树舌多糖对胃癌MGC-803细胞PTK活性的影响

目的研究树舌多糖（Ganoderma applanatum polysaccharides,GAPS）对MGC-803细胞增殖和PTK活性的影响,探讨树舌多糖抗肿瘤作用机制。方法 MTT法检测树舌多糖对胃癌细胞MGC-803增殖抑制作用;流式细胞术检测PTK活性。结果树舌多糖对胃癌MGC-803细胞具有增殖抑制作用,且呈时间及浓度依赖性。树舌多糖能下调PTK活性,与细胞对照组比较有差异（P〈0.05）。结论树舌多糖能抑制胃癌MGC-803细胞的增殖,下调PTK活性。     

沉默β-catenin表达对胃癌MGC-803细胞生物学行为的影响与作用机制研究

目的探讨β-链蛋白（β-catenin）表达下调对胃癌MGC-803细胞生物学行为的影响,并分析其作用机制。方法将RNA干扰慢病毒（β-catenin-RNAi慢病毒）及空载体慢病毒（β-catenin-Neg）分别感染MGC-803细胞,分为实验组（MGC-803-RNAi细胞）、阴性对照组（MGC-803-Neg细胞）、空白对照组（未处理的MGC-803细胞）。Westernblot检测验证转染效率;双染流式细胞术检测细胞凋亡率,单染流失细胞术分析细胞周期,Transwell法检测细胞侵袭能力;Westernblot检测细胞Bax、Bcl-2、cyclinD1及基质金属蛋白酶（MMP）-7蛋白表达水平。结果MGC-803-RNAi、MGC-803-Neg细胞中显示绿色荧光的细胞约占80%,MGC-803细胞不显示荧光;与MGC-803-Neg、MGC-803细胞相比,MGC-803-RNAi细胞β-catenin表达水平明显下调(P＜0.05),细胞凋亡率升高(P＜0.05),出现G1/S期阻滞现象(P＜0.05),侵袭能力明显减弱(P＜0.05),Bcl-2、cyclinD1及MMP-7蛋白表达水平下调(均P＜0.05）,而Bax蛋白表达水平上调(P＜0.05)。结论沉默β-catenin表达可促进胃癌MGC-803细胞凋亡,阻滞其细胞周期进程,减弱其侵袭转移力,其作用机制可能与影响Wnt/β-catenin信号通路下游靶蛋白表达有关。     

苦参素诱导人胃癌细胞系MGC-803凋亡的研究

目的:探讨苦参素诱导人胃癌细胞系MGC-803调亡作用及机制。方法:运用倒置显微镜和透射电子显微镜观察细胞形态变化;运用流式细胞术检测细胞凋亡及凋亡相关基因蛋白Bc1-2和Bax的表达水平。结果:苦参素1mg/ml、2mg/ml作用24小时后,倒置显微镜和透射电子显微镜观察MGC-803细胞均出现典型的凋亡形态变化;流式细胞仪检测结果显示,细胞凋亡率与阴性对照组相比,差异具有显著性(P<0·05);Bcl-2表达量明显减少,Bax表达量明显增加,差异具有显著性(P<0·05);但细胞凋亡峰不明显。结论:苦参素对人胃癌细胞系MGC-803有诱导凋亡作用,其机制与上调Bax和下调Bcl-2表达有关。     

二烯丙基三硫诱导人胃癌细胞凋亡及对Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨二烯丙基三硫（dially trisulfide，DATS）对人胃癌MGC-803细胞凋亡和凋亡调控基因Bcl-2和Bax的影响。方法用光学显微镜，荧光显微镜，流式细胞术检测凋亡，免疫组化研究人胃癌MGC-803细胞Bcl-2，Bax表达的变化。结果在光学显微镜及荧光显微镜下，通过DATS作用后的胃癌细胞出现了凋亡的典型形态学改变；流式细胞术检测可见亚G1峰出现。免疫组化显示，经DATS处理后，Bax的表达增强（P〈0．05），Bcl-2表达未见明显改变。结论Bcl-2基因家族可能参与了DATS诱导的MGC-803细胞凋亡。     

龙葵多糖对人胃癌MGC-803细胞增殖的影响

目的:研究龙葵多糖(Solanum nigrum polysaccharide,SNPS)粗提物对人胃癌MGC-803细胞株生长的移植,对其细胞周期的影响,探讨龙葵多糖对人胃癌细胞增值的影响.方法:MTT法检测SNPS对胃癌细胞MGC-803增殖作用;使用流式细胞仪检测1.6mg/mL SNPS作用72 h,MGC-803细胞的周期分布的影响.结果:结果表明SNPS对MGC-803细胞的增殖具有抑制作用,并具有时间及浓度依赖性.龙葵多糖1.6mg/mL组作用72 h,人胃癌MGC-803细胞被阻滞于G0/G1期(60.01±1.04),S(29.79±1.01)期和G2/M期(10.20±0.99)细胞数量减少,与细胞对照组比较有显著差异,具有统计学意义(P<0.05).结论:SNPS能显著抑制MGC-803细胞的增殖,阻止胃癌细胞由G1期进入S期、阻滞细胞周期进程.     

