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自噬是细胞程序性死亡的一种方式,人类多种肿瘤存在自噬异常。自噬过程受自噬相关基因调控,Beclin1是目前惟一被证实的哺乳动物"自噬基因",是自噬的直接执行者,通过诱导自噬、促进凋亡抑制肿瘤进程。本文就Beclin1与肿瘤发生、发展的关系进行综述,并对口腔癌自噬研究做一简要介绍。     

低氧增强自噬促进舌鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭

目的探讨低氧条件下对舌鳞状细胞癌（TSCC）自噬活性和迁移能力的影响。 方法应用含1% O₂的低氧培养箱培养TSCC UM1细胞,Western blot检测低氧诱导3、6、9、12、24 h后低氧诱导因子1α（HIF-1α）和自噬标记蛋白Beclin-1、自噬相关蛋白5（ATG5）和微管相关蛋白轻链3（LC3）的表达变化;细胞划痕实验检测低氧诱导后细胞迁移能力的改变;Transwell侵袭小室实验检测低氧诱导后细胞的侵袭能力;SPSS 13.0统计软件进行数据分析。 结果低氧条件下,与对照组（0.527 ± 0.055）相比,TSCC UM1细胞自噬体双层膜标记蛋白LC3Ⅱ的表达（1.206 ± 0.053）增加（t= 12.96,P<0.001）,同时自噬相关蛋白Beclin-1表达量（1.151 ± 0.078）较对照组（0.775 ± 0.062）明显提高（t= 6.736,P= 0.001）,ATG5的表达（1.231 ± 0.06）较对照组（0.711 ± 0.052）也明显上升（t= 7.834,P= 0.001）。与对照组相比,低氧诱导后细胞迁移能力（0.349 ± 0.024）较对照组（0.788 ± 0.037）明显增加（t= 9.918,P= 0.001）,细胞侵袭能力（23 ± 2）较对照组（71 ± 4）明显增强（t= 9.528,P= 0.001）。 结论低氧条件下可以增强TSCC细胞自噬活性,促进其迁移和侵袭。     

低氧环境下自噬对颏舌肌卫星细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨低氧环境下自噬对颏舌肌卫星细胞(Genioglossus muscle satellite cells,GG MuSCs)增殖能力与凋亡蛋白表达的影响。方法:体外培养大鼠颏舌肌卫星细胞, MTT法筛选自噬抑制剂氯喹(chloroquine,CQ)无毒剂量并检测细胞增殖能力。实验设常氧组、常氧+25 μmol/L氯喹组、单纯低氧组、低氧+5 μmol/L氯喹组、低氧+15 μmol/L氯喹组、低氧+25 μmol/L氯喹组。Western blot检测自噬标志蛋白LC3、促凋亡蛋白caspase-3及细胞色素c(cytochrome c,Cyt c)的表达水平。结果:1)Western blot结果显示:与常氧组相比,单纯低氧组LC3-Ⅱ/Ⅰ、caspase-3、Cyt c表达均增加;与单纯低氧组相比,低氧+氯喹组中随着给药浓度增加,LC3-Ⅱ/Ⅰ、caspase-3、Cyt c的表达水平呈递增趋势。2)MTT结果显示:与常氧组相比,单纯低氧组细胞增殖能力显著增强;而低氧+氯喹组中随着给药浓度增加,细胞增殖能力受到明显抑制。结论:低氧诱发的自噬促进颏舌肌卫星细胞存活,抑制自噬导致细胞增殖能力下降,凋亡蛋白表达显著增加。这提示自噬可能是颏舌肌卫星细胞抵御低氧损伤的重要机制。     

雷帕霉素诱导自噬抑制舌鳞癌细胞增殖和迁移

目的探讨自噬诱导对舌鳞癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法应用雷帕霉素(Rap)诱导上调舌鳞癌Tca8113细胞自噬活性,Western blot检测诱导后Tca8113细胞自噬标记蛋白Beclin1和LC3的表达变化;MTT法检测自噬诱导对细胞增殖的影响;Wound-healing检测诱导后细胞迁移能力改变;SPSS 19.0统计软件进行数据分析。结果 Rap诱导6h即可上调舌鳞癌Tca8113细胞自噬标记蛋白LC3-Ⅱ表达,24h时LC3-Ⅱ表达最强,自噬活性最高(P<0.05)。与对照组相比,Rap诱导后细胞生长明显抑制(P<0.05),迁移速率减慢。结论上调舌鳞癌细胞自噬活性可以抑制其增殖和迁移。     

