白藜芦醇诱导肾癌细胞凋亡的分子机制研究

目的研究白藜芦醇对肾癌786-O细胞周期和凋亡的影响及其分子机制。方法 CCK-8检测细胞活力;propidium iodide(PI)染色-流式细胞仪分析细胞周期和PI/AnnexinⅤ双染-流式细胞仪检测细胞凋亡;免疫印迹法检测细胞周期和凋亡相关靶蛋白表达水平。结果白藜芦醇能够呈浓度依赖方式显著抑制786-O细胞生长活力(P0.05,与正常组比较);周期图谱显示白藜芦醇引起G1期的786-O细胞比例减少,G2/M期的细胞比例增多,周期蛋白Cyclin和周期蛋白依赖激酶抑制子p21表达上调;另外,白藜芦醇呈药物浓度依赖诱导786-O细胞凋亡,促凋亡蛋白Bax和凋亡切割蛋白Caspase-3表达上调。结论白藜芦醇能抑制肾细胞癌786-O细胞增殖,使其阻滞在G2M期,并且诱导786-O细胞凋亡。p21和Bax参与了白藜芦醇诱导786-O细胞凋亡。     

浙江蝮蛇毒诱导人白血病Jurkat细胞凋亡的体外实验研究

目的：研究浙江蝮蛇毒诱导人白血病Jurkat细胞凋亡的作用及机理，方法：采用MTT法测定IC50值及生长曲线，流式细胞仪（FCM)Annexin Ⅴ FITC/PI法检测细胞凋亡发生率，PI染色法检测细胞周期，同时用流式细胞汁FCM及Western-blot检测Bcl-2蛋白表达。结果：浙江蝮蛇毒能抑制Jurkat细胞生长，且呈剂量依赖关系，并能诱导人白血病Jurkat细胞凋亡，48h时作用最强，此时Bcl-2蛋白表达下降，随后此作用减弱，低浓度作用下细胞逐渐恢复生长，结论：浙江蝮蛇毒能诱导人白血病Jurkat细胞凋亡，且呈剂量依赖关系，此作用与Bcl-2蛋白表达下调有关。     

雷公藤甲素诱导结肠癌细胞凋亡的分子机制研究

目的研究雷公藤甲素对人结肠癌HCT-116细胞周期和凋亡的影响及其分子机制。方法采用MTT法检测细胞的增殖;流式细胞仪分析细胞周期和细胞凋亡;Western blot检测细胞中相关蛋白的表达。结果雷公藤甲素可显著抑制HCT-116细胞的增殖活性;流式细胞仪和Western blot结果显示,雷公藤甲素作用HCT-116细胞后,G_0/G_1期细胞比例增多,随着雷公藤甲素浓度的增加,p21蛋白表达上调,周期蛋白Cyclin D1表达下调;并且,雷公藤甲素呈浓度依赖性诱导HCT-116细胞凋亡,凋亡抑制蛋白Bcl-2表达下调,促凋亡蛋白Bax表达上调。结论雷公藤甲素能抑制人结肠癌HCT-116细胞增殖,通过促进p21的表达,抑制Cyclin D1使细胞周期阻滞于G_0/G_1期,并可通过线粒体途径诱导HCT-116细胞凋亡。     

乳浆大戟提取物诱导HeLa细胞凋亡及其机制研究

目的研究乳浆大戟提取物诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用及其分子机制。方法采用MTT法和克隆形成实验检测乳浆大戟提取物对宫颈癌HeLa细胞的生长和增殖抑制作用;利用Annexin V-FITC/PI双染和DAPI细胞核染色法检测乳浆大戟提取物诱导细胞凋亡情况;线粒体膜电位检测凋亡细胞的线粒体膜电位变化情况;流式细胞仪和Westernblot法分别分析细胞周期及细胞周期蛋白变化情况。结果①乳浆大戟提取物以时间和剂量依赖的方式显著抑制宫颈癌HeLa细胞的生长和增殖;②乳浆大戟提取物能使宫颈癌HeLa细胞线粒体膜电位显著降低,诱导细胞发生凋亡性细胞死亡;③乳浆大戟提取物能够显著阻滞宫颈癌HeLa细胞在G0/G1期,降低Cyclin D1、Cyclin E和CDK4的表达水平,增加P21的表达水平。结论乳浆大戟提取物通过下调Cyclin D1、Cyclin E和CDK4的表达和上调P21的表达,使HeLa细胞阻滞在G0/G1期,进而显著抑制宫颈癌HeLa细胞生长和增殖,诱导细胞依赖线粒体通路的凋亡性死亡。     

