十二指肠钩虫谷胱甘肽转移酶AduGST-1基因的克隆和重组表达

目的克隆十二指肠钩虫谷胱甘肽转移酶（GST）AduGST-1基因,并在大肠埃希菌中表达获得重组AduGST-1。方法设计特异引物,以十二肠钩虫成虫cDNA为模板,通过PCR扩增AduGST-1基因。将获得的AduGST-1编码序列克隆至原核表达载体pETHF,构建重组表达质粒pETHF/AduGST-1。重组质粒转化至大肠埃希菌BL21（DE3）,用IPTG诱导表达、Ni亲和层析分离纯化重组AduGST-1,SDS-PAGE分析重组蛋白表达及纯化情况。结果成功扩增到AduGST-1全长编码序列,并登记到GenBank（accession no.JQ812812）。AduGST-1编码序列长度为624bp,编码307个氨基酸残基。成功构建了重组表达质粒pETHF/AduGST-1,在BL21（DE3）中表达并纯化了重组AduGST-1。结论首次报道从十二指肠钩虫中分离到GST基因,该基因可在大肠埃希菌中高效表达,并分离纯化了重组GST蛋白,为进一步研究AduGST-1功能与应用奠定了基础。     

丙型肝炎病毒非结构区NS3基因在大肠埃希菌中的可诱导性表达

目的 构建丙型肝炎病毒（HCV）NS3基因的原核细胞表达载体。实现在大肠埃希菌中的可诱导性表达。方法 应用聚合酶链反应（PCR）技术，以美国HCV-H株全长cDNA质粒为模板，扩增获得NS3基因片段，克隆到原核表达载体pET-30C( )中，构建原核表达载体pET-NS3，转化BL21（DE3）宿主菌，以IPTG诱导，获得NS3蛋白的可诱导性表达，以HCVNS3的单链可变区抗体（ScFv)证实表达的NS3蛋白的特异性，结果 以HCVNS3基因序列特异性引物，PCR扩增获得1893bp的NS3DNA征段，插入pET-30C( )表达载体，转化BL21（DE3）受体菌，经培养，IPTG诱导，获得了重组HCVNS3蛋白的表达，以HCVNS3的ScFv证实了表达的重组蛋白HCVNS3的特异性。结论 以大肠埃希菌表达了HCVNS3的重组蛋白质。     

程序死亡蛋白1基因的克隆及原核表达

目的 克隆人程序死亡蛋白(PD-1)基因并构建PD-1蛋白的原核表达质粒,在大肠埃希菌中进行表达.方法 用RT-PCR的方法从慢性乙肝患者外周血淋巴细胞总RNA中逆转录得到PD-1基因的cDNA,构建PD-1基因的原核表达质粒,在大肠埃希菌BL21(DE3)中进行表达并纯化.用SDS-PAGE、DNA测序、氨基酸测序等方法对表达蛋白进行鉴定.结果 克隆到PD-1基因编码区全长序列cDNA,经DNA测序与已报道的序列同源性达99.8%.构建得到PD-1的原核表达质粒,并在大肠埃希菌中表达,纯化获得纯度较高的PD-1蛋白.氨基酸测序证明表达蛋白的正确性.结论 成功克隆人PD-1基因,在大肠埃希菌中获得表达,得到纯化的PD-1蛋白,为进一步研究PD-1蛋白的功能及应用打下基础.     

幽门螺杆菌cag4蛋白的原核表达、纯化及鉴定

目的:构建幽门螺杆菌cag4蛋白的原核重组体系,表达、纯化融合蛋白。方法:利用PCR技术从幽门螺杆菌NCTC11637中克隆了cag4基因;经T-A克隆,酶切鉴定,构建了原核表达载体pET-28a-cag4;经测序鉴定正确后,转化进入大肠埃希菌BL21(DE3)进行异源表达。利用IPTG体外诱导后,经SDS-PAGE和Western bolt鉴定目的蛋白表达后,采用Ni2+-NTA柱在变性条件下纯化目的蛋白,并对重组蛋白进行透析复性处理。将SDS煮沸法获得的溶壁微球菌肽聚糖掺入SDS-PAGE作为底物,进行酶谱分析。结果:成功扩增了cag4基因基因;重组质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达出pET-28a-cag4融合蛋白;优化了pET-28a-cag4原核表达体系的最适条件;Western bolt分析结果显示表达的基因重组蛋白与目的蛋白相符;酶谱分析显示其具有明显的肽聚糖水解活性。结论:幽门螺杆菌cag4蛋白具有溶菌糖基转移酶活性。     

