人类成熟卵母细胞玻璃化冷冻研究

目的:研究人类成熟卵母细胞玻璃化的方法和冷冻液,探讨人类卵母细胞玻璃化冷冻保存的方法及临床应用价值。方法:运用cryoleaf进行人类成熟卵母细胞玻璃化冷冻保存,复苏后行胞浆内单精子注射-胚胎移植或培养至囊胚形成,观察复苏后卵母细胞受精及发育能力。根据冷冻方法分为程序化冷冻组和玻璃化冷冻组,又将玻璃化冷冻组分为自配液冷冻组和成品液冷冻组,比较各组存活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率。结果:程序化冷冻组和玻璃化冷冻组间存活率、卵裂率、囊胚形成率均无显著性差异(P>0.05),但是受精率存在显著性差异(P<0.05);程序化组与自配液组、成品液组间存活率、卵裂率均无显著性差异(P>0.05),但受精率存在显著性差异(P<0.05)。成品液组与自配液组、程序化组间囊胚形成率存在显著性差异(P<0.05)。程序化组移植4例,获得临床妊娠并分娩1例,玻璃化组移植7例,获得1例生化妊娠。结论:程序化冷冻与玻璃化冷冻法均可应用于人类成熟卵母细胞,冻融后卵母细胞具备正常受精能力及卵裂能力。玻璃化冻存人类卵母细胞具有更大发展趋势。     

Hemi-straw玻璃化与程序化冷冻小鼠不同发育阶段胚胎的效果

目的:探讨半细管(Hem i-straw)玻璃化方法与程序化方法冷冻不同发育阶段小鼠胚胎的效果。方法:采用慢速程序化方法与玻璃化方法冷冻小鼠原核期胚胎、卵裂期及早期囊胚期胚胎。解冻后观察存活率、囊胚形成率。结果:采用玻璃化方法冷冻小鼠卵裂期与早期囊胚期胚胎的存活率为92.7%与95.5%,显著高于玻璃化冷冻原核期胚胎的存活率79.8%与程序化冷冻的各组(均P<0.01)。程序化冷冻早期囊胚的存活率仅为50.2%,显著低于其他组(均P<0.01)。经培养后囊胚的形成率比较,程序化冷冻组内无显著性差异(P>0.05),但均显著低于玻璃化冷冻组(均P<0.01)。玻璃化冷冻卵裂期与早期囊胚组的囊胚形成率高达90.1%与92.2%,显著高于原核期胚胎玻璃化冷冻组69.5%(均P<0.01)。结论:胚胎行冷冻保存时,玻璃化冷冻效果较程序化冷冻好,且选择早期囊胚可获最佳冷冻效果。     

玻璃化冷冻法在未成熟卵子冷冻技术中的应用

目的:探讨玻璃化冷冻法在未成熟卵子冷冻方面的应用价值。方法:选取GV期卵母细胞744枚,随机分为5组,A组(128枚),GV期卵子直接进行未成熟卵母细胞体外培养(IVM);B组(220枚),GV期卵子直接行玻璃化冷冻;C组(155枚),GV期卵子直接行IVM,待培养至MⅡ期,再行玻璃化冷冻;D组(112枚),GV期卵子去除冠-丘细胞,行玻璃化冷冻;E组(129枚),GV期卵子保留除冠-丘细胞行玻璃化冷冻。比较各组卵母细胞的存活率、成熟率、受精率、卵裂率及囊胚形成率。结果:与A组相比,B组和C组的成熟率、受精率、卵裂率和囊胚形成率均降低(P<0.05);B组与C组间存活率、成熟率、受精率、卵裂率和囊胚形成率无差异(P>0.05)。E组的成熟卵子率较D组提高(P<0.05),但两组在解冻卵子存活率、受精率、2细胞数和>2细胞数方面无差异(P>0.05)。结论:未成熟卵子的玻璃化冷冻保留冠-丘细胞可显著提高冻融效果。     

