奶牛鲜胚移植黄牛技术应用研究报告

1989—1990年,针对四川农村黄牛散饲养的情况,进行了奶牛鲜胚移植黄牛应用技术及其经营管理的研究,并用西门塔尔牛×本地黄牛的杂种母牛(以下简称西杂牛)作供体,进行了超排采胚与移植黄牛探索。用FSH和PGF_2α常规超排法和加预处理超排法,共处理黑白花奶牛供体58头,有效率81.0％(47/58),头均获卵7.2±5.2枚(340/47),获可用胚4.7±4.3枚(220/47);鲜胚移植黄牛受体92头,受胎率44.6％(41/92)。超排西杂牛供体27头,有效率85.2％(23/27),头均获卵5.9±4.6枚(136/23),获可用胚2.8±2.6枚(64/23);鲜胚移植黄牛受体17头,受胎率41.2％(7/17)。结果显示:2—3胎、3.5—5.4岁、产犊后90天以上健康母牛供体的超排效果最佳;供体发情周期的第3—5天,用低剂量FSH预处理可提高超排效果和获卵数;在农村异地远距离运送鲜胚,桑椹胚的移植受胎率显著高于囊胚;产后180天以上、非哺乳期、发情与供体同步或提前1天的受体黄牛,移植受胎率最高;结合农村黄牛改良,用西杂牛作供体就地采胚移植黄牛,不仅降低胚移成本费 用,也使黄牛直接生产出二、三代级进杂交牛,加快了杂交改良进程,有一定生产价值和经济效益。在以上基础上,提出了一套适合农村的奶牛鲜胚移植黄牛的技术与经营管理措施,为在农村条件下开展该项技术提供了试验依据和新     

奶牛胚胎移植引进技术的消化吸收总结报告(1986—1990)

1986—1990年利用FSH对136头黑白花奶牛进行超数排卵处理328次,有效率77.7％,采卵成功率91.4％,共获卵1791枚,其中可用胚胎1127枚,可用率为62.9％,平均每次采卵得可用胚4.84±4.66枚。 冷冻保存胚胎1015枚,解冻后胚胎可用率平均为84.6%。1990年将奶牛冷冻胚胎移植给黄牛和杂种牛205头,妊娠85头,妊娠率为41.6％。通过试验,肯定了国产激素的适宜剂量及其可与进口激素相比的超排效果,但同种FSH不同批号间存在差异。对29头供体母牛重复超排处理129次,各次处理间各项指标差异均不显著,获可用胚≥5枚的供体牛比率,在2—3次重复处理中均显著高于首次,指出由于供体对激素反应的个体效应,筛选对激素反应敏感的供体重复超排是可行的。同时探讨了胚胎品质、发育阶段以及黄体等级与移植妊娠率的关系。     

供体牛超排效果研究

试验按黄体级别、饲料条件、奶孕酮含量分组,超排222头黑白花奶牛,有效反应208头(93.7％),采卵成功184头(88.5％),获卵1740枚(7.8枚/头),可用胚1173枚(5.3枚/头)。统计分析结果:Ⅰ、Ⅱ级黄体组超排可用胚胎数显著(P<0.05)高于Ⅲ级黄体组。饲料条件好的昆明和郑州牛场组可用胚胎数显著(P<0.05)高于饲料条件差的个体户和新沂牛场组。从超排前奶孕酮含量测定结果分析,黄体不同级别的孕酮含量、可用胚数等差异不显著(P>0.05),奶孕酮含量≥3毫微克/毫升组和≤3毫微克/毫升组的超排效果差异不显著(P>0.05)。结论:在现有条件下直检黄体级别为主、结合奶孕酮测定(校正判别Ⅲ级黄体的人为误差),即可获得良好的超数排卵结果。     

苏联牛胚胎移植技术研究现状

苏联牛胚胎移植起步较晚,直到1980年才通过手术移植的方法获得第一头冻胚犊牛,但近年来这项技术进展较快。据H CepreeB等(1983)报道,用手术法给183头青年母牛移植不同日龄胚胎,妊娠率为48.1％(88/183);118头母牛移入冷冻胚胎,妊娠率为44.1％(52/118)。苏联在超数排     