人内皮抑素抗肿瘤相关肽基因的克隆表达及活性研究

目的克隆并表达人内皮抑素抗肿瘤相关肽,检测其生物活性。方法人工合成人内皮抑素1~30位氨基酸(30肽,序列25~31由RGIRGAD改为RGDRGD)所对应的核苷酸序列,连接到质粒pTYB2中,再转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,几丁质亲和层析树脂一步纯化30肽。通过MTT法、鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)实验、小鼠体内抑瘤实验比较30肽和内皮抑素抗肿瘤活性。结果MTT证实30肽体外对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)、胃癌7901细胞(SGC-7901)半数抑制浓度IC50为36μg/ml、47μg/ml,显著低于内皮抑素IC50179μg/ml、202μg/ml。CAM实验中30肽对血管的抑制作用更强。30肽在小鼠体内抑瘤率47.8%,效果优于内皮抑素28.7%。结论30肽具有更强抗肿瘤活性,有可能成为治疗肿瘤的一种新药物。     

流式细胞术用于细菌抗生素敏感性试验的初步探索

大肠埃希菌ATCC2 5 92 2、临床分离头孢噻肟 (CTX)敏感大肠埃希菌 7771、7880、CTX耐药大肠埃希菌 7992与浓度范围为 (0 .0 15～ 12 8) μl/ml的CTX于35℃孵育 2h后 ,用碘化丙啶 (PI)标记上流式细胞仪检测。在一系列药物浓度作用下 ,各菌株的碘化丙啶荧光强度 (MFI)随着药物浓度的升高呈现递增的变化趋势 ,但是 ,当抗生素浓度过高 ,如大于其最小抑菌浓度 (MIC) 8倍时 ,菌细胞门所占比例将明显减少 ,MFI值也会显著下降 ,表明在高浓度抗生素持续作用下 ,较多细菌死亡后 ,菌细胞被裂解。基金项目 :安徽省“十五”科技攻关基金资助 ( …     

肾上腺素对生物材料表面大肠埃希氏菌qseC缺陷株生物被膜形成的影响

目的 探讨肾上腺素( EPI)对生物材料表面大肠埃希氏菌 qseC 缺陷株生物被膜形成的影响.方法 以大肠杆菌MC1000、MC1000△qseC为实验菌株,对两菌株在不同培养基(LB或LBEPI)中的运动能力进行比较;同时分别将两菌株和PVC材料片在不同培养基(LB或LB+EPI)中培养,用激光共聚焦显微镜(CLSM)和扫描电镜(SEM)观察EPI对PVC表面细菌生物被膜形成的影响.结果 在LB培养基中,qseC缺陷株的细菌生物被膜形成能力较野生菌株明显减弱(P＜0.05).MC1000菌株在LBEPI培养基中的运动力较之在LB培养基中明显增强(P＜0.05),而qseC缺陷株的变化不明显.CLSM和SEM对PVC表面细菌生物被膜的检测结果表明,EPI增强MC1000菌株生物被膜形成能力,而对qseC缺陷株的影响不大.结论 肾上腺素促进大肠埃希氏菌在生物材料表面细菌生物被膜的形成,该作用由qseC介导.     