二烯丙基三硫对MGC-803细胞凋亡的影响

目的探讨二烯丙基三硫(dially disulfide，DATS)诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡及作用机制。方法光学显微镜观察凋亡形态，流式细胞术检测凋亡及细胞内活性氧水平。结果12mg／LDATS作用于胃癌MGC-803细胞24小时后，在光学显微镜下出现了典型的凋亡细胞形态学改变，流式细胞仪检测结果提示，活性氧水平升高，出现明显的亚G1峰。用抗氧化剂NAC预处理细胞，能抑制细胞内活性氧水平的升高及DATS诱导的凋亡。结论DATS诱导胃癌细胞凋亡可能与细胞内活性氧产生增加有关。     

氧化苦参碱诱导人胃癌细胞凋亡的实验研究

目的：研究氧化苦参碱诱导人胃癌MGC-803细胞裸鼠移植瘤细胞凋亡的作用机制。方法：制备人胃癌MGC-803细胞裸鼠移植瘤模型,将其随机分为阴性对照组、阳性对照组及氧化苦参碱小、中、大剂量组,观察氧化苦参碱对人胃癌裸鼠移植瘤的抑制作用。流式细胞仪检测移植瘤细胞Bd-2、Bax的表达。结果：氧化苦参碱能有效抑制裸鼠移植瘤的生长,与阴性对照组比较,其大剂量组肿瘤抑制作用明显,平均抑制率为43．20％;流式细胞仪检测显示氧化苦参碱组裸鼠移植瘤细胞Bcl-2表达降低,而Bax表达升高,以中剂量氧化苦参碱诱导细胞凋亡最明显,移植瘤细胞Bel-2表达为（339．19±42．34）,与阴性对照组（492．31±36．19）比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;Bax表达为（554．74±26．13）,与阴性对照组（397．48±18．36）比较,差异有高度统计学意义（P〈0．01）。结论：氧化苦参碱对人胃癌MGC-803细胞裸鼠移植瘤生长有一定的抑制作用。且其机制与下调细胞Bel-2的表达、上调Bax的表达,从而诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

长链非编码RNA PRNCR1对胃癌细胞增殖、侵袭及转移的研究

探索胃癌MGC-803细胞和人正常胃黏膜上皮GES-1细胞中,长链非编码RNA PRNCR1的表达,以及沉默PRNCR1 对胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法利用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测细胞中PRNCR1 表达水平;设计并合成PRNCR1-siRNA及对照序列（PRNCR1-NC）转染胃癌细胞,通过qRT-PCR 检测细胞中PRNCR1 的沉默效果;利用四甲基偶氮唑盐比色法检测胃癌细胞 的增殖;Transwell实验检测胃癌细胞迁移和侵袭能力的变化。结果PRNCR1 在胃癌MGC-803 细胞中的表达高于人正常胃黏膜上皮GES-1 细胞,PRNCR1-siRNA 可以下调胃癌MGC-803 细胞中PRNCR1 的表达,并可以抑制MGC-803 细胞的增殖和侵袭转移能力。结论PRNCR1-siRNA 能够下调PRNCR1 的表达,并有效抑制胃癌细胞的增殖和侵袭迁移力,为以PRNCR1 为靶点的胃癌基因治疗奠定理论基础。     

染料木素对人胃癌MGC-803细胞增殖及PKA活性的影响

目的 本文通过研究染料木素（Gen）对体外培养MGC-803细胞增殖以及PKA活性的影响,探讨Gen抑制MGC-803细胞系增殖的分子机制.方法 光镜下观察经Gen处理后人胃癌MGC-803细胞形态学改变;应用MTT法检测Gen对体外培养的人胃癌MGC-803细胞增殖影响;PepTag法检测Gen对MGC-803细胞PKA活性的调节.结果 与空白对照组比较,经Gen处理后MGC-803细胞外形呈不规则状、细胞间隙增大、折光性差;MTT实验发现Gen能够抑制体外培养的MGC-803细胞增殖,并且抑制作用呈现时间及浓度依赖性;浓度为40 μg/mL的Gen可以显著上调MGC-803细胞的PKA活性（P＜0.01）.结论 Gen对人胃癌细胞系MGC-803细胞的增殖有抑制作用,上调PKA活性可能是Gen抑制人胃癌MGC-803细胞增殖的机制之一.     

