实时荧光定量PCR快速分子诊断唐氏综合征

目的　探讨快速诊断唐氏综合征的检测方法 .方法　采用实时荧光定量PCR技术 ,检测唐氏患者 2 3例、正常人 33例 ,定量分析比较ΔCt值 .结果　正常组和唐氏组ΔCt值有显著性差异 (p <0 .0 0 1) ,并建立了相应的参考值范围 .结论　实时荧光定量PCR具有简单、快速、特异性高等优点 ,可用于快速诊断唐氏综合征     

实时荧光定量PCR法筛查唐氏综合征的实验研究

目的建立一种无创性、高特异性的快速筛查唐氏综合征（Down’s syndrome，DS）的检测方法。方法采用实时荧光定量PCR技术对正常人和DS患者外周血样本的有核细胞进行检测，根据△Ct值的差异建立检测方法。结果正常组和唐氏组△Ct值有显著性差异（P〈0．001），初步建立了实时荧光定量PCR筛查唐氏综合征的快速检测方法。结论实时荧光定量PCR具有无创性、特异性高且简单、快速等优点，适用于唐氏综合征产前筛查。     

应用实时荧光定量PCR快速分子诊断唐氏综合征

目的探讨一种快速、准确诊断唐氏综合征的方法。方法采用实时荧光定量PCR技术，对25例唐氏患者、50名正常人外周血标本，扩增21号及1号、19号染色体上的多态位点，定量分析比较正常组及唐氏患者组的4对△Ct值。结果唐氏患者组△Ct值明显低于正常组，两组比较差异有统计学意义（P〈0．001）。初步建立了临床应用的参考值范围，可以有效区分出唐氏样本和正常样本。结论应用实时荧光定量PCR技术可快速、准确诊断唐氏综合征，为唐氏综合征的快速产前诊断开辟了新的途径。     

应用短串联重复序列快速诊断唐氏综合征

目的在实时荧光定量PCR技术的基础上建立一种诊断效果较好、简便、经济的快速诊断唐氏综合征的技术。方法以D21s1411,D21s1259为检测位点,D19s222为参照位点,用SYBR GreenI作为荧光染料,采用荧光定量PCR技术检测37例唐氏综合征及13l例非唐氏综合征胎儿羊水标本的STR片段,分析唐氏综合征组及非唐氏综合征组的4对△Ct值。结果1．非唐氏征组的△Ct1411。及△Ct1259的均数、标准差及95％置信区间均为正值,唐氏征组的△Ct1411及△Ct1259的均数及95％置信区间均为负值;两组间95％置信区间互不重叠。2．非唐氏征组与唐氏征组位点D21s141l及D21s1259△Ct值差异均有统计学意义,分别为t=12．088,P=0．000及t=13．884,P=0．000.3．用D21s1411进行诊断时,ROC曲线下的面积为0．9291,将△Ct1411 0．1327为截止值时的灵敏度与特异度之和最大;用D21s1259进行诊断时,ROC曲线下的面积为0．985,将△Ct1259=-0．2016作为截止值时的灵敏度与特异度之和最大。结论1．以D21s141l和D21s1259为检测位点,应用荧光定量PCR方法检测羊水标本的STR片段,可有效判断胎儿是否为唐氏综合征,检出率达91％以上。2．用SYBR GreenI作为染料进行荧光定量PCR检测,操作步骤简单,成本较低,效果良好。     

多重实时定量PCR快速诊断唐氏及爱德华综合征

目的 建立多重实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RTqPCR)技术,快速分子诊断唐氏及爱德华综合征.方法 应用PCR方法同时扩增位于21号染色体上的淀粉样前蛋白基因(amyloid precursor protein gene,APP)和18号染色体上的胸苷酸合成酶基因(thymidylate synthetase gene,TYMS),以相对定量指标△CT值区分唐氏、爱德华综合征及正常人.用此方法检测4组样本:36名正常人外周血(A组)、15名正常核型的羊水细胞(B组)、21例唐氏综合征(C组)和6例爱德华综合征(D组).结果 A～D 4组样本△CT均值分别为-0.48±0.15、-0.49±0.12、-1.26±0.17和0.25±0.12.B组与A组间差异无统计学意义(P＞0.05);C组与A组、D组与A组间差异有统计学意义(P＜0.01),且无交叉重叠.结论 多重实时荧光定量PCR技术同时快速诊断唐氏及爱德华综合征是可行的.     