复方樟脑乳膏微生物限度检查方法的建立

目的:建立复方樟脑乳膏微生物限度检查方法。方法:取复方樟脑乳膏3g加100ml pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液溶解后,静置,取上层液作为供试品溶液,采用培养基稀释法(0.1ml.皿-1)进行细菌、霉菌计数;并进行金黄色葡萄球菌验证测定。结果:用1∶33供试品溶液按培养基稀释法(0.1ml.皿-1)进行大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉菌的回收率均大于70%;采用供试品溶液(1∶33)33ml加入至相应的增菌培养基可以进行金黄色葡萄球菌(200ml.瓶-1)测定。结论:所建立的培养基稀释法进行复方樟脑乳膏微生物限度检查方法可行。     

日本血吸虫重组质粒pET32α-Sj26GST—Sj32的构建及其在大肠埃希菌BL21（DE3）中的表达

目的构建日本血吸虫重组质粒pET32α-Sj26GST—Sj32,分析该质粒在大肠埃希菌BL21（DE3）中的表达情况。方法超声粉碎日本血吸虫成虫提取总RNA,通过RT—PCR扩增获得Sj26GST和Sj32抗原编码基因,然后采用基因拼接法（geneSOEing）剪接Sj26GST和Sj32,得到Sj26GST—Sj32融合基因,克隆至原核表达载体pET32α（＋）,构建重组质粒pET32α一Sj26GST—Sj32,转化人大肠埃希菌BL21（DE3）,经异丙基硫代-β—D．半乳糖苷（IPTG）诱导表达后用SDS—PAGE和Westem—blot对表达产物进行分析和鉴定。结果基因拼接法扩增出约1991bp的Sj26GST—Sj32融合基因;双酶切和PCR鉴定证实Sj26GST—Sj32融合基因成功插入pET32α（＋）中,SDS—PAGE分析显示表达产物为分子质量约82000Mr的重组蛋白．与预期结果一致,表达的蛋白约占菌体总蛋白的22％：Western—blot鉴定重组蛋白能被日本血吸虫感染的兔血清识别。结论成功构建了日本血吸虫重组质粒pET32α一Sj26GST—Sj32,该质粒在大肠埃希菌BL21中获得了高效融合表达,表达的融合蛋白具有特异的抗原一件     

CTX—M一3型超广谱β-内酰胺酶原核表达条件的研究

目的探讨重组质粒pET一28a（＋）／CTX—M一3分别在大肠埃希菌ER2566和BL21（DE3）中进行原核表达的最佳条件。方法分别在不同的宿主菌、诱导温度、诱导时间和诱导剂浓度中诱导pET．28a（＋）／CTX—M一3融合表达载体,目的产物经SDS—PAGE和BandScan凝胶分析软件分析,以获得最佳表达条件。结果表达载体的最佳诱导条件是重组质粒在BE21（DE3）中18℃诱导24h,IPTG终浓度为0．8mmol／L;表达载体在最佳条件下表达时,目的蛋白的最高表达量占菌体总蛋白的33％。结论获得pET一28a（＋）／CTX—M一3在大肠埃希菌中表达CTX—M一3型超广谱β一内酰胺酶（extended—spectrumB—lactamase,ESBLs）蛋白的最佳条件,为此酶的大量纯化奠定了基础。     

体素内不相干运动弥散加权成像在受压腰骶神经根诊断中的应用

目的 探讨MR体素内不相干运动(IVIM)弥散加权成像(DWI)在受压腰骶神经根诊断中应用的可行性。方法 前瞻性对照研究。纳入2017年4—10月30例腰椎间盘突出致神经根受压患者(观察组)的常规腰椎MR序列及3D-Fiesta序列、IVIM-DWI序列图像;另按性别、年龄匹配纳入30名健康志愿者作为对照组。在GE ADW 4.6工作站,使用MADC软件包测量对照组双侧L₄、L₅、S₁神经节的扩散系数(D)、灌注相关扩散系数(D*)、灌注分数(f)和表观扩散系数(ADC)值,以及观察组患者受压侧及其对侧神经根的D、D*、f、ADC值。比较对照组同节段左右两侧神经节和不同节段神经节各观察项目测量值,以及观察组受压侧神经根与对侧正常神经根各观察项目测量值。绘制受压神经根D值和ADC值的ROC曲线,评价诊断效果。结果 对照组L₄、L₅、S₁神经根的D值分别为(0.603±0.064)×10^-3 mm²/s、(0.624±0.079)×10^-3 mm²/s、(0.628±0.088) ×10^-3 mm²/s, D*值分别为(3.815±0.541) ×10^-3 mm²/s、(3.862±0.414)×10^-3 mm²/s、(3.915±0.611) ×10^-3 mm²/s; f值分别为0.454%±0.076%、0.484%±0.101%、0.445%±0.094%; ADC值分别为(0.934±0.085)×10^-3 mm²/s、(0.945±0.051)×10^-3 mm²/s、(0.953±0.064)×10^-3 mm²/s。观察组神经根受压侧D、D*、f、ADC值分别为(0.669±0.081)×10^-3 mm²/s、(3.852±0.776)×10^-3 mm²/s、0.528%±0.115%、(1.096±0.087)×10^-3 mm²/s,健侧D、D*、f、ADC值分别为(0.617±0.080)×10^-3 mm²/s、(3.961±0.684)×10^-3 mm²/s、0.479%±0.083%、(0.938±0.074)×10^-3 mm²/s。对照组同节段左右两侧神经节和不同节段神经节所测D、D*、f、ADC值,差异均无统计学意义(P值均＞0.05)。观察组受压侧神经根与对侧正常神经根比较:D和ADC值均升高,差异均有统计学意义(P值均＜0.01);D*、f值差异均无统计学意义(P值均＞0.05)。绘制并分析ROC曲线,D值对诊断神经根受压具有较高效能,其次是ADC值,D值的AUC为0.923(95%CI 0.803~0.987),ADC值的 AUC为0.895(95%CI 0.865~0.999)。结论 IVIM模型的MR DWI技术可用于腰骶神经根检查,且与单指数模型的MR DWI相比能更详细、准确地反映神经根受压后的病理改变。     

