α-平滑肌肌动蛋白在牙龈成纤维细胞和牙周韧带细胞中的表达及意义

目的 研究α—平滑肌肌动蛋白在体外培养的牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞中的表达并探讨其意义。方法 利用细胞培养和免疫细胞化学技术检测α—平滑肌肌动蛋白在体外培养的牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞中的表达。结果 α—平滑肌肌动蛋白在两种成纤维细胞中的免疫细胞化学染色均为阳性。结论 α—平滑肌肌动蛋白在牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞中稳定表达，可能在细胞收缩与基质改建中起重要作用。     

Scleraxis在牙周韧带细胞、牙龈成纤维细胞中的表达

目的研究碱性螺旋-环-螺旋转录因子 Scleraxis 能否在人牙周韧带细胞、牙龈成纤维细胞、骨髓基质细胞中表达,及其与牙周韧带细胞分化能力的关系。方法体外培养人牙周韧带细胞、牙龈成纤维细胞和骨髓基质细胞,RT-PCR 法检测牙龈成纤维细胞、骨髓基质细胞及不同代次牙周韧带细胞中 Scleraxis 的表达。结果 Scleraxis 在牙周韧带细胞、骨髓基质细胞及牙龈成纤维细胞中的表达差异有统计学意义(P<0.05)。其 Scleraxis 与β-肌动蛋白吸光度比值分别为0.877±0.024,0.438±0.031,0.313±0.083。Scleraxis 在牙周韧带细胞中的表达最强,在牙龈成纤维细胞中表达最弱。牙周韧带细胞中 Scleraxis 的表达随培养代次的增加而减弱。结论 Scleraxis 可表达于体外培养的牙周韧带细胞、牙龈成纤维细胞和骨髓基质细胞,Scleraxis 可能在牙周韧带细胞的分化过程中起重要作用。     

人牙周膜细胞和牙龈成纤维细胞生物学活性的研究

目的:体外原代培养人牙周膜细胞和牙龈成纤维细胞,并对其生物学活性作初步探讨.方法:采用组织块法原代培养牙周膜细胞和牙龈成纤维细胞,绘制生长曲线,测定二者碱性磷酸酶活性;流式细胞术和免疫组化染色法测定Ⅰ、Ⅲ型胶原、骨形成蛋白的表达情况,观察对比两种细胞的生物学特性的异同.结果:牙龈成纤维细胞原代培养成功率及细胞增殖活性明显高于牙周膜细胞.在牙周膜细胞中,Ⅰ、Ⅲ型胶原均为阳性表达,棕黄色颗粒克满整个胞浆内.在牙龈成纤维细胞中Ⅰ型胶原为弱阳性表达,Ⅲ型胶原阳性表达更弱.牙周膜细胞的ALP水平明显高于牙龈成纤维细胞.牙周膜细胞BMP2表达为强阳性,而牙龈成纤维细胞表达弱阳性.结论:牙周膜细胞具有较强的成骨能力,是理想的牙周组织工程的种子细胞.牙龈成纤维细胞易于培养成活,增殖力强,具有牙周膜细胞的一些特点,组织取材方便,也可作为牙周组织工程的种子细胞.     

牙周韧带细胞与牙龈成纤维细胞生长特性及其胶原表达的比较研究

利用体外细胞培养技术及四唑盐比色法观察了牙周韧带细胞(PDLC)和牙龈成纤维细胞(GF)在体外生长、增殖的情况,用免疫荧光法观察了其细胞外基质表达的差异。结果显示GF较PDLC更容易成活,其增殖速度更快,且GF中Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达均较PDLC强,提示在相同生长环境下,GF较PDLC可能有更强的生长能力。     

硝苯地平性牙龈增生组织中成纤维细胞增殖和胶原分泌

目的探讨硝苯地平对牙龈组织中成纤维细胞增殖和胶原分泌的影响。方法体外原代培养硝苯地平易感性牙龈组织和非易感性组织中人牙龈成纤维细胞。MTT法观察硝苯地平对细胞增殖的影响,酶联免疫吸附试验检测硝苯地平对细胞Ⅰ型胶原表达水平的影响。结果在第1,3,5天,硝苯地平易感性牙龈组织和非易感性组织之间Ⅰ型胶原合成和细胞增殖在统计学上均有显著性差异。结论细胞增殖明显和胶原合成增加可能和硝苯地平药物性牙龈增生机制有关。     

