环氧合酶-2对多发性骨髓瘤细胞血管内皮生长因子表达的调节作用

目的探讨多发性骨髓瘤（MM）细胞中环氧合酶-2（COX-2）对血管内皮生长因子（VEGF）表达的调控作用及其临床意义。方法应用人淋巴细胞分离液提取43例多发性骨髓瘤患者骨髓中的单个核细胞,Western blotting（WB）方法检测COX-2及VEGF的蛋白表达,分析其与MM的国际分期系统（ISS）分期、预后的相关性;RT-PCR方法检测多发性骨髓瘤U266细胞COX-2及VEGF mRNA的表达;MTT方法检测COX-2特异性抑制剂对多发性骨髓瘤U266细胞的生长抑制效应。结果多发性骨髓瘤细胞患者COX-2及VEGF过度表达,与ISS分期及预后密切相关;年龄、β2-微球蛋白（β2-MG）、血钙（Ca）及骨髓中浆细胞百分比（BMPC）等预后指标与COX-2的相关系数分别为0.692,0.791,0.571及0.856,与VEGF的相关系数分别为0.731,0.645,0.511及0.823;应用选择性COX-2抑制剂塞来昔布作用于U266细胞48 h,VEGF mRNA及蛋白的表达明显下调,与未处理组相比,统计学差异显著（P〈0.01）。结论 COX-2与VEGF高表达于多发性骨髓瘤患者,与疾病的ISS分期及预后密切相关,干预COX-2可部分下调VEGF的表达,COX-2可望成为多发性骨髓瘤治疗的靶点。     

血管新生在急慢性白血病中的研究及临床评价

 目的 观察急慢性白血病患者骨髓血管新生情况,分析血管内皮细胞生长因子（VEGF）及其受体（VEGFR）在急慢性白血病患者中的表达及意义。方法 应用vWF标记免疫组化法观察骨髓血管新生情况,ELISA法检测血浆VEGF水平,流式细胞术（FACS）分析新鲜分离的白血病细胞表面VEG-FR表达。结果 32例初诊白血病患者骨髓微血管密度（MVD）较对照组明显增高,治疗后获缓解者骨髓MVD较治疗前明显降低,与对照组相比差异无统计学意义。32例初诊白血病患者血浆VEGF含量明显高于对照组,化疗后获完全缓解（CR）的急性白血病患者血浆VEGF含量降低至正常水平。31例白血病患者骨髓单个核细胞（BMMNC）27例不同程度表达VEGFR,而5例正常对照骨髓均无VEGFR表达。结论 初诊白血病患者存在骨髓血管新生及血浆VEGF水平增高,白血病细胞不同程度表达VEGFR,阻断VEGF-VEGFR信号通路可成为白血病治疗新的靶点。     

可溶性血管细胞黏附因子-1、血管内皮生长因子在多发性骨髓瘤患者中的表达及对预后的评估价值分析

目的 分析可溶性血管细胞黏附因子-1(sVCAM-1)、血管内皮生长因子(VEGF)在多发性骨髓瘤患者中的表达及对预后的评估价值.方法 选取65例多发性骨髓瘤患者作为研究组,另选取同期接受检查的55例骨髓正常患者作为对照组.采用酶联免疫吸附法测定两组患者血清sVCAM-1、VEGF水平.随访1年,记录不同血清sVCAM-1、VEGF表达水平的多发性骨髓瘤患者生存情况.采用受试者工作特征(ROC)曲线分析sVCAM-1、VEGF水平对多发性骨髓瘤患者预后的评估价值.结果 研究组患者血清sVCAM-1、VEGF水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01).Ⅲ期多发性骨髓瘤患者血清sVCAM-1、VEGF水平均高于Ⅰ期和Ⅱ期,Ⅱ期多发性骨髓瘤患者血清sVCAM-1、VEGF水平均高于Ⅰ期,差异均有统计学意义(P﹤0.05).血清sVCAM-1、VEGF高表达组患者的累积生存率均低于sVCAM-1、VEGF低表达组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).ROC曲线显示,sVCAM-1、VEGF水平对多发性骨髓瘤患者预后的曲线下面积分别为0.824、0.873,检测灵敏度分别为79.3％、78.6％,特异度分别为68.4％、88.1％.结论 sVCAM-1、VEGF水平与多发性骨髓瘤患者的疾病进展及预后有关,对多发性骨髓瘤患者预后具有一定的评估价值.     