影响本地杂交黄牛胚胎移植妊娠率的因素分析

本试验选用本地杂交黄牛作为受体,在同一饲养条件下,利用自然发情的方法,移植黑白花奶牛提供的胚胎,移植结果显示:胚胎发育日龄和受体发情日期同步移植,受胎率44.2%,8天受体移植7天桑葚胚,受胎率38.9%,7天受体移植8天囊胚,受胎率35.5%,三者比较差异不显著(P>0.05)。冻胚分别移植A、B、C级黄体的受体,其受胎率分别为40.4%、37.2%、33.3%,三者差异不显著(P>0.05);而鲜胚移植A、B、C级黄体,受胎率分别为48.6%,40.3%,25.8%,A、B级黄体移植受胎率差异不显著(P>0.05),A、C级黄体差异极显著(P<0.01),B、C级黄体差异显著(P<0.05)。不同胚胎质量比较:一、二、三级胚胎移植受胎率分别为50.5%、42.6、25.2%,三者比较,一级、二级胚胎受胎率差异不显著(P>0.05),但二级和三级差异显著(P<0.05),一级和三级差异极显著(P<0.01)。移植单胚和双胚的受胎率分别为25.2%,40.2%,二者差异显著(P<0.05)。     

对超排供体牛使用PMSG抗体的见解

对使用PMSG超数排卵,在注射PMSG后60小时注射PGE的174头乳用母牛,在注射PGE48小时后注射两种PMSG抗体[Monoclenal n=56;Poly-clonal n=57;生理盐水(对照)n=61]。用非手术法或屠宰后回收卵1206枚,其中,显微镜下肉眼评估757枚为可用胚,从52头冲卵供体得到的295枚胚胎,移植给同期发情的受体,记录妊娠结果。37头冲卵供体在超排后6个月恢复繁殖能力。 对于供体的排卵率、回收卵数、受精率、可用胚数和胚移植后的妊娠结果及超排采卵后繁殖性能恢复的时间等,PMSG抗体无明显影响。 结果是使用PMSG抗体不能提高可用胚的数量和质量,促进供体超排后6个月内繁殖性能恢复正常。因此,在胚移植过程和使用PMSG超排的程序中,不必推广使用PMSG抗体。     

波尔山羊腹腔内窥镜鲜胚移植试验

2002年10-11月在山东省东营市蓝海集团绵野公司种羊场使用两种超排药物对40只经产波尔山羊进行超排处理．供体羊有两只未发情．超排有效率为95％(38／40)。共回收胚胎388枚．其中可用胚311枚．每只获胚胎10．21枚(388／38)，平均可用胚8．18枚(311／38)，可用胚率80．15％(311／388)。同期处理受体399只，有320只发情，同期率为80．20％．运用腹腔内窥镜技术移植受体267只．其中44只供体移植双胚。经试情150只受体未返情，受胎率为56．18％(150／267)。     

比利时蓝白花肉牛超数排卵及胚胎移植试验

用FSH +Ctoprostenol药物组合 ,超排处理 1 7头次比利时蓝白花肉牛 ,共采卵 70枚 (头均 4.1 2± 2 .74) ,可用胚 47枚 (头均 2 .76± 2 .30 ) ;以非手术方法移植 34头受体 ,妊娠 1 3头 ,妊娠率 38.2 % ,获 8头犊牛     

奶牛胚胎分割移植试验研究

用简单方法(即胚胎透明带不经链霉蛋白酶软化处理)直接分割7—8日龄新鲜胚胎(一分为二)。裸半胚成对移植给66头受体,90天妊检,移植妊娠率为56.1％(37/66)。除6头流产和尚有5头待产外,已有26头受体产犊35头,其中有9对同卵双胎,双胎率为34.6％(9/26),半胚产犊率为29.2％(35/120)。对影响成对半胚移植妊娠率和半胚产犊率的因素如胚胎质量、胚胎在体外停留时间、胚胎发育阶段、黄体状况、受体牛品种等进行了较系统的研究。此外对冷冻胚胎进行了分割试验,移植妊娠率为45.5％(5/11)产3头犊牛。对快速冷冻和常规冷冻胚胎分割后的移植妊娠率进行了比较,分别为25.0％(1/4)和57.4％(4/7)。     

山羊鲜胚及冻胚移植

经超排处理获黑山羊3日龄新鲜胚胎12枚,分别移植到同期发情的6只白色受体羊,其中2只妊娠,产羔3只,受体妊娠率为33.3％(2/6),鲜胚移植成功率25.0％(3/12)。7日龄山羊冷冻胚胎35枚,分别移植到同期发情的18只浏阳黑山羊和白色马头山羊受体母羊,其中6只妊娠,受体妊娠率 为38.89％(7/18),产活羔10只,流产1只,冻胚移植成功率为31.43％(11/35)。     

牛半胚分割移植技术的应用

牛胚胎移植技术已趋于成熟,其鲜胚移植妊娠率可达60％—70％,冻胚也达到45％—50％。每年黑白花牛移植的受体牛超过400头,迄今获得胚胎移植的犊牛1500多头,目前正在稳步地向奶牛户普及和推广。 过去要求进行胚胎移植的奶牛户几乎都是自己拥有优秀的供体牛,但近来的发展趋势是联合购入优秀的供体牛,集中移植给青     