数字化载银羟基磷灰石人工骨抗菌性及生物相容性

背景：载银珊瑚羟基磷灰石作为一种新型抗菌植骨材料,受到越来越多的关注,作为植入物需与人体具有良好的生物相容性。 目的：观察数字化载银珊瑚羟基磷灰石人工骨材料的抗菌性及生物相容性。 方法：将珊瑚羟基磷灰石粉末浸泡于不同浓度的硝酸银溶液,制备出不同含银量的载银羟基磷灰石,再将其与聚乳酸混合,并通过选择性激光烧结快速成形制备出具有特殊形状的数字化载银抗菌人工骨材料。 结果与结论：连续光源原子吸收光谱仪测定珊瑚羟基磷灰石浸泡于10^-2,10^-3,10^-4,10^-5 mol/L AgNO₃中制备的载银人工骨中Ag+的含量分别为2.31×10^-1%,3.18×10^-2%,6.75×10^-3%,6.05×10^-4%。体外抑菌圈实验表明浸泡10^-2 mol/L AgNO₃中制备的载银人工骨材料对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌圈直径分别为(13.00±1.52)mm 及(12.30±1.65)mm;浸泡10^-3 mol/L AgNO₃中制备的载银人工骨材料分别为(11.50±0.73) mm及(11.00±0.46) mm。浸泡10^-4,10^-5 mol/L AgNO₃载银人工骨材料对两种细菌均无抑菌圈产生。细胞毒性试验结果表明100%浸泡10^-2,10^-3,10^-4,10^-5 mol/L AgNO₃的载银珊瑚羟基磷灰石人工骨材料的细胞毒性分别为3级、1级、0级、0级。急性全身毒性试验表明浸泡10^-3 mol/L AgNO₃中的人工骨浸提液对小鼠无明显的急性毒性反应,具有良好的安全性。结果表明浸泡10^-3 mol/L AgNO₃中的载银珊瑚羟基磷灰石人工骨在体外对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌有明显抗菌作用,且具有良好的生物相容性及安全性。     