急性白血病患者BAG-1、Survivin表达及其临床意义

目的：研究凋亡相关蛋白BAG-1、Survivin在急性白血病患者骨髓白血病细胞中的表达及其临床意义。方法：SABC法检测初治急性白血病患者骨髓单个核细胞BAG-1、Survivin蛋白表达水平,并动态检测患者不同治疗阶段BAG-1、Survivin蛋白表达,与非恶性血液病患者比较。结果：初诊急性白血病患者调亡相关蛋白BAG-1、Survivin表达阳性率显著高于对照组,P〈0.05,差异有显著性;完全缓解组与未缓解组比较,P〈0.05,差异有显著性。结论：BAG-1、Survivin蛋白是影响急性白血病缓解的重要因素;检测BAG-1、Sur-vivin蛋白对预判急性白血病能否缓解有重要临床意义。     

多发性骨髓瘤患者血清HSP90 mRNA、β2-MG的表达水平及其与患者预后的关系

目的:探讨多发性骨髓瘤患者血清热休克蛋白90（HSP90）mRNA、β2-微球蛋白（β2-MG）的表达水平及其与患者预后的关系。方法:选取我院94例多发性骨髓瘤患者作为骨髓瘤组,并分为ISS I期26例、ISS II期36例、ISS III期32例;同期选取96例健康体检者作为健康对照组。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测血清HSP90 mRNA表达水平,酶联免疫吸附（ELISA）法检测血清β2-MG表达水平。Pearson法分析多发性骨髓瘤患者血清HSP90 mRNA与β2-MG水平的相关性。Kaplan-Meier法分析多发性骨髓瘤患者预后与血清HSP90 mRNA、β2-MG表达水平的关系。多发性骨髓瘤患者预后的影响因素采用Cox回归分析。结果:骨髓瘤组血清HSP90 mRNA、β2-MG水平均明显高于健康对照组（P＜0.001）。多发性骨髓瘤ISS III期患者血清HSP90 mRNA、β2-MG水平均明显高于ISS II期和ISS I期患者,ISS II期患者血清HSP90 mRNA、β2-MG水平均明显高于ISS I期患者（P＜0.001）。多发性骨髓瘤患者血清HSP90 mRNA与β2-MG水平呈正相关（r=0.630,P＜0.001）。HSP90 mRNA高表达多发性骨髓瘤患者3年生存率（35.42%）明显低于HSP90 mRNA低表达患者（63.04%）（P＜0.01）;β2-MG高表达多发性骨髓瘤患者3年生存率（35.56%）明显低于β2-MG低表达患者（61.22%）（P＜0.05）。血清HSP90 mRNA、β2-MG是影响多发性骨髓瘤患者预后的独立危险因素（P＜0.05）。结论:HSP90 mRNA、β2-MG在多发性骨髓瘤患者血清中呈高表达,检测二者水平对多发性骨髓瘤患者病情评价及预后评估有潜在参考价值。     

血管内皮生长因子在急性白血病中的表达水平及其意义

目的 探讨急性白血病（AL）血清和骨髓单个核细胞培养上清液（CSBMMNC）中血管内皮生长因子（VEGF）表达水平及其临床意义。方法 采用酶联免疫吸附法定量检测71例急性白血病和20例正常对照血清及CSBMMNC中VEGF表达水平。对其中33例初发AL患者采用2个疗程化疗。分析比较VEGF表达水平的变化与疗效的关系。结果ANLL组与ALL组初发患者血清与CSBMMNC中VEGF水平相比，差异无显著性（P〉0．05）。AL初发组、复发难治组分别与完全缓解（CR）组、正常对照组血清及CSBMMNC中VEGF表达水平相比有非常显著性差异（P均〈0．01）。但复发难治组与初发组相比差异无显著性（P均〉0．05）。初发AL血清与CSBMMNC中VEGF水平与骨髓原始细胞数呈显著正相关（r值分别为0．521和0．849，P均〈0．01）。33例初发AL患者采用2个疗程化疗，血清及CSBMMNC中高表达组CR率（36．36％）较低表达组CR率（90．90％）低，有非常显著性差异（P均〈0．01）。结论 动态检测血清及CSBMMNC中VEGF水平可在一定程度上了解AL的状态和体内白血病细胞的总负荷量，对AL的疗效及预后判断有一定的指导意义。     