农畜胚胎移植实用化研究

鲜胚及分割胚移植,超排处理供体牛8头,采卵7头,获取胚胎29枚,其中可用胚21枚。 移植受体贵州黄牛16头,移植3个月后检胎,确定妊娠8头,妊娠率为50％,妊娠期放牧流产2头,产犊6胎,产出8头(2头双胎),出生重为25—30千克。 自70年代迄今,胚胎移植技术在乳牛及肉牛业生产中,对提高牛的品质、增加乳肉产量及扩大良种牛群等起到积极作用。倘若在农畜方面应用E.T技术,则可大大加快农畜的改良进程,因为现有的级进杂交改良需时12—16年之久,而采用E.T技术只需1—2年便可获得纯种乳牛或肉牛,如此便可显著地加速奶牛群和肉牛群的发展。 几年来,贵州省家畜胚胎移植研究中心曾进行少量的农畜胚胎移植的尝试并取得初步成果。     

多胎多浪羊群胚胎移植扩繁试验

(目的)绵羊多胎基因在多浪羊品种群体中携带率较低,为增加携带多胎基因多浪羊群的数量,提高多浪羊的繁殖率和养殖效益,本试验选择携带多胎基因的多浪羊作为供体进行了胚胎移植扩繁试验.(方法)选取经检测携带有多胎基因的种公羊4只、母羊19只,通过同期发情、超数排卵和手术法采卵,腹腔镜移植技术给普通生产群的多浪羊受体移植.(结果)供体平均生产可用胚胎9.26枚(176/19),鲜胚移植受胎率为59.5％,另外制作A级冷冻胚胎57枚.(结论)结果表明胚胎移植技术能够有效地用于携带有多胎基因羊繁殖生产,达到迅速扩群的目的.     

肉牛胚胎移植技术应用研究

1998— 2 0 0 0年通过对 1 3头西门塔尔牛进行FSH—PG法超排处理 ,超排有效头数 1 0头 ,平均获可用胚 7.8枚 /头 ;探索了在不同营养条件下移植妊娠率 ,说明注射营养药对妊娠率有显著影响 (P <0 .0 1 ) ;比较了经产牛与育成牛的移植妊娠率 ,育成牛显著高于经产牛 (P <0 .0 1 ) ;分析了一次PG与二次PG注射法对受体牛同期发情的影响 ,表明二次PG注射法高于一次注射法 (P <0 .0 5)。对冻胚与鲜胚移植效果进行比较 ,对影响移植效果的因素进行分析 ,从而对大规模地实施牛的ET计划提供了科学参考依据     

影响德国美利奴母羊两次超排移植效果因素分析

对同一批德国美利奴羊供体母羊采用输卵管法、子宫角法进行超排胚移,使用的FSH总剂量也不同,取得不同的效果： 采用输卵管法,FSH总剂量为84单位/只,对17只供体母羊进行超排,采胚13只,平均每只供体采集胚胎11.77枚,其中可用胚胎10.92枚.移植受体142只,产羔61只,产羔率42.96%;采用子宫角法,FSH总剂量为120单位/只对上述17只供体母羊进行超排,采胚13只,平均每只供体采集胚胎6.23枚,其中可用胚胎6.07枚,移植受体78只,产羔51只,产羔率66.82%.结果显示：不同的采胚方法、不同的超排剂量、供体羊的年龄、体重对供体羊的超排效果有影响;而不同的孕激素材料、母羊的生理状态以及体膘对受体的同期发情和移植后的受胎率有影响。     

黑白花母牛血浆硫酸雌酮对雌酮浓度比值同超数排卵反应力的关系

成年及青年黑白花母牛28头,用一种高纯度FSH-P制剂,自周期9—13天开始,按常规方法进行超排处理。冲卵失败2头除外,其余26头,平均有黄体6.58±5.44(M±SD)、总卵胚4.19±4.67、可用胚3.65±4.28。在超排处理前,即周期0、1、3、5、7、9各日共6次,自颈静脉采集血样,分离血浆,用放射免疫法分析血浆雌二醇-17β(E_2 -17β)、雌酮(E_1)和硫酸雌酮(E_1S)浓度。统计分析以上3种激素浓度以及不同激素的浓度比值同超排反应力的关系。发现供体的可用胚数同E_1S/E_1、E_2+E_1十E:S/E_1的比值有关,特别是E_1S/E_1值在各组的分布呈现出明显的规律。按可用胚数和黄体数将供体分为3组:组1包含可用胚≥4(全群平均为3.65)、黄体≥4的个体,其中有7/8(87.5％),周期0天E_1S/E_1值>2;组2为可用胚<4、黄体≥4的个体, 其中仅有1/9(11.1％)E_1S/E_1值>2 (P<0.01);组3为可用胚<4、黄体<4的个体,E_1S/E_1值无一定规律。如按E_1S/E_1值分组,组1,13头(50.0％)为E_1S/E_1值>2的个体,共有可用胚82枚,占全群可用胚总数95枚的83.3％,平均每头6.54枚(全群平均3.65);组2亦为13头,为E_1S/E_l<2的个体,总共仅有可用胚13枚,占总数的13.7％(P< 0.01),平均每头仅1枚。如用周期0天E_1S/E_1值预选供体,可望将超排效率提高80％。     