二氯化钴诱导唾液腺腺样囊性癌ACC-M细胞自噬的实验研究

目的 ：研究二氯化钴(CoCl2)对唾液腺腺样囊性癌ACC-M细胞增殖和自噬的影响。方法 ：应用MTT法对ACC-M细胞进行细胞活力测验,以检测CoCl2对细胞增殖的抑制作用;透射电镜观察自噬体形成;双免疫荧光标记、实时定量PCR（RT-PCR）及Western 蛋白免疫印迹检测自噬相关基因HIF-1α/BNIP3通路相关基因、自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（microtubule associated protein 1 light chain 3, LC3）及Beclin 1的表达。采用SPSS15.0软件包对数据进行双尾 t检验。结果 ：CoCl2可降低ACC-M细胞的活性,同时诱导自噬体的形成;透射电镜下,实验组细胞内可见自噬体样的双层膜结构;RT-PCR及Western 蛋白免疫印迹检测显示,CoCl2可使HIF-1α/BNIP3信号通路和自噬相关蛋白的表达显著提高。结论 ：CoCl2可模拟低氧环境,从而诱导ACC-M细胞产生自噬,HIF-1α/BNIP3信号通路在这一过程中扮演着重要角色。     

周期性机械应力诱导的自噬抑制caspase通路依赖的成肌细胞凋亡

目的 观察大鼠成肌细胞（L6 myoblast,L6）在周期性机械应力作用下细胞凋亡与自噬的水平变化,探讨机械应力诱导的细胞自噬对凋亡的作用。方法 构建大鼠成肌细胞力学刺激模型,加载参数为细胞拉伸形变率15%,加力周期包括 3 s 拉伸及 3 s 舒张,加力时间为 6、12、24 h,以不加力0 h组为对照组。通过Hoechst染色及AnnexinV-FITC/PI染色观察各组细胞凋亡情况;通过MDC染色及透射电镜（transmission electron microscopy,TEM）评价各组细胞自噬变化;应用 Western 免疫印迹检测各组凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-9、Bcl-2、Bax及自噬相关蛋白LC3Ⅱ、LC3Ⅰ、P62表达变化。加入自噬抑制剂3-MA后重复实验,检测各组细胞凋亡情况。采用 SPSS 17.0 软件包对数据进行统计学分析。结果 Hoechst染色及AnnexinV-FITC/PI流式结果表明,大鼠成肌细胞在周期性应力诱导下发生凋亡,24 h 时达到凋亡最大值。Western 免疫印迹结果显示,凋亡相关蛋白表达水平随加力时间延长而逐渐升高, caspase抑制剂z-VAD-fmk有效抑制应力诱导的细胞凋亡。MDC染色及TEM扫描电镜显示,大鼠成肌细胞在周期性应力诱导下发生自噬,24 h细胞自噬达到最大值。Western 免疫印迹结果显示,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ随加力时间延长而升高,P62的表达随着加力时间延长而降低。加入自噬抑制剂3-MA后重复试验,发现应力诱导的成肌细胞凋亡被明显抑制。结论 周期性机械应力诱导大鼠成肌细胞发生自噬与caspase通路依赖的细胞凋亡,细胞自噬作为一种代偿机制,保护性地抑制应力诱导的细胞凋亡。     

低氧对C2C12细胞分化不同阶段自噬和肌细胞生成素表达的影响

目的:研究低氧对C2C12细胞分化不同阶段自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein light chain 3,LC3B)和肌细胞生成素(myogenin)表达的影响。方法:C2C12细胞诱导分化1、2、3、4 d,在常氧和低氧状态下观察细胞分化情况。免疫细胞化学染色法检测自噬相关蛋白LC3B和Beclin1的表达。Western blot检测Beclin1、LC3B和myogenin的蛋白表达水平,采用SPSS 22.0软件对数据进行统计学分析。结果:1.与常氧组比较,低氧组分化形成的肌管数量较少,形态细小;2.免疫细胞化学染色结果显示,分化1、2、3、4 d低氧组细胞LC3B和Beclin1荧光强度均低于常氧组;3.Western blot结果显示分化前中期低氧组Beclin1、LC3B和myogenin蛋白表达水平显著低于常氧组(P<0.05)。随着分化时间的增加,低氧状态下LC3B的表达水平进一步降低,而myogenin表达水平回升。结论:低氧抑制C2C12细胞分化;低氧能降低细胞分化前中期Beclin1、LC3B和myogenin蛋白表达水平。     