多发性骨髓瘤骨病患者白细胞介素-17的表达及其意义

 【摘要】　目的　研究多发性骨髓瘤（MM）骨病患者骨髓中白细胞介素17（IL-17）的表达水平及其与骨髓单个核细胞核因子κB受体活化因子配体（RANKL）表达的关系,探讨IL-17在MM骨病发病机制中的作用及其临床意义。方法　采用双抗体夹心酶联免疫吸附（ELISA）法检测33例MM骨病患者及20例对照者骨髓上清中IL-17水平,采用荧光定量PCR检测上述两组骨髓单个核细胞RANKL mRNA的表达。 结果　MM骨病组及对照组的骨髓上清均表达IL-17,骨髓单个核细胞均表达RANKL mRNA。MM骨病组骨髓上清中IL-17的含量［（52.69±4.55）pg／ml］高于对照组［（14.35±1.25）pg／ml］,MM骨病组骨髓单个核细胞RANKL mRNA的表达［（0.96±0.12）pg／ml］高于对照组［（0.42±0.03）pg／ml］,差异均有统计学意义（P＜0.05）。活动期MM骨病患者骨髓IL-17［（76.71±7.06）pg／ml］水平显著高于稳定期MM骨病患者［（40.67±3.84）pg／ml］,差异有统计学意义（P＜0.05）,活动期MM骨病患者骨髓单个核细胞RANKL mRNA的表达水平（1.22±0.27）显著高于稳定期MM骨病患者（0.83±0.12）,差异有统计学意义（P＜0.05）。MM骨病组骨髓IL-17与RANKL的表达呈显著正相关（r＝0.690,P＜0.05）。结论　MM骨病患者骨髓IL-17的表达显著增高,骨髓IL-17水平与MM活动期和（或）稳定期相关,骨髓IL-17与RANKL的表达呈正相关,IL-17可能在MM骨病的发病机制中起重要的作用。     

组织因子在多发性骨髓瘤中的表达及其与血管新生的关系

 目的　研究多发性骨髓瘤（MM）患者骨髓组织中组织因子（TF）的表达及其与血管内皮生长因子（VEGF）和骨髓血管新生程度的关系。方法　采用免疫组织化学法对试验组32例初治／复发的MM患者、对照组32例缺铁性贫血患者和健康者骨髓组织的TF、VEGF表达水平和微血管密度（MVD）进行测定。结果　试验组与对照组的TF、VEGF阳性率分别为88 %、78 %;60 %、10 %。试验组与对照组TF、VEGF中位表达水平分别为（++） 、（++）;（-）、（-）;试验组与对照组中位MVD分别为4、0。试验组TF表达水平与血管新生程度等级相关性分析结果显示TF表达水平与血管新生程度呈等级正相关（rs＝0.568,P＜0.001）。结论　MM患者骨髓组织中的TF表达水平与VEGF表达水平高于对照组,与血管新生程度呈等级正相关。     

多发性骨髓瘤MRI骨髓浸润模式与血管生成关系的研究

目的:探讨多发性骨髓瘤MRI骨髓浸润模式与血管生成的相关性。方法:以25例初诊MM患者为研究对象,进行传统影像学、血清肌酐、血清蛋白、β2微球蛋白、乳酸脱氢酶等检测,并根据Durie-Salmon分期系统进行分期。对骨髓瘤患者在初诊及治疗之前行脊柱T1WI、STIR和常规的T1WI增强扫描,分析骨髓瘤细胞在骨髓内的浸润模式。对照组包括非恶性血液病患者10例,其骨髓涂片及活检检查均证实为正常骨髓象。对研究组和对照组患者均进行骨髓活检及病理检查,免疫组化测定微血管密度（MVD）,以CD34单抗标记微血管内皮细胞。另外,采集骨髓后分离上层血浆,采用ELISA法测定VEGF蛋白浓度,根据结果进行统计学分析。结果:初治MM患者骨髓上清VGEF水平及MVD高于健康对照组（P＜0.05）。MRI骨髓弥漫性浸润的MM患者骨髓上清VGEF水平及MVD高于MRI骨髓成像正常或局灶性浸润的患者（P＜0.05）。结论:MRI骨髓弥漫性浸润模式与血管生成密切相关。     