矿化相关蛋白在牙周组织中的分布及意义

目的：研究矿化相关蛋白在牙周组织中的分布并探讨其意义。方法：取正常成年杂种狗第二磨牙及其牙周组织，利用免疫组化SP法对矿化相关蛋白在牙周组织中的表达进行定位研究。结果：骨桥素OPN在牙周韧带基质及细胞中表达阳性，牙龈结缔组织中表达弱阳性，牙槽骨中邻近牙周韧带的部位表达阳性，其余部位及牙骨质中表达阴性；骨钙素OC在牙周韧带中表达阳性，牙龈结缔组织中表达弱阳性，牙槽骨中染色较弱且不均匀，牙骨质中表达阴性；骨唾蛋白BSP在牙周韧带中表达阳性，牙槽骨中染色集中在哈佛氏管周围，牙骨质和牙龈表达阴性。结论：矿化相关蛋白在牙周韧带基质及细胞中阳性表达，提示牙周韧带细胞在矿化组织的形成与再生中具有重要作用；矿化相关蛋白在牙周韧带细胞和牙龈成纤维细胞中的不同表达可作为鉴别牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞的标志。     

体外培养人牙囊细胞Ⅰ型胶原与纤维粘连蛋白的表达

目的：通过体外培养人牙囊细胞，研究Ⅰ型胶原与纤维粘连蛋白在细胞中的表达，探讨其在牙齿萌出过程中转化为牙周膜细胞的机制。方法：取12岁患者因正畸需要拔除埋藏阻生牙齿的牙囊，组织块法进行人牙囊细胞的培养，通过免疫组织化学染色技术观察Ⅰ型胶原及纤维粘连蛋白在牙囊细胞中的表达及定位。结果：培养的人牙囊细胞呈梭形、卵圆形及多角形，形似成纤维细胞。在牙囊细胞中Ⅰ型胶原和纤维粘连蛋白的表达呈阳性，定位于细胞的胞质中，围绕细胞核周围染色较强，细胞核内染色阴性。结论：体外培养人牙囊细胞具有成纤维细胞的特性，具有合成与分泌Ⅰ型胶原与纤维粘连蛋白的能力。     

糖基化终产物对牙龈成纤维细胞增殖和Ⅰ型胶原合成的影响

目的 观察糖基化终产物对牙龈成纤维细胞增殖能力和Ⅰ型胶原合成的影响,探讨糖基化终产物对牙周组织修复功能的作用及在伴有糖尿病牙周炎中的致病机制.方法 采用组织块法培养牙龈成纤维细胞,培养基中加入体外合成的不同浓度的糖基化终产物,甲基噻唑基四唑(MTT)法检测在不同时间段下牙龈成纤维细胞增殖水平的变化,酶联免疫吸附测定法和实时定量反转录聚合酶链法(RT-PCR)分别测定牙龈成纤维细胞合成Ⅰ型胶原的量和表达Ⅰ型胶原mRNA的水平.结果 200 mg/L糖基化终产物作用于牙龈成纤维细胞48、74 h的A值分别为0.016±0.023、0.035±0.008,比其他组A值低(P＜0.05),并且细胞形态发生了改变,细胞由均一的梭形变成圆形、椭圆形、细长不规则条状等,胞质浓缩,细胞间隙增大;糖基化终产物作用72 h后,牙龈成纤维细胞上清液中和胞内Ⅰ型胶原的含量减少(P＜0.05),Ⅰ型胶原mRNA表达下调(P＜0.05).结论 糖基化终产物能抑制牙龈成纤维细胞的增殖、降低其合成Ⅰ型胶原蛋白和表达Ⅰ型胶原mRNA,从而可能削弱了牙周组织的愈合能力.     

釉基质蛋白对人牙周膜细胞形成Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的影响

目的:观察釉基质蛋白对体外培养的人牙周膜细胞形成Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的影响.方法:改良组织块法培养人牙周膜细胞,免疫细胞化学方法和图像分析方法观察细胞形成Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的能力.结果:50、100、200 mg/L的釉基质蛋白可以促进牙周膜细胞合成Ⅰ、Ⅲ型胶原,其中,以100 mg/L釉基质蛋白的促Ⅰ型胶原合成作用最明显,50 mg/L釉基质蛋白的促Ⅲ型胶原合成作用最明显.但是,这种促进作用有一定的时间性.结论:一定浓度的釉基质蛋白可以促进牙周膜细胞形成Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原.     

正畸应力作用下牙龈肌成纤维细胞表达的初步研究

目的 初步探讨正畸应力加载后牙龈肌成纤维细胞的表达情况。方法 选取8例正畸应力加载后需要拔除牙牙龈组织,以应力加载前拔除牙牙龈组织为对照,进行α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原免疫组织化学染色。然后进行测量和统计分析。结果 正畸应力加载前牙龈组织内Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原免疫组化染色阳性,α-SMA除血管上皮外,其余为阴性表达。正畸应力加载后,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达明显上升,差异有统计学意义（P<0.05）;α-SMA在牙龈组织内出现阳性表达,与加力前差异有统计学意义（P<0.05）。结论 正畸应力加载后,牙龈组织内肌成纤维细胞出现表达,其可能在正畸牙术后复发中发挥一定作用。     