二烯丙基三硫诱导人胃癌细胞凋亡的作用

目的 探讨二烯丙基三硫（diallyl trisulfede，DAlS）诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的作用。方法 采用倒置显微镜、光学显微镜、透射电镜分别观察DATS诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的形态学改变以及用流式细胞术观察亚G1峰。结果 MGC-803细胞经DATS处理24h后，光镜可见细胞胞浆浓缩、核固缩深染等早期凋亡细胞；电镜可见到不同时期凋亡细胞；流式细胞术检测有亚G1峰的出现。结论 DATS具有诱导胃癌MGC-803细胞凋亡的作用。     

奥沙利铂对胃癌细胞XIAP表达及凋亡的影响

目的研究奥沙利铂对人MGC-803胃癌细胞株中XIAP表达及凋亡的影响,探讨其诱导凋亡的作用机制。方法应用流式细胞仪检测XIAP表达及凋亡的情况。结果奥沙利铂对XIAP表达有明显的抑制作用(P<0.05),凋亡率明显高于对照组(P<0.01)。结论奥沙利铂具有抑制MGC-803胃癌细胞株中XIAP表达,诱导胃癌细胞凋亡作用,其机制与抗凋亡相关基因表达减弱有关。     

SRPX2 在胃癌中的表达及对细胞侵袭的影响

目的 探讨含sushi 重复蛋白X 连锁2（SRPX2）在人胃癌（GC）中的表达及对胃癌MGC-803细胞侵袭能力的影响。方法 收集2014 年3 月1 日-2015 年3 月1 日于该院消化内科行手术切除的45 例胃癌及对应癌旁组织。检测SRPX2 mRNA 及蛋白在胃癌及癌旁组织中的表达情况,分析胃癌组织中SRPX2 蛋白表达对肿瘤临床表型的影响。通过siRNA 下调胃癌MGC-803 细胞中SRPX2 的表达,通过Transwell 侵袭小室检测沉默SRPX2 之后MGC-803 细胞侵袭能力的变化;同时检测沉默SRPX2 后MGC-803 细胞内基质金属蛋白酶2（MMP-2）表达水平的改变。结果 SRPX2 在胃癌组织中表达升高,胃癌组织高表达SRPX2与肿瘤淋巴结转移及高TNM 分期（Ⅲ + Ⅳ期）相关（P <0.05）;沉默SRPX2 表达可抑制胃癌MGC-803细胞的侵袭能力并同时下调了MGC-803 细胞中MMP-2 的表达。结论 胃癌组织中高表达的SRPX2 与肿瘤转移表型关系密切,沉默SRPX2 可能通过下调MMP-2 的表达而抑制胃癌细胞侵袭。     

稳定过表达Cdx2基因的胃癌细胞株的建立

目的 建立稳定过表达Cdx2基因的胃癌细胞株。方法 使用阳离子脂质体分别将真核表达载体pCMV-Cdx2-HA或空载体pCMV-HA转染至人胃癌细胞MGC-803中,G418筛选出阳性克隆后扩大培养。RT-PCR和Western Blot技术检测各组胃癌细胞中Cdx2基因mRNA和蛋白的表达情况,将挑选出的稳定株命名为MGC-803/Cdx2细胞（转染组）和MGC-803/EV细胞（空载体组）;流式细胞仪检测MGC-803细胞（未转染组）、MGC-803/EV细胞和MGC-803/Cdx2细胞的细胞周期和凋亡情况。结果 成功筛选出稳定过表达Cdx2基因的MGC-803胃癌细胞,即MGC-803/Cdx2细胞;与MGC-803细胞和MGC-803/EV细胞比较,MGC-803/Cdx2细胞中Cdx2基因mRNA和蛋白的表达明显增加（P<0.05）,而且细胞周期G0/G1期比例和凋亡率也明显增加（P<0.05）。结论 成功构建了稳定过表达Cdx2基因的胃癌细胞株,而且Cdx2过表达使细胞周期停滞、凋亡增加。     

