＜0.01),重组载体转染肿瘤生长缓慢,微血管数显著低于对照组(P＜0.01).结论:pCMV-Script-Cans重组载体能在转染的哺乳动物细胞中表达Canstatin,并抑制内皮细胞增殖,而且有很好的抗肺癌血管生成作用.     

人canstatin基因治疗人食管癌裸鼠移植瘤的实验研究

背景与目的：Canstatin是一种新内源性血管生成抑制剂,以往的研究显示canstatin能有效的抑制肿瘤的生长,作用甚至强于endostatin。本研究将探讨人canstatin基因对人食管鳞状细胞癌移植瘤模型的抑制作用。方法：应用人食管癌细胞株KYSE150建立移植瘤模型。将裸鼠随机分成3组：腺病毒携带的canstatin基因组（Ad—GFP—canstatin）、腺病毒携带的绿色荧光蛋白组（Ad—GFP）和磷酸盐缓冲液组（PBS）。治疗期间测量皮下移植瘤的长径和短径;30d后处死裸鼠,取下肿瘤行常规病理切片,观察药物的毒性反应;检测肿瘤组织中caspase-3、内皮细胞生长因子受体1（fetal liver kinase-1,Flk-1）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的表达和微血管密度（microvessel density,MVD）。结果：第二次注射病毒后3d,canstatin基因治疗组肿瘤体积显著小于其余两组（P〈0．05）,治疗第6天抑瘤率达到61％;HE染色显示：各组肿瘤组织中都有坏死．尤其在canstatin基因治疗组坏死更加明显;canstatin基因治疗组caspase-3表达高于空载体组和对照组（P〈0．05）;Flk-1的表达低于空载体组和对照组（P〈0．05）：VEGF的表达3组相比差异无统计学意义（P〉0．05）：canstatin基因治疗组MVD低于空载体组和对照组（P〈0．05）。结论：人canstatin基因对人食管癌移植瘤的生长具有抑制作用,作用机制可能是降低Flk-1的表达进而抑制肿瘤的血管生成,抑制肿瘤的生长。     

CANSTATIN, A ENDOGENOUS INHIBITOR OF ANGIOGENESIS AND TUMOR GROWTH

Canstatin is a novel inhibitor of angiogenesis and tumor growth, derived from the C-terminal globular non-collageneous (NCI) domain of the α2 chain of type Ⅳ collagen. It inhibits endothelial cell proliferation and migration in a dose-dependent manner, and induces endothelial cell apoptosis. In vivo experiments show that canstatin significantly inhibits solid tumor growth. The canstatin mediated inhibition of tumor is related to apoptosis. Canstatin- induced apoptosis is associated with phosphatidylinositol 3-kinase/Akt inhibition and is dependend upon signaling events transduced trough membrane death receptor.