VEGF和MDR1在急性髓系白血病中的表达及其与预后关系研究

目的研究初治急性髓系白血病(AML)患者化疗前后血清VEGF的表达及骨髓白血病细胞MDR1的表达。探讨VEGF与MDR1的表达对AML预后中的评价作用。方法血清VEGF的含量采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测,MDR1的表达采用直接免疫荧光标记单抗流式细胞仪(FCM)检测。结果初发和未缓解AML患者血清VEGF水平明显高于正常对照组和AML完全缓解(CR)组(P<0.01);未缓解患者血清VEGF含量与CR组比较差异有显著性意义(P<0.01),而与初治组比较差异无显著性意义(P>0.05)。初发AML患者骨髓单个核细胞的P-gp表达为(9.20±3.13)%。初发和未缓解AML患者骨髓白血病细胞的P-gp表达高于正常对照组和AML缓解组(P<0.01);P-gp表达与VEGF表达具有一定的相关性(r=0.639,P<0.01)。结论AML患者血清VEGF水平一定程度上可能反映体内白血病细胞的总负荷量同时与临床病情变化密切相关,可作为判断预后的指标之一。AML患者P-gp阳性表达者疗效差、预后不良。AML患者VEGF与P-gp的表达呈正相关,同时检测这两项指标对于AML的预后判断较单独检测更有意义。     

Survivin在多发性骨髓瘤患者骨髓细胞中的表达及其临床意义

背景与目的:Survivin是凋亡抑制蛋白家族成员之一,在多种恶性肿瘤中高表达,但在正常成人分化组织无表达。其表达与多种肿瘤的预后及肿瘤对放、化疗的耐受有关。本研究旨在通过检测Survivin在正常人、初治及复发/难治多发性骨髓瘤(multiplemyeloma,MM)患者骨髓细胞及骨髓瘤细胞系KM3中的表达,以揭示Survivin在骨髓瘤中的表达与耐药及疗效的关系。方法:RT-PCR和Westernblot法检测29例MM患者(其中初治17例,复发/难治12例)、9例正常人骨髓标本及KM3细胞系中SurvivinmRNA和蛋白质水平表达。结果:骨髓瘤细胞系KM3高表达Survivin。SurvivinmRNA在正常人、初治和难治/复发MM患者骨髓细胞中阳性率分别为22.2%、70.5%和83.3%,表达水平(Survivin/β-actin比值)分别为0.06±0.04、0.31±0.14和0.69±0.24,骨髓瘤患者表达率和表达水平显著高于正常人(P<0.01),而难治/复发MM组表达水平高于初治组(P<0.05)。所有的正常人标本中均未检测到Survivin蛋白,在初治和难治/复发MM组Survivin蛋白阳性率分别为41.1%和58.3%(P>0.05),表达水平(Survivin/α-tubulin半定量比值)分别为0.11±0.07和0.21±0.12,难治/复发MM组明显为高(P<0.05)。17例初治患者中,7例Survivin阳性者4例部分缓解(partialresponse,PR),1例微小反应(minorresponse,MR),2例无变化(nochange,NC),有效率[完全缓解(completeresponse,CR) PR MR]71.4%;10例Survivin阴性者中2例CR,4例PR,2例MR,2例NC,有效率80%,略高于阳性组。但统计学分析未发现两组有效率存在显著性差异。结论:Survivin在骨髓瘤患者中的高表达可能是部分患者对化疗不敏感的原因之一,由于Survivin仅特异性表达于骨髓瘤细胞,Survivin可作为逆转骨髓瘤细胞耐药治疗中的潜在靶点。     

Expression of VEGF and microvessel density in patients with multiple myeloma: clinical and prognostic significance