正畸应力作用下牙龈肌成纤维细胞表达的初步研究

目的 初步探讨正畸应力加载后牙龈肌成纤维细胞的表达情况。方法 选取8例正畸应力加载后需要拔除牙牙龈组织,以应力加载前拔除牙牙龈组织为对照,进行α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原免疫组织化学染色。然后进行测量和统计分析。结果 正畸应力加载前牙龈组织内Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原免疫组化染色阳性,α-SMA除血管上皮外,其余为阴性表达。正畸应力加载后,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达明显上升,差异有统计学意义（P<0.05）;α-SMA在牙龈组织内出现阳性表达,与加力前差异有统计学意义（P<0.05）。结论 正畸应力加载后,牙龈组织内肌成纤维细胞出现表达,其可能在正畸牙术后复发中发挥一定作用。     

纯钛表面牙周韧带细胞形成物的组织学和免疫组织化学研究

目的：探讨牙周韧带细胞在商用纯钛表面的增殖与分化。方法：牙周韧带细胞在纯钛表面进行培养，14天后刮取形成物，进行HE染色及Ⅰ型胶原免疫组织化学分析。结果：牙周韧带细胞在纯钛表面生长良好，14天后形成单层，形成大量细胞基质，其成份主要为Ⅰ型胶原。结论：牙周韧带细胞能够在纯钛表面生长、增殖，并形成大量细胞外基质，细胞外基质的主要成份为Ⅰ型胶原。     

维甲酸诱导牙周韧带细胞分化的研究

目的研究并比较维甲酸对牙周韧带细胞和牙龈成纤维细胞向成骨样细胞分化潜能的影响。方法体外培养牙周韧带细胞与牙龈成纤维细胞,通过生化法、原位杂交及RT- PCR分别检测维甲酸作用前后碱性磷酸酶（ALP）活性的变化及其mRNA的表达情况。结果正常牙周韧带细胞与牙龈成纤维细胞的ALP活性有明显差别,前者高于后者;原位杂交及RT- PCR均检测到牙周韧带细胞有mRNA表达而牙龈成纤维细胞无表达。维甲酸作用后牙周韧带细胞ALP活性明显升高,mRNA表达信号相应增强,且在5×10- 6 mol/L组效果最明显;牙龈成纤维细胞ALP活性亦有升高,在mRNA水平仅RT- PCR检测到5×10- 6 mol/L组有较弱的表达,其他组及原位杂交均未见表达。结论牙周韧带细胞和牙龈成纤维细胞在向成骨方向的分化潜能上存在差异。     

静压力大小对人牙周膜成纤维细胞Ⅰ型胶原表达影响的研究

目的研究不同大小静压力对人牙周膜成纤维细胞Ⅰ型胶原表达的影响。方法采用第4代人牙周膜成纤维细胞（human periodontal ligament fibroblasts,HPDLFs）,对照组不加力,实验组用静压力加载装置分别施加15 kPa、30 kPa、45 kPa的持续性静压力,加力时间为1 h。加力后立即收集样本,用免疫细胞化学染色技术检测细胞内Ⅰ型胶原蛋白的表达情况,用彩色病理图像分析仪分析各组细胞的阳性表达。结果与对照组比较,15 kPa压力下,实验组Ⅰ型胶原蛋白表达显著增多（t=5.806,P〈0.05）;30 kPa压力下Ⅰ型胶原蛋白表达有所下降但仍高于对照组（t=4.933,P〈0.05）;45 kPa压力下Ⅰ型胶原蛋白表达较对照组明显减少（t=5.654,P〈0.05）。结论适当大小的静压力能促进人牙周膜成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白的表达,但静压力过强则会抑制其表达。     

人牙龈和牙周韧带成纤维细胞的体外培养及生物学特性研究——细胞形态、生长曲线及碱性磷酸酶活性测定

目的 :建立人牙龈和牙周韧带成纤维细胞体外培养模型并对其生物学特性作初步探讨。方法 :采用组织块法常规条件下分别进行牙龈和牙周韧带成纤维细胞的培养 ,通过光镜、透射电镜、生长曲线及碱性磷酸酶测定等手段对其部分生物学特性进行研究。结果 :两种培养的原代及传代细胞在光镜下细胞排列及结构无明显差别 ,传代培养时牙龈成纤维细胞有接触抑制现象 ,而牙周韧带成纤维细胞则可呈复层生长 ,牙周韧带成纤维细胞排列方向性较明显 ,生长曲线表明牙周韧带成纤维细胞增殖活性高于牙龈成纤维细胞 ;碱性磷酸酶活性测定及染色法显示两者有明显的差别。结论 :体外培养的两种细胞在形态及排列上相似 ,但在细胞亚型的组成上存在差异。     