白藜芦醇对多发性骨髓瘤细胞的体外抗癌作用

目的研究白藜芦醇对多发性骨髓瘤细胞体外抗癌作用,探讨其抗癌作用的分子机制。方法用MTT法检测白藜芦醇对骨髓瘤细胞系RPMI-8226和KM3增殖的影响;Annexin-V/PI双标流式细胞术检测白藜芦醇对RPMI-8226细胞凋亡的影响;PI单标流式细胞术测定白藜芦醇对RPMI-8226、KM3细胞DNA分布的影响;Western-blotting方法检测白藜芦醇对RPMI-8226细胞Bcl-2、Bax、XIAP、c-IAP-1、c-IAP-2蛋白表达的影响。结果白藜芦醇对RPMI-8226和KM3细胞具有明显的增殖抑制作用,其抑制增殖作用呈时效和量效关系。25～100μmol/L白藜芦醇作用24h可诱导RPMI-8226细胞凋亡,100μmol/L作用24h时KM3细胞凋亡率达(26.5±2.7)%。白藜芦醇处理组RPMI-8226及KM3细胞周期均发生变化,细胞周期被阻滞于S期和G0/G1期。白藜芦醇以时间依赖方式下调抗凋亡蛋白Bcl-2、XIAP、c-IAP-1、c-IAP-2的表达,并可上调促凋亡蛋白Bax的表达,但白藜芦醇对各蛋白作用的动力学不同。结论白藜芦醇可通过调控细胞周期进程、诱导细胞凋亡而有效抑制骨髓瘤细胞增殖,其诱导细胞凋亡与调节Bcl-2和IAP家族蛋白的表达有关。     

小檗碱体内外对人鼻咽癌细胞CNE-2生长的抑制作用

目的观察小檗碱体内外对人鼻咽癌CNE-2细胞生长的影响,探讨小檗碱的抗肿瘤作用机制。方法MTT法测定小檗碱对CNE-2细胞生长的抑制作用;流式细胞仪检测小檗碱对CNE-2细胞凋亡和周期的影响;透射电镜观察CNE-2细胞经小檗碱处理后凋亡形态变化;Westernblotting法检测小檗碱对CNE-2细胞的细胞周期相关蛋白(cyclin)B1、CDK1、cdc25c表达的影响;3H-胸腺嘧啶(3H-TdR)和3H-亮氨酸(3H-Leu)标记前体掺入法检测小檗碱对CNE-2细胞DNA和蛋白质合成的影响;利用荷人鼻咽癌的裸鼠模型验证小檗碱的体内抗肿瘤作用。结果小檗碱能抑制CNE-2细胞生长,48h的半数抑制浓度(IC50)为(49.5±5.8)μmol/L,72h的IC50为(13.3±2.0)μmol/L;小檗碱能抑制CNE-2细胞DNA和蛋白质合成;小檗碱能诱导CNE-2细胞凋亡,细胞经过25.0μmol/L小檗碱处理48h后的凋亡指数为(48.9±10.4)%;50.0μmol/L小檗碱能诱导CNE-2细胞G2/M期阻滞,并且下调细胞周期相关蛋白B1、CDK1、cdc25c表达;小檗碱能抑制人鼻咽癌CNE-2细胞在裸鼠体内的生长,30mg/kg剂量组的肿瘤体积中位数为317.9mm3,明显低于对照组(P<0.05)。结论小檗碱体内外均能抑制人鼻咽癌CNE-2细胞的生长,其抗肿瘤作用可能与其诱导细胞周期阻滞和凋亡,下调相关细胞周期蛋白有关。     