The conflicting data are reported on the clinical significance of VEGF deregulation and intensity of angiogenesis in multiple myeloma. The aim of this study was to evaluate the incidence and prognostic significance of VEGF expression and microvessel density (MVD) in multiple myeloma, as well as the relationship of their expression with selected clinical data, histological features, and proliferative activity of myeloma cells. We analyzed bone marrow biopsy specimens obtained from 59 patients with newly diagnosed multiple myeloma. Expression of VEGF and MVD was analyzed using standard immunohistochemical method (antibodies against VEGF and CD34, respectively) on B5-fixed and routinely processed paraffin-embedded bone marrow specimens. MVD was estimated by counting the number of microvessels in three “hot spots” at 400× magnification. VEGF immunoreactivity was estimated on the basis of intensity and percentage of positive plasma cells. VEGF was expressed in 47/59 (79.7%) specimens. There was no significant correlation between VEGF overexpression and age, clinical stage, the extent of osteolytic lesions, type of monoclonal protein, hemoglobin concentration, platelet count, serum concentration of creatinine, calcium, and albumins, the extent of bone marrow infiltration, histological grade, and proliferative activity index (measured with Ki-67 immunoreactivity). No significant difference was observed regarding the overall survival between VEGF-positive and VEGF-negative patients (29 vs. 34 months, P = 0.8). Median MVD was 15, ranging from 1 to 89 microvessels per three “hot spots”. There was significant correlation between MVD and histological grade, the extent of bone marrow infiltration, and proliferative activity. Significant difference was observed regarding the overall survival between patients with low MVD (<15) and patients with high MVD (≥15) (46 vs. 22 months, P = 0.009; univariate analysis). The results of this study did not reveal clinical significance of VEGF overexpression in multiple myeloma. On the contrary, the extent of bone marrow angiogenesis is an indicator of biological potency of malignant clone and a predictor of poor survival in newly diagnosed myeloma.     

Expression of vascular endothelial growth factor and its receptors in multiple myeloma and other hematopoietic malignancies.

Vascular endothelial growth factor (VEGF) is a potent angiogenic peptide with biologic effects that include regulation of hematopoietic stem cell development, extracellular matrix remodeling, and inflammatory cytokine generation. The importance of angiogenic factors such as VEGF, while clearly established in solid tumors, has not been fully elucidated in human hematopoietic neoplasms. Human hematopoietic tumor cell lines, representing multiple lineages and diseases, produce and secrete VEGF and express at least one of its two receptors. Exposure of human vascular endothelial cells to VEGF increased the expression of several hematopoietic growth factors known to be involved in myeloma including interleukin-6 (IL-6). Bone marrow samples from patients diagnosed with multiple myeloma were examined for expression of VEGF and its receptors. VEGF protein production was detected in malignant plasma cells from 78% of the myeloma patients studied. While expression of the Flt-1 and KDR receptors was not observed in the malignant plasma cells, both were markedly elevated in the normal marrow myeloid and monocytic cells surrounding the tumor. In bone marrow clot sections from normal allogeneic donors, low-intensity cytoplasmic VEGF expression was detected infrequently in isolated myelocytes, macrophages, and megakaryocytes. In vitro colony-forming assays using patient-derived material revealed that antibody neutralization of VEGF resulted in an inhibition of colony growth, whereas the addition of recombinant human VEGF stimulated colony formation. Neutralization of VEGF activity also suppressed the generation of tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha) and interleukin-1beta (IL-1beta) from bone marrow mononuclear cells. These data raise the possibility that VEGF may play a role in the growth of hematopoietic neoplasms such as multiple myeloma through paracrine and perhaps autocrine mechanisms.     

Survivin基因调控Notch1信号通路抑制骨髓瘤细胞增殖及侵袭的机制

目的 探讨Survivin基因调控Notch1信号通路对骨髓瘤细胞增殖及侵袭的影响.方法 RT-PCR检测42例骨髓瘤组织及正常骨髓组织中Survivin基因的mRNA表达;NC-siRNA和Survivin-siRNA转染人骨髓瘤细胞株RPMI8226,Western blot检测48 h后各组细胞中Survivin蛋白的表达;台盼蓝拒染法和Transwell小室分别检测细胞活率及侵袭能力;Western blot检测MMP-2、MMP-9、Notch1、Hes1蛋白的表达.结果 Survivin基因在骨髓瘤组织中的mRNA表达显著高于正常骨髓组织(P﹤0.01);转染siRNA后RPMI8226细胞中Survivin蛋白的表达显著降低(P﹤0.01);与对照组及NC-siRNA组的比较,Survivin-siRNA组细胞活率、细胞侵袭数及MMP-2、MMP-9、Notch1、Hes1蛋白表达均显著降低(P﹤0.01).结论 RNA干扰Survivin基因的表达可降低RPMI8226细胞活率及侵袭能力,其机制与抑制Notch1信号通路有关.