细胞松弛素B在人类体外成熟卵子冷冻中的作用

目的:探讨细胞松弛素B在人类体外成熟卵子玻璃化冷冻中的作用。方法:收集常规胞浆内单精子显微注射-胚胎移植(ICSI-ET)周期中未成熟卵母细胞234枚(包括生发泡期即GV期和第1次减数分裂中期即MⅠ期),在体外培养24～48 h,181枚卵母细胞成熟(排出第2极体),随机分成3组并行玻璃化冷冻。A组(43枚)用细胞松弛素B(CB)预处理30 min后行玻璃化冷冻;B组(66枚)用CB预处理20 min后行玻璃化冷冻,C组(72枚)未用CB预处理直接行玻璃化冷冻。D组为对照组30枚体内成熟卵子未用CB处理直接玻璃化冷冻。各组卵子冷冻3周后解冻,复苏的卵子行ICSI辅助授精,观察各组成活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率。结果:冻融后的体外成熟卵子,其成活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率均显著低于体内成熟卵子(P<0.05)。A组的成活率显著低于B、C两组(P<0.05),A、B、C 3组间的受精率、卵裂率差异无统计学意义(P>0.05),A、B两组未获囊胚,C组仅有1枚囊胚。结论:冻融体外成熟卵子,成活率、受精率、卵裂率均下降,囊胚形成率低,胚胎后期发育潜能显著降低。CB预处理未能提高卵子冷冻的成活率、受精率、卵裂率及胚胎的发育潜能。     

小鼠卵母细胞程序化和玻璃化冷冻效果的比较

目的本实验通过建立小鼠的实验模型,比较程序化和OPS玻璃化冷冻效果,探讨卵子冷冻的具体方法,为卵子冷冻技术应用于临床提供实验依据。方法通过促排卵获取小鼠MII期卵母细胞,随机分组,观察不同冷冻方法、高浓度的冷冻保护液,对卵子的成活及进一步发育潜能的影响;不同的IVF前培养时间对冻融卵子的受精及继续发育的影响。结果（1）OPS玻璃化冷冻组与程序化冷冻组的存活率、受精率、卵裂率及6—8cell胚形成率均无显著差异。（2）玻璃化冷冻组与暴露组的卵母细胞存活率分别为35．3％,100％,有显著性差异（P〈0．05）。暴露组与对照组比较的受精率、卵裂率,无显著性差异（P〉0．05）。而暴露组与对照组的6—8cell的胚形成率分别为41％,63％,两组比较,有显著差异（P〈0．05）。（3）无论OPS玻璃化冷冻法还是程序化冷冻法,冻融后的培养2h组和培养1h组的,受精率、卵裂率。两组比较,均有显著性差异（P〈0．05）。结论本实验证实,OPS玻璃化冷冻法至少可以达到程序化冷冻法同样的效果,而OPS玻璃化冷冻法有好于程序化冷冻法的趋势。加之,其简便、省时、经济等优点,因而,更有发展前景。     

不同方法冻融小鼠未成熟与成熟卵母细胞的研究

目的:探讨不同冷冻方法对小鼠生殖泡(GV)期与成熟期(MⅡ)卵母细胞体外成熟、体外受精及胚胎发育能力的影响。方法:收集ICR小鼠GV期与MⅡ期卵母细胞,分别行程序化冷冻(慢速冷冻-快速解冻)与玻璃化冷冻。解冻后比较各组成熟率、受精率、卵裂率及8细胞胚胎形成率。结果:采用玻璃化冷冻法冷冻GV期卵母细胞(Ⅰ组),解冻后存活率达84.2%,显著高于MⅡ期卵母细胞(Ⅱ组)60.5%及程序化冷冻组(Ⅲ组)56.9%、(Ⅳ组)55.7%(均P<0.01)。各组成熟率、受精率、卵裂率及8细胞胚胎形成率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在进行卵母细胞冷冻保存时,宜选择玻璃化冷冻法,且GV期卵母细胞冷冻效果好于MⅡ期卵母细胞。     

卵子玻璃化冷冻保存生育力的研究进展

随着人类辅助生殖技术的发展,卵子冷冻技术已经成为人们关注的课题,在拓宽目前辅助生殖技术服务的范围和保存女性生育能力方面有重要的价值.近年来玻璃化冷冻被认为是深低温保藏卵母细胞很有前途的选择.玻璃化冷冻卵母细胞冻融后存活率、受精率、卵裂率及移植妊娠活婴率较前有所提高,但迄今为止,人们仍缺少标准的玻璃化冷冻方案,对保护剂和载体的选择及冷冻程序等仍未达成共识.该文就玻璃化冷冻人类卵母细胞意义、卵子玻璃化冷冻的应用现状及冷冻保护剂、低温冷冻复苏对卵子的潜在危害及应用前景等研究作以综述.     