ID蛋白及其在口腔鳞癌中的表达

摘要ID蛋白是一种负调控核转录因子的蛋白,通过抑制相关基因的转录表达,参与调控细胞的定型、分化、增殖和凋亡。ID蛋白可以推进细胞周期的演进,促进细胞增殖、迁移、浸润,抑制细胞的分化和诱导血管的发生,在肿瘤发生、发展及转移中具有显著的作用。本文就ID蛋白分子生物学特点、在肿瘤组织中,以及在口腔鳞癌中的表达和作用等研究进展作一综述。     

根尖周炎低氧微环境下自噬调控骨吸收研究进展

根尖周炎是一种常见的根尖周组织炎症性疾病，多继发于牙髓病。患牙根尖周部位产生炎症因子，诱导分化出大量破骨细胞，导致周围骨组织破坏和吸收。研究显示，根尖周炎时牙根周围组织处于缺氧状态，而缺氧可通过上调缺氧诱导因子的表达激活下游通路，促进破骨细胞自噬。自噬通过多种途径来促进破骨细胞的分化成熟和功能活化。文章就根尖周炎低氧微环境下自噬调控骨吸收的相关研究及其在临床防治中的应用做一综述。     

NOD2上调自噬抑制舌鳞癌细胞增殖和迁移

目的:探讨NOD2在雷帕霉素(Rap)诱导下上调舌鳞癌SCC-15细胞自噬对增殖和迁移能力的影响。方法:NOD2表达载体转染SCC-15细胞上调NOD2表达,NOD2-shRNA载体转染SCC-15细胞,抑制NOD2表达;应用Rap诱导SCC-15细胞正常组、NOD2上调组和抑制组的细胞自噬活性,采用Western blot检测自噬标记蛋白LC3和Beclin-1表达变化;MTT法检测NOD2对自噬诱导后细胞增殖的影响;划痕实验检测NOD2对自噬诱导后细胞迁移能力的变化。结果:Rap诱导NOD2上调组细胞中LC3-II和Beclin-1表达显著增强(P<0.05)、诱导NOD2抑制组细胞中LC3-II和Beclin-1表达显著降低(P<0.05)。与对照组相比,Rap诱导NOD2上调组细胞生长明显抑制(P<0.05),迁移速率减慢;诱导NOD2抑制组细胞增殖加快(P<0.05),迁移速率增快。结论:NOD2可上调舌鳞癌SCC-15细胞自噬抑制其增殖和迁移。     

自噬及其与肿瘤生长、侵袭、治疗的关系

自噬是真核细胞中一种高度保守的细胞生物学行为,是细胞内包裹细胞质成分的双层膜结构形成并与溶酶体结合产生自我吞噬性质的一种分解代谢过程。自噬的分解代谢作用可以清除细胞内的毒性物质,维持细胞内环境稳态,同时在这一过程中产生的氨基酸等小分子物质可被细胞代谢循环利用,为细胞的生存提供营养。自噬维持细胞内环境稳态的作用能抑制肿瘤的发生;但在已完成恶性转化的肿瘤细胞中,自噬能在不利于肿瘤生存的微环境内维持肿瘤细胞的基础代谢,保持细胞活性。在恶性肿瘤的增殖和侵袭转移过程中,自噬能调节肿瘤细胞的微环境,抑制细胞失巢凋亡,参与细胞休眠和上皮-间充质转化等一系列过程,从而发挥重要作用。     

Roles of Membrane-type 1 Matrix Metalloproteinase in Tumor Invasion and Progression

Membrane-type 1 matrix metalloproteinase (MT1-MMP) has been implicated in tumor invasion and metastasis. Degradation of the extracellular matrix (ECM) and cell migration are critical steps in tumor invasion. MT1-MMP stimulates a cascade for ECM degradation on the surface of tumor cells, and promotes cell migration and focal adhesion turnover by activating extracellular signal-regulated kinase (ERK) and by processing various biologically important cell-surface molecules. Moreover, MT1-MMP promotes tumor cell proliferation in the 3-dimensional (3-D) ECM but not in 2-D ECM culture system. Studying the biological function of MT1-MMP would appear to be important for better understanding of the mechanisms of tumor invasion and progression.     