单细胞实时荧光定量PCR结合比较阈值法在诊断唐氏综合征中的应用

目的探讨单细胞水平实时荧光定量PCR技术对于诊断唐氏综合征的应用价值。方法22例唐氏综合征患者及胎儿、40名正常对照外周血或脐血经梯度离心、显微操作分离单个淋巴细胞，应用引物延伸预扩增及实时荧光定量PER技术扩增基因组12号染色体上GAPDH基因、21号染色体上S100B基因和DSCR1基因。比较病例组与对照组ACT值有无差异，计算病例组S100B／GAPDH、DSCR1／GAPDH的值。结果两组间ACT值差异有统计学意义（P〈0．01），病例组低于对照组。病例组S100B／GAPDH、DSCR1／GAPDH值分别为1．891（1．563～2．287）、1．840（I．562～2．168）。结论实时荧光定量PCR是一种可信的诊断方法，为唐氏综合征的无创性产前诊断及植入前遗传学诊断等提供了新的思路。     

唐氏综合征高危孕妇血浆游离胎儿DNA的检测

目的探讨实时荧光定量PCR(RQ-PCR)检测孕妇血浆游离胎儿DNA;在筛查唐氏综合征高危孕妇中的应用。方法采用RQ-PCR检测22例唐氏综合征高危孕妇及20例低危孕妇血浆中GA;PDH及SRY水平,2-△△Ct法分析两组间的差异。结果 22例孕男胎均检出SRY基因,20例孕女胎中出现2例假阳性,高危组游离胎儿DNA;水平明显高于低危组(P=0.006,<0.05),比值为2.79。结论孕妇血浆游离胎儿DNA;的定量检测在唐氏综合征筛查中有重要价值。     

荧光定量PCR产前快速诊断唐氏综合征

目的探索荧光定量PCR方法在产前快速诊断唐氏综合征中的作用。方法收集65例妊娠20~24w,进行羊水穿刺胎儿细胞培养染色体核型分析的胎儿羊水,采用荧光定量PCR技术对标本D21S11位点进行PCR扩增、检测,并与染色体核型分析的结果进行对照分析。结果65例未培养羊水标本经过荧光定量PCR检测,发现2例唐氏综合征,显示1:1:1三条或2:1两条D21S11位点等位基因带,63例显示1:1两条带;与细胞培养染色体核型分析的结果基本一致。结论荧光定量PCR技术具有检测速度快、需要模板量少,检测结果准确等特点,可用于染色体异常的产前快速诊断。     

应用QF-PCR技术研究孕妇血浆中胎儿游离DNA与染色体非整倍体妊娠的关系

目的孕21三体胎儿孕妇血浆中胎儿游离DNA水平明显高于正常孕妇,该研究旨在评价妊娠时期孕妇血浆中胎儿游离DNA作为筛查唐氏综合征指标的意义及可行性。方法应用荧光定量PCR技术(QF-PCR)检测怀孕唐氏综合征男胎孕妇和孕正常男胎孕妇血清中胎儿游离DNA的水平。15例孕唐氏综合征男胎孕妇和25例孕正常男胎孕妇及10例孕正常女胎孕妇参与该项研究。结果孕唐氏综合征孕妇血清中胎儿游离DNA水平为185.8基因当量/ml,明显高于正常组(81.9基因当量/ml),P=0.005。结论孕唐氏综合征男胎孕妇血清中胎儿游离DNA含量明显高于正常组,提示荧光定量PCR技术检测孕期母血中胎儿游离DNA水平可能成为筛查唐氏综合征的一个有效指标。     

应用STR-荧光定量PCR行产前唐氏综合征诊断的初步研究

目的建立快速高效的产前诊断唐氏综合征的方法。方法选取21号染色体上唐氏综合征关键区域内的4个串联重复序列（STR）（D21S1413,D21S1414,D21S1446,D21S1437）作为遗传标记,采用荧光定量PCR扩增技术（QF—PCR）及片段分析技术来检测178例羊水标本,并与羊水标本的染色体核型分析结果相比对,评价QF—PCR方法的特异性和灵敏度。结果所有178例羊水标本中经核型分析证实有19例为21三体,另有2例为性染色体数目异常,19例唐氏综合征样本均可由QF—PCR法扩增检出。19例唐氏综合症样本,采用4对STR引物同时检测,阳性诊断率达100％。结论基于STR的QF—PCR技术具有简单、快速及准确等优点,对唐氏综合征大规模的产前基因诊断具有很好的临床价值。