双氢睾酮对大鼠原代卵泡颗粒细胞抗苗勒管激素表达的影响

目的 探讨双氢睾酮（DHT）对大鼠原代卵泡颗粒细胞抗苗勒管激素（AMH）表达的影响。方法 从95只21 d SD雌性大鼠中提取颗粒细胞原代培养48 h后,先用HE染色检测细胞形态,卵泡刺激素受体（FSHR）细胞免疫荧光检测细胞纯度;然后根据干预方法和实验的不同,随机将细胞分为对照组（无药物干预）、10^-8mol/L DHT组、10^-5mol/L DHT组,2×10^-5mol/ L蛋白激酶B(Akt)抑制剂（MK-2206 2Hcl）组和10^-8mol/L DHT+2×10^-5mol/L MK-2206 2Hcl组,分别使用相应浓度的试剂干预细胞3 h。干预完成后,细胞免疫荧光染色观察AMH表达的部位和变化;Western blotting测定不同组的AMH、Akt、p-Akt蛋白表达量。结果 大鼠原代卵泡颗粒细胞的纯度为93.33%±3.09%,AMH表达在大鼠原代卵泡颗粒细胞膜和细胞质中;与对照组相比,10-8 mol/L DHT和10-5 mol/L DHT均可使颗粒细胞AMH表达增加（P<0.05）,但这两个浓度的DHT对颗粒细胞AMH的表达影响差异无显著性（P>0.05）;与对照组相比,10^-8 mol/L DHT可以使p-Akt、AMH表达升高,2×10^-5 MK-2206 2Hcl使AMH表达降低（P<0.05）;与2×10^-5MK-2206 2Hcl相比,10^-8mol/L DHT+2×10^-5 MK-2206 2Hcl处理组AMH表达升高（P<0.05）。结论 DHT可以上调大鼠原代卵泡颗粒细胞AMH的表达,这种作用可能与Akt信号通路有关。     

PKC和ROCK对硝苯地平舒张血管作用的影响

目的:探讨蛋白激酶C(PKC)及Rho相关激酶(ROCK)对硝苯地平舒张大鼠离体胸主动脉血管环作用的影响。方法:采用离体血管环灌流装置观察硝苯地平对基础状态血管环及去甲肾上腺素(NE,10~(-6)mol/L)或KCl(60mmol/L)预收缩血管环的张力变化,并利用PKC抑制剂和ROCK抑制剂等工具药观察对硝苯地平舒血管作用的影响并探讨可能机制。结果:系列浓度硝苯地平对基础状态血管环张力无明显影响,对NE和KCl预收缩的血管环具有浓度依赖性舒张作用(P 0. 05),去内皮组舒张作用与内皮完整组比较无明显差异。预孵PKC抑制剂星孢菌素(STA,10~(-8)mol/L)及激动剂佛波酯(PMA,10~(-7)mol/L)后,STA能增强硝苯地平对血管的舒张作用,而PMA能减弱硝苯地平对血管的舒张作用(P 0. 05);预孵ROCK抑制剂法舒地尔(fasudil,10~(-6)mol/L)及激动剂血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ,10-9mol/L)后,fasudil能增强硝苯地平对血管的舒张作用,而Ang-Ⅱ能减弱硝苯地平对血管的舒张作用(P 0. 05);钾通道阻滞剂BaCl_2(10~(-4)mol/L)、四乙胺(10~(-3)mol/L)、格列本脲(10~(-5)mol/L)和4-氨基吡啶(10~(-3)mol/L)对硝苯地平的舒张血管作用无明显影响。在无钙且含高浓度KCl的溶液中,硝苯地平可浓度依赖性地抑制累积浓度的CaCl_2对大鼠离体主动脉环的收缩作用(P 0. 05)。在无钙液中,硝苯地平对NE所引起的收缩无明显影响。结论:硝苯地平能够呈浓度依赖性地舒张大鼠主动脉,其舒张血管作用为非内皮依赖性,且与抑制细胞外钙内流密切相关,其舒张血管作用部分与抑制PKC和ROCK作用相关。     

Enhancement of Suppressor T Cell Activity by Lymphocyte Promotiong Factor of Bordetella Pertussis

Lymphocyte promoting factor (LPF), a bioproduct of Bordetella pertussis shown previously to exert immunosuppressive effects, was examined for its effect on Concanavalin A (Con A) induced T lymphocyte supressor activity by human lymphocytes. Suppressor cells (5 ± 104) cells/well) first generated with Con A (10 mμg/ml) for 24h were co-cultured with responder cells (5 × 10⁴ cells/ well for another 72h in the presence of Con A (2.5, 5, 20 mμg/ml). In this culture condition, LPF (20 mμg) and/or histamine 10^-5 M or 10^-6 M/well were added for comparison. The suppressor activity was assessed by the reduction of the uptake of radioactivity of [³H] thymidine compared to that of Con A alone. Lymphocytes treated with LPF exhibited increase of suppression by 22 to 41%, while LPF and histamine (10^-5 M) together further increased the suppression by 35 to 63% compared to controls. Serial studies on cell population in the culture indicated OKT8(+) cells proliferated after day 6 in culture. These results indicated LPF exerts selective enhancement of T cell suppessor activity by 72h in culture, prior to cell expansion, and that activity can be further strengthened by sensitizing cells to histamine.     