低氧诱导下Tca8113细胞HIF-1α与VEGF的表达及血管生成相关性研究

目的:研究在体外缺氧培养条件下舌鳞癌细胞系Tca8113中缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1alpha,HIF-1α)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,探讨HIF-1α、VEGF在缺氧条件下对舌鳞癌血管生成的作用机制及相互联系。方法:CoCl2化学缺氧法模拟肿瘤缺氧环境,MTT法检测细胞生长能力。荧光定量PCR,Western blot法分别检测不同缺氧状态下HIF-1α和VEGF在mRNA和蛋白水平的表达并进行相关性研究。结果:MTT发现CoCl2诱导的缺氧对细胞的生长起抑制作用。低氧条件下,Tca8113细胞HIF-1αmRNA水平稳定,蛋白表达显著升高,而VEGF mRNA和蛋白的表达均显著升高。结论:CoCl2诱导的缺氧使Tca8113细胞HIF-1α在蛋白水平表达升高,并通过转录激活VEGF的表达,调控舌鳞癌的血管生成。     

张应力对小鼠蝶枕软骨联合细胞增殖及低氧诱导因子-1α表达的影响

目的:了解循环张应力对小鼠颅底蝶枕软骨联合细胞(SOSCs)增殖及低氧诱导因子-1α表达的影响.方法:采集1 d龄小鼠的SOSCs进行体外培养,对第三代细胞加载牵张形变率分别为3％、6％、9％,频率为1 Hz,持续时间为1 h的循环张应力;用流式细胞术测算细胞增殖指数,用蛋白免疫印迹技术分析Hif-1α的表达水平.用按...     

缺氧对口腔癌细胞增殖和凋亡的作用

目的检测口腔癌细胞中缺氧情况及缺氧/复氧对口腔癌细胞增殖、凋亡的影响。方法设立对照组和不同时间缺氧/复氧6个实验组,采用细胞培养、缺氧探针、MTT法及流式细胞术等方法检测SCC15口腔癌细胞中缺氧情况及缺氧/复氧对口腔癌细胞增殖、凋亡的影响。结果对照组和实验组SCC15细胞均呈现缺氧状态,随着缺氧时间的延长,活细胞数减少,细胞形态呈现细胞凋亡改变。缺氧12h组、24h组、缺氧12h/复氧2h组、缺氧24h/复氧2h组细胞增殖被显著抑制,随缺氧时间延长,SCC15细胞生长抑制的比例逐渐加大(P0.01)。缺氧对不同实验组SCC15细胞均能促进细胞凋亡。随缺氧时间延长,SCC15细胞发生凋亡的比例逐渐增高。除缺氧4h组外,其它各组与对照组相比,差异具有统计学意义((P0.01)。结论缺氧与口腔癌细胞增殖和凋亡密切相关,缺氧程度影响着口腔癌细胞的生长。     

Analysis of cell proliferation and pattern of invasion in oral squamous cell carcinoma

Cell proliferation markers play an important role in the biological behavior of neoplasms. This study investigated the immunohistochemical expression of PCNA, Ki-67 and Cyclin B1 proteins based on the pattern of cell invasion in oral squamous cell carcinoma (OSCC). A total of 39 OSCC specimens and 13 samples of normal oral mucosa (control) were immunohistochemically analyzed. Protein expression was evaluated according to World Health Organization - Histological Malignancy Grading (WHO-HMG) and a specific grading system for invasion, graded from 1 to 4, varying from a consistently well-defined "pushing" border to diffuse infiltration and cellular dissociation, and was then correlated with clinical features. We found higher expression of Ki-67 and Cyclin B1 in OSCC when compared with the control group. High Ki-67 expression levels were more commonly seen in the floor of the mouth than in the tongue (P = 0.009). Cyclin B1 showed a positive correlation with histological grade, according to WHO-HMG criteria (P = 0.01). Our results suggest that Cyclin B1 is a reliable proliferation marker for indicating degree of tumor proliferation. Correlations between PCNA, Ki-67, Cyclin B1 and invasive tumor front with overall survival were not observed. Further studies are needed in order to elucidate whether cell proliferation activity at the tumor invasion front is related to prognosis.     