人未成熟卵玻璃化冷冻初步实验探讨

目的:对人未成熟卵母细胞玻璃化冷存保存技术进行初步实验探讨。方法:采用OPS玻璃化冷冻方法,对未成熟的卵子进行冷冻,解冻后体外成熟培养,ICSI受精,观察胚胎培养情况,并对某些影响因素进行探讨。结果:冷冻了GV期卵62个,M I期卵40个。两期卵细胞复苏后存活率、成熟率、受精率和卵裂率分别为:80.65%、77.50%,52.00%、41.94%,57.69%、61.54%,60.00%、62.50%,两组间比较无统计学差异(P>0.05);采用HTF或G-Mops两种缓冲液配制玻璃化冷冻液冷冻解冻未成熟卵效果无统计学差异(P>0.05);未成熟卵解冻后置于含性激素的TCM199与单纯IVF30中成熟培养效果无统计学差异(P>0.05)。结论:应用OPS玻璃化冷冻方法能够有效冻存未成熟卵母细胞。     

人类囊胚玻璃化冷冻研究进展

1985年Rall和Fahy首次应用玻璃化法冷冻保存小鼠胚胎以来,玻璃化冷冻技术以其简单、有效、经济受到关注.在人类辅助生殖技术中,囊胚的培养和移植对于提高妊娠率、减少多胎妊娠的发生具有重要意义,因此需要将剩余囊胚有效冷冻保存,玻璃化法可望成为有效冷冻保存多余囊胚的新技术.在玻璃化冷冻技术中,不同的冷冻装置、冷冻保护剂的类型和浓度、解冻方法的不同、囊胚冷冻前的不同处理,都是影响囊胚冷冻后复苏的关键因素.     

冷冻膜及冷冻环在人早期胚胎玻璃化冷冻中的应用比较北大核心CSCD

目的探讨冷冻膜和冷冻环2种载体行玻璃化冷冻对人卵裂期胚胎和囊胚的效果。方法采用回顾性队列研究分析912个解冻复苏周期,比较2种载体行玻璃化冷冻后胚胎复苏结局和临床结局的差异及其相关危险因素。结果 (1) 385枚卵裂期胚胎中,冷冻环组(n=251)和冷冻膜组(n=134)的胚胎复苏率、完整胚胎存活率、临床妊娠率、种植率、流产率、移植周期出生率、双胎出生率、早产率及出生男女比率差异均无统计学意义(P>0.05);冷冻环组新鲜周期优质胚胎率(24.78%)、平均移植周期数(1.3±0.6)、复苏后优质胚胎率(40.76%)、复苏后平均移植胚胎数[(2.1±0.4)个]及低体质量儿出生率(19.01%)均明显高于冷冻膜组[18.59%,P=0.002;1.2±0.4,P=0.001;28.13%,P=0.001;(1.9±0.4)个,P=0.000;4.08%,P=0.015]。(2) 527枚囊胚中,冷冻环组(n=287)和冷冻膜组(n=240)的平均移植周期数、胚胎复苏率、完整胚胎存活率、复苏后囊胚扩张率、流产率、双胎出生率、早产率、低体质量儿出生率及出生男女比率差异均无统计学意义(P>0.05);冷冻环组的临床妊娠率(67.94%)、种植率(49.72%)、移植周期出生率(52.96%)、新鲜周期优质胚胎率(27.0%)、平均移植胚胎数[(1.9±0.4)个]显著高于冷冻膜组[54.17%, P=0.001;39.58%,P=0.002;41.25%,P=0.047; 23.0%, P=0.002;(1.8±0.5)个,P=0.004]。Logistic回归显示,新鲜周期优质胚胎数、内膜厚度及冷冻胚胎所用载体类型与冷冻囊胚复苏移植后临床妊娠密切相关(P=0.017、P=0.049、P=0.044),而年龄、复苏后平均移植胚胎个数、复苏后囊胚扩张数、平均移植周期数及内膜分型等差异均无统计学意义(P>0.05)。结论对于卵裂期胚胎,冷冻膜和冷冻环冷冻胚胎的复苏结局和临床结局均是相当的。对于囊胚,冷冻环组的临床结局优于冷冻膜组。