1987—1990年奶牛胚胎分割研究

1987年10月—1990年10月在不同地区的6个奶牛(农)场进行奶牛胚胎分割研究。采用简单的分割方法和设备,以及培训农场技术人员,三年共分割奶牛胚胎277枚,移植半胚522个,移植受体288头,有125头受体妊娠(43.4％),半胚妊娠率29.7％,双胎率33.3％。随着分割技术的提高,到1990年受体妊娠率达到51.4％,和整胚移植的(50％)相同。半胚妊娠率达34.6％。分割一级胚胎可获得最好的结果。受体和半胚的妊娠率分别是53.5％和37.2％。半胚产犊率为35.3%,按未分割的整胚计算,产犊率达到70.4％,比整胚的(45.5％)提高25％。双胎率达到42.0％。结果表明,在我国牛(农)场比较简陋的设备条件下,依靠本身培训的技术力量,可以利用胚胎分割来提高奶牛的繁殖效率。本研究表明,用黄牛或奶牛作受体移植成对奶牛半胚,两者在受体妊娠率、半胚妊娠率和产犊率及双胎率上均无差异(P>0.1)。这对充分利用我国丰富的黄牛资源生产出更多优良的奶牛具有十分重要的意义。     

绵羊鲜胚分割移植试验

本试验就胚胎发育阶段、胚胎质量和黄体等级对分割胚胎移植效果的影响进行了研究。试验结果表明,囊胚二分割移植受体妊娠率(56.5％,13/23)、半胚妊娠率(41.6％,20/42)、移二个半分胚妊娠受体双羔率54.6％、6/11)均高于桑椹胚和扩大囊胚。A级胚胎分割移植妊娠率高于B级(P<0.01)。桑椹胚分割移植妊娠的受体中A级黄体为68.8％,B级黄体31.3％。囊胚和扩大囊胚受体A、B级黄体间无明显差异。鲜胚四分胚移植20只受体,产6只羔羊,受胎率30％。     

胚胎移植技术在白绒山羊选育中的应用研究

从 1 996— 1 998年 ,经 4个品种的 30 6只白绒山羊供体羊进行超排处理共获可用胚胎 3782枚 ,平均回收可用胚胎 1 2 .43± 4.6 8枚 ,受胎率达 70 .1 6 % ,产羔率达6 4.99%。同时获得以下研究成果 :①使用两种FSH制剂 ,每组供体回收可用胚胎平均数 :1 2 .97± 4.74(宁波产FSH1 2 0IU)、1 2 .4± 5.77(宁波产FSH1 38IU )、9.32±4.6 8(中科院FSH1 .8mg)、1 1 .73± 5.2 8(中科院FSH2 .2mg) ,本次实验表明两种制剂只要剂量合适都有较好的超排效果 ;②移植三胚和双胚受体羊的受胎率和产羔率明显高于移植单胚的受胎率和产羔率。获得的受胎率如下 :6 5.1 2 % (单胚 )、79.4%(双胚 )、86 .2 % (三胚 ) ;③供受体羊发情同步差对受体羊妊娠率有重要的影响 ,同步差为 0h、+ 1 2h的受胎率显著高于同步差 + 2 4h的受胎率。受胎率分别为 :74.86 %( 0h)、72 .1 2 % ( + 1 2h)、41 .4% ( + 2 4h)。     

卵母细胞体外成熟能力及其影响因素

当前,虽然鲜胚移植已推广应用,鲜胚分割、冻胚分割和体外受精等技术正在发展,然而胚胎和成熟卵的来源却是一个严重问题。多年来,人们热衷于超排技术,期望用外源激素处理供体,以获得大量可以利用的胚胎或成熟卵,可是超排卵的质量低下,得到的卵子数也很有限,远远不能满足科研和生产的需要。近年来,越来越多的科学家致力于研究淘汰母畜或屠宰母畜的卵巢卵母细胞的体外成熟,以探索胚胎移植和胚胎生物工程所需的大量胚胎来源,使卵母细胞体外成熟的研究受到前所未有的重视。