黄芪多糖抑制人胃癌MKN45、MGC-803细胞生长的作用机制

目的:探讨黄芪多糖抑制人胃癌细胞MKN45、MGC-803生长的作用机制。方法:将人胃癌细胞MKN45、MGC-803置于RPMI1640培养基中做传代培养,分为对照组、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)组和黄芪多糖(astragalus polysaccharides,APS)组。对照组采用1640培养基培养,5-FU组给予不同质量浓度的5-FU培养,黄芪多糖组给予不同质量浓度的黄芪多糖培养,采用四甲基偶氮噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)实验检测细胞生长抑制情况,使用流式细胞仪检测细胞周期,使用荧光显微镜观察细胞凋亡情况。结果:(1)培养24 h,APS质量浓度≥10.0 g·L~(-1)、5-FU质量浓度≥0.05 g·L~(-1)时,MKN45、MGC-803细胞受抑制作用均比较明显;培养48 h,APS质量浓度≥5.0 g·L~(-1)、5-FU质量浓度≥0.025 g·L~(-1)时,MKN45、MGC-803细胞受抑制作用均比较明显;(2)细胞培养48 h后,5-FU组和APS组MKN45、MGC-803细胞周期均改变,停留在G0/G1期的细胞比例显著高于对照组,处于S期和G2/M期细胞明显少于对照组,差异有统计学意义(P0.05);(3)培养48 h后,5-FU组和APS组MKN45、MGC-803细胞凋亡率均高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:黄芪多糖可以抑制胃癌细胞MKN45、MGC-803的生长,其作用机制可能是使细胞停留在GO/G1期并诱导细胞发生凋亡。     

姜黄素对胃癌MGC-803细胞磷酸化-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶表达的影响

目的 探讨姜黄素对胃癌MGC-803细胞磷酸化-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)表达的影响.方法 将MGC-803细胞分为空白对照组和四个药物实验组,各组姜黄素浓度分别为5 μmol/L,10 μmol/L,20 μmol/L,40 μmol/L.经不同浓度的姜黄素作用24 h、48 h、72 h后,应用CCK8法检测姜黄素对MGC-803细胞增殖的影响;应用Annexin V-FITC/PI双染色法测定不同浓度的姜黄素作用24 h后胃癌MGC-803细胞凋亡情况;应用蛋白免疫印迹法检测不同浓度姜黄素作用24 h对MGC-803细胞内p-AKT蛋白表达水平的影响.结果 姜黄素对MGC-803细胞增殖有抑制作用,且呈剂量依赖性和时间依赖性.在5~40 μmol/L浓度范围内,姜黄素呈浓度依赖性地促进MGC-803细胞的凋亡,并下调MGC-803细胞中p-AKT的水平.结论 姜黄素可能是通过抑制p-AKT蛋白的表达和AKT信号通路促进MGC-803细胞凋亡并抑制其增殖.     

汉黄芩素抑制人胃癌MGC-803细胞糖代谢的作用

探讨汉黄芩素对人胃癌MGC-803细胞糖代谢的抑制作用及其可能的内在机制。采用葡萄糖摄取检测试剂盒检测汉黄芩素对MGC-803细胞糖代谢中葡萄糖摄取量的影响;同时采用乳酸生成检测试剂盒检测汉黄芩素对MGC-803细胞糖代谢中乳酸生成量的影响;Annexin V-PI双染实验检测汉黄芩素调节糖代谢过程中MGC-803细胞的凋亡率;Western blot法分析糖代谢相关蛋白己糖激酶2(HKⅡ)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、丙酮酸脱氢酶激酶(PDHK)和乳酸脱氢酶A(LDH-A)的表达变化情况。结果表明:汉黄芩素能在一定浓度下抑制人胃癌MGC-803细胞糖代谢中的葡萄糖摄取量,同时它还能抑制人胃癌MGC-803细胞糖代谢中的乳酸生成量,但并未诱发明显凋亡。此外一定浓度下的汉黄芩素还能抑制人胃癌MGC-803细胞糖代谢相关蛋白的表达。综上所述,汉黄芩素能抑制人胃癌细胞MGC-803的糖代谢但并未诱发明显凋亡,其抑制作用可能与其对MGC-803细胞糖代谢相关蛋白的作用相关。     