外源性纤维结合蛋白对牙周韧带细胞中Ⅲ型胶原及其本身合成的影响

通过体外细胞培养技术及免疫细胞化学等方法，观察了外源性纤维结合蛋白（ＦＮ）对牙周韧带（ＰＤＬ）细胞合成Ⅲ型胶原和ＦＮ本身的影响。结果显示ＦＮ可促进ＰＤＬ细胞中Ⅲ型胶原的合成，而抑制ＦＮ本身的合成（Ｐ＜０．０１）．超微结构亦显示ＦＮ组ＰＤＬ细胞里分泌相，胞浆中含有较多线粒体、粗面内质网等细胞器。表明在牙周愈合时，外源性ＦＮ可促进胶原蛋白合成，而对ＦＮ本身的合成抑制作用可能与ＰＤＬ细胞的分化有关。     

LPS刺激对体外培养人牙龈成纤维细胞环氧合酶表达的影响

目的检测脂多糖（LPS）刺激后体外培养人牙龈成纤维细胞环氧合酶-1和环氧合酶-2（COX-1,COX-2）表达的改变,探讨牙龈成纤维细胞与牙周炎症发生发展的关系。方法组织块法原代培养正常人牙龈成纤维细胞并进行来源鉴定,MTT法检测不同浓度LPS刺激后活细胞数量的改变;以10ug/ml刺激第4代细胞,24h后用免疫细胞化学方法检测COX-1和COX-2在细胞中的表达,多功能彩色细胞分析管理系统进行图像分析和统计学分析。结果 LPS刺激可使牙龈成纤维细胞的增殖速度降低,生长曲线大致呈＂S＂形;10ug/ml LPS刺激24h后细胞数量未见明显变化。免疫细胞化学染色结果显示COX-1在LPS刺激前后均有表达但无显著差异（P〉0.05）,COX-2在LPS刺激前无表达,LPS刺激后则表达增强并有显著差异（P〈0.01）。结论 LPS对牙龈成纤维细胞生长增殖有抑制作用,不影响COX-1的表达强度,但可使COX-2表达显著增强,说明牙龈成纤维细胞对LPS刺激的反应可能影响牙周炎症进展。     

牛血浆粘连蛋白对培养的人牙髓成纤维细胞FN和Ⅲ型胶原表达的影响

观察了不同浓度牛血浆纤维粘连蛋白（ＦＮ）对培养的人牙髓成纤维细胞Ⅲ型胶原、ＦＮ表达的影响；用图象分析仪对染色强弱进行相对定量分析，ＦＮ（１０、２０μｇ／ｍｌ）组的人牙髓细胞Ⅲ型胶原表达最强，ＦＮ（４０，８０μｇ／ｍｌ）组的人牙髓细胞ＦＮ表达最强，说明ＦＮ的不同浓度影响了培养的人牙髓成纤维细胞的功能，ＥＬＩＳＡ测定结果可做为图象分析的参考与补充。     

人牙龈成纤维细胞体外降解胶原能力的测定

目的 :观察体外培养的健康人牙龈成纤维细胞对鼠Ⅰ型胶原降解的影响和时间效应。方法 :在 6孔板底制备胶原膜 ,取固定数量的对数生长期健康人牙龈成纤维细胞接种于胶原膜中央 (2 5× 10 3/孔 ) ,分别于孵育 2 4、48、72h后消化弃去细胞 ,考马斯亮蓝液染色胶原膜 ,显微镜下测定降解区和非降解区的吸光度来判定不同时间段的胶原降解量。结果 :3例标本来源细胞的结果基本一致 ,表现为随时间的延长 ,胶原降解量也相应增加 ,2 4、48、72h的胶原降解量分别约为 2 0 %、40 %、60 %。结论 :健康人牙龈成纤维细胞对鼠Ⅰ型胶原有降解作用 ,而且有一定时间效应 ,这可能是细胞本身的功能变化所为 ,而非细胞数量变化的结果     

Biglycan在牙周损伤愈合中的免疫化学定位和表达

目的：研究biglycan在牙周组织损伤愈合过程中的免疫化学定位。方法：损伤成年鼠磨牙周围的牙周组织，跟踪28d，对biglycan和Ⅰ型、Ⅲ型胶原在愈合过程中的免疫组织化学分布进行分析。结果：biglycan在结缔组织中的免疫组织化学分布与Ⅰ型胶原相似。在牙周损伤愈合早期，biglycan在损伤区炎性细胞和移行的牙龈上皮细胞有强烈表达。愈合中期，biglycan广泛表达于肉芽组织成纤维细胞及其基质。愈合晚期，biglycan在新骨成骨细胞中表达明显。结论：biglycan在牙周组织损伤区中的细胞内特征性表达，预示其在牙周损伤愈合过程中起着不可忽视的作用。