越橘花青素对人胚胎巩膜成纤维细胞MMP2和collagen I表达的影响

 目的：探讨越橘花青素对人胚胎巩膜成纤维细胞（HFSF）基质金属蛋白酶2（MMP2）和I型胶原蛋白（collagen I）表达的影响,为越橘花青素防治近视提供实验依据。方法：取不同浓度（0、10^-6、10^-5、10^-4、10^-3、10^-2、10^-1和1 g/L）越橘花青素作用于HFSF,应用MTT法检测越橘花青素作用不同时间（6 h、8 h、12 h、24 h和48 h）对HFSF活力的影响;流式细胞术检测HFSF活力最高时（10^-1 g/L越橘花青素作用12 h）的细胞周期和凋亡情况;RT-qPCR检测HFSF中MMP2、COL1A1和COL1A2的mRNA表达;Western blot检测其MMP2和collagen I的蛋白表达。结果：MTT法结果显示HFSF在10^-1 g/L的越橘花青素作用12 h时活力最高;与空白对照组比较,流式细胞术显示10^-1 g/L越橘花青素组S和G₂期的细胞比例增加（P<0.05）,凋亡率差异无统计学意义;RT-qPCR显示MMP2的mRNA表达量下降（P<0.05）,COL1A1的mRNA表达量增加（P<0.05）,COL1A2的mRNA表达量差异无统计学意义;Western blot显示MMP2蛋白表达下降（P<0.05）,collagen I蛋白表达增加（P<0.05）。结论：越橘花青素对HFSF和具有抑制MMP2和增加collagen I表达的作用。     

白杨素对大鼠主动脉舒张作用的影响

 目的: 研究白杨素(chrysin)对离体大鼠主动脉肌源性反应的影响,并探讨其作用机制。方法: 分离SD大鼠主动脉,采用离体血管环灌流装置观察chrysin对血管环的基础张力及对60 mmol/L KCl预收缩血管的舒张作用,并结合不同抑制剂处理,探讨其作用于血管环的可能机制。结果: Chrysin(10^-6 mol/L、3×10^-6 mol/L、10^-5 mol/L、3×10^-5 mol/L和10^-4 mol/L)对基础状态血管无明显影响,但对60 mmol/L KCl预收缩的血管环具有浓度依赖性舒张作用,并且去内皮组舒张作用弱于内皮完整组(P<0.05)。NOS抑制剂L-NAME(10^-4 mol/L)处理血管后,chrysin的舒张血管作用部分被抑制(P<0.05),COX抑制剂吲哚美辛(10^-5 mol/L)处理血管后无明显抑制作用。钾通道阻滞剂4-氨基吡啶(10^-3 mol/L)、氯化钡(10^-4 mol/L)、格列苯脲(10^-5 mol/L)和四乙胺(10^-3 mol/L)预孵后,chrysin舒张血管作用均被部分抑制(P<0.05)。Chrysin(10^-6 mol/L、10^-5 mol/L和10^-4 mol/L)可浓度依赖性抑制2.5 mmol/L CaCl₂引起的主动脉收缩。结论: Chrysin能够浓度依赖性舒张大鼠主动脉,其作用机制可能与促进一氧化氮释放、激活4种K⁺通道及减少细胞内钙离子浓度有关。     

Modulating Effects of Sensory and Autonomic Neuropeptides on Murine Splenocyte Proliferation and Cytokine Secretion Indd by Leishmania Major