羟基喜树碱对胃癌细胞的诱导凋亡及凋亡相关基因表达的影响

[目的]探讨羟基喜树碱(HCPT)对胃癌MGC-803细胞株的诱导凋亡和抗增殖作用及凋亡相关基因表达的影响.[方法]通过MTT比色法、HE染色、吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)染色及各种显微镜观察,并且采用原位细胞凋亡检测法(TUNEL法)及免疫细胞化学法,观察HCPT对胃癌MGC-803细胞株的诱导凋亡和抗增殖作用及凋亡相关基因的表达情况.[结果]HCPT在质量浓度0.5~48.0 mg/L范围内对胃癌MGC-803细胞株均有抑制生长作用,并表现出显效关系;在倒置显微镜、HE染色光学显微镜、AO/EB染色荧光显微镜和透射电子显微镜下,均可见MGC-803细胞的凋亡形态学改变;不同质量浓度HCPT均可诱导胃癌MGC-803细胞凋亡,细胞凋亡率随药物质量浓度的增高而上升,当药物作用48 h时细胞凋亡率达高峰;增殖细胞核抗原Ki-67的阳性表达率随HCPT质量浓度的增高和作用时间的延长而降低;当12 mg/L HCPT作用于胃癌MGC-803细胞株48 h后,明显下调抑制凋亡基因Bcl-2的表达和上调促进凋亡基因Bax的表达.[结论]HCPT对胃癌MGC-803细胞株有诱导凋亡和抗增殖作用,其机制可能与下调抑制凋亡基因Bcl-2的表达和上调促进凋亡基因Bax的表达有关.     

流式细胞术检测苦参素对人胃癌细胞系MGC-803凋亡的作用

目的运用流式细胞术检测苦参素对人胃癌细胞系MGC-803凋亡的作用.方法运用流式细胞术检测细胞凋亡率、凋亡峰及凋亡相关基因蛋白Bcl-2和Bax的表达水平.结果 苦参素1 mg/mL、2 mg/mL作用24 h后,流式细胞仪(FCM)检测结果显示,细胞凋亡率与阴性对照组相比,差异具有显著性(P＜0.05);Bcl-2表达量明显减少,Bax表达量明显增加,差异具有显著性(P＜0.05).结论苦参素对人胃癌细胞系MGC-803有诱导凋亡作用,其机制与上调Bax和下调Bcl-2表达有关.     

神经生长因子的提取及其对MGC-803细胞的凋亡作用

目的:从广西眼镜蛇蛇毒中提取神经生长因子(nerve growth factor,NGF)并探讨其对人胃癌MGC-803细胞的生长抑制作用.方法:①粗毒采用Sephadex G75 凝胶过滤及CM Sepharose CL-6B阳离子交换柱进行分离纯化,洗脱峰用大鼠嗜铬神经瘤细胞(PC12细胞)测定活性, 通过SDS-PAGE测定纯度和相对分子质量;②采用MTT法,以NGF浓度分别为7.5、15、30、60、120 mg/L处理人胃癌MGC-803细胞24 h,观察不同浓度NGF对MGC-803细胞的毒性和生长抑制率;③采用AO/EB双重染色法,NGF浓度分别为25、50、75 mg/L,观察不同浓度NGF作用后细胞染色及形态的变化,计算细胞凋亡率;④Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡率变化.结果:①所得NGF为单一组分,SDS-PAGE结果为一条带,相对分子质量约为23 000,对PC12细胞有良好的促进分化作用;②NGF对MGC-803细胞的生长有抑制作用且呈剂量依赖关系,作用24 h的IC50值为49.9 mg/L;荧光显微镜下可观察到凋亡细胞主要特点为:细胞体积缩小,染色质固缩,橘红色荧光增强,各浓度组与对照组的细胞凋亡率比较有明显差异(P<0.01);流式细胞仪检测到早期细胞凋亡率随NGF浓度的增高而增加,各浓度组与对照组的细胞凋亡率比较有明显差异(P<0.01).结论:采用Sephadex G75 凝胶过滤及CM Sepharose CL-6B阳离子交换柱提取得到的眼镜蛇毒NGF能诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡且呈剂量依赖关系.     

二十碳五烯酸与表阿霉素联合应用对人胃癌细胞株MGC-803的作用

目的 评估二十碳五烯酸（EPA）联合表阿霉素（EPI）对人胃癌细胞株MGC-803的作用。方法 采用MTT法检测各种药物单用和联合应用对细胞的作用,电镜观察细胞超微结构的变化,等效线图解法判断两药合用效果,流式细胞仪检测细胞周期分布。结果 EPA可抑制MGC-803细胞的生长,且呈剂量及时间依赖性（P〈0．01）;倒置相差显微镜下可见经EPA培养的胃癌细胞核周存在大量异常颗粒,电镜下在核周及胞浆内可见异常电子致密物;EPA对人胚肺成纤维细胞（HPF）生长起促进作用,且呈剂量依赖性（P〈0．01）;EPA与EPI联合应用对MGC-803细胞生长的抑制具有协同作用（P〈0．05）;EPA有一定的G0／G1期阻滞作用,EPI有明显的S期阻滞作用,两者可从不同环节抑制细胞增殖。结论 EPA对胃癌细胞株MGC-803有抑制作用,相同剂量对正常细胞无抑制作用。EPA与EPI对胃癌细胞的抑制具有协同作用,与单用EPI相比,联合应用可减少EPI的用药剂量。