环状RNA hsa_circ_0002203对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡能力的影响

目的 探讨环状RNA hsa_circ_0002203对口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞系恶性生物学行为的影响。方法 纳入OSCC患者40例,使用实时荧光聚合酶链反应检测环状RNA hsa_circ_0002203在OSCC组织、癌旁组织、OSCC细胞系和人口腔黏膜角质形成细胞（HOK）中的表达水平。慢病毒感染SCC15和CAL27细胞,实时荧光聚合酶链反应检测环状RNA hsa_circ_0002203的表达,细胞计数（CCK-8）实验检测细胞增殖能力,划痕实验和Transwell迁移及侵袭实验检测细胞迁移侵袭能力,流式细胞凋亡实验检测细胞凋亡水平,蛋白质印迹法检测细胞增殖凋亡侵袭相关蛋白的表达。通过裸鼠成瘤实验观察hsa_circ_0002203对SCC15细胞体外成瘤能力的影响。结果 环状RNA hsa_ circ_0002203在OSCC组织的表达低于癌旁组织（P<0.01）,在OSCC细胞系中的表达低于人类角质形成细胞（P< 0.001）。慢病毒感染SCC15和CAL27细胞后hsa_circ_0002203的表达增加;SCC15和CAL27细胞的增殖、迁移和侵袭能力下降,凋亡水平增加;裸鼠肿瘤体积、质量减小,生长速度降低。结论 环状RNA hsa_circ_ 0002203在口腔鳞状细胞癌中的低表达可以增强肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力,抑制肿瘤细胞凋亡。     

低氧对人牙周膜细胞增殖、细胞周期及分化潜能的影响

目的研究低氧对人牙周膜细胞（hPDLC）增殖、细胞周期以及干细胞表面标志物（STRO-1和CD146）表达水平的影响。 方法采用组织块法体外分离培养hPDLC;取第3~5代细胞分别在常氧和低氧（1.5%~2.0% O₂）条件下培养12、24、36、48 h,采用MTT法检测低氧对细胞增殖的影响;并通过流式细胞术检测低氧条件下细胞周期的变化以及细胞表面STRO-1和CD146表达水平的变化。 结果两组细胞增殖率随时间延长而增加,12和24 h低氧组细胞增殖率比常氧组稍高,差别无统计学意义。36和48 h低氧组增殖活性较常氧组降低,差异有统计学意义（t_{36 h} = 3.538,P_{36 h} = 0.024;t_{48 h} = 5.349,P_{48 h}= 0.006）;12 h低氧组细胞的增殖指数（PI）比常氧组低,24和36 h低氧组细胞PI比常氧组高,但差异均无统计学意义,48 h低氧组细胞PI比常氧组高,差异有统计学意义（t_{48 h}=-5.768,P_{48 h}= 0.004）;4个时间点低氧组细胞STRO-1和CD146的表达水平与常氧组比较差异无统计学意义。 结论低氧抑制hPDLC的增殖,但促进hPDLC DNA合成;hPDLC在低氧条件下能保持其分化潜能。     

环状RNA hsa_circ_0002203对口腔鳞状细胞癌 细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡能力的影响

目的 探讨环状RNA hsa_circ_0002203对口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞系恶性生物学行为的影响。方法 纳入OSCC患者40例,使用实时荧光聚合酶链反应检测环状RNA hsa_circ_0002203在OSCC组织、癌旁组织、OSCC细胞系和人口腔黏膜角质形成细胞（HOK）中的表达水平。慢病毒感染SCC15和CAL27细胞,实时荧光聚合酶链反应检测环状RNA hsa_circ_0002203的表达,细胞计数（CCK-8）实验检测细胞增殖能力,划痕实验和Transwell迁移及侵袭实验检测细胞迁移侵袭能力,流式细胞凋亡实验检测细胞凋亡水平,蛋白质印迹法检测细胞增殖凋亡侵袭相关蛋白的表达。通过裸鼠成瘤实验观察hsa_circ_0002203对SCC15细胞体外成瘤能力的影响。结果 环状RNA hsa_ circ_0002203在OSCC组织的表达低于癌旁组织（P<0.01）,在OSCC细胞系中的表达低于人类角质形成细胞（P< 0.001）。慢病毒感染SCC15和CAL27细胞后hsa_circ_0002203的表达增加;SCC15和CAL27细胞的增殖、迁移和侵袭能力下降,凋亡水平增加;裸鼠肿瘤体积、质量减小,生长速度降低。结论 环状RNA hsa_circ_ 0002203在口腔鳞状细胞癌中的低表达可以增强肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力,抑制肿瘤细胞凋亡。