半边旗提取物5F对人鼻咽癌CNE-2Z细胞生长的抑制作用

目的研究半边旗提取物5F对人鼻咽癌CNE-2Z细胞的抑制作用及可能机制。方法以台盼蓝活细胞计数法测定生长曲线;用MTT比色法检测给药后鼻咽癌细胞的增殖抑制情况;采用FCM检测5F对细胞周期和凋亡的影响;用PI/Hoechst33258荧光双染法和DNA ladder检测凋亡。结果 5F作用后,生长曲线测定和MTT比色法实验结果显示,5F对CNE-2Z细胞的增殖和生长有显著的抑制作用并呈明显的时间-剂量依赖关系;流式细胞仪、DNA ladder和荧光双染法结果提示5F可诱导CNE-2Z细胞凋亡。结论半边旗提取物5F能抑制CNE-2Z细胞的增殖效应,其机制可能与诱导细胞凋亡和引起细胞周期阻滞于G2/M期有关。     

白黎芦醇对人口腔鳞癌KB细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的:探讨白藜芦醇对人口腔鳞癌KB细胞的增殖及凋亡影响。方法:应用MTT比色法检测Res对KB细胞体外生长的抑制作用;流式细胞仪测定细胞的周期和凋亡;Hoechst33258荧光染料染色,显示凋亡细胞形态;Western blot方法检测survivin、Caspase-3、Smac蛋白的表达。结果:Res能以剂量和时间依赖的方式抑制KB细胞生长,以剂量依赖的方式使KB细胞周期阻滞在S期、诱导细胞凋亡;Hoechst33258染色,可见细胞呈明显的凋亡特征;Western blot方法测得Res下调KB细胞的Survivin蛋白表达水平、增加KB细胞胞浆的Smac蛋白含量(P<0.01)、同时活化Caspase-3蛋白。结论:Res可抑制KB增殖,使细胞周期呈S阻滞并可诱导细胞发生凋亡,Survivin、Caspase-3和Smac基因参与了Res诱导KB细胞凋亡的作用。     

Piscidinol A诱导人白血病K562细胞凋亡及其作用机制

目的:初步研究Piscidinol A对人慢性髓系白血病K562细胞的增殖抑制作用及抗肿瘤分子作用机制。方法:MTT法检测细胞增殖抑制率;Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡形态;AnnexinⅤ-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡率;Western blot方法检测Piscidinol A对细胞中凋亡相关蛋白表达的影响。结果:Piscidinol A对K562细胞具有增殖抑制作用且呈浓度和时间依赖关系,24 h时IC_(50)为27.36 mg/L;细胞凋亡染色示有典型的细胞凋亡形态出现;流式细胞仪AnnexinⅤ-FITC/PI双标记法检测发现Piscidinol A可诱导K562细胞凋亡,其凋亡率呈浓度依赖性;Western blot法检测到Piscidinol A能上调Bax和Caspase-3的表达,同时下调抑凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论:Piscidinol A能抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与凋亡相关蛋白表达量变化有关。     

姜黄素诱导肾癌786-O细胞G2/M期阻滞及其分子机制的研究

目的研究姜黄素对肾癌786-O细胞生长抑制作用及其分子机制。方法 MTT(四甲基偶氮唑盐)法检测姜黄素对肾癌细胞786-O生长影响;流式细胞术分析姜黄素对786-O细胞周期的影响;免疫印迹检测细胞周期相关靶基因表达水平。结果姜黄素能够呈浓度依赖方式显著抑制肾癌786-O细胞生长活力;细胞周期分析表明姜黄素对786-O细胞具有G2/M期阻滞效应;免疫印迹结果证明姜黄素处理后786-O细胞P53、P21蛋白均上调表达,相应Cyclin B1蛋白表达维持较低水平。结论姜黄素作用于786-O细胞导致细胞周期G2/M期阻滞,其机制可能依赖于P53和P21蛋白信号通路。