The intimate, bidirectional link between neuroendocrine and immune systems is now accepted. A modulating effect of the nervous system on immune and inflammatory responses has been corroborated by identification of neuropeptide receptors on immunocompetent cells and the finding that neuropeptides can regulate leukocyte functions. The present study was undertaken to investigate the possible immunomodulatory role of sensory (SOM, CGRP and SP) and autonomic (VIP and NPY) neuropeptides in a murine model of cutaneous leishmaniasis, using two genetically different inbred mouse strains, BALB/c and C57BL/6, respectively susceptible and resistant to Leishmania (L.) major infection. The parameters studied were extent of splenocyte proliferation, as measured by thymidine uptake, and the ability of these cells to secrete IFN-γ and IL-4 by using a two-site ELISA, upon in vitro challenge with L. major parasites and addition of the neuropeptides. The resistant mouse splenocyte proliferation was enhanced by SOM, CGRP, and VIP at 10^-5', 10^-6 and 10^-9 M concentration, respectively, but was inhibited by NPY at 10^-5M. Proliferation of the splenocytes from the susceptible strain was inhibited by SOM (10^-11 M) and CGRP(10^-5 M). Somatostatin, at various concentrations, stimulated IFN-γ secretion in both mouse strain splenocytes, and IL-4 production in the susceptible mouse. Calcitonin gene-related peptide enhanced IFN-γ secretion in susceptible mouse splenocytes at 10^-6 10^-7 and 10^-9 M, as did VIP at 10^-10 M and NPY at 10^-7 M. Vasuactive intestinal peptide also stimulated IL-4 production in BALB/c splenocytes at all concentrations used Substance P had no effect on either cell proliferation or cytokine sccrction in eithcr of the two mouse strains.

These findings indicatc that the nervous system, represented by sensory and autonomic nerve terminals and their content of neuroinediators, may be involved in the pathophysiology of cutaneous leishmaniasis.     

虎杖苷对成纤维细胞生物学特性的影响

背景：虎杖多年来一直是烧伤、创伤创面愈合治疗方剂中的一味主药,因成分复杂,具体药理作用难以进一步研究,对于虎杖苷促愈合作用目前未见文献报道。 目的：分析不同浓度虎杖苷对成纤维细胞生物学特性的影响。 方法：取烧伤后行瘢痕切除植皮4例患者剩余小中厚皮片,原代培养人成纤维细胞。用含有10^-6,10^-5,10^-4,10^-3,10^-2 mol/L不同浓度虎杖苷培养液作用第2代人成纤维细胞,未加虎杖苷的培养液作为对照。MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡;ELISA法检测上清中纤维结合蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白的表达情况。 结果与结论：10^-5、10^-4 mol/L组促进成纤维细胞增殖最明显,10^-2 mol/L组吸光度值显著下降,细胞生长受抑制。10^-3 mol/L组G1期细胞大幅度下降,细胞有S期阻滞现象。10^-2 mol/L组有明确的促凋亡作用。10^-2 mol/L组上清中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白较其他各组显著增高(P < 0.05);纤维结合蛋白较对照组显著增高(P < 0.05),较其他各组有所下降(P < 0.05)。说明低浓度虎杖苷有促进成纤维细胞增殖、保护细胞免于凋亡及促进纤维结合蛋白的表达与合成分泌的作用,促进成纤维细胞增殖的最适浓度应为10^-5~10^-4 mol/L。     

乙烯雌酚可诱导骨髓基质干细胞向成骨细胞分化

背景：关于雌激素对骨髓基质干细胞作用的报道尚不多。 目的：观察乙烯雌酚对兔骨髓基质干细胞成骨分化的影响。 方法：体外培养骨髓基质干细胞,用0,10^-7,10^-6,10^-5 mol/L浓度乙烯雌酚干预,并设地塞米松10^-8 mol/L、β-甘油磷酸钠10 mmol/L、维生素C 50 mg/L为阳性对照。 结果与结论：乙烯雌酚干预培养24,48,72 h,10^-6 mol/L组显著促进了骨髓基质干细胞增殖(P < 0.01)。干预48 h 10^-5 mol/L组显著抑制细胞增殖,干预72 h 10^-7 mol/L组显著抑制细胞增殖(P < 0.01)。10^-7 mol/L组乙烯雌酚干预25 d后开始出现钙化结节;10^-7,10^-6 mol/L组干预14,21 d碱性磷酸酶活性显著增加。证实乙烯雌酚能促进兔骨髓基质干细胞的成骨分化。